Name: 蛍光顕微鏡を用いた脂質二重層中の単一タンパク質の追跡 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: 学ぶ脂質二重層中の単一膜タンパク質追跡法。蛍光顕微鏡を用いてアクアポリン4の動態と熱力学的特性を解析し、生体模倣膜におけるタンパク質挙動の理解を深める。

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<table><tbody><tr><td>1/4波面板</td><td>ソーラブ</td><td>WPQ05M-633</td><td>レーザーの色を合わせてください</td></tr><tr><td>100Xオイル・オブジェクティブ</td><td>オリンポス</td><td>12-563-659</td><td>1.45 N/A アポクロマティック</td></tr><tr><td>16:0-18:1 PC</td><td>アヴァンティ極性脂質</td><td>850457</td><td>POPC リン脂質</td></tr><tr><td>18:0 PEG2000体育</td><td>アヴァンティ極性脂質</td><td>880210</td><td>アンモニウムソルト</td></tr><tr><td>300mmレンズ</td><td>ソーラブ</td><td>AC254-300-A-ML</td><td></td></tr><tr><td>633 nm He:Neレーザー</td><td>メレス・グリオ</td><td>05-LHP-927</td><td>他の光源や波長に変更することも可能です</td></tr><tr><td>633nmバンドパスフィルター</td><td>クロマテック</td><td>633/10X</td><td>使用されているレーザーとのマッチング</td></tr><tr><td>655nmロングパスフィルター</td><td>クロマテック</td><td>ET655LP</td><td>染料やレーザーの波長に合わせて変更してください</td></tr><tr><td>アンドール・ソリス1世</td><td>アンドール&nbsp;</td><td>アンドール・ソリス1世</td><td>画像キャプチャ用のソフトウェア</td></tr><tr><td>ATTO 655&nbsp;</td><td>ATTO-TEC</td><td>西暦655年</td><td>NHS-エステル修飾法は、単一分子の加工に適した修飾された染料なら何でも使用できます。ATTOが推奨されますが、Cy5/7も使用可能です</td></tr><tr><td>バイオビーズ SM-2 レジン</td><td>バイオラッド</td><td>1523922</td><td></td></tr><tr><td>塩化カルシウム</td><td>ミリポール・シグマ</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>カタラーゼ</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>C3155-50MG</td><td>牛肝臓、水溶液、およびGeから;30000単位/mg</td></tr><tr><td>クロロホルム</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>C547-1</td><td>HPLCまたは分光グレード</td></tr><tr><td>コレステロール</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>C8667-500MG</td><td></td></tr><tr><td>カバースリップ</td><td>ESCO オプティクス</td><td>R525000</td><td>25mmクォーツ</td></tr><tr><td>二色性ビームスプリッター</td><td>セムロック</td><td>FF545/650-Di01-25x36</td><td>染料やレーザーの波長に合わせて変更してください</td></tr><tr><td>EMCCDカメラ</td><td>アンドール&nbsp;</td><td>iXon Ultra 888</td><td></td></tr><tr><td>ファルコンチューブ 