Name: 光学投影トモグラフィを用いたヒト乳癌検体とその分析の長期培養 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: 学ぶ光学投影トモグラフィを用いたヒト乳癌検体の長期培養法。コラーゲン基質で20日間培養し、3次元の腫瘍浸潤パターンを定量化する技術で、個別化医療への応用が期待されます。

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我々は、臨床検体を得るための彼女の貴重な援助のためにローナレンショウ（エジンバラの乳ユニットを）感謝。 腫瘍の材料の使用量は、ロージアンの研究倫理委員会（08/S1101/41）によって承認され、実験的がん医療センタープログラム（エジンバラ）の後援の下に得られた。 この作品は、スコットランドの財政審議会でサポートされています。 ADLは、ミスマーガレットバタードリーキー信託臨床の仲間です。

1。ラットの尾からコラーゲンを抽出<ol><li> 70％エタノールで冷凍新鮮なラットの尾を置きます。 </li><li>メス公開する腱を覆う皮膚をDeglove。 </li><li>滅菌に離れて70％エタノールで尾と場所から腱を剥ぎ取ります。 </li><li>収集した腱と酢酸（250ミリリットル0.5M酢酸に1gの腱）への転送を量る。 4℃で48hrのためにミックス℃に</li><li> 30分間10,000 gで腱/酢酸の混合を遠心し、ペレットを捨てる。 </li><li>上清に10％の等量（w / v）のNaClを追加し、ミックスは4℃で一晩放置する℃に</li><li> G. 10,000さらに30分のためのコラーゲンが豊富な、不溶性の底層とcentrifugateを収集する</li><li> 4℃で0.25M酢酸でコラーゲン豊富な材料° Cを再懸濁し、毎日二度の透析バッファーを変更すること、3日間4℃で1:1000酢酸に対してdialyse。 </li><li>さらに4℃で遠心分離（2時間、20,000 g）とストアによってコラーゲン溶液を滅菌℃に</li><li> 1mg/mlのストック濃度に滅菌1:1000酢酸の添加により、必要に応じてコラーゲンを希釈する。 </li></ol> 2。 3Dアッセイの作成 3Dアッセイは、以前は次の2発行された、細胞株のアッセイに基づいています。 <ol><li>複数のコア生検は侵襲性乳癌に対する根治的切除術の時に患者の同意から採取されています。 </li><li>目によって、1ミリメートル3フラグメントにメスを使用してコアを割る。巨視的に異なる脂肪をトリミングして捨てる。 </li><li> MEGM完全なメディアの断片を浸す。組織は、最大1時間までは、この状態で保存することができます。 </li><li>氷1mg/mlのラット尾コラーゲンでコラーゲンゲル、ミックスを作成するには、1:1000フィルタリング酢酸、3:5:1:1の比率で10倍DMEM/F12と0.22MのNaOH、0.3の最終コラーゲン濃度を作成するmg / mlの。 </li><li> 37℃インキュベーターに24ウェルプレートおよび場所の個々のウェルにコラーゲンの混合物の1.2ミリリットルを注入℃で10分間ゲル化を開始する。 </li><li> 10分後、インキュベーターから24ウェルプレートを取り外します。ゲル化コラーゲンへの腫瘍片を置き、静かに10μlをピペットチップを用いてゲルの中心にそれらを押してください。 1時間のためのインキュベーターに24ウェルプレートを返します。 </li><li> ER +腫瘍の場合は、3.2x10 -10 Mの濃度にβ-エストラジオールとMEGM完全なメディアを補完するゲルアッセイは、1時間のためにゲル化した後、慎重に各ウェルに添加培地の1.2ミリリットル紹介します。アッセイ内の最後のβ-エストラジオール濃度は、乳房組織3で見られる生理的なエストロゲンのレベルを再現するために1.6 × 10 -10 Mにequilibriateなります。 </li><li>各ゲルは、メディア内で自由にフロートすることができますので、円周方向にそれぞれのゲルを放出、各ウェルの内側のエッジの周り10μlをピペットの先端を実行します。インキュベーターに24ウェルプレートを返します。 </li><li> Exchangeは実験終了まで、メディアは週2回の補足。メディアを削除し、ホルマリン固定液を追加して実験を終了します。 </li></ol> 3。光学投影断層撮影の準備のためにアッセイの抗体染色我々は、全サンプルの染色の4の以前に発行された方式を採用している。 <ol><li> PBSで30分のためのホルマリン固定標本を洗浄してください。 33％、66％、各ステップで≥15分のための100％：0.05％ツイーン20（0.05％PBST）を含むPBSで希釈したメタノールで段階的にゲルを脱水する。 </li><li> DMSO：30％H 2自己蛍光をクエンチするために24時間、室温で2時01分03秒の比率（15％v / vのH 2 O 2）で、O 2、新しく調製MeOH中で組織をインキュベートする。 </li><li>メタノールで30分間二回のサンプルを洗浄する。 -80 ° C組織の深い部分でその抗原性を確保するために室温（RT）に戻って少なくとも1時間ごとに時間との5倍がレンダリングされるアクセス可能にサンプルを凍結する。 </li><li>希釈剤（33％、66％、各ステップで15分のための100％）としてメタノールと0.05％PBSTに戻って組織を再水和。 </li><li> 24時間のために溶液（0.05％PBSTで10％血清を）ブロックするに組織をブロックする。 </li><li> 48hr 5％のDMSOを含む溶液をブロッキングの1.5ミリリットルで希釈1:500の濃度でウサギ抗サイトケラチンを使用して、上皮コンテンツを識別するための一次抗体で組織をインキュベートする。 </li><li> 30分ごとに0.05％PBSTで試料を4回洗浄。 </li><li> 48hr 5％のDMSOを含む1.5ミリリットルブロッキング溶液で希釈した蛍光二次抗体（1:100ヤギ抗ウサギAlexa555）で組織をインキュベートする。 </li><li> 30分ごとに、0.05％PBSTで4回、再度サンプルを洗浄してください。 </li></ol> 4。光学投影トモグラフィ光学投影断層は最大15ミリメートル5の厚さと蛍光生体試料の高解像度3D画像を生成するために以前に開発された顕微鏡技術です。 <ol><li> sをマウントするtained 1％低融点アガロースのゲルと24時間のために100％メタノールで脱水。 48hrのためバブソリューション（1:2ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル）で試料をクリアして、OPT 3001Mスキャナ（Bioptonics）を使用してスキャン。 </li><li>ターゲットと自家蛍光の両方をCy3フィルターセット（エキサイター545nm/30 NM、エミッタ75分の610 nm）とそれぞれGFP1フィルターセット（エキサイター425nm/40 NM、エミッタLP475 nm）を使用してキャプチャされます。 </li></ol> 5。復興と三次元定量化<ol><li> OPTが取得した角突起のセットは、浸潤アッセイの断面スライスのシリーズを作成するNReconソフトウェア（SkyScan）を使用して再構成することもできる。このソフトウェアは無償でダウンロードすることが可能です<a href="http://www.skyscan.be/products/downloads.htm">http://www.skyscan.be/products/downloads.htm</a> 。 </li><li> Volocityソフトウェア（パーキンエルマー社）を使用して再構成されたデータを分析。無料のデモソフトは、でダウンロードすることが可能です<a href="http://www.cellularimaging.com/products/Volocity/demo/">http://www.cellularimaging.com/products/Volocity/demo/</a> 。 </li><li>サイトケラチン染色により上皮量を定量化するために、ターゲットチャネルにおけるバックグラウンド蛍光からの干渉を低減するための最小ボクセル強度のしきい値を設定します。我々は、計測アプリケーションで使用可能なパラメータのリストを使用して9000のauで経験的にこのしきい値を定義した、我々はオリジナルのコア（自家蛍光チャンネルに区分さ）との連続性の上皮の量を定量化した。これは、私たちは異なるとの間で上皮性増殖のボリュームを定量化することを許可腫瘍サンプル。 </li></ol> 6。代表的な結果： アッセイの開発中に、52乳癌の合計は、組織病理学の広い範囲で標本を生検に使用されている。これらの&lt;10％の人が（5 / 52）少なくとも一つの実行可能な浸潤アッセイを提供するために失敗した。アッセイの失敗は、上記感染細菌または不十分な腫瘍生検材料によるものであった。したがって、アッセイのアプリケーションは、乳がんの特定のサブタイプに限定されるものではない。 典型的なアッセイ（図1）はコラーゲンの培養で20日後に固定し、その後、サイトケラチンのために染色。 Volocityソフトウェアは、オリジナルのコアと浸潤細胞の分離されたグループとの連続的な上皮バルクの両方を認識し、個別にそれぞれのボリュームを定量化することができます。 <img src="/files/ftp_upload/3085/3085fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 固定および定量は、次の図1。浸潤アッセイ。アッセイは、複数の乳癌のサブタイプから得られた試​​料をサポートしています：）ER + b）のHER2 +とc）ER -。

