이 동영상은 이용 배아 여자 척수에서 뉴런의 유전자 정의된 그룹의 axonal 경로를 시각화하는 방법을 보여줍니다 비켜에서 electroporation.
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방법 논문
활용 칙 신경 튜브에서 뉴런의 유전 정의된 그룹 Axonal 경로를 벗기기 비켜에서 Electroporation
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
뉴런에서 기자 유전자의 표현 드라이브 향상제 요소의 고용은 axonal 투영를 추적하기위한 널리 사용되는 패러다임이다. 척추 동물에서 척추 interneurons의 axonal 투영을 추적하는 경우, 세균 라인 타겟 기자의 유전자가 좌우 대칭으로 대칭 상표를 얻을 수 있습니다. 따라서, 그것은 ipsi 및 콘트라 옆으로 돌출 axons을 구별하기 어렵습니다. 여자가 신경 튜브로 일방적 electroporation은 중추 신경계의 한쪽으로 리포터 유전자의 표현을 제한하고, 양쪽에 axonal 영사에 따라 유용한 수단을 제공
프로토콜
I. Electroporation
에그 처리
- 37-38 락을 쟁반과 함께 ° C, 바람직 인큐베이터에 humidified 보육 세트에 계란을 넣으십시오.
- 그들이 햄버거 & 해밀턴 (HH) 단계에 18-20에 도달하면 배아는 부화의 66 시간 정도 후에 electroporated 있습니다. 이 단계에서는 머리 트렁크 (경추 굴곡라는 조건)와 같은 앞쪽에, 사후, 오른쪽과 왼쪽 vitelline의 정맥을 볼 수 정상적으로 엑스트라 배아 혈관의 광대한 설정 직각 놓여 있습니다. 이것은 확장기에 의존 특정 표현 1,3,4에 대한 최적의 무대입니다. 가능한 및 동기 배아를 얻기 위해서는, 온도와 보육의 습도를 모니터하는 것이 중요합니다.
- 부화의 66 시간 후에, 인큐베이터에서 계란을 제거합니다. 수평 계란을 넣으십시오. 50~10분 기다립니다. 배아 이제 계란의 위쪽 기둥에 있습니다.
준비
- 페니실린 / 스트렙토 마이신 (P / S) (1:100 희석)와 행크의 솔루션을 준비합니다.
- microcapillary에 유리 모세관 (0.5 mm 직경) 당기세요.
- microm....
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토론
여자의 배아에 플라스미드 DNA의 Electroporation은 생체내 이소성 표현을위한 강력한 기술로 발전. 특정 강화하고, 여자의 electroporation의 결합 뉴런 1,3,5의 유전자 정의된 그룹의 axonal 경로를 파악을 위해 신속하고 효율적인 도구를 제공합니다. Cre 호텔 / LoxP 및 Gal4/UAS의 증폭 시스템을 활용하는 것은 표현의 수준 및 기간을 확대하실 수 있습니다. 새로운 그림들은 axonal 계획의 방향에 의해 정의된 interneuron의 subpopulations에서 발생 axonal 신호의 복잡한 발산입니다. 또한 두의 연결 인구의 동시 분자와 공간적 제한 라벨을 획득하실 수 있습니다. 따라서,의 연결 회로 3 아키텍처에 대한 정보를 제공합니다.
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감사의 글
이 작품은 이스라엘 과학 재단, 건강의 이스라엘 사역 및 DFG (독일 학술 진흥 재단)에서 AK로 보조금에 의해 지원되었다.
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참고문헌
- Zisman, S., et al. Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule. J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).
- Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T.
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재인쇄 및 허가
