Name: マウスにおけるアテローム性動脈硬化症に対する筋内膜過形成を誘発する。つの有効なモデルの導入 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: 学ぶマウスにおける筋内膜過形成とアテローム性動脈硬化症の2つの動脈硬化モデル。バルーンカテーテル法とAPOE欠損マウスの食事誘導法により、血管狭窄メカニズムを比較解析する。

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著者は、技術支援のためにクリスティPahrmannに感謝します。 SSはドイツ学術振興（DFG）（SCHR992/3-2とSCHR992/4-2）から資金提供を受けた。

全ての動物研究は、関連する動物ケアガイドラインに従って行われるべきである。前初めプロトコルへの動物の仕事のための制度的認可を受けなければならない。 1。筋内膜増殖症モデル（A） 内膜肥厚モデルの場合、約25グラムの重さ8週齢のC57BL/6J（在庫番号000664、C57BL/6J）マウスを購入。従来の条件の下で、これらの実験のための家のマウス;マウス標準マウス飼料を飼料と水を自由に提供する。 <ol><li> マウスの調製：イソフルラン（2％）が導入室を利用して麻酔状態にマウスを導入する。 <ol><li>ヘアトリマーを使用して腹部の毛を削除すると、その背中の上でマウスを置き、麻酔を保証するためにフェイスマスクで鼻と口をカバーしています。 </li><li>プロボ - ヨウ素と、普遍的に腹部を消毒、2サイクルで、80％エタノールが続く。 </li><li>存在しないことを保証する麻酔の十分な深さを監視するために後肢をつまんで反射の。 </li><li>腹部臓器を公開するには、2つのステップで白線に沿って皮膚と筋肉を分離する。 </li><li>生理食塩水しっとり手袋で腸を置く。湿ったそれらを保つために、腸の周りに手袋を包む。 </li><li>注意深く腹部大動脈天竺脂肪組織を離れてオフにします。任意の分岐血管を傷つけないように注意しながら、ダウンの分岐部に大動脈大動脈を公開します。 </li><li>まず、血液の流れをシャットダウンするには、近位に大動脈大動脈を顕微クランプを置く。今、大動脈分岐の隣に第2の遠位クランプを適用します。 </li><li>血液の流れが中断されたときに、近位のクランプに近い大動脈に小さな切開を行います。 </li><li> 0.9％生理食塩水で湿らされたバルーンが先端に付いたカテーテルを挿入し、大動脈の遠位クランプに向かって前進する。 </li><li>内皮損傷の場合は、ballooを膨張させることによって大動脈をはぎ取るN慎重にゆっくりと近位クランプの方向にカテーテルを引っ張って。 </li><li>二回削剥演習を繰り返します。 </li><li>カテーテルを取り外し、10-0プロレンランニング縫合糸を使用して大動脈切開を閉じます。 </li><li>慎重に遠位クランプを開きます。大動脈切開部位での出血の場合には、必要に応じて、再度、クランプを閉じ、出血を見つけて、追加の中断ステッチを配置。 </li><li>出血が認められない場合は、ゆっくりと近位のクランプを開きます。 </li><li>大動脈パルスが切開部から遠位側に見えるはずです。今腸その場で戻って配置することができる。 </li><li>予め温め滅菌生理食塩水を用いた腹腔を洗浄します。 </li><li> 6-0プロレンランニング縫合糸を使用して、筋層で始まる腹壁を閉じます。 </li><li>次の5-0プロレン実行、実行中の縫合糸の使用をして肌を適応させる。 </li><li>マウスがまだ麻酔している間、皮下麟蹄を経由して4〜5 mg / kgのカルプロフェンを適用ction。 </li><li>疼痛コントロールのための飲料水（100ミリリットル当たり50ミリグラムメタミゾール）にメタミゾールを追加し、3日後に手術のために続けている。回復を通して動物を監視します。 注：このモデルの観察期間は28日間です。 </li></ol></li></ol> 2。アテローム性動脈硬化症モデル（B） 4週齢でマウス（在庫番号002052、B6.129P2-Apoetm1Unc / J）をした後、4〜6ヶ月間与え、アテローム性動脈硬化症のモデルでは、（ - / -アポ）アポリポタンパク質E欠損を購入。従来の条件の下で、これらの実験のための家のマウス;到着（ハーランラボラトリーズTD.88137）上にマウス高脂肪西洋食を供給し、4から6ヶ月の間、 水を自由に提供する。 <ol><li> マウスの調製： <ol><li>アポフィード - / - 西洋食付きマウスは生後4週から始まる。食餌操作は、到着時に直接開始する必要があります。 </li><li>実験期間を通して西洋食を維持している。&lt;/李&gt; </ol></li></ol> 3。分析<ol><li> 筋内膜増殖症モデル（A） このモデルにおける関心領域」は、病変領域」である。分析のためのオプションは、管腔閉塞を含み、I / M比（内膜/中膜比）は、最大myointima厚さ、筋内膜面積、線維症トリクローム染色、および単核細胞のためのH＆E染色（ 図1A〜1Cに示されるように）。科学的な質問によると、コラーゲン、免疫組織化学、および共焦点のメソッドのピクロシリウスレッドのような他の多くの染色を適用することができる。 </li><li> アテローム性動脈硬化症モデル（B） このモデルでの関心領域は、大動脈弁、大動脈弓だけでなく、下行大動脈である。分析のためのオプション：スーダンレッド脂質の染色や大動脈弁のトリクローム染色、大動脈弓と下行大動脈（ 図1（d）に示すように）。 このモデルはまた、他のような染色のさまざまなオプションをもたらす中性脂質については、例えばオイルレッドO、ピクロシリウスレッド、免疫組織化学、および共焦点方法。 <ol><li>スーダンレッド染色：新たに採取大動脈組織にスーダンレッド染色を行います。 <ol><li>収穫前にダイエット6Hを削除します。 </li><li>イソフルラン（2％）が導入室を利用して麻酔状態にマウスを導入する。麻酔の十分な深さを監視するために後肢をつまんで反射神経が存在しないことを保証する。 </li><li>胸を開きます。心尖​​を切断し、大動脈を修正するために大動脈基部を通じて4％PFA（3ミリリットル）に続いて、最初に生理食塩水（3ml）で、左心室を経由して灌流する。 </li><li>その分岐ルートから大動脈を解放します。可能な限りの脂肪組織を除去するようにしてください。 </li><li>心臓や大動脈根を切断し、組織学のために4％PFAに格納します。 </li><li>組織学のために大動脈基部は、AORの切断を可能にするために慎重に直立位置にパラフィンブロック内に配置されなければならないすべての3弁膜チラシを表示TICルート生成スライド。 </li><li>大動脈ツリーの一方の端をカットし、細かいピンとシリコーン層の上に固定します。縦に大動脈を開き、大動脈組織を修正。 </li><li> 50％エタノールを用いて組織を洗浄します。約15分間、スダンIII染色溶液で組織を浸す。 </li><li>過剰スーダンIIIを除去するために50％エタノールで軽くすすいでください。 （注：50％エタノールへは、染料を洗うこと）をdH 2 Oですすぎ、そしてさらなる分析のために写真を撮る。 </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Manuel, D. G., Leung, M., Nguyen, K., Tanuseputro, P., Johansen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+cardiovascular+disease+in+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Burden of cardiovascular disease in Canada.</a> Can J Cardiol. 19, 997-1004 (2003).</li>
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<li>Nitschke, Y., Weissen-Plenz, G., Terkeltaub, R., Rutsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Npp1+promotes+atherosclerosis+in+ApoE+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cellular+and+molecular%22%5BJournal%5D)">Npp1 promotes atherosclerosis in ApoE knockout mice.</a> Journal of cellular and molecular. 15, 2273-2283 (2011).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

