갇힌 화합물의 광분해는 다양한 생리학 활성 화합물의 농도에 신속하고화된 증가의 생산 수 있습니다. 여기, 우리는 갇힌 캠프의 광분해와 함께 또는 dissociated 마우스 후각 감각 뉴런의 후각 전달 연구를위한 CA를 갇힌 패치 - 클램프 녹음을 얻는 방법을 보여줍니다.
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이 논문에서
요약
초록
갇힌 화합물의 광분해는 다양한 생리학 활성 화합물 1의 농도에 신속하고화된 증가의 생산 수 있습니다. 갇힌 화합물은 자외선의 플래시에 의해 부러진 수있는 화학 케이지에 의해 만들어진 분자 생리학 비활성됩니다. 여기, 우리는 dissociated 마우스 후각 감각 뉴런의 후각 전달의 연구 갇힌 화합물의 광분해와 함께 패치 - 클램프 녹음을 얻는 방법을 보여줍니다. 후각 전달의 과정 (그림 1) 수용체에 바인딩 odorant는 주기적 염기 - 게이트 (CNG) 채널 2를 열어 캠프의 증가로 연결 후각 감각 뉴런의 속눈썹에서 열립니다. CNG 채널을 통해 CA 항목은 CA - 활성화 망할 CIA 채널을 활성화한다. 우리는 마우스 후각 상피 3 방법에 갇힌 CAMP 4 광분해 또는 칼슘 5 갇힌하여 CNG 채널 또는 CA - 활성화 망할 CIA 채널을 활성화에서 신경을 떼어 놓다하는 방법을 보여 </>를 한모금. 우리는 패치 - 클램프 녹음이 전체 셀 전압 클램프 구성 8-11에서 전류를 측정하기 위해 이동하는 동안 우리에서 내놓다 캠프 CA에 ciliary 지역 자외선 섬광을 적용하기 위해 플래시 램프 6,7을 사용합니다.
프로토콜
1. 기기 및 장비
- 케이지 화합물의 광분해에 대한 후각 신경세포의 반응을 측정하기 위해, 패치 클램프 증폭기, 기록 전극 및 패치 클램프 증폭기의 헤드 스테이지에 연결된 참조 전극, 디지타이저, 컴퓨터, 데이터 수집용 소프트웨어, 마이크로 조작기, 형광 현미경, 관류 시스템, 진동 방지 테이블 및 패러데이 케이지를 포함하는 전형적인 패치 클램프 기록 시스템과 함께 플래시 램프를 사용합니다(그림 2).
- 고강도 자외선(UV) 플래시를 생성하기 위해, 제논 가스가 충전된 쇼트-아크 플래시 튜브에 고전압 커패시터를 방전시키는 방식으로 작동하는 제논 플래시 램프(Rapp OptoElectronic JML-C2 Flash Unit, 그림 3A)를 사용합니다6-7. 빛 플래시는 수동으로 또는 전기생리학적 수집을 제어하는 동일한 소프트웨어를 사용하여 컴퓨터로 트리거할 수 있습니다.
- 언케이지(uncaging) 응용 분야에 최적화된 UV 쇼트 패스 필터(270-390 nm)를 플래시 램프의 출력 슬롯에 삽입하고, 쿼츠 광섬유 라이트 가이드를 현미경에 연결합니다(1.5 참조).
- 빛 플래시의 강도, 따라서 광분해의 정도는 특정 파라미터를 변경하여 조절할 수 있습니다:
전압 또는 커패시턴스6. 실제로 빛의 강도는 커패시터에 저장된 에너지와 관련이 있으며, 표준 관계식 0.5 CV2에 따라 커패시턴스 값과 그에 걸리는 전압에 따라 달라집니다. 플래시 램프의 전면 패널에서 세 가지 커패시턴스 값(C1=1000 μF, C2=2000 μF 또는 C3=3000 μF) 중 하나를 선택할 수 있으며, 전압은 100에서 385 Volts 사이에서 가변 가능하여(그림 3A), 5에서 220 J 범위의 저장 에너지를 생성합니다. 플래시 지속 시간은 전체 반치폭(full half maximal width) 기준 0.5에서 1 ms까지 다양하며 선택한 커패시턴스 값에 따라 달라집니다. 다른 커패시턴스를 선택하거나 전압을 더 낮은 값으로 설정하기 전에, 플래시 램프 전면 패널의 방전 모드를 선택하여 커패시터를 방전시켜야 합니다(그림 3A).
