Name: プレターゲッティングPETイメージング用バイオ直交逆電子需要ディールスアルダー環化を活用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-03T15:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: 学ぶバイオ直交逆電子需要ディールスアルダー環化を用いたプレターゲッティングPETイメージング法。トランスシクロオクチン標識抗体とテトラジン放射性配位子を用いて、大腸がんの高コントラスト腫瘍描出と低被ばくを実現する技術です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者は、有益な会話を提供してくださったRalph Weissleder教授、Pat Zanzonico博士、NagaVaraKishore Pillarsetty博士、そしてNIHの資金提供に感謝します（BMZ: 1K99CA178205-01A1）

倫理STATEMENT：記載のin vivo動物実験のすべてが承認されたプロトコルとメモリアルスローンケタリングがんセンター施設内動物管理使用委員会（IACUC）の倫理指針の下で実施した。 TZ-BN-NOTAの1の合成<ol><li>小さ ​​な反応容器中で、600μlの飽和NaHCO 3緩衝液（0.1M、pHが8.1）に7mgのNH 2 -Bn-NOTA（1.25×10 -2ミリモル）を溶解する。溶液のpHを確認してください。必要に応じて、0.1 MのNa 2 CO 3の少量のアリコートを用いて8.1に溶液のpHを調節する。 </li><li> 1.7ミリリットルのマイクロ遠心チューブに0.5mgのTZ-NHS（1.25×10 -3 mmol）のNH 2 -Bn-NOTAソリューションを追加します。 注：TZ-NHSは、乾式を秤量または乾燥DMFまたはDMSO（&lt;50μL）のストック溶液から追加することができます。 </li><li>得られた反応溶液を室温で30分間反応させる穏やかに撹拌しながら。 </li><li> 30分後、未反応のNH 2 -Bn-NOTAを除去し、逆相C 18 HPLCクロマトグラフィーを用いて生成物を精製する。 TZ-NHSおよびTZ-BN-NOTAは最高の525の波長で監視されながら、NH 2 -Bn-NOTAは、254nmの波長でモニターすることができます。 注：保持時間は、明らかに、各研究室（ポンプ、カラム、チューブなど ）のHPLC機器設定に大きく依存している。 100〜100のMeCN / H 2 O（0.1％TFA両方）：0のMeCN / H 2 O 25分および分析4.6×250ミリメートルC 18カラムを使用した0の勾配は場合は、例を提示する、Tzを-Bnは、NOTA、Tzを-NHSおよびNH 2 -Bn-NOTAの保持時間は、それぞれ、約15分、16.5分、および10分であろう。生成物は、単一の実行またはセミ分取または分取C 18 HPLCカラムを使用して複数の実行のいずれかの他の反応成分から精製することができる。1 H-NMR、肛門ytical HPLCおよびESI-MS完了Tzを-Bnは、NOTA前駆体の純度を確認するために使用することができるすべての方法である。11 </li><li>液体窒素を使用して収集HPLC溶出液を凍結する。 </li><li>不透明なアルミホイルで凍結されたコレクションチューブを包みます。 </li><li> HPLC移動相を除去するために凍結乾燥容器のO / Nで凍結されたコレクションチューブを置きます。 </li><li> -80℃で暗所に精製された生成物（固体明るいピンク）を保管してください。 注：この手順で許容停止点である。完成Tzを-Bnは、NOTA前駆体は、これらの条件下で少なくとも1年間安定である。 </li></ol> huA33-TCO免疫複合の調製<ol><li> 1.7ミリリットルマイクロ遠心チューブでは、1 mg / mlの乾燥DMF中のTCO-NHSの（2.7 mM）の溶液を調製。 </li><li> 1.7 mlのマイクロ遠心チューブにおいて、リン酸緩衝生理食塩水1mlにhuA33の2mg / mlの（13.3μM）溶液を調製し、pHを7.4（0.01 M PO 4 3- </sub&gt; 0.154 MのNaCl）。 </li><li> 0.1 MのNa 2 CO 3の少量のアリコート（&lt;5μl）を使用して、8.8から9.0への抗体溶液のpHを調整。 pHを監視するために微小電極でpH試験紙またはpH計のいずれかを使用し、pHが9.0を超えて上昇することを可能にしないように注意してください。 </li><li>抗体溶液は、適切なpHであると、活性化エステルの8モル当量に対応するTCO-NHS溶液の容量を追加する。例えば、2 mg / mlのhuA33抗体溶液（1.33×10 -8モルhuA33）1mlに1mg / mlのTCO-NHSの溶液（1.07×10 -7モルTCO-NHS）7.9μlを添加する。溶液中で5体積％DMFを超えないようにしてください。 </li><li>静かにマイクロ遠心チューブを数回反転させた溶液を混合。 </li><li>不透明なアルミホイルでマイクロ遠心チューブを包みます。 </li><li>ソリューションは、穏やかに撹拌しながら室温で1時間インキュベートすることを許可する。 </li><li>室温で1時間後、プレパック使い捨てSIZを使用して生じた免疫複合体を精製しE除外脱塩カラム。貯蔵中のカラム上に存在する任意の防腐剤を除去するために供給者によって記載されているように、まず、サイズ排除カラムをリンスする。その後、1.5mlの0.9％滅菌生理食塩水でカラムを洗い流し、サイズ排除カラムに反応混合物を追加し、続いて溶離液として0.9％滅菌生理食塩水2 mlを使用して製品を収集する。 注：このステップは2ミリリットルソリューションとして完成huA33-TCOが得られます。 </li><li> UV-Vis分光光度計に生じたhuA33-TCOの濃度を測定します。 </li><li>より高い濃度が望まれる場合には50,000分子量カットオフ遠心フィルターユニットを用いhuA33、TCO液を濃縮する。 注：それはhuA33と他のよく知られた種々の抗体（ 例えば、ベバシズマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、およびJ591）が集中しているのは非常に寛容である一方で、凝集および沈殿が他のケースでは濃度に発生する可能性があることに注意することが重要である。このPROCEDを試みる研究者新しい抗体とのUREは文献または抗体を集中させるかどうかに関しては問題の抗体の独自の知識を信頼する必要があります。 </li><li>暗闇の中で4℃で完了しhuA33-TCOの免疫複合体を保管してください。 注：この手順で許容停止点である。完成したmAbを、T​​COコンジュゲートは、これらの保存条件下で少なくとも3ヶ月間安定であるべきである。 </li></ol> 3. TZ-BN-NOTAの64 Cuの放射性標識注：プロトコルのこの手順では、放射能の取り扱いと操作を含む。または放射能を持つ他の作業を行う - - これらの手順を実行する前に研究者は、自宅の機関の放射線安全課に相談してください。電離放射線への暴露を最小限に抑えるために可能なすべての手順を実行します。 <ol><li> 1.7ミリリットルマイクロ遠心チューブでは、0.5 mg / mlの（723μM）TZ-BN-NOTAの溶液を調製。 </li><li> 1.7ミリリットルのMicroCでentrifugeチューブ、0.2 M NH 4 OAcのpHが5.5の緩衝液400μlにTZ-BN-NOTA溶液10μl（5μgの）を追加します。 </li><li>適切な放射化学ノートキーピングの利益のために、以下のプロトコル（3.4から3.8）でその後の工程の前と後の投与量キャリブレータを用いて試料中の放射能の量を測定し、記録します。これは放射化学的収率での正確な決定に役立ちます。 </li><li> TZ-BN-NOTA溶液に64のCuの2000μCiの（74 MBqの）を追加します。 注：典型的には、[64のCu]のCuCl 2を 0.1NのHClの小体積（&lt;30μlの）で供給されるので、この原液のほんの体積（&lt;10μl）を、放射標識反応のために必要とされる。 【64のCu]のCuCl 2株式の大きなボリュームが必要な場合は、放射標識反応は、全反応容積を増大は許容される。しかし、放射性標識反応液のpHを確保するために注意深く監視されるべきであるそれはpHが4.0を下回らないこと。 </li><li>ソリューションは、穏やかに撹拌しながら室温で10分間インキュベートすることを許可する。 </li><li>インキュベーションの10分後、逆相C 18 HPLCクロマトグラフィーを用いて生成物を精製する。保持時間は、明らかに、各研究室（ポンプ、カラム、チューブなど ）のHPLC機器設定に大きく依存している。 64のCu-Tz-の保持時間、分が使用されている15以上5のMeCN / H 2 O：95から5:95のMeCN / H 2 O（0.1％TFAの両方）の勾配場合は、例を提示する無料で、非複合体64 Cuが周りに2-4分で溶媒先端で溶出する一方BN-NOTAは約9.8分であるべきである。 </li><li>ロータリーエバポレーターを用いて、HPLCの溶離液を取り除く。 </li><li> 0.9％滅菌生理食塩水で64のCu-TZ-BN-NOTA製品を再溶解。 注：64のCuの12.7時間の物理的半減期を考えると、これは手続きで許容停止点ではありません。 64のCu-TZ-BN-NOTの合成を行う放射性リガンドの注射の直前に、ステップ4.5によってすぐにステップ3.7に従ってください。 </li></ol> 生体内 、プレターゲッティングPETイメージング4. 注：プロトコルセクション3のように、プロトコルのこのステップでは、放射能の取り扱いと操作を含む。これらの手順を実行する前に研究者は、自宅の機関の放射線安全課に相談してください。電離放射線への暴露を最小限に抑えるために可能なすべての手順を実行します。 <ol><li>雌の無胸腺ヌードマウス、皮下インプラント1×10 6 SW1222大腸癌細胞における、これらは（9-12日接種後）100〜150ミリメートル3異種移植片へと成長することができます。11 </li><li> 0.9％滅菌生理食塩水で0.5 mg / mlの濃度にプロトコル部2からhuA33-TCO溶液のアリコートを希釈する。 </li><li>異種移植片担持マウスの尾静脈にhuA33、TCO溶液200μl（100μgの）を注入する。 </li><li>マウスの腫瘍におけるhuA33-TCOの蓄積のための24時間を許可する。 </li><li> 0.9％滅菌生理食塩水で1.5 mCiの/ mlの濃度になるように64のCu-Tzを-Bnは、NOTAの放射性リガンドを希釈する。 </li><li>の尾静脈に（6.7 MBqで/ナノモルの比活性を仮定して、64のCu-TZ-BN-NOTAの1.6ナノモル; 11.1 MBqの300μCiの）64のCu-TZ-BN-NOTAの放射性リガンド溶液200μlを注入異種移植片担持マウス。 </li><li>酸素ガス混合物：所望の撮影時点（ 例えば、2、6、12、または24時間後に注射）で、2％イソフルランでマウスを麻酔。 </li><li>小動物PETスキャナーのベッドの上にマウスを置きます。酸素ガス混合物：1％イソフルランを使用して、スキャン中に麻酔を維持。スキャナベッド上に動物を配置する前に、つま先ピンチ方式を使用して麻酔を確認し、麻酔中の乾燥を防止するために、マウスの眼に獣医軟膏を適用する。 </li><li>静的介してマウス用PETデータを取得する350〜700 keVのエネルギーウィンドウと6ナノ秒の一致タイミングウィンドウを使用して2000万一致するイベントを最小限に抑えてスキャンします。画像の取得を完了した後、無人のマウスを残していないし、それが意識を取り戻したまで他のマウスとケージに入れないでください。 </li></ol>

