Name: 血液脳関門の破壊のラットモデルは、対象となる神経血管治療を許可する (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: 学ぶ血液脳関門破壊法をラットモデルで。マンニトールを頸動脈に投与し、エバンスブルー染色で評価する神経血管治療技術。薬物脳内送達を可能にする神経科学の重要手法です。

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1。手続きのための動物と機器を準備<ol><li>手術を開始する前に、手術部位や動物を準備します。 PE50のチューブ12の一端 &quot;に23ゲージのブラント針を挿入することにより、頸動脈にカテーテルを作る。カテーテルの反対側の端では約45°の斜面をカットします。前の手順と機器を滅菌する。ヘアボンネット、外科用マスクを着用する、無菌手袋。 </li><li>手術が行われる表面に加熱パッドを配置します。それをアクティブにし、それが温まることができます。吸収ベンチパッドを使用して領域をカバーしています。 </li><li>あなたが結晶せずに溶液中で25％のマンニトールを持っていることを確認します。結晶が存在する場合は、80℃の温水浴でバイアルを置き、定期的に攪拌することにより、それらを溶かす。 </li><li>動物の質量を記録する。 </li><li> 0.1ミリリットル/分の速度で0.8ミリグラム/ kg /分で配達のためのプロポフォール希釈を作る。 </li><li> 3分間インダクションボックスにラットを配置します。設定：5％イソフルラン、2L /分人工呼吸器の流量。 </li><li>使い捨てタオルの上に、首、両内側の太ももを剃る。 </li></ol> 2。ラットを挿管<ol><li> 3分間インダクションボックスの動物の背中を置きます。 </li><li> IVカテーテルを使用して気管内チューブを準備します。このサイズとラットの歪みのために、私たちは18 GAのカテーテルを使用しています。チューブが損傷を引き起こすことなく、十分な通気を確保できるように十分な大きさですが、気管内に収まるように十分に小さくなければならない。プラスチック製のカテーテルの針を引き出し、慎重に針約を破る。その鋭い先端から1cm。 bunted針はあなたのスタイラスになります。カテーテルに針をしなさい。 </li><li>傾斜面にその歯によってラットを掛けます。 </li><li>動物の首に直接光を当てると耳の間に並んでいた。 </li><li>小さなへら約を挿入します。中咽頭への3センチメートル。そっと口から舌を引き出しながら上方に持ち上げます。 </li><li>気管の開口部を視覚化します。あなたは、そういうものでしょうEA小さな穴が開き、各息を閉じます。 </li><li>そっと穴にカテーテルを挿入します。あなたは時々プラスチックは気管の軟骨を入力感じることができます。気管と小文字が区別されます。カテーテルを無理に押し込まないでください。 </li><li> 1 L /分、60拍と2％イソフルレンに人工呼吸器を設定します。 </li><li>操作面への人工呼吸器とテープチューブにカテーテルを接続します。 </li><li>動物がつま先のピンチを行うことにより、麻酔であることを確認します。 </li></ol> 3。プロポフォール静脈麻酔を確立<ol><li>操作面に四肢と尾をテーピングすることによりラットを固定します。 </li><li>クロルヘキシジン石鹸で剃って、首と脚の付け根の部位3回こすります。クロルヘキシジンが3回すすぎ次いでスクラブ。 </li><li> IVの拡張セットにプロポフォールの注射器を取り付けます。輸液ポンプにシリンジをマウントします。 </li><li>剃ら太ももの皮膚を切ってメスを使用している場合。筋肉を切ることは避けてください。 </li><li>力で切開を開くpsの大腿静脈を可視化する。 </li><li>血管を露出させるために動脈を介して組織を引き離します。 </li><li>静脈内に26 GA monoject獣医静脈カテーテルを挿入します。針が静脈の壁を穿刺するときには、それが押しやすくなって感じることができる。針を撤回し、血管内にカテーテルを押してください。 </li><li> 0.1ミリリットル/分でプロポフォール点滴を開始します。 </li><li> 3-5分プロポフォール注入を開始した後、50％O 2、50％N 2 Oの混合物に麻酔ガスを切り替えて、イソフルランを遮断してください。 </li></ol> 4。総頸動脈分岐部を露出<ol><li>メスの刃で首に正中切開を行います。 </li><li>ハサミやメスを持つ2つの大唾液腺の間で切断。 </li><li>頸動脈を露出させるために正中線に対して横方向に組織を離れて解剖する。組織の層を開くためにピンセットを使用しています。あなたは鉗子で公開している部分を削除し、minimallあることを決定するためにハサミを使用することができますyの血管。必要に応じてガーゼ、綿棒、焼灼で出血をコントロール。 </li><li>中等度から重度の出血があった場合には3ミリリットル生理食塩水IPを注入します。 </li><li>頸動脈から組織を引き離しトラクタを使用しています。分岐を探す。 </li><li>分岐のすぐ遠位後頭動脈を公開します。鉗子の間それを焼灼し、電気メスを使って区切ります。 </li><li>完全に頸動脈分岐部、できるだけECAの限りを公開するためにピンセットを使用しています。 </li><li>後頭動脈の遠位にECAを分岐上甲状腺動脈を公開します。鉗子の間それを焼灼し、電気メスを使って区切ります。 </li></ol> 5。外頸動脈にカテーテルを挿入する<ol><li> ECAの下4/0シルクの2の長さを置く。 </li><li>あなたの止血と縫合糸の長さは1をつかんで、（ラットの足に向かって）背尾側にECAを引っ込める。 </li><li>限り頭側（ラットの口に向かって）可能なワットなどの他の糸とネクタイを取るi番目の外科医の結び目。これにより、ECAを犠牲にする恒久的な合字を形成している。 </li><li>第一止血（尾側張力をかけたもの）を削除し、他の縫合（ECAの周りに結ばれているもの）を取得し、止血と頭側で穏やかな緊張を適用します。 </li><li>分岐から遠位および永久結紮の近位 - 疎（かろうじて結ばまま固定しないでください）​​別の外科医の結び目を作る。 </li><li> 1％は動脈をリラックスさせるリドカイン洗浄してください。 </li><li>ヘパリン加生理食塩水を使用してカテーテルを埋める。 </li><li>分岐点のできるだけ近くに一時的な血管クリップを配置します。カテーテル挿入のためのスペースを最大限にするための角度で置き血管クリップ。クリップに向かって緩い結び目をスライドさせます。 </li><li> microscissorsを使用してリガチャーの直近のECAの小さな切開（カット）を行う。クリップとリガチャーが安全である場合も出血があってはなりません。 </li><li> ECAの壁を制御するためにピンセットを用いて、血管内にカテーテルの面取り端を養う。 </lI&gt; <li>緩い縫合糸の結び目でカテーテルを固定します。カテーテルの周りの動脈を縛る。 </li><li>クリップを外して、綿棒でその領域をきれいにしてください。 </li><li>分岐部の遠位に約1mmにカテーテルを進める。容器が固定化されていることを確認するために結び目の近位に鉗子で動脈を開催しています。 </li></ol> 6。マンニトール投与<ol><li>気泡を作成せずにマンニトールを持つ8 &quot;IVの拡張セットと6 mlの注射器を埋める37℃インキュベーターでこれを℃で保存注：マンニトールで迅速に仕事 - それは容易に室温で溶液から析出されます。 </li><li> BBBD可視化するためには、エバンスブルー染料を投与することができる、それがバリアが破壊されている脳の領域を入力見守る。これを行うには、プロポフォール注入に反対脚の、新しいIVサイトを通じて動物を2％エバンスブルーの2ミリリットル/ kgを与える。 </li><li> 5μmのフィルターに設定拡張子を取り付け、エアーバブを削除するにはマンニトールでそれを埋めるBLES。その後、泡を作成せずにコックにこれを添付してください。 </li><li> 0.09 25のml /秒秒でマンニトールを管理します。 ICAの直近時点での総頸動脈の流れに平衡に達するのにマンニトールを監視します。これは、ラットの心拍数を持つパルスに見えるはずです。マンニトールは、単に心臓に向かって流下する場合は、ラットの血圧を克服している。これは、生命を脅かす合併症と貧しいBBBDを引き起こす可能性があります。 </li></ol>

