성인의 사용에 제한 요인 Drosophila 눈이 세포 프로세스의 어려운 이미지입니다. 우리는 약물 치료 및 고급 이미지의 대상이 될 수있는 진실된 - 진정한 기본의 연결을 세포 배양을 생성하는 단일 ommatidia의 절개를 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
과일 파리 Drosophila melanogaster는 신경 과학 연구에 귀중한 기여를했다 때문에 강력한 유전자 1 neurodegenerative 질병에 대한 모델로 널리 사용되고 있습니다. 특히 플라이 눈이 Drosophila 신경계의 가장 접근 및 생명 소모품 부분이되고, neurodegeneration 연구에 대한 선택의 기관이되었습니다. 그러나 그대로 눈의 주요 주의해야 할 점은 neurodegeneration의 이해 파라마운트 아르 등 autophagy 역학이 같은 세포 이미징 이벤트에 때문에 안료의 강렬한 autofluorescence의 어려움이다.
우리는 최근 Dentatorubro - Pallidoluysian 위축의 비행 모델 (DRPLA) 3, 4 autophagic 장애에 대한 우리의 이해에 필수적인되었습니다 단일 ommatidia 3의 해부와 문화를 사용했습니다.
우리는 지금 크게 neurodegeneration에 대한 비행 모델의 가능성을 확장시킬 수 있습니다 electrophysiological 연구 5에서 조정이 기술의 종합적인 설명 (그림 1),보고합니다. 이 방법은 이미지 subcellular 이벤트를 살하고 (그림 2) photoreceptor 세포에 효과적인 약물 관리를 모니터에 적용할 수 있습니다. 모자이크 기법 6-8와 함께 사용한 경우, 유전적으로 다른 세포의 반응은 (그림 2) 병렬로 assayed 수 있습니다.
프로토콜
1. Drosophila의 망막의 해부
- 인산염과 함께 한 잘의 3 자 유리 슬라이드를 작성하면 (PBS 1X) 호수 버퍼, 그리고 CO 2에 의해 파리를 마취. 남성과 여성 모두가이 실험을 위해 사용될 수 있습니다.
- 파리 anesthetized되면 집게를 사용하여 하나의 플라이를 선택하고 PBS의 작은 접시에 놓으십시오.
- 해부 현미경, 집게와 코을 공략하고 포셉의 두 번째 세트를 사용하여 목을 severing하여 시체에서 머리를 분리합니다.
- 왼쪽 / 오른쪽 정중선 두뇌를 공개 microscissors와 파리 머리를 따라 반으로, 코에서 파리 머리를 개최.
- 망막을 선택하고, 슈나이더 매체로 채워진 3 - 그럼 유리 슬라이드의 잘 두 번째로 전송하는 컷 피펫 팁을 사용합니다.
- 첫째, 벗겨 다음 머리 표피의 대부분 및 집게로 머리를 제거합니다. 라미나와 각막 사이에 끼워 넣으면 망막 보관하십시오.
- 다음, 유리 슬라이드의 직접 위치 신선한 샤이더 매체의 드롭 (50 μl)로 망막을 전송.
2. ommatidia의 해부
- 해부의 최종 목적 (즉시 이미지 또....
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토론
여기에 제시 단일 ommatidium의 해부은 Drosophila의 눈 모델 neurodegeneration와 같은 프로세스에 대한 깊이 세포 생물 학적 정보의 수집이 가능합니다. photoreceptor의 뉴런은 다른 뉴런보다 쉽게 접근할 수 있으며, 그 세포질은 생체내에 neurodegeneration를 정할 많은 모델 proficiently 사용되는 매우 동일한 세포에서, 특히 대형 및 소포의 역학 연구를 따라서 적합합니다. 해부의 중요한 측면은 주로 공기 또는 최대 건조에 노출 절대해야 떼어낸 조직에 수행할 수있는 능력입니다. 이 기본 기술의 확장에 대한 가능성은 파리에서 가능한 놀라운 유전 수정을 결합 기본의 연결을 문화에 조작 모든 종류의 가능한 수 있도록, 그것뿐만 아니라 neurodegeneration의 눈 모델에서 얻은 정보를 혁명 수도 있습니다 (그림 2) 아르 .
neurodegeneration 연구 9 .......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
우리는 토론을위한 버나드 Charroux 감사합니다. 이 작품은 KCL 의생명 학교에서 후원했다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 (옵션) |
| 휴대용 CO2 디스펜서 | Flystuff | 59-150 | 리필도 가능 |
| 더몬트 트위터 노 5 | 과학 한천 | T5034 | |
| 3 웰 유리 슬라이드 | EMS | 71561-01 | |
| 마이크로 가위 | VWR | HAMMHSB516 - 09 | |
| 슈나이더의 중간 | VWR | 733-1663 | |
| LysoTracker 레드 DND - 99 | Invitrogen | L7528 | |
| Superfrost 슬라이드 | VWR | 631-0108 | |
| Dapi과 Vectashield | 벡터 실험실 | H - 1200 | |
| Coverslips | VWR | 631-1336 |
참고문헌
- Marsh, J. L., Thompson, L. M. Drosophila in the study of neurodegenerative disease. Neuron. 52, 169-178 (2006).
- Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M., Klionsky, D. J. Autophagy fights disease through cellular self-digestion. Nature. 451, 1069-1075 (2008).
- Nisoli, I.
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재인쇄 및 허가