<ol><li>Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+and+antimatter%3A+The+resurgence+of+immuno-PET%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibodies and antimatter: The resurgence of immuno-PET.</a> Journal of Nuclear Medicine. 50, 2-5 (2009).</li>
<li>Zeglis, B. M., Lewis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+the+construction+of+radiometallated+bioconjugates+for+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Dalton+Transactions%22%5BJournal%5D)">A practical guide to the construction of radiometallated bioconjugates for positron emission tomography.</a> Dalton Transactions. 40, 6168-6195 (2011).</li>
<li>Hollander, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bispecific+antibodies+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Bispecific antibodies for cancer therapy.</a> Immunotherapy. 1, 211-222 (2009).</li>
<li>Liu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+pretargeting+in+mice+using+99mTc-labeled+morpholino%2C+a+DNA+analog%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tumor pretargeting in mice using 99mTc-labeled morpholino, a DNA analog.</a> Journal of Nuclear Medicine. 43, 384-391 (2002).</li>
<li>Boerman, O. C., van Schaijk, F. G., Oyen, W. J. G., Corstens, F. H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretargeted+radioimmunotherapy+of+cancer%3A+Progress+step+by+step%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pretargeted radioimmunotherapy of cancer: Progress step by step.</a> Journal of Nuclear Medicine. 44, 400-411 (2003).</li>
<li>Goldenberg, D. M., Sharkey, R. M., Paganelli, G., Barbet, J., Chatal, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+pretargeting+advances+cancer+radioimmunodetection+and+radioimmunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Antibody pretargeting advances cancer radioimmunodetection and radioimmunotherapy.</a> Journal of Clinical Oncology. 24, 823-834 (2006).</li>
<li>Sharkey, R. M., Chang, C. H., Rossi, E. A., McBride, W. J., Goldenberg, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretargeting%3A+taking+an+alternate+route+for+localizing+radionuclides%5BTitle%5D)+AND+%22Tumor+Biology%22%5BJournal%5D)">Pretargeting: taking an alternate route for localizing radionuclides.</a> Tumor Biology. 33, 591-600 (2012).</li>
<li>Sharkey, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+delivery+of+radionuclides+for+imaging+and+therapy+of+cancer+using+pretargeting+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Improving the delivery of radionuclides for imaging and therapy of cancer using pretargeting methods.</a> Clinical Cancer Research. 11, 7109-7121 (2005).</li>
<li>Schultz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tetravalent+single-chain+antibody-streptavidin+fusion+protein+for+pretargeted+lymphoma+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A tetravalent single-chain antibody-streptavidin fusion protein for pretargeted lymphoma therapy.</a> Cancer Research. 60, 6663-6669 (2000).</li>
<li>Lewis, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+pretargeted+64Cu+for+tumor+imaging+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of pretargeted 64Cu for tumor imaging and therapy.</a> Journal of Nuclear Medicine. 44, 1284-1292 (2003).</li>
<li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pretargeted+PET+imaging+strategy+based+on+bioorthgonal+Diels-Alder+click+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">A pretargeted PET imaging strategy based on bioorthgonal Diels-Alder click chemistry.</a> Journal of Nuclear Medicine. 54, 1389-1396 (2013).</li>
<li>Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine+ligation%3A+fast+bioconjugation+based+on+inverse+electron+demand+Diels-Alder+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Tetrazine ligation: fast bioconjugation based on inverse electron demand Diels-Alder reactivity.</a> Journal of the American Chemical Society. 130, 13518-13519 (2008).</li>
<li>Devaraj, N. K., Upadhyay, R., Hatin, J. B., Hilderbrand, S. A., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+and+sensitive+pretargeted+labeling+of+cancer+cells+through+a+tetrazine%2Ftrans-cyclooctene+cycloaddition%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie-International+Edition%22%5BJournal%5D)">Fast and sensitive pretargeted labeling of cancer cells through a tetrazine/trans-cyclooctene cycloaddition.</a> Angewandte Chemie-International Edition. 48, 7013-7016 (2009).</li>
<li>Devaraj, N. K., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomedical+applications+of+tetrazine+cycloadditions%5BTitle%5D)+AND+%22Accounts+of+Chemical+Research%22%5BJournal%5D)">Biomedical applications of tetrazine cycloadditions.</a> Accounts of Chemical Research. 44, 816-827 (2011).</li>
<li>Devaraj, N. K., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine-based+cycloadditions%3A+application+to+pretargeted+live+cell+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Tetrazine-based cycloadditions: application to pretargeted live cell imaging.</a> Bioconjugate Chemistry. 19, 2297-2299 (2008).</li>
<li>Keliher, E. J., Reiner, T., Turetsky, A., Hilderbrand, S., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-yielding%2C+two-step+18F+labeling+strategy+for+18F-PARP1+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22ChemMedChem%22%5BJournal%5D)">High-yielding, two-step 18F labeling strategy for 18F-PARP1 inhibitors.</a> ChemMedChem. 6, 424-427 (2011).</li>
<li>Reiner, T., Earley, S., Turetsky, A., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioorthogonal+small-molecule+ligands+for+PARP1+imaging+in+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Bioorthogonal small-molecule ligands for PARP1 imaging in living cells.</a> ChemBioChem. 11, 2375-2377 (2010).</li>
<li>Reiner, T., Keliher, E. J., Earley, S., Marinelli, B., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+in+vivo+imaging+of+a+18F-labeled+PARP1+inhibitor+using+a+chemically+orthogonal+scavenger-assisted+high-performance+method%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Synthesis and in vivo imaging of a 18F-labeled PARP1 inhibitor using a chemically orthogonal scavenger-assisted high-performance method.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50, 1922-1925 (2011).</li>
<li>Taylor, M. T., Blackman, M., Dmitrenko, O., Fox, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+synthesis+of+highly+reactive+dienophiles+for+the+tetrazine-trans-cyclooctene+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Design and synthesis of highly reactive dienophiles for the tetrazine-trans-cyclooctene ligation.</a> Journal of the American Chemical Society. 133, 9646-9649 (2011).</li>