両疾患の患者で同様の症状を引き起こすが、プラーク発生の根本的なメカニズム、したがって、治療アプローチは、2非常に異なっている。動脈狭窄の様々な形態での患者の臨床所見だけでなく、プラークの開発期間は、基本的なメカニズムに依存しています。 患者の臨床所見に応じて、サンプル分析の異なる方法が5,15を実行する必要があります。これは、選択されたモデル14によって模倣されている疾患に特徴的な所見と分析を適応させることが必要である。逆に、研究されている疾患に応じて、最も可能かつ適切な動物モデルを選択すべきである。さらに、新薬が機構的にモデルと一致している必要があることが重要です。 この出版物で紹介両方のモデルは、迅速かつ簡単に実行するために、高度に再現可能である。いくつかのMAがありますモデル間のJOR違い。アテローム硬化性プラークの発達は、4〜6ヶ月必要としながら17、例えば、筋内膜過形成モデルにおける観察時間は、28日間16で...

先進国における虚血性心疾患は死亡率1の主要な原因のまま。冠動脈狭窄の原因は多種多様であり、最も一般的な治療戦略2を 、残りの血行再建術と筋内膜増殖症だけでなく、アテローム性動脈硬化症が含まれる。明らかに内膜肥厚やアテローム性動脈硬化症の機構経路を区別する研究モデルは、動脈プラークの開発における病理生物学的および病態生理学的プロセスを調査するために不可欠である。このビデオでは筋内膜増殖症やアテローム性動脈硬化症の発症のどちらかを研究するために使用される二つの異なるマウスモデルを導入する。 筋内膜増殖症、アテローム性動脈硬化症は、もともと3について記載の「レスポンス·ツー·傷害」パラダイムを経由して形成することが想定される。内皮層の機械的破壊は、パラクリン効果によって増強激しいリモデリングをもたらす。いくつかのディがありますfferent動物モデルは、一般的に筋内膜過形成を研究するために使用。いくつかのグループは、ラット4の上行大動脈に金属のデバイスを使用しています。バルーンカテーテルを用いて行わ大動脈削剥モデルは、一般に実験用ラット5,6で使用される。実験用マウス7で行われる内膜過形成モデルは、頸動脈の結紮を実装し、筋内膜病変8を誘導する。私たちの研究室では、腹部大動脈侵食モデル-筋内膜過形成の発達を研究する-だけでなく、ヒトのステント再狭窄モデル9は、一般的に使用されている。このビデオでは、適切な実験動物モデルを選択すると、動脈狭窄の機序や病態生理学的研究のために重要であることを強調している。 筋内膜過形成モデルは、アテローム性動脈硬化症のモデルと区別されなければならない。後者については、（アポE - / - ）アポリポタンパク質E欠損西洋食と組み合わせたマウスは一般にatherosclを誘導するために使用されているHな病変10,11,12,13。マウスでの筋内膜疾患のこれらのタイプの両方を誘導するための例としては、血管狭窄14を分析するために別のモデルに適応したオプションと一緒に、ここに示されています。

<table><tbody><tr><td>チオグリコール酸ブロス3%</td><td>フルカ</td><td>70157</td><td>粉末</td></tr><tr><td>PFA 4%</td><td>電子顕微鏡科学</td> <td>#157135S</td><td>20%</td></tr><tr><td>スーダンIII染色溶液</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>S4131</td><td>粉末</td></tr><tr><td>マウスC57BL / 6J</td><td>ジャクソン研究所</td><td>ストック#0006664</td><td></td></tr><tr><td>マウスApoE -/-</td><td>ジャクソン研究所</td><td>ストック#002052</td><td></td></tr><tr><td>ウエスタンダイエット</td><td>ハーラン研究所</td><td>TD.88137</td><td></td></tr><tr><td>バリカン</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td></td><td>イソフルラン</td></tr><tr><td>顕微手術用クランプ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18055-04</td><td>Micro-Serrefine-4</td></tr><tr><td>mmクランプアプリケーター</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18056-14</td><td></td></tr><tr><td>カテーテル</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 プロレン縫合糸</td><td>エチコン</td><td>788G</td><td></td></tr><tr><td>6-0 プロレン縫合糸</td><td>エチコン</td><td>8709H</td><td></td></tr><tr><td>5-0 プロレン縫合</td>糸 <td>エチコン</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>リマディル</td><td>ファイザー</td><td></td><td>カルプロフェン</td></tr><tr><td>メタカム 1.5 mg/ml</td><td>ベーリンガーインゲルハイム</td><td></td><td>メタミゾール</td></tr></tbody></table>