<ol><li>Abbott, N. J., Patabendige, A. A. K., Dolman, D. E. M., Yusof, S. R., Begley, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+disease%22%5BJournal%5D)">Structure and function of the blood-brain barrier.</a> Neurobiology of disease. 37, 13-25 (2010).</li>
<li>Smith, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The Blood-Brain Barrier.</a> 89, 193-208 (2003).</li>
<li>Kroll, R. A., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outwitting+the+blood-brain+barrier+for+therapeutic+purposes%3A+osmotic+opening+and+other+means%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Outwitting the blood-brain barrier for therapeutic purposes: osmotic opening and other means.</a> Neurosurgery. 42, 1083(1998).</li>
<li>Kroll, R. A., Pagel, M. A., Muldoon, L. L., Roman-Goldstein, S., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+volume+of+distribution+to+the+brain+with+interstitial+infusion%3A+dose%2C+rather+than+convection%2C+might+be+the+most+important+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Increasing volume of distribution to the brain with interstitial infusion: dose, rather than convection, might be the most important factor.</a> Neurosurgery. 38, 746-754 (1996).</li>
<li>Butt, A. M., Jones, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+histamine+and+antagonists+on+electrical+resistance+across+the+blood-brain+barrier+in+rat+brain-surface+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Effect of histamine and antagonists on electrical resistance across the blood-brain barrier in rat brain-surface microvessels.</a> Brain research. 569, 100-105 (1992).</li>
<li>Inamura, T., Black, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bradykinin+selectively+opens+blood-tumor+barrier+in+experimental+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Bradykinin selectively opens blood-tumor barrier in experimental brain tumors.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 14, 862-870 (1994).</li>
<li>Matsukado, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+tumor+uptake+of+carboplatin+and+survival+in+glioma-bearing+rats+by+intracarotid+infusion+of+bradykinin+analog%2C+RMP-7%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Enhanced tumor uptake of carboplatin and survival in glioma-bearing rats by intracarotid infusion of bradykinin analog, RMP-7.</a> Neurosurgery. 39, 125(1996).</li>
<li>Kroll, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+drug+delivery+to+intracerebral+tumor+and+surrounding+brain+in+a+rodent+model%3A+a+comparison+of+osmotic+versus+bradykinin+modification+of+the+blood-brain+and%2For+blood-tumor+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Improving drug delivery to intracerebral tumor and surrounding brain in a rodent model: a comparison of osmotic versus bradykinin modification of the blood-brain and/or blood-tumor barriers.</a> Neurosurgery. 43, 879(1998).</li>
<li>Kinoshita, M., McDannold, N., Jolesz, F. A., Hynynen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+localized+delivery+of+Herceptin+to+the+mouse+brain+by+MRI-guided+focused+ultrasound-induced+blood-brain+barrier+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Noninvasive localized delivery of Herceptin to the mouse brain by MRI-guided focused ultrasound-induced blood-brain barrier disruption.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 103, 11719-11723 (2006).</li>
<li>Neuwelt, E. A., Dahlborg, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy+administered+in+conjunction+with+osmotic+blood-brain+barrier+modification+in+patients+with+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuro-oncology%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy administered in conjunction with osmotic blood-brain barrier modification in patients with brain metastases.</a> Journal of neuro-oncology. 4, 195-207 (1987).</li>