그러나 가스 방전의 물리적 특성과 전기 에너지가 증가함에 따라 회로에서 발생하는 비선형 손실 등 여러 가지 이유로 인해 빛 에너지가 단순히 저장 에너지에 비례하지는 않습니다6. 빛 플래시와 관련된 에너지를 측정하려면 RappOptoElectronics에서 제공하는 JM10과 같은 줄미터를 사용할 수 있습니다. Rapp OptoElectronic Flash Unit의 사용자 가이드에 보고된 바와 같이, UV 필터가 장착된 쿼츠 라이트 가이드 출구에서의 에너지는 플래시당 1-15 mJ 범위입니다.
플래시 램프 유닛과 함께 제공되는 포토다이오드 어셈블리(그림 3B)를 사용하여 C와 V의 함수로서 빛 강도의 변화를 추정할 수 있습니다. 실제로 포토다이오드의 출력은 빛의 강도에 비례합니다. 사용자 가이드의 지침에 따라 라이트 가이드를 포토다이오드 어셈블리의 입력단에 연결하고, 출력단은 오실로스코프에 연결합니다. 그림 3C는 플래시 램프 유닛에서 사용 가능한 세 가지 커패시턴스 값 C1, C2 또는 C3에 대해 인가 전압에 따른 포토다이오드의 피크 출력 전압을 보여줍니다. 이 값들은 플래시 전구가 노후화됨에 따라 변화합니다. 포토다이오드를 정기적으로 사용하여 플래시 전구의 열화를 확인하는 것이 바람직합니다.
전면 패널에서 커패시턴스 및/또는 전압을 수정하는 대신, 플래시 램프의 두 번째 필터 슬롯에 중성 밀도 필터를 배치함으로써 빛 강도를 더 정밀하고 빠르게 제어할 수 있습니다(그림 3A). 이 방법이 더 빠르며, 추가적으로 선택한 커패시턴스 값에 따라 결정되는 플래시 지속 시간이 변경되지 않습니다. 투과율이 100%에서 0.1%까지 되는 중성 밀도 필터를 사용하면 넓은 범위에서 플래시 강도를 빠르게 조절할 수 있습니다. - 빛 플래시는 쿼츠 광섬유 라이트 가이드를 통해 유리 바닥 디시에 플레이팅된 뉴런으로 유도됩니다(그림 2). 라이트 가이드는 어댑터를 사용하여 도립 현미경의 형광 부착 장치에 연결됩니다. 여기 필터가 없는 수정된 필터 큐브가 다이크로익 미러를 통해 UV 빔을 뉴런으로 유도합니다.
- 빛은 100x 오일 침지 대물렌즈를 통해 집광됩니다. 플래시가 커버하는 영역은 가시광선의 연속 광원을 제공하는 조명기에 라이트 가이드를 삽입하여 시각화합니다. 영상(비디오에서 노란색으로 표시됨)은 현미경에 연결된 CCD 카메라를 통해 모니터로 관찰합니다. 실험을 위해 UV 플래시 영역을 국소화하도록 조명된 영역의 윤곽을 모니터에 그립니다. UV 플래시를 조사하기 전에 뉴런의 섬모 부위를 모니터에 그려진 영역으로 이동시킵니다.
