Name: 正常マウスで70％肝切除後の血管と実質再生の可視化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 10 s
Description: 学ぶマウスの70％肝切除後における血管と実質の再生可視化手法。Microfil造影、µCTスキャン、3D再構成を用いて血管成長を定量化し、肝臓再生における血管動態の理解を深める。

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著者は、システム生物学ネットワーク「Virtual Liver」を通じたドイツ教育研究省(BMBF)からの資金提供、助成金番号0315743(ExMI)、0315765(英国Jena)、0315769(MEVIS)を認めています。また、技術サポートを提供してくれたFrank Schubert氏にも感謝しています。

動物を対象とする手順は、テューリンゲンのLandesamtエリーゼVerbraucherschutz Abteilung TiergesundheitウントTierschutz、ドイツによって承認されています。門脈系が肝静脈系とは別に可視化したので、別々の動物は異なる血管木のために必要でした。 1.試薬の調製<ol><li>ヘパリン - 生理食塩水<ol><li> 10ミリリットルの生理食塩水（5 IU / mL）に0.1ミリリットルのヘパリンを追加します。 </li></ol></li><li>シリコーン化合物の混合物<ol><li> 1 5ミリリットルチューブに2ミリリットルMV-120を追加します。 40％溶液をあるために3 mlのMVの希釈剤を添加することによって、MV-120を希釈します。 </li></ol></li></ol> 2.ポータル静脈系シリコーンインジェクション<ol><li>開腹<ol><li>麻酔導入チャンバー内にマウスを置き、2％イソフルランおよび0.3リットル/分の酸素とそれをanaesthetize。 </li><li> 2％の連続吸入でテープを使用して、オペレーティングテーブルの上に麻酔したマウスをされている修正プログラムofluraneおよび0.3リットル/分の酸素。マウスの足指ピンチ引っ込め反射をチェックして、反射が存在しない場合は、操作を開始します。 </li><li>スキン層と筋肉層のための電気凝固のためのはさみを使用して腹部に横切開を行います。綿のヒントを使用して、左側に腸を移動し、生理食塩水に浸したガーゼで腸にカバーしています。 </li></ol></li><li>カテーテルの挿入<ol><li>マイクロピンセットを用いて、顕微鏡下で門脈を解剖。その分岐部に1mm程度の距離で、肝外門脈の下に1 6-0絹縫合糸を置き、後で使用するために緩くそれを結びます。 </li><li> 5分間の全身ヘパリン化のための陰茎静脈（オス）または下大静脈（メス）を介して調製ヘパリン生理食塩水を注入します。 </li><li>門脈に26ゲージ針を用いて（26 G）カテーテルを挿入し、クランプで固定します</li></ol></li><li>ヘパリン生理食塩液とシリコーン化合物灌流<ol><li>負荷ヘパリン生理食塩水ゾル5ミリリットルの注射器でutionと灌流装置の電源をオンにします。気泡を避けるために、ヘパリン生理食塩水で十分にカテーテルを埋めます。 </li><li>カテーテルに延長チューブを接続し、しっかりとそれらを修正。 0.4ミリリットル/分の灌流速度でヘパリン生理食塩水灌流を開始します。 </li><li>事前配置された二重カテーテルを固定し、脾静脈および腸間膜静脈からの血流を遮断するための6-0絹縫合糸を結紮。麻酔下での灌流を介して放血によりマウスをEuthanatize。 </li><li>しっとりそれを維持するために、全体の灌流処置中に生理食塩水を使用して肝臓をすすぎます。 </li><li> MV-120チューブに硬化剤を0.1ミリリットルを追加します。シリコーン注射器にヘパリン生理食塩水の注射器を変更します。 </li><li>カテーテルシステムを事前入力し、門脈系を充填するために、約1分間0.2 ml /分の灌流速度でシリコーン灌流を開始します。表面の血管が青色の電源を入れたときにシリコーン灌流を停止します。 </li></ol></li><li>サンプリング<ol><li> UNT in-situで肝臓を保ちますILは、シリコーンは、完全に、約15〜30分後に重合されます。無傷の肝臓を維持するために注意して肝臓や隣接臓器を結ぶ靭帯を解剖。肝臓を外植し、固定のためにホルマリンに入れて。 </li></ol></li></ol> 3.肝静脈系シリコーンインジェクション<ol><li>ステップ2.1で実行されるように開腹術を行い、完全に術野を公開します。 </li><li>カテーテルの挿入<ol><li>マイクロピンセットを用いて、顕微鏡下で門脈を解剖。その分岐部に1mm程度の距離で、肝外門脈の下に1 6-0絹縫合糸を置き、後で使用するために緩くそれを結びます。 </li><li> 5分間の全身ヘパリン化のための陰茎静脈（オス）または下大静脈（メス）を介して調製ヘパリン生理食塩水を注入します。 </li><li>門脈に針で1 26 Gカテーテル（カテーテル1）を挿入し、クランプで固定します。下大静脈に針を持つ別の26のGカテーテル（カテーテル2）を挿入し、クランプで固定します。 </li><li> 6-0の合成、モノフィラメント、非吸収性ポリプロピレン縫合糸を用いて、（左と右腎静脈を含む）下大静脈とその先端の枝を結紮。 </li></ol></li><li>ヘパリン生理食塩液とシリコーン化合物灌流<ol><li> 5ミリリットルの注射器にヘパリン生理食塩水ソリューションをロードし、灌流装置の電源をオンにします。気泡を避けるために、ヘパリン - 生理食塩液で完全にカテーテル1を入力します。カテーテル1に延長チューブを接続し、しっかりと固定します。 0.4ミリリットル/分の速度でヘパリン生理食塩水灌流を開始します。 </li><li>事前配置された二重カテーテルを固定し、脾静脈および腸間膜静脈からの血流を遮断するための6-0絹縫合糸を結紮。麻酔下での灌流を介して放血によりマウスをEuthanatize。 </li><li>しっとりそれを維持するために、全体の灌流処置中に生理食塩水を使用して肝臓をすすぎます。 MV-120チューブに硬化剤を0.1ミリリットルを追加します。シリコーン注射器を使用してExchangeヘパリン生理食塩水の注射器。 </li><li> suprahepatにクランプを置きIC下大静脈は、肝臓の流出を妨害します。 </li><li>カテーテル2に延長チューブを接続し、報告されているように客観的肝血管容積に到達するまでの約2分間0.2ミリリットル/分の灌流速度でシリコーン灌流を開始します。表面の血管が青色の電源を入れたときにシリコーン灌流を停止します。 </li></ol></li><li>サンプリング<ol><li>肝臓への損傷を避ける肝靭帯を解剖。肝臓を外植し、固定のためにホルマリンに入れて。 </li></ol></li></ol> 4.マイクロCT（μCT）スキャン μCTを用いた外植肝臓試料をスキャンするには、以下のステップが必要とされています。 <ol><li>固定液のうち、肝臓試料を取ります。 μCT床上に肝臓を置きます。 μCTに肝臓サンプルとμCTのベッドを置きます。 </li><li>スキャンを開始する前に、トポグラムを取得します。小さな肝臓試料のための1つの副走査と大きなサンプル用の2つのsubscansを使用してください。 </li><li>選択します81;高解像度のCTプロトコル（ 例えば 、HQD-6565-390-90）。このプロトコルは、副走査あたり90秒のスキャン時間で1全回転の間に1032のx 1012ピクセルと720の突起を取得します。 μCTスキャンを開始します。 </li></ol> 5.組織学的連続切片<ol><li> μCTスキャン後に全体としてパラフィン中の肝臓片を埋め込みます。 2,000〜2,500一連のセクションで、その結果、4μmのセクションに全体のパラフィンサンプルをカットします。 </li><li>虚血性損傷のマーカーとして増殖マーカーおよびHMGB1などのKi-67などの対象の分子事象を可視化するための適切な染色技術で染色切片。科学的疑問に対するで染色の配列を決定します。 </li><li>染色した切片をデジタル化全体スライドスキャナを使用してください。 </li><li>血管樹（複数可）（既に実行可能）の3次元再構成を行い、血管樹（進行中の研究）に対するにおける分子事象の3次元分布を可視化します。 </li></ol>

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</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

シリコーン注入とμCTスキャンすることにより、血管ツリーを対比すると、血管新生の進行5,7,8,10を研究するために頻繁に腫瘍モデルおよび神経学的疾患モデルで導入されました。シリコーン注入の方法論の改善は、マウスにおける部分肝切除後の血管の成長を可視化し、定量化するために本研究で作製しました。 良好な潅流品質を達成するために注意が必要重要なステップの数があります。まず第一に、全身ヘパリン化は非常に肝臓内部の血液凝固を避けるために、ヘパリンまたは生理食塩水で肝臓をフラッシュする前にお勧めします。チューブからの気泡の除去は、シリコーン灌流の良好な品質を達成することも重要です。灌流速度と圧力の決意は最初の生理学的血行動態パラメータ17に基づくべきです。灌流時間は、総注入量を反映していると予想される血管内を取って推定されていますボリュームとアカウントへのカテーテルシステムの事前入力ボリューム。 シリコーンは、血液または生理食塩水とは異なる粘性の高い化合物です。したがって、いくつかの試験は、灌...