<li>Doolittle, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+a+multicenter+study+using+intraarterial+chemotherapy+in+conjunction+with+osmotic+opening+of+the+blood-brain+barrier+for+the+treatment+of+patients+with+malignant+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of a multicenter study using intraarterial chemotherapy in conjunction with osmotic opening of the blood-brain barrier for the treatment of patients with malignant brain tumors.</a> Cancer. 88, 637-647 (2000).</li>
<li>Guillaume, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-arterial+chemotherapy+with+osmotic+blood-brain+barrier+disruption+for+aggressive+oligodendroglial+tumors%3A+results+of+a+phase+I+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Intra-arterial chemotherapy with osmotic blood-brain barrier disruption for aggressive oligodendroglial tumors: results of a phase I study.</a> Neurosurgery. 66, 48(2010).</li>
<li>Remsen, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+anesthetic+choice%2C+PaCO2%2C+and+other+factors+on+osmotic+blood-brain+barrier+disruption+in+rats+with+brain+tumor+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+%26+Analgesia%22%5BJournal%5D)">The influence of anesthetic choice, PaCO2, and other factors on osmotic blood-brain barrier disruption in rats with brain tumor xenografts.</a> Anesthesia & Analgesia. 88, 559-559 (1999).</li>
<li>Nilaver, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+herpesvirus+and+adenovirus+to+nude+rat+intracerebral+tumors+after+osmotic+blood-brain+barrier+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Delivery of herpesvirus and adenovirus to nude rat intracerebral tumors after osmotic blood-brain barrier disruption.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 92, 9829(1995).</li>
<li>Fortin, D., McCormick, C. I., Remsen, L. G., Nixon, R., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unexpected+neurotoxicity+of+etoposide+phosphate+administered+in+combination+with+other+chemotherapeutic+agents+after+blood-brain+barrier+modification+to+enhance+delivery%2C+using+propofol+for+general+anesthesia%2C+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Unexpected neurotoxicity of etoposide phosphate administered in combination with other chemotherapeutic agents after blood-brain barrier modification to enhance delivery, using propofol for general anesthesia, in a rat model.</a> Neurosurgery. 47, 199(2000).</li>
<li>Neuwelt, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+CNS+lymphoma+treated+with+osmotic+blood-brain+barrier+disruption%3A+prolonged+survival+and+preservation+of+cognitive+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+oncology%22%5BJournal%5D)">Primary CNS lymphoma treated with osmotic blood-brain barrier disruption: prolonged survival and preservation of cognitive function.</a> Journal of clinical oncology. 9, 1580(1991).</li>
<li>Remsen, L. G., Trail, P. A., Hellström, I., Hellström, K. E., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+delivery+improves+the+efficacy+of+a+tumor-specific+doxorubicin+immunoconjugate+in+a+human+brain+tumor+xenograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Enhanced delivery improves the efficacy of a tumor-specific doxorubicin immunoconjugate in a human brain tumor xenograft model.</a> Neurosurgery. 46, 704(2000).</li>
<li>Neuwelt, E. A., Pagel, M. A., Kraemer, D. F., Peterson, D. R., Muldoon, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+chemoprotection+without+compromise+of+chemotherapy+efficacy+in+a+rat+brain+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Bone marrow chemoprotection without compromise of chemotherapy efficacy in a rat brain tumor model.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 309, 594-599 (2004).</li>
</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