- UV 광점의 크기는 대물렌즈 배율, 라이트 가이드의 직경, 그리고 현미경 후면의 라이트 가이드 위치에 의해 제어됩니다. 본 실험에서는 100x 배율 오일 침지 대물렌즈를 사용합니다. 원형 광점의 직경은 조명기의 빛을 현미경 스테이지에 놓인 마이크로미터 슬라이드에 투사하여 측정합니다. 본 설정에서 광점 직경은 라이트 가이드 직경이 각각 200, 400, 600 또는 1250 μm일 때 약 16, 33, 50 또는 105 μm입니다.
2. 용액 준비
해부
- Ringer 용액: 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM glucose, 1 mM sodium pyruvate (1M NaOH로 pH 7.4 조절).
- Stop mix 용액: 0.1 mg/ml BSA, 0.3 mg/ml leupeptin 및 0.02 mg/ml DNaseI가 포함된 Ringer 용액.
- Zero-divalent Ringer 용액: 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 10 mM HEPES, 1 mM EDTA, 10 mM glucose, 1 mM sodium pyruvate (1M NaOH로 pH 7.4 조절). 효소적 해리를 위해 200 μM cysteine과 2 U/ml papain을 첨가한다.
참고: 해부를 위해 용액을 멸균 필터링한다.
패치 클램프 기록 용액
세포외 용액
- 세포외 링거 용액(Extracellular Ringer’s solution): 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM glucose, 1 mM sodium pyruvate (1M NaOH로 pH 7.4 조절).
- 저칼슘 링거 용액(Low-Ca Ringer’s solution): 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 10 mM EGTA, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM glucose, 1 mM sodium pyruvate (1M NaOH로 pH 7.4 조절).
세포 내 용액
주변 빛으로 인한 케이지 화합물(caged compound)의 분해를 방지하기 위해, 케이지 화합물 용액은 항상 어두운 곳에서 준비하고 사용하십시오. 알루미늄 호일을 사용하여 용기를 빛으로부터 보호하십시오.
케이지형 cAMP:
- 145 mM KCl, 4 mM MgCl2, 0.5 mM EGTA, 10 mM HEPES, 1 mM MgATP 및 0.1 mM NaGTP를 포함하는 세포 내 용액을 제조한다(1M KOH로 pH 7.4로 조정).
- caged cAMP (BCMCM-cAMP4)를 DMSO에 용해하여 50 mM 농도의 스톡 용액을 제조한다. 5 μl씩 소분하여 -20°C에서 최대 1년 동안 보관한다.
- caged cAMP 스톡 용액 소분액을 세포 내 용액에 용해하여 caged cAMP의 최종 농도가 50 μM이 되도록 한다. 볼텍스를 사용하여 혼합한다.
- caged cAMP가 포함된 세포 내 용액을 1 ml씩 소분한다. 사용 전까지 -20°C에서 최대 2개월 동안 보관한다.
케이지형 Ca:
1.5 mM Ca가 50% 적재된 3 mM DMNP-EDTA5를 포함하는 세포 내 용액을 준비합니다.
- 140 mM KCl(또는 CsCl), 10 mM HEPES(1M KOH 또는 CsOH로 pH 7.4로 조정)를 포함하는 세포 내 용액을 제조한다.
- 5 mg DMNP-EDTA 바이알을 연다. 0.1 M 염화칼슘 표준 용액 52.8 μl와 세포 내 용액 1 ml를 첨가한다. 볼텍스를 사용하여 혼합한다.
- 주변 광선에 의해 케이지드 Ca가 언케이지되는 것을 방지하기 위해, 용액을 알루미늄 호일로 빛이 차단된 튜브로 옮긴다. 최종 부피가 3.5 ml가 되도록 세포 내 용액을 추가한다. 볼텍스를 사용하여 혼합한다. 케이지드 Ca 세포 내 용액을 약 1 ml씩 분주하여 사용 시까지 -20°C에서 최대 2개월 동안 보관한다.
