내유 이미징 창문 Dendra2 Photoswitching

요약

내유 이미징 창을 통해 Dendra2 - 라벨 종양 세포의 Intravital photoswitching 및 추적은 우리가 이미지 일 timescale 이상 선택 종양의 microenvironments에서 종양 세포의 전이성 동작을 수있는 기술입니다.

초록

단일 셀 해상도 마우스 및 쥐의 유방 종양의 지난 10 년, intravital 현미경

프로토콜

1. 내유 지방 패드로 종양 세포의 주입을 사용하여 형광 종양의 생성 :

1. 80% confluency - 40 Dendra2 단백질 (세포질 마커 등) 표현 세포 라인을 성장.
2. PBS w / O 칼슘 ² 요리 적어도 3 번 린스 ⁺ 또는 MG ^{2 +.}
3. 37 10cm 요리와 부화 당 트립신 3 ML 추가 ° C 세포의 대부분은 분리하고 그것을 흔들 수있는 평면에 대한 접시를 나오기 전까지.
4. 접시에서 모든 세포를 씻어하고,뿐만 아니라 매트릭스를 수집하는 스크레이퍼 (고무 경찰관)을 사용합니다. PBS의 5 ML을 추가합니다. 원심 분리하는 동안 셀 나누어지는 가져가라.
5. 5 분 800g에 원심 분리기.
6. 기음 5의 농도로 PBS에 resuspend - 10X 10 ^{6 /} ML. (30 분 이내에 주입) 주입까지 얼음에 보관하십시오.
7. 멸균 후드 안쪽 4~5주 오래된 여성 면역 결함 쥐 (예 : SCID)이있는 케이지를 놓습니다.
8. 70 % 에탄올과 함께 4 (복부) 유두 주변을 스프레이.
9. 내유 지방 패드로 0.1 ML를 주사. 보조를 찾을 수있다면, 한 사람이 자리....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Ca, Mg 제외 PBS	GIBCO, by Life Technologies	14190-144
Trypsin	GIBCO, by Life Technologies	25300
HBSS	GIBCO, by Life Technologies	14025
DMEM 배지 (MDA-MB-231 세포)	GIBCO, by Life Technologies	11965
Isoflurane(Aerrane)	Baxter Internationl Inc.	# NDC 10019-773-40
SCID 마우스	National Cancer Institute	N/A
배양 접시	BD Biosciences	353003	주문 제작
원형 커버슬립 8 mm	Scientific, Inc.	8CIR-1-FIS