<li>Selvaraj, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine-trans-cyclooctene+ligation+for+the+rapid+construction+of+integrin+alpha%28v%29beta%283%29+targeted+PET+tracer+based+on+a+cyclic+RGD+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+and+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Tetrazine-trans-cyclooctene ligation for the rapid construction of integrin alpha(v)beta(3) targeted PET tracer based on a cyclic RGD peptide.</a> Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. 21 (3), 5011-5014 (2011).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+18F+labeling+of+cysteine-containing+peptides+and+proteins+using+tetrazine-trans-cyclooctene+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Efficient 18F labeling of cysteine-containing peptides and proteins using tetrazine-trans-cyclooctene ligation.</a> Molecular Imaging. 12, 121-128 (2013).</li>
<li>Han, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+bioorthogonal+and+highly+efficient+conjugation+method+for+quantum+dots+using+tetrazine-norbornene+cycloaddition%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Development of a bioorthogonal and highly efficient conjugation method for quantum dots using tetrazine-norbornene cycloaddition.</a> Journal of the American Chemical Society. 132, 7838-7839 (2010).</li>
<li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+strategy+for+the+construction+of+radiometalated+antibodies+for+positron+emission+tomography+based+on+inverse+electron+demand+Diels-Alder+click+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Modular strategy for the construction of radiometalated antibodies for positron emission tomography based on inverse electron demand Diels-Alder click chemistry.</a> Bioconjugate Chemistry. 22, 2048-2059 (2011).</li>
<li>Zeng, D., Zeglis, B. M., Lewis, J. S., Anderson, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+growing+impact+of+bioorthogonal+click+chemistry+on+the+development+of+radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">The growing impact of bioorthogonal click chemistry on the development of radiopharmaceuticals.</a> Journal of Nuclear Medicine. 54, 829-832 (2013).</li>
<li>Reiner, T., Zeglis, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inverse+electron+demand+Diels-Alder+reaction+in+radiochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Labeled+Compounds+and+Radiopharmaceuticals%22%5BJournal%5D)">The inverse electron demand Diels-Alder reaction in radiochemistry.</a> Journal of Labeled Compounds and Radiopharmaceuticals. 57, 285-290 (2014).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine-trans-cyclooctene+ligation+for+the+rapid+construction+of+18-F+labeled+probes%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Communications%22%5BJournal%5D)">Tetrazine-trans-cyclooctene ligation for the rapid construction of 18-F labeled probes.</a> Chemical Communications. 46, 8043-8045 (2010).</li>
<li>Karver, M. R., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+evaluation+of+a+series+of+1%2C2%2C4%2C5-tetrazines+for+bioorthogonal+conjugation%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Synthesis and evaluation of a series of 1,2,4,5-tetrazines for bioorthogonal conjugation.</a> Bioconjugate Chemistry. 22, 2263-2270 (2011).</li>
<li>Sletten, E. M., Bertozzi, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioorthogonal+chemistry%3A+fishing+for+selectivity+in+a+sea+of+functionality%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Bioorthogonal chemistry: fishing for selectivity in a sea of functionality.</a> Angewandte Chemie International Edition. 48, 6973-6998 (2009).</li>
<li>Bosch, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+strained+alkynes+for+Cu-free+click+reaction+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of strained alkynes for Cu-free click reaction in live mice.</a> Nuclear Medicine and Biology. 40, 415-423 (2013).</li>
<li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+chemisry+for+pretargeted+tumor+imaging+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">In vivo chemisry for pretargeted tumor imaging in live mice.</a> Angewandte Chemie International Edition. 49, 3375-3378 (2010).</li>
<li>Ackerman, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A33+antigen+displays+persistent+surface+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+and+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">A33 antigen displays persistent surface expression.</a> Cancer Immunology and Immunotherapy. 57, 1017-1027 (2008).</li>
<li>Carrasquillo, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((124I-huA33+antibody+PET+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">124I-huA33 antibody PET of colorectal cancer.</a> Journal of Nuclear Medicine. 52, 1173-1180 (2011).</li>
<li>Sakamoto, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+I+radioimmunolocalization+trial+of+humanized+monoclonal+antibody+huA33+in+patients+with+gastric+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Science%22%5BJournal%5D)">A phase I radioimmunolocalization trial of humanized monoclonal antibody huA33 in patients with gastric carcinoma.</a> Cancer Science. 97, 1248-1254 (2006).</li>
<li>Rossin, R., Lappchen, R., vanden Bosch, S. M., LaForest, R., Robillard, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diels-Alder+reaction+for+tumor+pretargeting%3A+In+vivo+chemistry+can+boost+tumor+radiation+dose+compared+with+directly+labeled+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diels-Alder reaction for tumor pretargeting: In vivo chemistry can boost tumor radiation dose compared with directly labeled antibody.</a> Journal of Nuclear Medicine. 54, 1989-1995 (2013).</li>
<li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+reactive+trans-cyclooctene+tags+with+improved+stability+for+Diels-Alder+chemistry+in+living+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Highly reactive trans-cyclooctene tags with improved stability for Diels-Alder chemistry in living systems.</a> Bioconjugate Chemistry. 34, 1210-1217 (2014).</li>
<li>Emmetiere, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((18F-labeled-bioorthogonal+liposomes+for+in+vivo+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">18F-labeled-bioorthogonal liposomes for in vivo targeting.</a> Bioconjugate Chemistry. 24, 1784-1789 (2013).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