참고: 실험 중에 caged 화합물 용액이 빛에 노출되지 않도록 알루미늄 호일로 감싸고 얼음 위에 보관하십시오. 세포 내 용액은 멸균 필터링하십시오.
3. 생쥐 후각 감각 신경세포의 분리
동물 실험은 실험동물 사용에 관한 이탈리아 가이드라인(Decreto Legislativo 27/01/1992, no. 116) 및 동물 연구에 관한 유럽 연합 가이드라인(No. 86/609/EEC)을 준수하여 수행되었습니다.
- 10 mg/ml concanavalin-A와 10 mg/ml poly-L-lysine가 코팅된 유리 바닥 접시 3개를 준비합니다.
- 해부를 위해 1 ml의 0-divalent Ringer’s solution을 준비합니다. 50 mm Sylgard 코팅 페트리 접시 2개에 Ringer’s solution을 채우고 얼음 위에 둡니다. 또한 papain-cysteine 믹스, 0.5 ml의 stop mix solution, 그리고 약 10 ml의 Ringer’s solution이 들어있는 0.22 μm 필터 장착 주사기를 냉각시킵니다.
- CO2 질식 후 참수로 마우스를 희생시킵니다. 두개골 위를 덮고 있는 피부를 제거하고 턱선을 따라 절개한 후 머리를 Sylgard 코팅 페트리 접시에 넣습니다.
- 접시를 실체현미경 아래에 둡니다. 메스를 사용하여 머리를 정중선을 따라 시상면으로 이분합니다. 머리의 절반을 내측이 위로 오도록 뒤집습니다. 비갑개(turbinates)가 드러나도록 비중격을 조심스럽게 제거합니다 (Cygnar et al., 201013 참조).
- 3번 핀셋과 메스를 사용하여 후각 상피가 덮인 비갑개를 제거합니다. 이를 Sylgard 코팅 페트리 접시로 옮깁니다.
- 55번 초정밀 핀셋을 사용하여 후각 상피 조각을 부착된 비갑개 부분으로부터 분리합니다. 이를 1 ml의 0-divalent Ringer’s solution이 들어있는 튜브로 옮깁니다. papain 및 cysteine 믹스를 첨가합니다. 미세 가위로 상피를 잘게 다진 후 실온에서 3분간 배양합니다. 미세 가위로 다시 부드럽게 다진 후 5분 더 기다립니다.
- 화염 연마된 파스퇴르 피펫을 사용하여 0.5 ml의 stop mix solution이 들어있는 튜브로 옮깁니다.
- 300 g (1500 RPM)에서 5분간 원심분리합니다. 상층액을 버리고 필터링된 Ringer’s solution 약 1 ml를 첨가합니다. 화염 연마된 파스퇴르 피펫으로 부드럽게 분쇄합니다.
- 세포가 포함된 용액 약 0.3 ml를 3개의 유리 바닥 접시 중앙에 분주합니다. +4°C에서 약 1시간 동안 세포가 가라앉도록 둡니다. Ringer’s solution을 첨가합니다.
4. 기록
- 붕규산 유리 모세관을 사용하여 세포 내 용액을 채웠을 때 3-7 MΩ의 저항을 갖는 패치 피펫을 준비한다.
- 분리된 후각 신경세포가 담긴 유리 바닥 접시를 도립 현미경의 스테이지 위에 놓는다. 링거액(Ringer’s solution)으로 관류한다.
- 케이지 화합물(caged compounds)이 포함된 세포 내 용액이 든 주사기를 알루미늄 호일로 감싸 빛으로부터 보호하고 냉장 보관한다. 주변 광에 의한 케이지 화합물의 분해를 방지하기 위해 어두운 조명 아래에서 작업한다.
- 100배 배율에서 섬모가 온전한 단일 후각 신경세포를 찾는다. 현미경 스테이지를 이동시켜, 이전에 확인한 UV 플래시 영역을 국소화하기 위해 모니터에 그려진 원 안에 섬모 영역이 위치하도록 맞춘다.
