ゼブラフィッシュの定期的ケアとメンテナンス（

本プロトコルでは、ゼブラフィッシュ飼育室の定期的な管理とメンテナンスについて説明します。ゼブラフィッシュ研究への関心が高まっているため、飼育施設の開設および維持の必要性も増しています。ゼブラフィッシュ飼育室のメンテナンスに関する文献は存在しますが、簡潔なビデオプロトコルは不足しています。

このビデオでは、ゼブラフィッシュの幼魚のシステムメンテナンス、給餌、繁殖、および飼育について説明します。こんにちは、大学医学部のABHです。こんにちは、Thee InstitutionのManchiです。

本日は、ゼブラフィッシュ飼育室における日常的なケアとメンテナンスについて解説します。ゼブラフィッシュは、遺伝学、薬理学、および行動研究において普及しつつあります。飼育が容易で成長が早いため、遺伝子改変を導入しやすく、ハイスループットの薬剤スクリーニングにも適しています。

このパートでは、ゼブラフィッシュを利用している方や、新しく魚類飼育施設を設立することを検討している研究者に向けて、ゼブラフィッシュの飼育に関するアイデアを提示します。それでは始めていきましょう。魚類飼育システムを提供している企業はいくつかありますが、ここではAquatic Habitats社のシステムを使用しています。

当研究室では、ゼブラフィッシュを26から28.5°Cの温度、および14時間明期・10時間暗期の光周期で飼育しています。ゼブラフィッシュは、飼育水を連続的にろ過およびエアレーションする循環システム内で飼育されています。健全な水圏環境に必要な水質を維持するため、本システム内では異なる種類のフィルターセットが活用されています。

タンクからの水は、フィルターパッド、キャニスターフィルター、生物ろ過フィルター、活性炭フィルター、およびUVフィルターを通過した後、再びタンクへと循環されます。ゼブラフィッシュの飼育システムでは、脱塩素水またはエージング水を使用します。水は、少なくとも48時間エージングさせることで脱塩素化できます。

システムの水 pH を毎日確認し、6.8から7.5の間に維持してください。重曹を用いて、魚水槽を定期的に洗浄してください。魚水槽を洗浄するには、この水槽への水流を止め、水槽を後方に傾けて余剰水を排出し、システムから注意深く水槽を取り出します。

清潔な水槽を準備し、システムウォーターを満たします。タモネットを使用して、魚を慎重にこの水槽に移動させます。蓋を閉め、水槽の名前タグを注意深く元の位置に戻します。

タンクをシステム内に設置します。チューブをタンクに戻し、給水スイッチをオンにします。魚用ネットとタンクを70%ethanolで除菌します。

水ですすぎ、乾燥させます。再利用する前に、循環システムのフィルターが適切に機能しているか定期的に点検し、必要に応じて交換してください。

120 micronのフィルターパッドは、交換前に毎日、水流に向けてチェックし、位置を調整します。キャニスターフィルターは週に一度交換してください。キャニスターフィルターを交換するには、レンチまたは手で取り外します。

水が漏れるのを防ぐため、下にプラスチックシートまたはタオルを敷きます。新しいキャニスターとフィルターを挿入し、ユニットをシステムに再度取り付けます。手とレンチを使用して、慎重に締め付けます。

必要に応じて、カーボンフィルターを2週間ごとに交換してください。カーボンフィルターを交換するには、慎重に取り外します。レンチを使用して、フィルター内の活性炭を廃棄し、新しい活性炭と交換します。

カーボンホルダーを再装着し、フィルターユニットに戻します。フィルターユニットをシステムに再度取り付けます。システムの電源を入れ、フィルターに水が流れているかを確認してください。

生物学的フィルターは6か月ごとに清浄する必要があります。生物学的フィルターを交換するには、システムからフィルターを取り出します。圧力放出ボタンを押して、フィルター内の圧力を放出してください。