肝再生は、多くの場合、肝臓重量および体積の増加を測定することによって、および肝細胞増殖速度16を評価することによって決定されます。しかし、肝臓の再生だけでなく、実質の再生だけでなく、血管再生6を誘導されます。したがって、血管の成長はさらに、肝臓再生の進行におけるその役割に関して調査する必要があります。肝臓の血管系の可視化は、血管再生の我々の理解を進めるために重要です。多数の間接的な方法は、肝臓の血管再生の根底にある分子メカニズムを研究するために開発されてきました。伝統的に、サイトカインの検出（血管内皮増殖因子、VEGF）14は 、ケモカインおよびその受容体（CXCR4 / CXCR7 / CXCL12）4は、血管再生を研究するための主力でした。しかし、血管系の定量分析と一緒に3Dモデルが重要な解剖学的を追加します肝実質と血管の再生の間の重要な関係のより良い理解を得るための情報。 血管ツリーを対比必要肝臓の血管系を可視化するために、マウスを直接門脈又は肝静脈血管樹に放射線不透過性のシリコーンゴムの造影剤を注入しました。シリコーン及び器官の外植の重合後に、肝臓試料を、CTスキャナーを使用してμCTスキャンを行いました。スキャンは、ボクセルの画像表現をもたらし シリコーン注入標本9。 品質管理のために、血管系は、最初の臨床前のソフトウェアを使用して3Dで可視化しました。セグメント化は、軟組織の強度と血管強度の閾値を設定することによって行いました。得られた容器マスクは表面レンダリングを用いて可視化しました。ソフトウェアはまた、vasculの二つのパラメータを手動で決意に許可しますarの成長：最大血管長と半径。 前臨床ソフトウェアは、次いで、血管樹および供給または排出する血管領域13のその後の計算の3次元再構成のために使用しました。また、このソフトウェアは自動的にそのようなも総エッジ長や総容器容積として知られている全ての可視血管構造の全体の長さなどの血管の成長の特定のパラメータを、決定しました。 シリコーン灌流手順はナイーブマウスにおいて、70％部分肝切除（PH）を受けたマウスで行いました。肝臓は、前述の可視化および定量化技術を使用して、血管と実質肝再生を分析するための切除後の異なる観測時点で採取しました。 この映画の主な目的は、次のとおりです。（1）最適な対照的なを達成するために必要な繊細な注入技術を実証し、（2）FRを結果として潜在的な利益を示しますμCTおよび組織学的連続切片を用いて得られた試​​料のオム詳細な分析。この映画を見た後、読者が特定の血管系にシリコーン化合物を注入する方法のと技術の有用性と適用性をよりよく理解している必要があります。