- 유연한 니들을 사용하여 케이지 화합물이 포함된 세포 내 용액을 패치 피펫에 채운다. 피펫 팁에서 기포를 제거한다. 패치 클램프 증폭기 헤드스테이지의 홀더에 피펫을 삽입한다. 마이크로매니퓰레이터를 사용하여 뉴런의 세포체(soma)에 접근하고, 가벼운 흡입을 가하여 기가옴 씰(gigaohm seal)을 형성한다. 전압을 -60 mV로 설정하고, 표준 패치 클램프 기술12을 사용하여 추가 흡입을 가해 whole-cell 모드에 진입한다.
- 케이지 화합물이 섬모 내부로 확산될 수 있도록 최소 2분 동안 기다린다.
- 컴퓨터에서 자극 프로토콜을 시작하고 응답을 기록한다. 1 kHz의 로우패스 필터를 사용하고 최소 2 kHz의 샘플링 주파수로 디지털화한다.
- 전형적인 자극 프로토콜은 전압을 일정 값으로 고정(clamp)하고, 섬모 영역 내 케이지 화합물의 광분해를 위해 플래시 램프에서 UV 플래시 방출을 트리거한다.
5. 대표 결과:
분리된 후각 신경세포의 섬모 부위에서 caged cAMP 또는 caged Ca의 국소적 uncaging을 유도하고, whole-cell voltage-clamp 구성으로 전류 반응을 기록할 수 있어야 합니다.
그림 4는 세포 외 저농도 Ca Ringer 용액 존재 하에 -60 mV 전압에서 기록한, caged cAMP의 광분해를 유도하는 UV 플래시로 인해 유발된 전형적인 내향 전류를 보여줍니다. 이 조건에서 내향 전류는 CNG 채널을 통한 Na 유입에 의해 발생합니다. 전류의 상승기는 빠르게 나타났으며, 시상수 3.4 ms의 단일 지수 함수로 피팅되었습니다.
그림 5A-B는 낮은 Ca 농도와 1mM Ca가 포함된 링거액(Ringer’s solution)에서 또 다른 후각 감각 뉴런의 반응을 보여줍니다. -60 mV에서의 전류 상승 단계가 훨씬 더 느려지고 다상성(multiphasic)으로 변했습니다(그림 5 A-B). 이는 Ca가 CNG 채널을 통해 섬모로 유입되어 2차 Cl 전류를 활성화시키기 때문입니다10. CNG 활성화로 인해 발생하는 초기 양이온 전류 성분은, 투과되는 Ca 이온에 의한 차단으로 전체 전류가 감소하기 때문에 낮은 Ca 용액에서보다 1mM Ca 링거액에서 더 작게 나타납니다.
섬모 내 Ca 증가를 억제하는 또 다른 방법은 뉴런을 +60 mV로 클램핑하는 것입니다 (그림 5 C-D). +60 mV에서 cAMP 언케이지닝에 의한 반응의 상승기는 시정수가 6.7 ms인 단일 지수 함수로 잘 설명되었으며, 이는 단 하나의 전류 성분만이 존재함을 나타냅니다.
후각 감각 뉴런의 섬모 내부에서 Ca를 광방출시키면 빠르게 상승하는 전류를 측정할 수 있어야 합니다. 이 전류는 Cl 이온에 의해 운반됩니다. 그림 6 A는 다양한 강도의 UV 플래시로 케이지드 Ca를 광방출시켰을 때 -50 mV에서 유도된 내향 전류를 보여줍니다. Ca 활성 Cl 전류의 상승 단계는 3.8에서 5 ms 사이의 시간 상수를 가진 단일 지수 함수로 잘 설명되었습니다(그림 6 B).
