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DOI: 10.3791/64493-v
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This article presents an optimized protocol for isolating hepatocytes in mice following partial hepatectomy. The method effectively retains lipid-laden hepatocytes, which are typically lost during density-gradient centrifugation, allowing for the study of regenerating hepatocyte populations.
脂質を含んだ肝細胞は肝臓の再生に固有のものですが、通常は密度勾配遠心分離で失われます。ここでは、脂肪肝細胞を保持する最適化された細胞分離プロトコルを提示し、マウスの部分肝切除後に再生肝細胞の代表的な集団を生み出します。
このプロトコルの全体的な目標は、密度勾配遠心分離を必要とせずに、部分肝切除後のマウスにおける肝細胞単離のための最適化された方法を提示することです。通常、初期の再生中に脂質を含んだ肝細胞の大部分が見られます。低密度のために密度勾配遠心分離で通常失われるこれらの脂肪肝細胞は、このプロトコルで保持されます。
灌流装置を準備するには、ルアーロックコネクタを使用して、26ゲージのIUIカニューレをチューブの出口端に接続します。次に、チューブを洗い流し、チューブの入口端を水浴中の予熱した灌流バッファーチューブに挿入します。毎分3ミリリットルのポンプ速度で温かい灌流バッファーでプライミングします。
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