BBBDの効果を最大化するいくつかの手段があります。カットダウンフェーズ中に、出血を最小限に抑えることが重要です。血圧と心拍数はかなりの出血の影響を受ける可能性があり、これらの要因はBBBD 13の程度に影響を及ぼすことが知られている。出血は分割しなければならないような優れた甲状腺および後頭部動脈などの主要な血管を、結紮する縫合糸を使用することで軽減することができます。さらに、電気焼灼は、血管を分割し、豊富な血液供給を持っている分野を分析するために使用できます。特に頚動脈カテーテル - それは動物に置かれたすべての行のうち、空気と固体を維持することも重要です。マンニトールで素早く作業する結晶はシリンジやチューブの内側に形成されないことを確認するのに役立ちます。 この実験で用いたラットのサイズと歪みに効果的であるマンニトール流量を使用することが重要です。マンニトール輸液の流量は、ラットの普通caroti内の圧力と一致する必要がありますこのような損傷を引き起こす可能性があり、心臓や肺に総頸動脈を流下せず、ICAにマンニトールフローの高濃度はd動脈。本研究で使用し...

<table border="1"><tbody><tr><td> 材料名 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>ロングエバンスラット</td><td>ハーランラボラトリーズ</td><td></td><td> 210〜250グラム、男性</td></tr><tr><td> PE50チュービング</td><td>ベクトン·ディッキンソン</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 18ゲージ×2.5 &quot;IVカテーテル</td><td>テルモ</td><td></td><td> ETチューブ用</td></tr><tr><td> 30 &quot;IVの拡張セット</td><td>アボット</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 26ゲージ獣医IVカテーテル</td><td> Monoject </td><td></td><td></td></tr><tr><td>エバンスブルー染料</td><td>シグマ</td><td> E2129 </td><td></td></tr><tr><td>バイポーラ</td><td> Codman </td><td></td><td></td></tr><tr><td>フィルタは5μm </td><td>ブラウン</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

血液脳関門の破壊のラットモデルは、対象となる神経血管治療を許可する

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

基底膜とアストロサイトの端の足と一緒に、タイトジャンクションと内皮細胞が血液脳関門1を形成する脳血管を囲んでいます。障壁は、選択的に血液とそのサイズと電荷に基づいて脳間交雑種の分子を排除する。この関数は、神経疾患の治療薬の送達を妨げることができます。化学療法薬の数は、例えば、効果的に腫瘍細胞2に到達するために血液脳関門を越えることはありません。従って、血液脳関門を横切る薬物の送達を改善することは興味のある分野である。 脳への薬物の送達を増強するための最も一般的な方法は、直接脳注入および血液脳関門の崩壊3アール。直接脳内注入は、治療が脳に到達することを保証しますが、この方法は、薬4を分散する能力が制限されています。血液脳関門の破壊（BBBD）アル循環系から直接流れる安値薬 脳になるため、より効果的に分散した腫瘍細胞に到達する。バリアの破壊には3つの方法が浸透バリアの破壊、薬理学的なバリアの破壊、そしてマイクロバブルによる集束超音波を含む。 Neuweltによって開拓浸透破壊は、彼らのタイトジャンクショ​​ンを縮小し、混乱させる原因となって、血液脳関門の細胞を脱水25％マンニトールの高張液を使用しています。バリアの破壊はまた、ヒスタミン及びブラジキニン5 6などの血管作動性化合物を用いて薬理学的に行うことができます。しかし、この方法は、主に脳の腫瘍関門7用に選択的である。さらに、RMP-7、ブラジキニンペプチドのアナログは、25％マンニトール8と浸透BBBDと頭に頭を比較した場合、劣ることが判明した。もう一つの方法は、マイクロバブル超音波造影剤と共に集束超音波（FUS）も示されている可逆的に血液脳関門9を開きます。 FUSのと比較して、しかし、25％のマンニトールはトランスレーショナル·リサーチ10月12日のための実証済みのツールとなって、人間の患者における安全性の長い歴史を持っています。 BBBDを達成するために、マンニトールは、直接脳の動脈循環に高いレートで配信される必要があります。ヒトでは、血管内カテーテルは迅速、直接の流れを達成することができる脳へと導かれる。このプロトコルモデル人間はできるだけ密接BBBD。総頸動脈分岐部にカットダウンに続いて、カテーテルにECAに逆行性に挿入し、内頸動脈（ICA）の循環に直接マンニトールを配信するために使用されています。プロポフォールとN 2 O麻酔はバリアの破壊13の効果を最大限に発揮する能力のために使用されます。適切に実行された場合、この手順は安全に、効果的に、かつ可逆的に血液脳関門と即興を開く機能を持っている通常の電子頭脳8,13,14に達していない薬剤の送達。