このプレターゲッティングPETイメージング戦略の主な利点は、直接標識された抗体によって生成バックグラウンド放射線量のほんの一部で標的対バックグラウンド画像コントラストを有する腫瘍の輪郭を描くことが可能であることである。例えば、ここに記載の結腸直腸癌のイメージングシステムにおいて、急性生体内分布実験からのデータは、直接標識された64のCu-NOTA-huA33 89のZr-DFO-huA33と共に64 Cu系プレターゲッティング戦略の線量計算を実行するために使用した。より臨床的に関連する89のZrで標識した抗体と比較した場合、これらの計算は、明らかに、特に、プレターゲッティング系の線量利点を示す。 0.4162ミリシーベルト/ MBqで：89のZr-DFO-huA33のそれは30倍以上高くなっている間プレターゲティング戦略の有効用量は、0.0124ミリシーベルト/ MBqである。 64と比較したときにプレターゲッティングの線量利点がそれほど顕著ではCuの標識ntibody（0.0359ミリシーベルト/ MBq...

最後の30年間で、陽電子放射断層撮影（PET）は、癌の診断と管理に不可欠な臨床ツールとなっている。抗体は、長い癌バイオマーカーに対するそれらの絶妙な親和性および特異性に起因する腫瘍への陽電子放出放射性同位元素の送達のための有望なベクターであると考えられている。抗体の1,2-しかしながら、比較的遅いインビボでの薬物動態は、複数日と放射性同位元素の使用を義務付け物理的半減期。この組み合わせは、患者の非標的器官、放射性免疫複合体を静脈内、したがって注入されるので、特定の臨床的意義のある重要な合併症に高い放射線量を得ることができる - 部分ボディCTスキャンとは異なり - 身体のあらゆる部分に吸収線量をもたらす、尋問組織の関係なく。 この問題を回避するためには、かなりの努力がdeveloに専念してきました同時に、それらの固有の薬物動態学的限界を幅木つつ抗体の有利な特性を活用し、放射性同位体と標的部分を切り離すPETイメージング戦略のpment。これらの戦略は-最も頻繁にプレターゲッティングまたは多段階のターゲティングと呼ばれる- 典型的には4つのステップを使用する：（1）抗原および放射性リガンドの両方に結合することができる抗体を投与する。 （2）標的組織及び血液からのそのクリアランスにおける抗体の蓄積。 （3）小分子、放射性リガンドを投与する。 （4）過剰な放射性リガンドの迅速なクリアランスによって。場合によっては3-8続い抗体に対する放射性リガンドのインビボでの連結は、追加のクリアリング剤は、任意の抗体の排泄を促進するために、手順2と3の間に注入されるそれは、腫瘍をバインドするためにまだあり、血液中に残っている。5 広義には、TWを話すプレターゲッティング戦略のO型は、文学の中で最も普及している。両方の前臨床モデルで成功を収めているが、それらはまた、それらの臨床適用を妨げている重要な制限を有する。最初の戦略は、ストレプトアビジン結合抗体およびビオチン修飾放射標識の間に高い親和性に依存しています。しかし、ストレプトアビジンで修飾された抗体の免疫原性は、翻訳に関して気になる問題があることが証明されている。 メタノシクロオクタ第二の戦略は、対照的に、癌の両方に結合するように遺伝子操作された二重特異性抗体を用いてバイオマーカー抗原と小分子、放射性標識ハプテン。3,11-14この後者のルートは確かに創造的である一方、その広範な適用は複雑さ、費用、およびシステムのモジュール性の欠如によって制限されている。 最近、我々は、逆電子需要ディールス - アルダーに基づくプレターゲッティングPET画像化方法論を開発し、公開された（Iトランス -cyclooctene（TCO）とテトラジン（Tzの間EDDA）付加環化反応; 図1）11反応自体は何十年も知られているがで示されるように、IEDDA化学は、クリック化学バイオコンジュゲーション技術として、近年、ルネッサンスを経験しているとりわけラルフ·ワスリーダー、ジョセフ·フォックス、そしてピーター·コンティのグループの魅力的な作品。12-15 IEDDAの環は、蛍光ペプチドでのイメージング、抗体、およびナノ粒子だけでなく、核画像を含め、設定の広い範囲で適用されている。批判- -バイオ直交27とクリックケミストリーの種類数ながら。放射性ハロゲンと放射性金属の両方で16-26ライゲーションは高い収穫、清潔、迅速な（K 1&gt;3万M -1秒-1）、選択され、 -銅触媒によるアジド - アルキン付加環、ストレイン·昇格アジド - アルキン付加環、及びシュタウディンガーLIG含む管理ポイント- 。それは生物全体でアプリケーションをプレターゲッティングに適しとてもよくIEDDA化学を行い、反応速度が速くとbioorthogonalityのユニークな組み合わせであるだけでなく、バイオ直交であるこれらの線に沿って28,29、それがあることを私たちの最近の報告に注意することが重要である研究所は、プレターゲッティングにIEDDA化学を適用することが第一ではなかった：IEDDAと予め標的イメージングの最初の報告は、 ら Rossin、の仕事から生じたと111 In標識テトラジンを採用したSPECTの方法論を特色にした30。。 我々は、上述のように、プレターゲッティング方法は、4つの非常に単純な手順（ 図2）を有している。手元プロトコルでは、64のCu-NOTA標識テトラジン放射性リガンド及びhuA33抗体のTCO変性共役を用いた結腸直腸癌のPET画像化のためのプレターゲッティング戦略を説明する。しかし、最終的にはこの方法論のモジュールは、そのGRの一つですトランス -cyclooctene部分としてeatest資産は、非内在化抗体に付加することができ、テトラジン、放射性レポーターの多種多様に取り付けることができる。

