マウスにおける恐怖条件付けをトレース

次の実験の全体的な目標は、微量球条件付けを使用して、マウスの海馬依存性の学習と記憶を評価することです。これは、まず動物が聴覚のトーンを嫌悪刺激と関連付けるように訓練することによって達成されます。翌日、動物は新しい状況に置かれ、音に反応して凍結行動が記録されます。

3日目に、動物は元のコンテキストに戻り、凍結行動が記録されます。結果は、ショックトーンペアリングで訓練されたマウスは、ショックを受けていないマウスよりも凍結行動を示すことを示しています。この方法は、海馬依存性の学習と記憶、およびマウスに関する洞察を提供するために使用することができ、トランスジェニック動物やノックアウト動物の研究に使用する場合に特に有用です。

次の手順は、より大きな音響減衰チャンバー内に収容された恐怖調整チャンバーで実行されます。チャンバーへのドアを閉じた状態で、ライトが目的の照明レベルに達するように正しく配置されている場合、ライトレベルインジケーターライトはオフになります。サウンドメーターを使用して、各チャンバー内のバックグラウンドノイズのレベルが一定であることを確認します。

次に、トレーニング中に使用されるトーンを調整します。外部キャリブレーションデバイスを使用して、衝撃レベルをキャリブレーションします。1つのリード線をバーに置き、さらに3つまたは4つのバーを置きます。

ショックジェネレーターを使用してショックを管理し、正しいレベルに達するまで校正します。各恐怖条件付けチャンバーについて、この手順を繰り返します。装置の準備ができたら、被験者を試験室とは別の待機室に移して、過度の取り扱いを減らします。

テストする前に、テストの少なくとも30分前または前日にテールにラベルを付けてください。開始する準備ができたら、テストマウスを清潔なラベル付きケージに移し、恐怖コンディショニングチャンバーに輸送します。マウスをチャンバーに置き、ドアを閉めてソフトウェアプログラムを起動します。

トレーニングの初日、マウスはチャンバーを3分間探索することが許可されます。その後、ソフトウェアは22番目のトーンを表示し、続いて22番目のトレース間隔が続き、軽度のフットショックで終了します。被験者を観察して、彼らが嫌悪刺激を受けたことを確認します。

202 回目の試行間間隔は、5 つの条件付け試行を分離します。試験後、動物を試験室に1分間留まらせてから取り出し、動物を移送ケージに戻し、待機室に戻します。ホームケージに個別にテストするマウスが他にもいる場合は、すべてのマウスがテストを完了するまでマウスを収容してください。

次の動物に備えて、30%イソプロパノールで試験チャンバーを洗浄します。すべてのマウスが学習されるまで、これらの手順を繰り返します。すべてのマウスをコロニールームに戻します。

コホートの最後のマウスが翌日にテストされた後、動物がテストされます。恐怖の記憶をトレースするために。この日は、トランスファーケージの寝具をシュレッダー紙に交換して、状況を変えます。

チャンバーのコンテキストも変更されます。床の透明なアクリルインサートの下に発泡スチロールシートを置き、その質感と外観を変えます。テストエリア内にアクリル製の仕切りを置きます。

バニラエッセンスを床下のホエイボートに入れて臭いを変えます。この日に挿入し、各マウスの間に30%イソプロパノールの代わりに70%エタノールでチャンバーを清掃します。準備ができたら、マウスをテストチャンバーに入れ、プログラムを開始します。

セッションは2分間のベースラインから始まり、その後に3つの22ndトーンのプレゼンテーションが続きます。各トーンプレゼンテーションの間には222回目の試行間隔があります。セッションが終了したら、マウスを自宅のケージに戻し、翌日の試験に備えてすべての動物が試験されるまで続けます。

初日に使用したのと同じコンテキストを復元します。チャンバーを30%イソプロパノールで清掃します。コンテクストコンディショニングは3日目に行われます。

初日と同じトランスファーケージを使用して、テストマウスを待機室から取り出します。マウスをテストチャンバーに入れ、コンテキストメモリをテストするためのプログラムを開始します。フリーズ動作を 8 分間記録するプログラムを実行します。

この時間の後、マウスを自宅のケージに戻し、先に示したように試験を続け、代表的な結果は、訓練セッションの過程でショックトーンペアリングを受けた動物の凍結行動の増加を示しています。新しい状況では、嫌悪性ショック刺激を受けたマウスは、ベースライントーントレースおよび試行間インターバル中にショックを受けなかったマウスと比較して、より多くの凍結が見られました。元の状況に戻すと、嫌悪性ショック刺激を受けた動物は、8分間にわたって一貫して高い凍結行動を示しました。

このビデオを見た後、海馬依存性の学習と記憶、およびマウスを理解するために、痕跡恐怖条件付けの使用方法を十分に理解しているはずです。