<table><tbody><tr><td>PERFUSOR&reg;VI</td><td>B.BRAUN</td><td>87 222/0</td><td></td></tr><tr><td>Pipetus&reg;-akku</td><td>Hirschmann</td><td>9907200</td><td></td></tr><tr><td>Pipets</td><td>Greiner</td><td>606180</td><td></td></tr><tr><td>マイクロはさみ</td><td>ファイン サイエンス ツール (F&middot;S&ミッドドット;L)</td><td>No.14058-09</td><td></td></tr><tr><td>micro serrefine</td><td>ファインサイエンスツール (F&middot;S&ミッドドット;L)</td><td>No.18055-05</td><td></td></tr><tr><td>マイクロクランプアプリケーター</td><td>ファインサイエンスツールズ(F&middot;S&ミッドドット;L)</td><td>No.18057-14</td><td></td></tr><tr><td>ストレートマイクロ鉗子</td><td>Fine Science Tools (F&middot;S&ミッドドット;L)</td><td>No.00632-11</td><td></td></tr><tr><td>湾曲マイクロ鉗子</td><td>Fine Science Tools (F&middot;S&ミッドドット;L)</td><td>No. 00649-11</td><td></td></tr><tr><td>針ホルダー</td><td>ファインサイエンスツール (F&middot;S&ミッドドット;L)</td><td>No. 12061-01</td><td></td></tr><tr><td>1 ml シリンジ</td><td>B.Braun</td><td>9161406V</td><td></td></tr><tr><td>5 ml シリンジ</td><td>B.Braun</td><td>4606051V</td><td></td></tr><tr><td>延長および接続ライン</td><td>B.Braun</td><td>4256000</td><td>30 cm, インナー & オスラッシュ; 1.2 mm</td></tr><tr><td>6-0 シルク (パーマ ハンド セイド)</td> <td>Ethicon</td><td>639H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 prolene</td><td>Ethicon</td><td>8711H</td><td></td></tr><tr><td>マイクロフィル&reg;MV希釈剤</td><td>FLOW TECH, INC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microfil&reg;MV - 120</td><td>FLOW TECH, INC</td><td>MV - 120 (青)</td><td></td></tr><tr><td>MV 硬化剤</td><td>FLOW TECH, INC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン 2500 I.E./5 ml</td><td>Rotexmedica</td><td>ETI3L318-15</td><td></td></tr><tr><td>Saline</td><td>Fresenius Kabi Deutschland GmbH</td><td>E15117/D DE</td><td></td></tr><tr><td>Imalytics Preclinical software</td><td>Experimental Molecular Imaging, RWTH アーヘン大学, ドイツ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HepaVision</td><td>Fraunhofer MEVIS、ブレーメン、ドイツ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NanoZoomer 2.0-HT&nbsp;デジタルスライドスキャナー</td><td>浜松電子印刷社&nbsp;</td><td>C9600</td><td></td></tr><tr><td>トモスコープデュオ CT&nbsp;</td><td>CT Imaging GmbH, エアランゲン, ドイツ</td><td>TomoScope&reg;&nbsp;シナジー</td><td></td></tr></tbody></table>

正常マウスで70％肝切除後の血管と実質再生の可視化

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

変性シリコーンの注入手順は、肝臓の血管樹の視覚化のために使用しました。この手順は、ポータルまたは肝静脈に、26 Gカテーテルを介して、シリコーン化合物の生体内注射からなりました。シリコーン注入後、臓器を外植し、ex vivoでのマイクロCT（μCT）スキャンのために準備します。シリコーン注入手順は、技術的に困難です。成功した結果を達成することは、外科医からの豊富な顕微経験が必要です。この手順の課題の一つは、シリコーン化合物のための適切な灌流速度を決定することを含みます。シリコーン化合物のための灌流速度は、対象の血管系の血行動態に基づいて定義される必要があります。不適切な灌流速度は、血管木の不完全灌流、人工拡張および破裂につながることができます。 血管系の3D再構成は、CTスキャンに基づいていたと使用して達成されましたこのようなHepaVisionとして前臨床ソフトウェア。再構築された血管樹の品質が直接シリコーン灌流の品質に関連していました。このような総血管容積のような血管の成長の指標と続い計算血管パラメータは、血管の再構成に基づいて計算しました。 μCTスキャン後の試験片のその後の組織学的後処理のために許可されたシリコーンと血管樹を対比。試料を連続切片、組織学的分析及び全スライドスキャンを、その後、組織の画像に基づいて血管樹の3D再構成を行うことができます。これは、分子事象および血管樹に関するそれらの分布を検出するための前提条件です。この変性シリコーン注入手順は、他の器官の血管系を可視化し、再構成するために使用することができます。この技術は、広く様々な動物aで血管の解剖学的構造と成長についての研究に適用する可能性を有しています目の疾患モデル。

品質基準 シリコーン注射の質は、処置中の肉眼で判断することができます。肝臓の表面上の小血管が青色化合物と徐々に埋めます。正常な血管構造が肝臓表面上に観察された場合には、シリコーンゴムの射出品質が良好でした。灌流量が不十分であった場合、肝臓表面の微小血管が完全には満たされませんでした。これとは対照的に、充填にわたり臓器の表面に不規則な青い斑点で示されるように、血管の破裂を引き起こしました。両方とも、3D再構成が最終的に手順の失敗をレンダリングする際に困難を引き起こしています。 注入品質のより良い評価のために、前臨床ソフトウェアを使用して3D血管再建続いμCTスキャンを行いました。注射は成功のwhであると決定されましたセグメンテーションエン目に見える血管外漏出によって示さ破裂した構造をなし、無傷の完全...