<img alt="図1" src="/files/ftp_upload/50019/50019fig1.jpg" /> 図1。エバンスブルー色素の血管外漏出を介して血液脳関門の崩壊を可視化する。エバンスブルー色素は、アルブミンに結合して、生理的条件下で脳内に溢出されていない顔料である。非中断半球が変わらないまま、脳の片側の血液脳関門の破壊は、エバンスブルーが中断半球青を入力して染色することができます。したがって、それは血液脳関門破壊の有用なマーカーである。 図1Aは、血液脳関門を中断せずに脳の一例です。 図1Bは、25％のマンニトールを用いた浸透BBBD後の脳青く染色の例です。他の残骸は汚れのない、一方の半球が青色に染色されることに注意してください。いくつかの青がtで血流の混合の結果として、内側縦裂に近い左半球に入っているウィリスの彼はサークル。

血液脳関門の乱れは、脳にある種の薬物の送達を助ける。動脈配信マンニトールは、物理的障壁を破壊するために、血管周囲の細胞を縮小します。

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

この手順の全体的な目標は、血液脳関門を破壊することです。これは、最初に動物を気管内気道でIV麻酔下に置くことによって達成されます。次に、総頸動脈の分岐部が露出します。次に、カテーテルを外頸動脈に挿入します。最後に、マンニトールを投与します。最終的には、Evan's Blue Dyeの血管外漏出による血液脳関門の破壊を示す結果を得ることができます。この技術が既存の動脈内療法の方法よりも優れている点は、生理学的条件下では通常は血液脳関門を通過しない薬物を脳に流入させることです。これは、血液脳関門を通過する能力が低い新しい治療法をテストすることができるため、神経科学の分野に影響を及ぼします。この技術の意味は、多くの化学療法剤が血液脳関門を通過しないため、神経腫瘍学にまで及びます。この方法は、新しい腫瘍学についての洞察を提供しますが、血液脳関門の透過性が低い薬物によって治療される他の神経学的障害に関する情報も提供できます。この手法の視覚的なデモンストレーションにより、動物外科に精通している研究者が研究室でこの技術を使用できるようになることを願っています。まず、25%マンニトールの溶液を調製し、結晶がないことを確認します。結晶が存在する場合は、バイアルを摂氏80度の水浴に入れて溶解し、攪拌します。動物の質量を定期的に記録し、毎分0.1ミリリットルの速度で送達されるプロポフォールの2つの12cc注射器を準備します。誘導室で動物に麻酔をかけた後、使い捨てタオルの上に置き、首と内腿を剃ります。動物を誘導室に3分間戻します。ラットを挿管するための挿管の準備をするには、IVカテーテル付きの気管内チューブを準備することから始めます。チューブは、十分な空気の流れを可能にするのに十分な大きさである必要がありますが、損傷を引き起こさずに気管に収まるのに十分な大きさである必要があります。スタイラスを作るには、プラスチックカテーテルから針を引き抜き、慎重に針を折ります。その鋭い先端から約1センチメートルのところで、針をカテーテルに戻します。次に、ネズミを角度のある面に歯で吊るし、耳の間に並んだ動物の首に直接光を当てます。次に、小さなヘラを中咽頭に挿入します。約3センチ。舌を口からそっと引き抜きながら上に持ち上げます。気管の開口部を、開閉する小さな穴として視覚化します。呼吸するたびに、カテーテルを穴にそっと挿入し、敏感な気管の軟骨に無理に押し込まないようにします。人工呼吸器を1分あたり1リットル、BPM60に設定し、フッ素を2%に設定し、カテーテルを人工呼吸器に接続し、チューブを手術面にテープで固定します。つま先をつまむことにより、動物が麻酔をかけられていることを確認します。尾部の4本の手足すべてを手術面にテープで固定して、ルートを固定します。剃った首と鼠径部の部位をクロルヘキシジン石鹸で3回こすります。次に、クロルヘキシジンでこすります。3回すすいでください。プロポフォールのシリンジをIVエクステンションセットに取り付け、シリンジを輸液ポンプに取り付けます。.次に、筋肉を切らずに剃った太ももの皮膚をメスで切り抜きます。次に、鉗子を使用して切開部を開き、大腿静脈の位置を特定し、動脈上の組織を引き離して血管を露出させます。26 Gモノイジェクト獣医用IVカテーテルを静脈に挿入します。