15mL&nbsp;</td><td>グライナー・バイオワン</td><td>188261</td><td>Cellestar細胞培養チューブ</td></tr><tr><td>グルコース酸化酵素</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>G2133-50KU</td><td>アスペルギルス・ニジェール、タイプVIIおよび100000単位/g固体(酸素添加なし)</td></tr><tr><td>ヒートガン</td><td>ハーバー・フレイト</td><td>56434</td><td>パラフィルムの加熱に使用され、一般的にどんなヒートガンでも使用可能でした</td></tr><tr><td>ヘペス</td><td>フィッシャー・バイオリエージェント</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>低自己蛍光浸漬油</td><td>ソーラブ</td><td>MOIL-30</td><td></td></tr><tr><td>メトナール</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>A452-1</td><td>HPLCまたは分光グレード</td></tr><tr><td>マイクロ遠心分離管</td><td>VMR</td><td>525-1126</td><td>1.5 mL &nbsp;</td></tr><tr><td>マイクロピペッター</td><td>エペンドルフ</td><td></td><td>さまざまです;1000 & micro;L、100 & micro;Lおよび10およびマイクロ;Lは推奨されています</td></tr><tr><td>&Oslash;1.5インチレンズチューブ</td><td>ソーラブ</td><td>SM1.5L10</td><td>外ネジ山はサンプル準備のために削り取られます</td></tr><tr><td>光学表</td><td>ニューポート</td><td>RPRリライアンス</td><td>tabelの大きさは利用可能なスペースに依存します</td></tr><tr><td>光学組織</td><td>ソーラブ</td><td>MC-50E</td><td>各種部品の清掃</td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>ミリポール・シグマ</td><td>P7669</td><td>プロセス中にガスの蛍光が出ていないか確認してください</td></tr><tr><td>圧電アクチュエータ</td><td>ニューポート</td><td>PZA12</td><td></td></tr><tr><td>空気圧振動アイソレータ</td><td>ニューポート</td><td>I-2000シリーズ</td><td>光学テーブルの不均一さを安定化するために使用され、nbsp;</td></tr><tr><td>冷蔵浴</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>アイソテンプ3016</td><td></td></tr><tr><td>シャッターコントローラー</td><td>ソーラブ</td><td>SC10</td><td>イメージングソフトウェアへのリンク</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>ミリポール・シグマ</td><td>S988</td><td></td></tr><tr><td>ステリトップフィルター</td><td>ミリポール・シグマ</td><td>S2GPT05RE</td><td></td></tr><tr><td>スイッチボックスドライバーとコントローラー&nbsp;</td><td>ニューポート</td><td>PZC200</td><td>ステージコントローラー</td></tr><tr><td>シリンジフィルター</td><td>J.T.ベイカー</td><td>SF01-98</td><td>PES 25mm 0.2 & micro;M</td></tr><tr><td>TEC要素</td><td>ソーラブ</td><td>TEC3-2.5</td><td>ペルティラーヒートポンプをサンプルホルダーおよび対物レンズカラーに接続するために使用されます</td></tr><tr><td>温度制御器</td><td>ミアステッター・エンジニアリング</td><td>TEC-1091</td><td></td></tr><tr><td>温度検出器</td><td>ソーラブ</td><td>TH100PT</td><td></td></tr><tr><td>サーミスタ</td><td>ソーラブ</td><td>TH10K</td><td></td></tr><tr><td>チューブ・O・ダイアリーザー</td><td>Gバイオサイエンス</td><td>786-611</td><td>4K MWCO</td></tr><tr><td>UVオゾンクリーナー</td><td>ノヴァスカン</td><td>PSDP_UV</td><td>プロシリーズ - デジタル&nbsp;</td></tr><tr><td>ズーム光学&nbsp;</td><td>ソーラブ</td><td>SM1NR1</td><td></td></tr></tbody></table>