<ol><li>Lopez-Garcia, M. A., Geyer, F. C., Lacroix-Triki, M., Marchio, C., Reis-Filho, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer+precursors+revisited%3A+molecular+features+and+progression+pathways.+Histopathology%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Breast cancer precursors revisited: molecular features and progression pathways. Histopathology.</a> 57, 171-192 (2010).</li>
<li>Sabeh, F., Shimizu-Hirota, R., Weiss, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protease-dependent+versus+-independent+cancer+cell+invasion+programs%3A+three-dimensional+amoeboid+movement+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Protease-dependent versus -independent cancer cell invasion programs: three-dimensional amoeboid movement revisited.</a> J Cell Biol. 185, 11-19 (2009).</li>
<li>Dabrosin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+extracellular+local+levels+of+estradiol+in+normal+breast+in+vivo+during+the+luteal+phase+of+the+menstrual+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Increased extracellular local levels of estradiol in normal breast in vivo during the luteal phase of the menstrual cycle.</a> J Endocrinol. 187, 103-108 (2005).</li>
<li>Alanentalo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tomographic+molecular+imaging+and+3D+quantification+within+adult+mouse+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Tomographic molecular imaging and 3D quantification within adult mouse organs.</a> Nat Methods. 4, 31-33 (2007).</li>
<li>Sharpe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+projection+tomography+as+a+tool+for+3D+microscopy+and+gene+expression+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical projection tomography as a tool for 3D microscopy and gene expression studies.</a> Science. 296, 541-545 (2002).</li>
<li>Hidalgo-Carcedo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+migration+requires+suppression+of+actomyosin+at+cell-cell+contacts+mediated+by+DDR1+and+the+cell+polarity+regulators+Par3+and+Par6%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Collective cell migration requires suppression of actomyosin at cell-cell contacts mediated by DDR1 and the cell polarity regulators Par3 and Par6.</a> Nat Cell Biol. 13, 49-58 (2011).</li>
<li>Katz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+on+the+HER2+amplicon%2C+C35%2C+is+an+oncogene+in+breast+cancer+whose+actions+are+prevented+by+inhibition+of+Syk%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">A gene on the HER2 amplicon, C35, is an oncogene in breast cancer whose actions are prevented by inhibition of Syk.</a> Br J Cancer. 103, 401-410 (2010).</li>
<li>Timpson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+Regulation+of+RhoA+Activity+during+Pancreatic+Cancer+Cell+Invasion+Driven+by+Mutant+p53%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Spatial Regulation of RhoA Activity during Pancreatic Cancer Cell Invasion Driven by Mutant p53.</a> Cancer Res. 71, 747-757 (2011).</li>
</ol>