針が静脈の壁に穴を開けると、押しやすくなります。針を引っ込め、カテーテルを血管に3〜5分押し込みます。プロポフォール注入を開始した後、麻酔ガスを50%O2と50%Nの2つのOの混合物に切り替え、イソフッ素を遮断します。.総頸動脈の分岐部を露出させるには、まずメスの刃を使用して首に正中線を切開します。正中線に沿って表在性顔面を切断して、気管の上の胸骨舌骨筋に到達します。組織を横方向に動かして、鉗子またはハサミでラット頸動脈の三角形を形成した胸骨舌骨、胃、胸骨乳様突起の3つの筋肉のグループを視覚化します。頸動脈三角形の筋肉間で筋膜を分離して、頸動脈を露出させます。バイポーラ焼灼を使用して、ガーゼと綿棒と一緒に小血管を分割します出血を制御するには、リトラクターを使用して鉗子で筋肉を離します。組織を頸動脈から離し、分岐部を見つけます。分岐部のすぐ遠位にある後頭動脈を露出させます。鉗子の間で焼灼し、電気焼灼を使用して鉗子で分離します。頸動脈分岐部と外部頸動脈またはECAをできるだけ多く露出させます。ECAから遠位後頭動脈に分岐する上甲状腺動脈を露出させます。.鉗子の間に焼灼し、ECAをカテーテル状にするために分離します。その下に4つのああシルクの2つの長さを置きます。止血剤を使用して、縫合糸の一方の長さをつかみ、ECAをもう一方の縫合糸で後ろの共和体に引っ込めます。それを外科医の結び目とできるだけ頭蓋骨に結び、分岐部の遠位と永久結紮糸の近位に結びます。別の外科医の結び目をゆるく結び、動脈をリラックスさせます。1%リドカインでそれを洗浄し、カテーテルにヘパリン化生理食塩水を満たします。次に、分岐部にできるだけ近い角度に一時的なベッセルクリップを配置します。次に、マイクロハサミを使用して緩い結び目をクリップに向かってスライドさせます。結紮糸のすぐ近位にあるECAに小さな切り込みを入れます。クリップと結紮糸が固定されていれば、鉗子を使用して出血することはありません。ECA壁を制御するには、カテーテルの斜めの端を緩い外科医の結び目で血管に送り込みます。カテーテルを固定します。カテーテルの周りに動脈を結び、クリップを取り外し、綿棒を使用してその領域を清掃します。カテーテルを分岐部から約1ミリメートル遠位に進めます。鉗子を使用して動脈を結び目の近位に保持し、血管が固定されていることを確認します。マンニトールを投与する。8インチのIVエクステンションセットと6ミリリットルのシリンジにマンニトールを充填し、気泡を発生させません。摂氏37度で保存して血液脳関門の破壊を視覚化するか、BBBDがプロポフォール注入の反対側の脚の新しいIV部位を通じて2%エバンスブルーのキログラムあたり2ミリグラムを投与します。エクステンションセットを5ミクロンのフィルターに取り付け、ミノールを充填して気泡を取り除きます。その後、泡を作らずにストップコックに取り付けます。マンニトールを毎秒0.09ミリリットルで投与します25秒間、マンニトールが内頸動脈のすぐ近位の点で総頸動脈の流れと平衡に達するのを監視します。ラットの心拍数で脈動しているように見えるはずです。マンニトールが心臓に向かって流れないようにしてください、これは流れがラットの血圧を克服し、深刻な合併症を引き起こす可能性があることを示しています。脳の片側にある血液脳関門の破壊により、エヴァンの青が乱れた半球に入り込み、乱れた半球を青く染めることができますが、非破壊的な半球は変化しません。ここに示されているのは、血液脳関門の破壊またはBBBDのない脳の例であり、浸透圧BBBDの後に青色に染色された脳の例であり、右半球が染色され、ウィリスの円での血流の混合の結果として、左半球の内側縦裂近くに青が入っていることに注意してください。この技術は、研究者がラットモデルで血液脳関門を通過しない治療法を探求する道を開きます。このビデオを見た後、頸動脈をカテーテル状にし、マニトール溶液を直接脳に注入することで、ぼやけた脳関門を破壊できるはずです。

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Research

JoVE Journal

Medicine

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血液脳関門（BBB）のマイクロバブル媒介集束超音波の乱れは、脳の非侵襲的な標的薬物送達のための有望な技術です。...