<table><tbody><tr><td>テトラジンNHSエステル</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td></td><td>764701-80°Cで保存。C</td></tr><tr><td>トランスシクロオクテン NHS エステル</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>764523</td><td>-80 °C で保存。C</td></tr><tr><td>p-NH2-Bn-NOTA</td><td>Macrocyclics</td><td>B-601</td><td>-80 >ハ</td></tr></tbody></table>

プレターゲッティングpetイメージング用バイオ直交逆電子需要ディールスアルダー環化を活用

Harnessing the Bioorthogonal Inverse Electron Demand Diels-Alder Cycloaddition for Pretargeted PET Imaging

その絶妙な親和性と特異性により、抗体はPETイメージングのための癌細胞への放射性同位元素の送達のための非常に有望なベクターとなっています。しかし、物理的半減期が長い放射性核種で抗体を標識する必要があるため、非標的組織へのバックグラウンド放射線量率が高くなることがよくあります。この問題を回避するために、逆電子要求量Diels-Alder環化付加反応に基づくプレターゲットPETイメージング戦略を採用しました。この方法論は、抗体を放射能から切り離すことで、抗体の良好な特性を利用しながら、薬物動態学的な欠点を回避します。このシステムは、(1)mAb-トランス-シクロオクテン(TCO)コンジュゲートの注入;(2)抗体が腫瘍に蓄積し、血液から除去する局在化期間。(3)放射性標識されたテトラジンの注射;(4)成分のin vivoクリックライゲーションとそれに続く過剰な放射性リガンドのクリアランス。手元の作業で提示された例では、64Cu-NOTA標識テトラジン放射性リガンドとトランスシクロオクテン標識ヒト化抗体(huA33)を使用して、腫瘍とバックグラウンドのコントラストが高いSW1222結腸直腸癌腫瘍を描写することに成功しました。さらに、プレターゲティング法は、64Cuまたは89Zrで直接標識された放射性免疫複合体によって作製された非標的組織への放射線量のほんの一部で高品質の画像を生成する。最終的に、このプロトコルのモジュール性は、トランスシクロオクテン部分を任意の非内在化抗体に付加することができ、テトラジンを多種多様な放射性同位元素に結合することができるので、その最大の資産の1つである。

実験の最初の三つのステップ- TZ-BN-NOTA、huA33にTCOの結合の合成、およびTZ-BN-NOTAの放射性標識（ 図3、図4）を構築は-信頼性が高いです。上記の手順の場合には、Tzを-Bnは、NOTA構築物を高収率および高純度で合成した。 〜huA33抗体は4.2±0.6、TCO / mAbで変更された、とTZ-BN-NOTAは、&gt; 85％の減衰補正後の収量、および比活性&gt; 99％の放射化学的純度に精製された放射性リガンドを得るのに64 Cuとの放射性標識した6.7 MBqを/ナノモル（ 図5）。 huA33-TCOコンジュゲートおよびテトラジン放射性リガンドの反応性は、放射性インスタント薄層クロマトグラフィー（ITLC）を用いて試験することができる。 huA33-TCOのわずかに過剰で、（6.7 MBqで/ナノモルの比活性を仮定して、0.55 nmolの100μCiの）これは、放射性標識テトラジンを混合することによって行われます（50μgの、0.66ナノモル）pHの5分間室温でosphate緩衝生理食塩水（pH7.4）。そ...

生体直交逆電子要求Diels-Alder環化付加は、癌に対する効果的でモジュール式のプレターゲットPETイメージング戦略を作成するために利用されました。このプロトコルでは、この方法論のステップは、結腸直腸癌標的抗体huA33および64Cu標識放射性リガンドを使用するモデルシステムのコンテキストで説明されています。

プレターゲッティングPETイメージング用バイオ直交逆電子需要ディールスアルダー環化を活用

Due to their exquisite affinity and specificity, antibodies have become extremely promising vectors for the delivery of radioisotopes to cancer cells for ...