フィルターを緩めて取り外し、蓋を開けます。内容物をふるい容器に空け、Cy Oexを水から分離します。Cy Oexが著しく汚れている場合は、交換してください。

フィルターに新しいcy axを充填します。ユニットにシステム水を満たします。フィルターの蓋を閉め、ユニットを再装着して電源を入れます。

UVフィルターは生物学的汚染を制御するために使用され、9〜10ヶ月ごとに交換する必要があります。ゼブラフィッシュには、乾燥飼料またはブラインシュリンプなどの生餌を与えることができます。ブラインシュリンプの卵は地元のペットショップで購入でき、ここに記載されている簡単な手順に従って研究室内で孵化させることが可能です。システム水にレッドシーソルトを溶解し、1リットルあたり30〜35gの溶液を作成します。

アルテミア孵化器に塩水を満たし、1リットルあたり大さじ1.2の割合でアルテミアの卵を加えます。エアポンプを用いて強力にエアレーションを行い、約48時間孵化させます。エアパイプを取り外し、培養液を4〜5分間静置させます。

受精したブラインシュリンプは孵化容器の底に集まります。孵化容器底部のタップを使用して、未受精卵が含まれている最初の流出分を捨ててください。その後、受精したブラインシュリンプを回収します。ブラインシュリンプを塩水から分離してください。

ブラインシュリンプ採取ネットを使用します。システム水を用いて、ブラインシュリンプを容器の中に洗い流します。ブラインシュリンプが容器の底に高濃度で集まり、ゼブラフィッシュへの給餌準備が完了します。ピペットまたはドロッパーを用いて、ブラインシュリンプを魚に与えます。

給餌量は、各水槽の個体数に応じて決定します。餌を水中に投入すると、空腹の魚がブラインシュリンプを捕らえるために泳ぎ回りますが、これは魚の定期的な運動にとって重要です。ドライフィーディング（乾餌給餌）は、アクアティック・ハビタット社製の魚用フードディスペンサー、または単純なスプーンを使用して行うことができます。

ゼブラフィッシュは点灯とともに産卵を開始します。卵は集団産卵またはペア産卵によって得ることができます。集団産卵はより労力が少なくて済むため、通常の胚収集に用いられますが、遺伝子や変異をスクリーニングする場合はペア産卵が好まれます。タンク内繁殖装置を組み立て、ゆっくりとタンクの中に沈めてください。

点灯後、魚が交配できるように、ブリーディングセットを水槽内に約15分間放置してから、ブリーダーを水槽から取り出して卵を回収します。ペアごとのブリーディングは、ブリーディングタンクを組み立ててシステムウォーターを満たすことで、夕方遅くに準備します。雌1匹と雄1匹を、水槽の反対側にそれぞれ移動させます。

雌は腹部がより大きいため、雄と区別できます。翌朝、仕切りを取り除きます。点灯後まもなく、魚に20分間、またはタンクの底に十分な数の胚が産み付けられるまで、妨げずに交配させます。

交配後、魚を水槽に戻します。ストレイナーを用いて卵を回収してください。その後、胚を十分に洗浄します。

システム水を用います。胚を回収したストレーナーを胚培地で洗浄し、胚をペトリ皿に移します。胚は顕微鏡下で観察可能です。

針とピペットを用いて、未受精卵を受精卵から分離します。受精卵を未受精卵から分離した後、幼生が孵化するまで約28.5 °Cのインキュベーター内で72時間保持します。これにより、幼生が卵膜（CORs）から脱出し、自由に泳ぐ状態になります。

仔魚には受精から5日後から給餌を行い、システムに移管するまで数日間、静止水中で飼育する必要があります。仔魚を、300から400 µm程度の小サイズのバッフルが入ったタンクに慎重に移します。14日後、仔魚のタンクをシステム内に設置し、循環水を少量流します。

幼魚および成魚のサイズに応じて、異なるサイズのバッフルを使用してください。胚が性的に成熟した成魚に成長するまでには、通常3か月かかります。ご視聴ありがとうございました。実験の成功をお祈りいたします。