マウスにおけるアテローム性動脈硬化症に対する筋内膜過形成を誘発する。つの有効なモデルの導入

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

虚血性心疾患、例えば観察される動脈狭窄を誘導するための種々 のin vivo実験用げっ歯類モデルは、動脈プラーク形成および狭窄を含む疾患を模倣するように確立されている。 2つの高度に再現可能なマウスモデル - 両方の動脈狭窄をもたらしたが、それぞれが開発のさまざまな経路を根底には - ここで紹介されています。モデルは、動脈狭窄の2の最も一般的な原因を表し;すなわち、1マウス各筋内膜過形成のためのモデル、およびアテローム性動脈硬化症が示されている。筋内膜過形成を誘発するために、腹部大動脈のバルーンカテーテル傷害が行われる。動脈硬化性プラークの発展のために、アポE - / - 西脂肪の食事と組み合わせたマウスモデルが使用されます。結果の測定·評価のための別のモデルに適合したオプションについては、この原稿に名前が付けられ、説明されています。これらの二つのモデルを導入することと比較すると、のinformatを提供しています科学者たちは尋ねた科学的な質問への応じた適切な動脈狭窄モデルを選択するためのイオン。

図1は、両方のモデルについて異なる分析オプションおよび誘導疾患状態を示している。内膜過形成モデルでは、トリクローム染色の代表断面の分析が示されている。これらの断面から、I / M比は、最大プラーク厚さが、内腔の最大内膜厚さ、パーセント管腔閉塞、ならびにプラーク面積のような結果を測定し、計算することができる。 アテローム性動脈硬化症モデルの結果を評価するために、上に挙げた全ての方法を用いることができる。また、腹部大動脈における定量的なプラーク領域において、大動脈弁、大動脈弓及び下行大動脈におけるプラーク形成の程度は、トリクローム染色によって測定することができる。 <img alt="図1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51459/51459fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51459/51459fig1....