血管再生を視覚化するために使用されるツールは、血管の樹木を対比するための方法を必要とします。このフィルムは、血管樹の最適なコントラストを達成し、μCTおよび組織学的シリアル切片を使用して得られた標本の詳細な分析から生じる潜在的な利点を示すために使用される繊細な注入技術を示しています。

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

正常マウスにおける70%部分肝切除後の血管および実質の再生の可視化。従来、肝再生は肝重量および体積の増加の測定、ならびに肝細胞増殖率の決定によって評価されてきました。現在、私たちはマウスの肝血管再生に関心を持っており、血管成長の可視化および定量化を目的としています。このようにして、血管再生をイメージングするためのワークフローを確立します。このワークフローは、血管系の造影、CTスキャンの取得、3D再構成、および得られた画像の定量的・定性的分析の4つのステップで構成されています。まず、血管系の造影からワークフローを開始します。まず、正常または切除後の肝臓を露出させ、次に、関心のある血管系に応じて門脈または肝静脈に重合性シリコン造影剤を注入します。続いて、摘出した肝臓をMicroCTでスキャンします。スキャン後、Imalyticsのプリクリニカルソフトウェアを用いて3D血管再構築を行います。得られた画像の技術的品質が十分であれば、HepaVisionを用いて3D再構成を行うことができます。このプログラムは、肝胆道手術の計画のために臨床現場で使用されています。血管系の3D可視化に加え、このプログラムでは、流入・流出血管に基づいて、肝臓全体の体積および各葉の体積の可視化と算出が可能です。再構成後、計算手法を用いることで、特定の血管の長さや直径など、血管成長を示す追加のパラメータを決定できます。これにより、血管成長の定量的な記述が可能になります。一方、ホルマリン固定したMicrofilサンプルは、連続切片として切断することが可能です。連続切片は、ホールスライドスキャナーを用いて染色およびデジタル化が可能です。連続切片を剛体登録および弾性登録した後、門脈系と肝静脈系の両方の3D血管樹を再構成できます。今後のステップとして、分子イベントの空間分布を探索したいと考えています。肝再生における注目すべき分子イベントの一例として、肝細胞核における増殖マーカーKi-67の発現と、3D再構築された血管樹におけるその空間分布が挙げられます。次に、Microfil注入法の詳細な手順について説明します。試薬の調製です。Microfil化合物混合液には、MV希釈液、MV化合物（今回は青色のMV-120）、および硬化剤が必要です。また、ピペット、チューブ、およびピペッターも用意してください。5 mLチューブ1本に、MV-120を2 mL準備します。次に、3 mLのMV希釈液を加えて希釈します。穏やかに振って混合してください。ヘパリン生理食塩水については、生理食塩水10 mLにヘパリン1 mLを加えます。手術台の準備を行います。まず顕微鏡を用意し、次に一連の消耗品を準備します。6-0シルクおよび6-0ポリプロピレン縫合糸、5 mLおよび1 mLシリンジ、30ゲージおよび21ゲージ針、シリンジとカテーテルを接続するための延長チューブ、針付き26ゲージカテーテル、綿棒およびガーゼです。第三に、手術器具が必要です。マイクロ器具、クランプ、および電気凝固器を用意します。第四に、灌流ポンプが必要です。動物の準備。マウスを麻酔導入チャンバーに入れ、2% isofluraneと0.3 milliliter per minuteの酸素で麻酔をかけます。2% isofluraneと0.3 milliliter per minuteの酸素を継続的に吸入させながら、麻酔状態のマウスをテープで手術台に固定します。Microfil注入、門脈系。皮膚層にはハサミを、筋肉層には電気凝固器を使用して、腹部に横切開を加えます。綿棒を用いて腸管を左側に寄せ、生理食塩水で湿らせたガーゼで腸管を覆います。顕微鏡下で門脈を剥離します。肝外門脈の分枝点から約1 mmの距離の直下に、6-0シルク縫合糸を留置します。後で使用するため、緩く結んでおきます。全身的なヘパリン化を行うため、ヘパリン生理食塩水を陰茎静脈から5分間注入します。このアニメーションでは、カテーテル挿入の手順を示します。まず、肝外門脈の下に6-0シルク縫合糸を配置し、次に26ゲージのカテーテルを門脈に挿入してクランプで固定します。カテーテルの固定および、脾静脈と腸間膜静脈からの血流遮断のため、あらかじめ配置した結紮糸を縛ります。ここでは、その手術手順を実演します。