縫製、JFはBioptonics OPTスキャナを製品化されたMRC技術、によって雇用されている。他の著者は、利害の抵触を宣言しません。

癌細胞株の挙動を研究するためにコラーゲンベースのアッセイは、現在広く6,7,8を使用されています。それにもかかわらず、これらのアッセイは、完全な腫瘍の複雑さとその環境に反映していない。本研究では、我々はヒト乳癌の材料は同じような方法は、ex vivoで使用できることを示す。更に、OPTは、乳がんの3D拡大を特徴付けるために有用なツールです。我々はこの技術の主な制限は、腫瘍の材料（シングルコア生検に4〜6アッセイに十分である）の可用性であることがわかった。別の制限要因は、その構造的な侵略は、アッセイの約40％でのみ発生します。これを克服するために、我々は定期的に目に見える成長とすべてのアッセイに7日目の周りの任意の治療を追加します。 OPTの使用はまた、薬物治療の結果の一括変更、ex vivoで 、検出するために将来的に拡張することができます。これは順番に、動物モデルに依存しない、より個別化がん治療を促進することができます。我々は現在、タモキシフェンex vivoでのER +の腫瘍の反応を探っています。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>完全MEGM </td><td>ロンザ</td><td> CC - 3150 </td></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> D8900 10X1L </td></tr><tr><td> β-エストラジオール</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> E8875 - 250mgの</td></tr><tr><td>ウサギ抗サイトケラチン</td><td>ダコ</td><td> Z0622 </td></tr><tr><td>ヤギ抗ウサギAlexa555 </td><td>インビトロジェン</td><td> A21422 </td></tr></tbody></table>他のすべての標準試薬はSigma - Aldrichから入手した。

光学投影トモグラフィを用いたヒト乳癌検体とその分析の長期培養

Long-term Culture of Human Breast Cancer Specimens and Their Analysis Using Optical Projection Tomography

乳がんは、西洋世界における死亡の主要な原因です。それはよく乳がんの広がりは、最初にローカルで、後に遠位、患者の予後における主要な因子であることが確立されている。乳癌の実験系は、通常、原発腫瘍または胸水由来の細胞株に依存しています。二つの大きな障害は、この研究の妨げになる：（i）は乳癌のいくつかの既知のサブタイプ（特に予後不良腔側Bの腫瘍は）現在の行のコレクション内で表現されていないこと、（ii）腫瘍の微小環境の影響は、通常は考慮されません。 我々は、すべてのサブタイプの文化原発性乳癌標本のテクニックを示しています。これは、腫瘍の小片が、私はクッションソフトラットのコラーゲンに埋め込まれている3次元（3D）培養系を用いることによって達成される。 2〜3週間以内に、腫瘍細胞はコラーゲンに広がり、人間tumours1で観察されたものと同様の様々な構造を形成する。オリジナルのコア内で実行可能な脂肪細胞、上皮細胞と線維芽細胞は組織学的に明らかにした。 squamoid形態と悪性上皮細胞は、周囲のコラーゲンに侵入する実証された。核多形性は有糸分裂像およびアポトーシス小体とともに、これらの細胞内で明らかであった。 我々は、培養中の腫瘍の広がりの程度を定量化するために光学投影断層撮影法（OPT）、3Dイメージング技術を、採用している。我々は腫瘍の文化のバルク量を測定するためにOPTを使用した、パラメータは、薬物療法に対する反応を評価するために、乳がん患者のネオアジュバント治療中に測定した。 ここでは、サブタイプのバイアスなしで培養ヒト乳癌腫瘍の機会を提示し、それらの生体外での広がりを定量化する。このメソッドは、元の腫瘍の薬剤感受性を定量化するために将来的に使用することができる。これは現在使用されている細胞株よりも多くの予測モデルを提供することがあります。