本実験の全体的な目的は、PETイメージングのために、Tetrazineとtrans-cycloocteneのバイオ直交反応を用いて癌組織を標的化することです。これは、腫瘍を持つマウスにtrans-cyclooctene標識抗体を注入し、抗体が腫瘍に徐々に蓄積し血液中から消失するまでの一定期間を置いた後、テトラジン放射性リガンドを同一個体に注入することによって達成されます。放射性リガンドは腫瘍部位でTCO標識抗体とクリック反応し、また低分子であるため血中から速やかに消失します。得られた小動物PET画像では、高いコントラストと高い腫瘍対背景活性比により、腫瘍が明確に描写されます。直接標識抗体を用いたPETイメージングなどの既存の手法に対する本手法の主な利点は、患者への放射線量をわずかに抑えつつ、高コントラストな画像が得られる点にあります。この手法の意義は治療への応用へと広がります。なぜなら、プレターゲット法を用いることで、正常な臓器や組織への投与量を極めて低く抑えつつ、腫瘍に非常に高線量の放射線を届けることができるからです。本手法の実演は、当研究室の技術者であるCatherine Kazaと共に進行します。合成反応は、7 mgのNH₂-BN-Nottaを、pH 8.1の0.1 M重炭酸ナトリウム溶液600 µLに溶解させることから始めます。pHを確認し、必要に応じて0.1 molar炭酸ナトリウムを少量ずつ加えてpHを8.1に調整します。次に、この溶液をマイクロ遠心チューブに入れた0.5 milligramsのTZ NHSに加えます。この反応液を室温で緩やかに撹拌しながら30分間インキュベートします。TZ NHSストックは、30分後にDMFまたはDMSOで溶解させることができます。逆相C 18 HPLCを用いて生成物を精製し、254 nmで検出される未反応のNH2-BN-NOTAを除去します。TZ NHSおよびTZ-BN-NOTAのモニタリングには、525 nmが最適です。サンプルの保持時間は装置によって異なりますが、25分間でアセトニトリルから水への0～100%、100～0%のグラジエントを用い、分析用4.6×250 mm C 18カラムを使用した場合、3つの化合物の保持時間はそれぞれ16.5分、15分、10分となります。回収したHPLC溶出液を液体窒素で凍結させ、チューブを遮光用のアルミホイルで包みます。次に、凍結したチューブを凍結乾燥容器に入れ、一晩凍結乾燥機にかけます。完成したTZ bn no top前駆体の純度を確認するためにHPLC移動相を除去し、プロトンNMR、分析用HPLC、および/またはESI質量分析を用います。まず、マイクロ遠心チューブでT-C-O-N-H-Sの2.7 millimolar DMF溶液を調製し、別のマイクロ遠心チューブに分注します。次に、1 mLのPBS pH 7.4を用いて、HUA 33の2 mg/mL溶液を調製します。次に、0.1 molar 炭酸ナトリウムを少量ずつ加え、溶液の pH を 8.8 から 9.0 の間に調整します（これ以上の値にならないようにしてください）。続いて、活性エステル 8 当量に相当する量の T-C-O-N-H-S を加えます。溶液を数回ゆっくりと転倒混和させ、アルミホイルで包みます。次に、チューブを室温で約1時間、緩やかに撹拌しながらインキュベートします。1時間後、充填済みの使い捨てサイズ排除脱塩カラムを用いて、反応液から免疫複合体を精製します。反応混合液1 mLをカラムに加え、続いて0.9%滅菌生理食塩水を1.5 mL加えます。次に、0.9% salineを用いて、ヒト化HUA 33 TCO産物を2 mLで溶出させます。UV vis分光光度計を用いて産物の濃度を測定します。濃度が目標値より低い場合は、50,000分子量分画の遠心フィルターを用いて産物を濃縮してください。まず、マイクロ遠心チューブで TZ BN notta の 0.5 mg/mL 溶液を調製します。2本目のマイクロ遠心チューブに、調製した TZ BN Notta 溶液 10 µL を、pH 5.5 の 0.2 M 酢酸アンモニウムバッファー 400 µL に加えます。以降の各ステップの前後に、サンプルの放射能量を必ず測定し、記録してください。これは、放射化学収率の正確な算出および記録保持に不可欠です。次に、2000 micro curiesのcopper 64をTZ BN Notta溶液に加えます。この混合液を室温で10分間、軽く撹拌しながらインキュベートします。生成物を精製するには、逆相C18 HPLCを用います。0.1% TFAを含むアセトニトリルと水の勾配を15分間で5%から95%、次いで95%から5%へと変化させて生成物を希釈します。放射標識されたtz, BN notaは9.8分に溶出し、一方の遊離Cu 64は2～4分に溶媒フロントとともに溶出します。エバポレーターを用いてHPLC溶媒を除去した後、放射標識生成物を0.9%滅菌生理食塩水に溶解し、速やかに使用してください。本手順は、調製したHEA 33 TCO溶液の等量を0.9%滅菌生理食塩水で0.5 mg/mLの濃度に希釈することから開始します。次に、溶液200 µLをゼノグラフト移植マウスの尾静脈に注入します。ヒト化a 33 TCOを24時間循環させ、腫瘍に蓄積させます。24時間後、0.9%滅菌生理食塩水中で1.5 mCi/mLの濃度に調製したcopper 64標識TZ BN Nottaを投与します。次に、任意のタイミングで、調製した放射性リガンド溶液 200 µL をマウスの尾静脈に注入します。マウスを麻酔し、小動物用 PET スキャナーのベッドに配置します。麻酔はノーズコーンを通じて維持し、足指のつまみテストで麻酔状態を確認してください。また、乾燥を防ぐために、眼科用軟膏を薄く塗布します。次に、350から700 keVの範囲で6,000万件の同時計数イベント、同時タイミング6 nsの静止スキャンを用いて、ペットデータの取得を行います。イメージング後、マウスが意識を取り戻すのを待ってから、他のマウスと共にケージに戻します。33抗原を発現するSW 1222大腸がんを移植したサイミアヌードマウスを使用しました。記載されたプロトコルを用いて、ゼノグラフトの検討を行った。急性期の生物学的分布およびPETイメージング実験の両方において、プレターゲティング戦略は、優れた画像コントラストと高い腫瘍対背景放射能比で大腸がんゼノグラフトを描写できることが明らかになった。数時間かけて放射性リガンドが糞便中に排泄されることで、腫瘍対背景放射能比は非常に高くなる。このプレターゲット法におけるいくつかの変数は、あらゆるイメージング戦略と同様に最適化が必要でした。抗体TCO複合体の投与量を100 µgではなく300 µgにした場合、また、投与間隔を24時間から12時間に短縮した場合、いずれもマウスの心臓に視認できる放射能の増加が見られました。どちらの場合においても、初期時間における腫瘍への集積に明確に示されているように、腫瘍部位でのクリック反応は依然として起こっていました。しかしながら、クリック反応は血液中でも明らかに進行しており、これは望ましくない結果です。この手順を試みる際は、プレターゲティングにおけるすべての変数の絶妙なバランスを実現する必要があります。TCO免疫複合体の量、および注射間の時間間隔を最適化することが非常に重要です。放射性物質の取り扱いは非常に危険であるため、適切なPPE（個人用保護具）の着用や、常に放射線が遮蔽されていることの確認など、実験中の予防策を講じることを忘れないでください。