針付きの26ゲージカテーテルを挿入します。カテーテルをさらに挿入し、同時に針をゆっくりと引き抜きます。クランプを用いてカテーテルを固定します。気泡が混入するのを防ぐため、カテーテル内をヘパリン生理食塩水で完全に満たします。延長チューブをカテーテルに接続し、しっかりと固定します。灌流ポンプの電源を入れます。流速 0.4 milliliter per minute でヘパリン生理食塩水の灌流を開始します。灌流直後に右葉が蒼白になることを確認します。灌流の手順全体を通して肝臓を湿った状態に保つため、生理食塩水で洗浄します。麻酔下での灌流による失血により、マウスを安楽死させます。肝臓全体が蒼白になるまで、ヘパリン灌流を数分間継続します。Microfil灌流の前に、重合プロセスを促進させるため、調製したMicrofil化合物に硬化剤を0.1 milliliter添加します。Microfil化合物を5 milliliterシリンジと延長チューブに充填します。以前と同様に、カテーテルにヘパリン生理食塩水を注入して気泡を取り除きます。チューブをカテーテルに接続し、しっかりと固定します。流速 0.2 milliliter per minute で、約1〜2分間 Microfil の注入を開始します。青色の薬剤が門脈枝にゆっくりと広がっていく様子を観察します。赤色の円で示されているように、各肝葉の表面に青色の血管構造が現れた時点で、灌流を停止してください。Microfil化合物を重合させるため、肝臓を少なくとも15分間放置します。Microfil注入、肝静脈系。手順は基本的に門脈系への注入と同様です。肝外門脈の分岐点から約1 mmの距離に、6-0シルク縫合糸を配置します。次に、門脈にカテーテルを挿入し、クランプで固定します。同様に、下大静脈にも別のカテーテルを挿入し、クランプで固定します。カテーテルの固定および脾静脈と腸間膜静脈からの血流遮断のため、あらかじめ配置しておいた縫合糸を結紮します。肝臓からの流出を遮断するため、肝上大静脈にクランプを装着します。両腎静脈および下大静脈遠位端を含む下大静脈の分枝を結紮します。カテーテル1を用いて、ヘパリン生理食塩水で肝臓をフラッシュします。カテーテル2を用いて、肝静脈系にMicrofil化合物を灌流させます。結果は、Micro CT再構成図です。Micro CTスキャン後、Imalytics preclinicalソフトウェアを用いて3D血管再構成を得ました。門脈および肝静脈系の両方における血管再生は、主要な血管構造の伸長と拡張に加え、より小さな血管の分枝として現れました。術後2日目には、残存葉の血管樹が伸長しました。術後7日目までには、同一の主門脈および肝静脈からさらに小さな分枝が視認できるようになりました。結果：肝血管系およびそれに依存する肝区域の3Dカラーコード再構築。HepaVisionによるカラーコード再構築後、各肝葉を3次元すべてで容易に可視化することができた。表に示されている通り、正常肝の肝静脈系について、全肝および各葉の肝体積を決定し、ここに示した。結果、連続切片および再構成。一方、ホルマリン固定したMicrofilサンプルに対して連続切片作成を行った。染色した連続切片をホールスライドスキャナーを用いてデジタル化し、両システムの血管系の再構成に使用した。これらは、剛体および弾性レジストレーション前後におけるマウス肝臓連続切片スタックの横断面です。コンピュータによるレジストレーション後、門脈系および肝静脈系を単一の3Dモデルとして再構築できます。この手動および計算による時間のかかる工程には、さらなる最適化が必要です。次なるステップである、血管樹に対する分子イベントの空間分布の可視化は、現在開発中です。このステップは、造影された血管樹から得られたMicro CT情報と組織学的情報の融合、あるいは純粋に組織学的な情報の3D可視化として想定されます。この場合、Micro CT情報は、困難な組織学ベースの3D再構築における品質管理として機能することになります。これが実現すれば、肝再生をより詳細に調査するためのツールが得られます。特に、血管再生に関連した分子イベントの空間的分布および肝実質の解析に有用です。

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学ぶマウスの70％肝切除後における血管と実質の再生可視化手法。Microfil造影、µCTスキャン、3D再構成を用いて血管成長を定量化し、肝臓再生における血管動態の理解を深める。

正常マウスで70％肝切除後の血管と実質再生の可視化

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