このビデオでは、マウスの動脈の内膜のプラークの開発の2つのモデルを示し、筋内膜増殖症およびアテローム性動脈硬化症の違いを強調している。

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

本実験の全体的な目的は、異なるメカニズムで大動脈狭窄を誘発する2つの有効な動物モデルを紹介することです。1つ目のモデルは、大動脈にバルーンカテーテルを挿入し、内膜中膜増殖を誘導する方法です。まず、腎下腹部大動脈を露出させ、クランプします。次に、大動脈を横切るように切開して開き、バルーンカテーテルを挿入します。その後、カテーテルを膨らませて大動脈の内皮を剥離させ、手術を完了します。2つ目のモデルは、動脈硬化プラークを作成するために、APOE欠損トランスジェニックマウスに食事操作を行うものです。これらのマウスは標準的な条件下で飼育され、4〜6ヶ月間、高脂質のウェスタンダイエットを投与されます。最終的に、外科的に誘発された筋内膜増殖と食事制限モデルの組織学的解析により、それぞれ異なる管腔狭窄が生じることが示されます。本日は、バルーンカテーテルを用いて血管損傷を誘発するマウスモデルと、動脈硬化モデルという、管腔狭窄を誘発するための2つの異なるモデルをご紹介します。欧米型食（Western diet）を投与したトランスジェニックマウスを用いたバルーンカテーテルモデルは、狭窄分野における重要な課題の解決に寄われてくれます。動脈硬化の病態生理を研究するためには、トランスジェニックホモ接合体upper E変異マウスモデルが用いられます。また、内膜増殖モデルには、体重約25 gのC57BL/6Jマウスを使用してください。通常の飼料を用いて、通常条件下で維持します。2% isof fluorine でマウスを麻酔した後、腹部の被毛を刈り取り、鎮痛のためにカルプロフェンを皮下投与します。次に、ポビドンヨードと 80% ethanol で皮膚を2回交互に消毒します。次に、足指を挟んで反射が消失しているか確認します。白線に沿って皮膚と筋肉を分離し、手術を開始します。続いて、腸管を生理食塩水で湿らせた手袋で包み、慎重に脂肪組織を取り除いて、腹部大動脈を露出させます。次に、腎下大動脈を分岐部まで露出させます。その際、分枝血管を損傷しないよう注意してください。その後、大動脈をクランプします。まず、血流を遮断するために、腎下大動脈の近位側にマイクロサージカルクランプを装着します。次に、大動脈分岐部の隣に2つ目の遠位クランプを装着します。血流が遮断されたら、近位クランプに近い大動脈に小さな切開を加えます。カテーテルを大動脈の遠位クランプ側に向かって挿入し、内皮損傷を作ります。カテーテルのバルーンを膨らませ、注意深くゆっくりと近位クランプ側へカテーテルを引き抜きながら、大動脈の内皮を剥離させます。この操作を2回繰り返し、計3回の大動脈内でのバルーン膨張を行います。次にカテーテルを取り除き、10 au prolineの連続縫合を用いて大動脈の切開部を閉じてください。縫合後、AOR自切部位に出血がある場合は、慎重に遠位側のクランプを開きます。その後、再びクランプを閉じ、出血部位を特定して、断続縫合を追加して止血します。出血がないことを確認し、近位クランプをゆっくりと開きます。切開部の遠位側で大動脈の拍動が確認できるはずです。次に、腸管をC2に配置します。次に、6本のOTTプロリン連続縫合を用いて、筋層から腹壁を閉鎖します。続いて、5本のOTT縫合で皮膚を閉鎖し、マウスをケージに戻します。術後の3日間は、疼痛管理のため、飲料水にメタゾールを添加して投与します。回復まで約28日間、動物を観察します。動脈硬化モデルについては、4週齢のA POE欠損マウスを用意してください。これらのマウスを、高脂質ウェスタンダイエットを投与し、標準条件下で4～6か月間飼育します。実験期間中、この食事を維持します。大動脈を採取する6時間前に、餌へのアクセスを遮断します。その後、前節に記載の方法に従って、マウスを手術の準備に回します。胸腔を開いて手術を開始します。次に、心尖部を切り離し、大動脈根部から4%パラホルムアルデヒド3 mLを緩やかな圧力で灌流して、大動脈を固定します。その後、大動脈根部から分岐部までを遊離させます。脂肪組織を可能な限り除去します。次に、大動脈弓を切り取り、4%パラホルムアルデヒドに保存します。その後、心臓と大動脈樹をPBSを入れたシリコンラインディッシュに移します。大動脈樹の一端を切断し、細いピンでシリコン層上に固定します。大動脈を縦方向に切り開き、大動脈組織を室温のPBSに数分間浸します。その後、組織を50%エタノールで1回すすぎ、Sudan溶液のバスに浸します。3. 染色液で約15分間染色します。染色後、余分なSudanのみを取り除くため、組織を50% ethanolで数秒間素早く洗浄します。洗浄しすぎると染料が過剰に除去されるため、直ちに組織を蒸留水で洗浄し、イメージングに進みます。筋内膜増殖モデルでは、内皮剥離させたマウスの大動脈を採取し、パラフィン包埋後、chromeで染色しました。chrome染色切片において内膜と中膜の厚さを測定し、比率を算出しました。コンピュータ解析後に比率を算出する方法を用い、最大プラーク厚はコンピュータモルフォツリーにより、ルーメンにおける最大内膜厚として測定した。ルーメン閉塞率は、元のルーメンに対する新しい内腔の比率として算出した。プラーク面積は、元のルーメンから新しい内腔を差し引くことで算出した。同様の解析を、動脈硬化モデルの大動脈弁、大動脈弓、および下行大動脈のトリクローム染色横断面に対して、動脈硬化モデルのみで実施した。下行大動脈を縦に切開し、スーダンレッドで染色した。両モデルの解析のため、コンピューターを用いてプラーク面積および大動脈全面積を測定した。管腔の閉塞、形態、および細胞性などの疑問を解消するために、組織病理学的検査や共焦点免疫蛍光顕微鏡観察などの他の手法を行うことができます。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