그림 1. 후각 감각 신경세포 섬모의 후각 신호 전달. 후각 분자가 후각 수용체(OR)에 결합하여 G 단백질을 활성화하고, 이는 다시 아데닐릴 시클라아제(ACIII)를 활성화하여 세포 내 cAMP 수치를 증가시킨다. cAMP는 cyclic nucleotide-gated (CNG) 채널을 열어 Na 및 Ca 이온의 유입을 가능하게 한다. 세포 내 Ca 증가로 인해 Ca-활성 Cl 채널이 활성화된다. Caged cAMP 또는 caged Ca는 패치 피펫을 통해 섬모로 확산시켜 도입할 수 있다. UV 광선을 조사하면 caged 화합물의 광분해가 일어난다 (Pifferi et al. 20062에서 수정 및 허가 받음).
그림 2. 패치 클램프 기록 및 플래시 광분해 시스템. 설정 구성 요소에는 패치 클램프 증폭기, 컴퓨터, 디지타이저, 에피형 형광 현미경, 제논 플래시 램프, CCD 카메라 및 모니터가 포함된다. 파란색과 보라색 선은 각각 가시광선과 UV 광 경로를 나타낸다.
그림 3. 제논 플래시 램프. (A) 케이지 화합물의 플래시 광분해에 사용된 광원. (B) 플래시 광도의 강도를 평가하는 데 사용된 포토다이오드 모듈. (C) 플래시 램프의 광가이드를 포토다이오드의 입력단에 연결하고 출력을 오실로스코프로 시각화하였다. 플래시 램프 전면 패널 스위치에서 세 가지 사용 가능한 정전용량 값(C1, C2 또는 C3) 중 하나를 선택하고, 전면 패널의 노브를 돌려 전압을 변경하였다. 서로 다른 플래시 강도에 따른 포토다이오드의 출력 전압을 각 정전용량 값(C1 = 1000 μF, C2 = 2000 μF, 또는 C3 = 3000 μF)에 대해 인가 전압에 대비하여 도식화하였다. 직경 600 μm의 광가이드를 사용하였다.
그림 4. 낮은 세포 외 Ca 용액에서 caged cAMP의 광분해에 대한 패치 클램프 기록. (A) 섬모에 국소화된 caged cAMP의 광분해에 의해 단리된 후각 sensory neuron에서 유도된 whole-cell 전류 반응. 화살표로 표시된 시점에 UV 플래시를 조사하였다. 유지 전위는 -60 mV였다. (B) 전류 상승기는 시상수 3.4 ms의 단일 지수 함수(점선)로 잘 적합되었다.
그림 5. 저농도 Ca 및 Ringer 용액에서 caged cAMP의 광분해로 인해 유도된 전류 반응. (A) 후각 감각 뉴런을 1 mM Ca를 함유한 Ringer 용액 또는 저농도 Ca 용액에 넣고 -60 mV의 유지 전위에서 측정하였다. 화살표로 표시된 시점에 UV 플래시를 조사하였다. (B) 확장된 시간 척도로 표시한 전류 반응에서, Ringer 용액에서는 다상 상승기(multiphasic rising phase)가 나타난 반면, 저농도 Ca 용액에서 기록된 반응의 상승기는 시상수 3.5 ms의 단일 지수 함수(점선)로 잘 적합되었다. (C) 유지 전위 -60 mV 및 +60 mV에서 Ringer 용액에 담근 (A)와 동일한 뉴런의 전류 반응. (D) 확장된 시간 척도로 표시한 전류 반응에서, -60 mV에서는 다상 상승기가 나타난 반면, +60 mV에서는 상승기가 시상수 6.7 ms의 단일 지수 함수(점선)로 잘 적합되었다.
그림 6. caged Ca의 광분해에 대한 반응. (A) -50 mV에서 caged Ca의 광분해로 유도된 whole-cell 전류. UV 플래시는 화살표로 표시된 시점에 방출되었다. 플래시 강도는 중성 밀도 필터를 사용하여 조절하였다. (B) 확대된 시간축은 Ca 광방출 후 전류의 급격한 증가를 보여준다. 전류는 시상수 5, 4.8, 3.8 ms의 단일 지수 함수(점선)로 잘 적합되었다. (Boccaccio & Menini, 200710로부터 허가 하에 재수록).