我々は、コラーゲンベースを開発している<em&gt; in vitroで</emすべての乳癌のサブタイプのサンプルから増殖と浸潤を促進する&gt;アッセイ。光学投影断層撮影、三次元顕微鏡法は、腫瘍の拡大を視覚化し、定量化するために利用された。このアッセイは、個々の腫瘍サンプルの薬物反応を定量化するために使用されることがあります。

乳がんは、欧米諸国における主要な死因の一つです。乳がんの転移は、まず局所的に広がり、その後……という過程を辿ることが十分に立証されています。

この手順の全体的な目的は、原発性乳がん組織の長期培養系を構築し、その3次元的な成長パターンを定量化することです。まずラットの尾からI型コラーゲンを抽出し、次に、がん生検試料を調製してコラーゲンマトリックスに封入することでこれを達成します。20日間の培養後、乳がん組織を免疫蛍光染色し、光学投影トモグラフィーを用いてスキャンを行い、データを再構築および定量化します。最終的に、個々の腫瘍の浸潤パターンを示す結果を得ることができ、さらに3次元解析を通じて定量化することが可能です。ex Vivi培養の主な利点は、生理学的文脈において実際の癌材料を使用できることです。細胞株の培養とは異なり、原発性がん組織の入手は困難であるため、本手法の視覚的な実演が重要となります。正しい手法を用いることで、実験結果を成功させる可能性を最適化できます。本手法の実演は、私とMRC TechnologyのJoanne Farrellが行い、タイプ1コラーゲンの抽出を開始します。凍結したラットの尾を70% ethanolに入れ、解凍させます。メスを用いて、皮膚を剥離して腱を露出し、腱を尾から取り除いて70% ethanolに入れて滅菌します。回収した腱を計量し、酢酸に移します。4°Cで48時間攪拌します。次に、腱と酢酸の混合液を10,000 ×gで30分間遠心分離し、ペレットを廃棄します。S上清に等量の10%塩化ナトリウムを加え、混合液を4°Cで一晩静置します。上層をピペットで吸い取り、廃棄します。次に、コラーゲンを豊富に含む不溶性の下層を回収し、10,000 ×gで30分間遠心分離します。その後、重力を用いてコラーゲン含有物質を4°Cの0.25 M 酢酸に再懸濁させ、ダイアリシスバッグにピペットで移します。4°Cで1/1000 酢酸に対し3日間透析を行います。透析バッファーを1日2回交換します。本アッセイでは、さらなる遠心分離ステップと酢酸への再懸濁により、コラーゲンをさらに滅菌することができます。浸潤性乳がんの根治的外科切除時に、同意を得た患者から目視およびメスを用いて採取した複数のコア生検組織を用いて開始します。組織を1 mm³の断片に分割し、肉眼で識別できる脂肪組織を切り取り、廃棄します。サンプルをメス刃の上に固定することで、フード内での視認性が向上し、解剖を正確かつ安全に行うことができます。断片をMEGM完全培地に浸します。組織はこの状態で最大1時間まで保存可能です。0.3 mg/mLのコラーゲンゲルミックスを氷上で調製します。これには、1 mg/mLのラットテールコラーゲン、1:1000希釈のろ過済み酢酸、10倍D-M-E-M-F 12、および0.22 M水酸化ナトリウムを使用します。コラーゲン混合液を1.2 mLずつ24ウェルプレートの各ウェルにピペッティングし、37 °Cのインキュベーターに10分間置きます。ゲル化を開始させるには、プレートをインキュベーターから取り出してください。腫瘍片をゲル化しつつあるコラーゲンの上に置き、10 µL ピペットチップを用いて、それらをゲルの中心部へと静かに押し込みます。プレートをインキュベーターに戻し、1時間静置します。A-M-E-G-M完全培地に、最終濃度が 3.2 × 10⁻¹⁰ M となるようにベータエストラジオールを添加します。ゲルアッセイを1時間インキュベートした後、各ウェルに補充培地を1.2 mLずつ慎重に導入します。乳腺組織に見られる生理的なエストロゲンレベルを再現するため、最終的なbeta estradiol濃度を1.6 × 10⁻¹⁰ Mに調整します。10 µLピペットチップを各ウェルの内縁に沿って動かし、ゲルの周囲を切り離すことで、各ゲルが培地内で自由に浮遊するようにします。