의 사출. stephensi의 태아는 말라리아 방지 모기를 생성하는

요약

아노 펠 레스 stephensi 모기가 말라리아 거주 인도 및 아시아 벡터입니다. 이 동영상은 모기에 말라리아에 대한 저항력을 부여합니다 transgenes이 종 microinjections을 수행하는 기법을 보여줍니다. 대부분이 동영상에서 보여주는 방법의 다른 모기 종의 microinjection 기술에 적용됩니다.

초록

모기의 genomes에 외인성 유전자의 도입은 관심의 특정 수종에 맞는 microinjection 기술을 필요로합니다. 이 비디오 프로토콜 변형 모기의 생성을위한 아노 펠 레스 stephensi의 배아에 DNA 구조를 microinject하는 제임스 실험실에서 사용하는 방법을 보여줍니다. , microinjection의 바늘을 준비하는 배아를 수집하고 준비하고 microinjection을 수행하기위한 기술은 그림입니다.

프로토콜

microinjection 사전에 준비 :

1. 혈액 공급 모기 : 월요일에서 이전 금요일에 수요일 피드 여자에 분사하십시오. 같은 주 월요일에 목요일과 금요일, 피드 여자를 삽입합니다.
   
   
2. 프로그램 2 isotonic 버퍼 (자료 참조)를 사용하여 석영 바늘을 준비합니다.
   
   
3. 배아에 대해 "튜브를 만들고 것은"일반 Drosophila 문화 약병입니다. 그것을 다루는 필터 종이 젖은 디스크와 함께 바닥에 젖은 탈지면.
   
   
4. 권력을 더블 사이드 테이프를 대고 비닐 커버 신청서를 준비합니다. 그것이 커버 슬립의 가장자리에 끝이 너무 커버하는 트림 테이프 이구요.
   
   
5. 탈수에 대한 오일을 준비합니다.
   
   
6. 부화를위한 배아를 전송하는 isotonic 버퍼와 페트리 접시를 준비합니다.

강제 부설의 설정 :

1. 흡인기를 이용하여 6-10 혈액 공급의 여자를 수집하고 면화와 isotonic 버퍼와 젖은 여과지로 Drosophila 문화 병을에게 전송할 수 있습니다.
   
   
2. 모기는 다음 어둠 속....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
주사용 쿼츠 니들		Sutter Instrument Co.		O.D. 1.0 mm, I.D. 0.70, 길이 10 cm이며, 마이크로피펫 풀러를 사용하여 모세관 튜브를 약 100-300 mm 샤프트와 3-8 um의 미세 팁으로 인발하여 준비한다.
쿼츠 풀러	도구	Sutter Instrument Co.	P-2000	설정: Heat-275, Fil-3, Vel-38, Del-250, Pull-141
EndoFree 플라스미드 키트		Qiagen
이소프로판올
Millex-GV 컬럼			SLGV RO4 NL	DNA 정제용
Construct DNA				0.5 mg/ml
헬퍼 플라스미드				0.3 mg/ml
주입 용액	완충액			1x 용액: 5mM KCl, 0.1mM sodium phosphate, pH 6.8
등장성 완충액				프로토콜 섹션의 레시피 참조
건조 오일				Halocarbon oil 700:Halocarbon oil 27(1:1). 잘 혼합한다. 미세주입 전에 미리 준비한다.
혈액				모기 급여용
Anopheles stephensi	동물			모기, 수컷 및 암컷.
초파리 배양 바이알				산란용
페트리 접시				등장성 완충액 포함, 배아 부화용
세밀 붓				Sable # 0000
3MM Whatman 종이
포셉 #5
양면 테이프
마이크로로더		Eppendorf	5242 956.003
트랜스젝터		Eppendorf
현미경		Leica Microsystems		이동식 스테이지 및 마이크로매니퓰레이터 포함, 10x 배율로 설정