蛍光顕微鏡を用いた脂質二重層中の単一タンパク質の追跡

Tracking Single Proteins in Lipid Bilayers Using Fluorescence Microscopy

Direct observation is a fundamental method for scientific discovery and understanding. Time-lapse single-molecule fluorescence imaging allows the ...

tracking-single-proteins-lipid-bilayers-using-fluorescence

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

このプロトコルは、全反射蛍光顕微鏡を使用して、生細胞の表面上の単一の受容体を視覚化し、追跡し、それによって受容体の横方向の移動性、受容体複合体のサイズを分析し、一過性の受容体-受容体相互作用を視覚化する方法を説明しています。このプロトコールは、他の膜タンパク質に拡張することができます。...

単一分子蛍光顕微鏡による受容体ダイナミクスの高分解能時空間解析

細胞膜タンパク質と脂質の空間分布と時間ダイナミクスは、生物学におけるホットなトピックです。ここでは、この問題は、概念的には同じ物理量の単一粒子追跡を提供する時空間画像変動解析によって対処されますが、低分子ラベルと標準的な顕微鏡セットアップを使用します。...

商業顕微鏡でのライブ細胞膜上の分子拡散法への高速蛍光イメージングから

我々は、高解像度の顕微鏡検査のために雲母支持された脂質二重層を調製する方法を提供する。マイカは、原子スケールで透明で平坦であるが、まれに、取り扱いの困難の撮影で使用されていません。我々の調製マイカシートの偶数堆積をもたらし、二層の調製に使用される材料を減少させる。...

マイカの製造は、高分解能光学顕微鏡イメージングのための脂質二重層をサポート

タンパク質官能基化平面ガラス支持脂質二重膜の調製、タンパク質内のタンパク質移動度の決定、およびタンパク質密度の測定がここに示されている。ノイズを低減した全反射顕微鏡を構築するためのロードマップが概説されており、これにより、高い時空間分解能で単一の二重層常在蛍光色素を視覚化できます。...

平面支持された二分子層​​上の単一分子蛍光顕微鏡

ここでは、単一分子感度と〜15ミリ秒の時間分解能で、偏TIRFMを用いたマイクロ流体チャネルにおけるリポソームおよびサポートされている二重層の間の単一、SNARE媒介融合事象を検出するためのプロトコルを提示します。脂質可溶性貨物放出を同時に検出することができます。リポソームサイズは、脂質拡散、および融合細孔特性が測定されます。...

偏光TIRF顕微鏡によって監視マイクロ流体フローセル内のテザー支持された二分子層​​を持つシングルプロテオリポソー​​ムのSNARE媒介性の融合

ここでは、単一粒子の拡散係数、蛍光顕微鏡で検出する単一粒子の運動とクラスター サイズの種類の定量評価ができる画像解析を追跡するためのプロトコルを提案する.

画像処理プロトコル、拡散の解析と蛍光顕微鏡による膜受容体のクラスター サイズ

3D単分子局在顕微鏡は、生きた細菌細胞における蛍光標識タンパク質の空間位置および運動軌道をプローブするために利用される。本明細書に記載される実験およびデータ分析プロトコルは、プールされた単一分子軌道に基づいてサイトソリックタンパク質の一般的な拡散挙動を決定する。...

単一分子トラッキング顕微鏡 - 細胞細胞分子の拡散状態を決定するツール

このプロトコルは、iSCATベースの画像処理と単粒子追跡アプローチを記述し、脂質膜と相互作用する高分子の分子量と拡散挙動の同時調査を可能にします。サンプル調製、質量コントラスト変換、ムービー取得、および後処理に関するステップバイステップの手順が、潜在的な落とし穴を防ぐための指示とともに提供されます。...

膜関連高分子ダイナミクスを特徴付けるための質量感受性粒子追跡

無細胞再構成は、細胞骨格アセンブリを理解するための重要なツールであり、過去10年間の研究は、最小限の系におけるセプチンダイナミクスを研究するためのアプローチを確立した。ここでは、異なる膜コンテキストでセプチンアセンブリを観察するための3つの相補的な方法、すなわち平面二重層、球状支持体、およびロッド支持体を提示する。...

生物物理学的特性と機能を研究するための膜でのセプチンアセンブリの再構成

ここでは、単一分子全反射蛍光(smTIRF)顕微鏡を使用して、人工混雑した脂質膜上の単一分子の結合、移動度、および組み立てを実行および分析するためのプロトコルが提示されます。...

高分子密集脂質膜上での1分子拡散と集合

このプロトコルでは、TIRF顕微鏡を使用して個々のイオンチャネルを追跡し、支持された脂質膜におけるそれらの活性を決定し、それによって側方膜の動きとチャネル機能の間の相互作用を定義する方法について説明します。メンブレンの準備、データの記録、および結果の分析方法について説明します。...

全反射蛍光(TIRF)顕微鏡を用いた脂質二重膜の横方向移動度とイオンチャネル活性の1分子イメージング(英語)

学ぶ脂質二重層中の単一膜タンパク質追跡法。蛍光顕微鏡を用いてアクアポリン4の動態と熱力学的特性を解析し、生体模倣膜におけるタンパク質挙動の理解を深める。

蛍光顕微鏡を用いた脂質二重層中の単一タンパク質の追跡

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