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グラフト動脈硬化のマウスモデル

大動脈洞と上行大動脈の精密切片化と組織化学的および免疫組織化学的分析を組み合わせて、マウスモデルのアテローム性動脈硬化病変を定量化し、特徴付ける手順について説明します。...

マウス大動脈洞におけるアテローム性動脈硬化症の病変の定量分析とキャラクタリゼーション

動物モデルは、慢性炎症の発展に貢献宿主および病原体特異的なメカニズムを定義する上で非常に貴重なツールであることが分かっている。ここでは、ローカルおよび全身の部位での炎症の進行を評価するために、ヒト病原体ポルフィロモナス·ジンジバリスとディテールの方法論で経口感染のマウスモデルを記述する。...

局所および全身所における病原体により誘導される慢性炎症のためのマウスモデル

再狭窄のマウス大腿動脈ワイヤ傷害モデルは、技術的に困難である。このプロトコルでは、我々は成功し、再狭窄の研究のための一貫性の新生内膜を誘導するために、ワイヤ傷害を実施するための不可欠なキー技術的な詳細を示している。...

動脈再狭窄のマウスモデル：大腿ワイヤー傷害の技術的な側面

本研究は、マウスにおける加速アテローム性動脈硬化の誘導のための侵襲的処置を説明する。電気またはクライオによる傷害を用いた他の方法と比較して、機械的誘発傷害は、再血管化療法後の修復の人間の状態を模倣し、関係する分子機構の研究に理想的である。...

マウスにおける加速アテローム性動脈硬化症の誘導:ワイヤー傷害モデル

この記事は、大動脈バルーン傷害の後 myointimal 過形成 (MH)...

マウスの腹部大動脈 Myointimal 過形成を誘導するために気球を利用した傷害

アテローム性動脈硬化症のマウスモデルは、分子レベルで病原性経路を調査するのに有用なツールであるが、病変発症の標準化された定量化を必要とする。このプロトコルは、大動脈根、大動脈アーチ、および高潔な動脈を含む主要な動脈血管の病変サイズを決定するために最適化された方法を記述する。...

マウスにおけるアテローム性動脈硬化症の定量化

この記事は、小さな切開を有するマウスにおける急性虚血を確立するための効率的な外科的アプローチを示す。このアプローチは、ほとんどの研究グループが、実験室でのアップグレードなしで適用できます。...

ApoEにおける後肢虚血の改変外科モデル-/- ミニチュア切開を用いたマウス

ここでは、大腿動脈吻合のマウスモデルを紹介し、血管吻合狭窄を研究し、シミュレートするための貴重な動物モデルを研究者に提供します。この開発は、この疾患の根底にある病態生理学の理解を深め、血管疾患のより正確で効果的な研究を促進するために重要です。...

大腿動脈吻合管狭窄症に対するマウスモデルの開発

この記事で紹介した収縮カフは、ネズミの総頸動脈のアテローム性動脈硬化症を誘発するように設計されています。その内腔の円錐形状に起因する移植されたカフは、種々の炎症性表現型のアテローム性動脈硬化病変の開発をトリガする、低、高と振動せん断応力の明確に定義された領域を生成します。...

マウスでのせん断応力誘発アテローム性動脈硬化症をトリガするための頸動脈カフの注入

学ぶマウスにおける筋内膜過形成とアテローム性動脈硬化症の2つの動脈硬化モデル。バルーンカテーテル法とAPOE欠損マウスの食事誘導法により、血管狭窄メカニズムを比較解析する。

マウスにおけるアテローム性動脈硬化症に対する筋内膜過形成を誘発する。つの有効なモデルの導入

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