ラットモデルでの経頭蓋集束超音波を用いた血液脳関門のMRI誘導破壊

このビデオでは、血液脳腫瘍関門を模倣したin...

血液脳腫瘍関門またはBBTBモデル:腫瘍への治療薬の送達を評価するための血液脳関門またはBBBモデルの適応

血液脳関門（BBB）のヒトモデルの確立は、BBBの障害に関連する脳条件の研究に利益をもたらすことができる。ここでは、多孔質膜の両側に、ヒト星状細胞および脳内皮細胞の共培養を可能に接触BBBモデルを調製するための改善された技術が記載されている。...

人間の細胞に基づく、血液脳関門の接触モデルの作製のための改善された方法

本研究の目的は、ラット同系内皮細胞とアストロサイトの共培養が関与する生体外 BBBモデルの再現性を検証することでした。内皮細胞単層は、高いTEERと低LY透過性を提示した。特定のTJタンパク質の発現は、炎症および輸送体および受容体の機能性に機能的応答を評価した。...

設定アップ<em&gt;体外</emラット血液脳関門の&gt;モデル（BBB）：BBB不透過性および受容体媒介輸送に注力

血液脳関門の機能障害の動物モデルに適用可能な灌流が続く蛍光トレーサーの腹腔内注入によるマウス脳血管透過性アッセイをご紹介します。1 逸見脳は、透水性の定量的評価と可視化トレーサー/染色の他に使用されます。10 匹のマウスに 5-6...

生体内で血液脳関門透過性アッセイを用いたマウス蛍光トレーサーに分類

この手順の全体的な目標は、虚血性脳卒中のモデルラットの血液脳関門の破壊の生体内評価の再現性の高い技術を提供することです。...

虚血性脳卒中のモデルラットの血液脳関門の破壊のIn Vivo評価

Cellulo BBB (血液脳関門) の設定を記述したプロトコルをご紹介-Minibrain ポリエステル多孔性膜の文化は人間の BBB...

病原体や医薬品との相互作用、脳によって障壁の交差を勉強する人間の血-脳インターフェイス モデル

中枢神経系腫瘍にターゲティングは大きな課題です。ここで我々 はマウスやヒトの細胞を用いた血液脳腫瘍関門の in vitro...

皿に血液脳腫瘍-障壁を使用して生体ペイロード配信で予測

血液脳関門(BBB)は、多細胞神経血管の単位は、密接に脳の恒常性を調節します。ヒトiPSCと臓器オンチップ技術を組み合わせることで、疾患モデリングやCNS薬物浸透性予測に適したパーソナライズされたBBBチップを生成しました。BBBチップの生成と動作に関する詳細なプロトコルについて説明します。...

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血液脳関門(BBB)は、安定した健康な脳環境を維持する上で重要な役割を果たしています。BBB機能障害は、多くの神経疾患と関連しています。私たちは、脳血管の病理学、BBBの完全性、およびBBBが遺伝学や疾患によってどのように変化するかを調べるために、BBBの3D幹細胞由来モデルを開発しました。...

神経疾患のモデル化と治療標的化のための血液脳関門の in vitro 再構築

学ぶ血液脳関門破壊法をラットモデルで。マンニトールを頸動脈に投与し、エバンスブルー染色で評価する神経血管治療技術。薬物脳内送達を可能にする神経科学の重要手法です。

血液脳関門の破壊のラットモデルは、対象となる神経血管治療を許可する

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