24ウェルプレートをインキュベーターに戻し、実験終了まで週に2回、補充培地を交換します。ここで、明視野顕微鏡を用いて浸潤増殖をリアルタイムで観察できます。タイムラプス撮影による拡張焦点深度（EDF）ビデオでは、7日目から9日目までの60時間にわたり、腫瘍端から周囲のコラーゲンへの上皮の浸潤が示されています。培地を除去して実験を終了し、固定液を添加します。光学投影トモグラフィー（OPT）による3Dアッセイサンプルの免疫染色を行うため、48時間固定します。まず、ウェルから固定済みの検体をバイアルに移します。その後、30分間洗浄します。0.05% Tween 20を含むPBSで希釈したメタノールを用いて、ゲルの段階的な脱水を行います。自家蛍光を消去するため、室温で24時間、新鮮に調製したメタノール、DMSO、30% 過酸化水素の混合液（比率2:1:3）に組織をインキュベートします。次に、サンプルを30分間、2回洗浄します。メタノール中で、組織の深部にある抗原にアクセスできるように、サンプルを-80°Cから室温まで5回凍結融解させ、各回少なくとも1時間維持します。次に、メタノールを希釈液として使用し、PBS with 0.05%T between 20を用いて組織を再水和させ、上皮成分を同定するためにブロッキング溶液中で4°Cで24時間インキュベートします。その後、5%DMSOを含むブロッキング溶液1.5mLで希釈したウサギ抗サイトケラチン一次抗体中で、サンプルを4°Cで48時間インキュベートします。最後に、PBS with 0.05%T between 24を用いて、サンプルを30分間ずつ洗浄します。5% DMSOを含むブロッキング溶液1.5 mLに希釈した蛍光二次抗体中で、組織を4°Cで48時間インキュベートします。0.05% Tween-20含有PBSでサンプルを再度、30分間ずつ計24回洗浄します。光学投影トモグラフィー用のサンプルを調製するため、染色済みゲルを1%低融点アガロースに包埋し、100%メタノール中で24時間脱水します。次に、BABB溶液を用いて標本を48時間透明化します。OPT 3001 Mスキャナーを用いてサンプルをスキャンします。ターゲットと自家蛍光のそれぞれを、SI threeおよびGFP oneフィルターセットを用いてキャプチャします。検体は透明なエアロゲルシリンダー内に保持され、0.9度ずつの角度ステップで回転させます。静止状態の検体のデジタル画像を、回転させた400箇所の各位置で撮影します。n reconソフトウェアを使用して、OPTで取得した一連の角度投影図を再構成し、浸潤アッセイの連続的な断面スライスを作成します。Velocityソフトウェアを用いて再構成データを解析し、サイトケラチン染色による上皮体積を定量化します。ターゲットチャンネルにおける背景蛍光の影響を軽減するため、最小ボクセル強度しきい値を設定してください。ここでは、このしきい値を経験的に9,000任意単位と定義します。最後に、測定アプリケーションで利用可能なパラメータリストと、元のコアに連続する上皮を区別する自家蛍光チャネルのデータを使用して、腫瘍増殖部における上皮の体積を定量します。ここでは、コラーゲン培養で20日間後に固定し、その後サイトケラチンで染色した典型的なアッセイ例を示します。Velocityソフトウェアは、元のコアに連続する上皮塊と、遊離して浸潤した細胞群の両方を認識し、それぞれの体積を個別に定量することが可能です。得られた元の生検検体は、ex Vivi培養後のさまざまな腫瘍に由来するものでした。増殖率やアポトーシス率、あるいはそれに類する指標を決定するために、免疫組織化学や免疫蛍光法などの他の手法を用いることも可能です。本手法の開発により、トランスレーショナル乳がん研究分野の研究者は、乳がん患者における薬剤耐性を特定する方法を探索することが可能になりました。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

出典: Huang, Y. et.al., 光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍スフェロイドの縦断的形態学的および生理学的モニタリング. J. Vis. Exp.