harnessing-bioorthogonal-inverse-electron-demand-diels-alder

Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

このビデオでは、腫瘍の治療のために免疫複合体とそれに続く放射性リガンドを投与するプレターゲット放射性免疫療法またはPRITの技術について説明しています。この放射線免疫療法は、健康な組織への放射線量を減らし、抗体ベースのベクターと互換性のない非常に短い半減期の放射性核種を利用します。...

プレターゲット放射性免疫療法:治療用放射性核種を腫瘍に標的送達する方法

我々は、順次、オンチップバイオ直交環化学と抗体抗原取り込みを使用して、低分子の急速な可逆固定化および表面プラズモン共鳴（SPR）の研究のための官能化ナノ粒子集合体のための手法を提案する。...

可逆小分子またはバイオセンサー応用のためのマルチコンポーネント構造を固定化するために、マイクロ流体オンチップキャプチャ - 環化反応

その数日間の放射性半減期と良好な崩壊特性により、陽電子を放出する放射性金属89Zrは、PETイメージングのための抗体ベースの放射性医薬品での使用に非常に適しています。このプロトコルでは、89Zr標識抗体のバイオコンジュゲーション、放射合成、および前臨床応用について説明します。...

バイオコンジュゲーションとのアルタン<sup&gt; 89</sup&gt;のZr-DFO標識抗体

125 I標識アジドの合成と銅のないクリック反応を用いて、dibenzocyclooctyne（DBCO） -基コンジュゲート、13-nmサイズの金ナノ粒子の放射性標識のための詳細な手順が記載されています。...

使用した金ナノ粒子の効率的な放射性標識のために最適化されたプロトコル<sup&gt; 125</sup&gt; I標識アジド補綴グループ

ここでは、プレターゲティングと生体直交化学のための三座99mTc(I)キレート-テトラジン誘導体の放射性標識とin vivo試験のためのプロトコルについて説明します。...

の調製と評価<sup&gt; 99メートル</sup&gt; Tc標識三座キレートバイオ直交化学反応を用いて事前ターゲティングするため

我々は、[ 18 F] 3F4APの半自動放射化学合成および品質管理手順を実証する。...

[<sup&gt; 18</sup&gt; F] 3F4AP：脱髄疾患イメージングのための新規PETトレーサ

安易な蛍光アッセイであるアミノ アミノアシル tRNA-合成酵素/tRNA ペア哺乳類細胞で発現したタンパク質に非正規のアミノ酸 (ncAAs) を組み込むことの効率を評価する. します。サイトと bioorthogonal GPCR の生きているセルのラベルを連結する光橋マッピングを含む ncAAs の G タンパク質共役受容体 (Gpcr)...

光橋マッピングおよび生きている哺乳類細胞における Bioorthogonal 化学の Gpcr にプローブを化学物質の遺伝的結合の最適化

複数初期臨床研究臨床試験に関与している陽電子放出断層撮影 (PET) 画像処理サイトには、堅牢で汎用性の高い検査製造能力が必要があります。ルコース [18F] を使用して Clofarabine、カセット ベースの柔軟な radiosynthesizer...

臨床用陽電子放出断層レントゲン写真撮影 (ペット) ルコース合成プロトコルの自動化

このプロトコルは合成とトランスcyclooctene (TCO) の特性について説明します-pretargeted 放射免疫療法 (した) の177Lu ラベル tetrazine (Tz) リガンド抗体を変更します。さらに、それは体内体内分布および大腸癌のマウスモデルにおける縦断的療法研究のこれらの 2...

逆電子需要ディールス ・ アルダー反応に基づく pretargeted 放射免疫療法

2光子励起蛍光顕微鏡(2PEF)と統合された酸化重水素(重水D2O)プローブ誘導ラマン散乱(DO-SRS)顕微鏡を使用して、アミノ酸によって制御される細胞の代謝活動を直接視覚化するプロトコルを提示します。...

芳香族アミノ酸によって制御される細胞代謝のバイオ直交化学イメージング

このプロトコルは、「ループ法」[11C]メチル化によって4つの炭素11放射性トレーサーを調製する詳細な手順を示しています。[11C]ER-176を合成する手順を、[11C]MRB、[11C]mHED、および[11C]PiBの3つの追加の放射性トレーサーのデータとともに説明します。ループ法は、従来の反応容器[11C]メチル化に対して放射化学的収率を高め、効率的な合成を提供します。...

ループ法を用いた臨床研究のための炭素11放射性配位子の効率と放射性標識収率の向上

学ぶバイオ直交逆電子需要ディールスアルダー環化を用いたプレターゲッティングPETイメージング法。トランスシクロオクチン標識抗体とテトラジン放射性配位子を用いて、大腸がんの高コントラスト腫瘍描出と低被ばくを実現する技術です。

プレターゲッティングPETイメージング用バイオ直交逆電子需要ディールスアルダー環化を活用

さらに動画を探す