光干渉断層撮影法を用いた腫瘍スフェロイドの形態学的および生理学的モニタリング

複雑な組織塊、器官からの腫瘍に、種々の細胞成分から構成されている。我々は、タンパク質の発現に基づいて細胞起源だけでなく、電池特性を解読するスペクトルアンミキシングに続くマルチパラメータ免疫蛍光染色と組み合わせたマルチ蛍光標識トランスジェニックマウスを利用して組織内の細胞の表現型の寄与を明らかにした。...

細胞の起源、タイプ、および相互作用の可視化のための蛍光組織移植に続いて定量的マルチスペクトル解析

心血管疾患の動物モデルからの動脈病変のEx...

発生と光学投影トモグラフィを用いたマウスにおける動脈病変の3次元定量

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培養ヒト大腿骨組織外植するための方法は、転移性ニッチの乳癌細胞コロニー形成を研究する

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光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍回転楕円体の縦断的形態学的および生理学的監視

本研究は、緑色蛍光タンパク質および生物発光シグナルの検出と定量的分子検出技術の統合によって腫瘍負荷を正確に評価するための高度なプロトコルをプリセットする。...

交感性乳癌モデルを用いたトリプルネガティブ乳癌の研究

患者のBMPC標本および骨転移性前立腺癌の異種移植片の三次元培養は、嚢胞、回転楕円および複雑な腫瘍様オルガノイドをもたらす元の腫瘍の機能的不均一性を維持する。本稿は、異種患者由来サンプルの3D培養とIFCを用いた解析のための最適化戦略とプロトコルを提供します。...

患者前立腺癌骨転移標本及びその異種移植片に由来する3次元(3D)オルガノイドの確立と解析

新しく切除されたヒト乳癌腫瘍は、新鮮な組織処理プロトコルに従ってテラヘルツ分光法およびイメージングを特徴とする。組織位置決めは、効果的な特性評価を可能にする一方、将来の術中アプリケーションに適時に分析を提供することを考慮する。...

新しい切除された乳癌腫瘍のテラヘルツ画像化と特性化プロトコル

このプロトコルは、貯蔵材料を使った原発性ヒト乳房組織を用いて乳癌を研究するためのインビトロ微小生理学的システムの構築を記述する。...

微小生理学的システムを用いたヒト乳房組織における乳癌のモデル化

がん免疫療法の時代、腫瘍微小環境ダイナミクスの解明への関心が飛躍的に高まっています。このプロトコルは、その染色およびイメージングステップに関して質量分析イメージング技術を詳述し、高度に多重化された空間分析を可能にする。...

ホルマリン固定およびパラフィン包埋組織サンプルの質量分析イメージングを用いた腫瘍微小環境の理解を広げる

患者由来の乳房腫瘍切除術または正常な乳房組織からヒト乳房オルガノイドを確立するための詳細なプロトコルがここに提供される。このプロトコルは、ヒト患者由来の乳房オルガノイドを培養、凍結、解凍するための包括的なステップバイステップの手順を提供します。...

患者由来乳房オルガノイドの確立と培養

学ぶ光学投影トモグラフィを用いたヒト乳癌検体の長期培養法。コラーゲン基質で20日間培養し、3次元の腫瘍浸潤パターンを定量化する技術で、個別化医療への応用が期待されます。

光学投影トモグラフィを用いたヒト乳癌検体とその分析の長期培養

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