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토론
패치 - 클램프 녹음과 함께 갇힌 화합물의 플래시 광분해은 생리학적으로 활성 분자 내부와 외부에서 세포 모두의 농도에 신속하고 현지 점프를 얻을 수있는 유용한 기술입니다. 갇힌 compounds1 여러 종류의 합성되었으며,이 기술이 활성화하거나 사용 가능한 갇힌 화합물 11 일부 광분해에 의해 변조된 수있는 이온 채널을 표현 교양 세포를 포함한 세포의 다양한 유형에 적용할 수 있습니다.
갇힌 화합물의 광분해은 짧은 시간에 분자의 충분한 양의 우리에서 내놓다 근처 자외선의 높은 강도의 펄스를 필요로합니다. 다양한 광원을 사용할 수 있습니다 : 지속적으로 운영 수은 또는 크세논 아크 램프 (LED 셔터에 의해 제어 및 현미경, 지논 플래시 램프, 자외선 레이저, 그리고 최근에 개발된 고전력 자외선 발광 다이오드의 epifluorescent 포트에 결합 ). 광원의 각 유형의 장점과 disadvan있다특정 응용 프로그램 및 장치의 비용에 따라 tages. 플래시...
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공개 사항
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 장비 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
| 현미경으로 어댑터 모듈 플래시 램프 | Rapp 광전자 | FlashCube 70 | |
| 에어 테이블 | TMC | MICRO - G 63-534 | |
| 디지타이저 | 축삭 인 스트 루먼트 | Digidata 1322A | |
| 데이터 수집 소프트웨어 | 축삭 인 스트 루먼트 | pClamp 8 | |
| 데이터 분석 소프트웨어 | WaveMetrics | 이고르 | |
| 어댑터 모듈 미러 | Rapp 광전자 | M70/100 | |
| 전극 홀더 | 축삭 인 스트 루먼트 | 1 - HL - U | |
| 패러데이의 새장 | 사용자가 만든 | ||
| 필터 큐브 | 올림포스 산 | U - MWU | 여기 필터를 제거 |
| 섬광등 | Rapp 광전자 | JML - C2 | |
| 집게 뒤몽 # 55 | 세계 정밀 계측기 | 14,099 | |
| 유리 모세관 | 세계 정밀 계측기 | PG10165 - 4 | |
| 유리 바닥 요리 | 세계 정밀 계측기 | FD35 - 100 | |
| 조명기 | 올림포스 산 | 하이라이트 3100 | |
| 거꾸로 현미경 | 올림포스 산 | IX70 | |
| Micromanipulators | Luigs & 노이만 | SM I | |
| Micropipette 풀러 | Narishige | PP - 830 | |
| 모니터 | HesaVision | MTB - 01 | |
| 중성 농도 필터 | 오메가 광학 | 다양 | |
| 목표 100X | 자이스 혈구 | Fluar 440,285 | 자이스 혈구 또는 Olympu 중의 |
| 목표 100X | 올림포스 산 | UPLFLN 100XOI2 | 자이스 혈구 또는 올림푸스 중 |
| 광학 UV 필터 shortpass | Rapp 광전자 | SP400 | |
| 패치 - 클램프 증폭기 | 축삭 인 스트 루먼트 | Axopatch 200B | |
| 포토 다이오드 조립 | Rapp 광전자 | PDA | |
| 석영 라이트 가이드 | Rapp 광전자 | 다양 | 우리는 600 μm의 직경을 사용하여 |
| 실버 와이어 | 세계 정밀 계측기 | AGT1025 | |
| 실버 지상 펠릿 | 워너 악기 | 64-1309 | |
| 크세논 아크 램프 | Rapp 광전자 | XBL - JML |
| 시약 | 회사 | 카탈로그 번호 |
|---|---|---|
| BCMCM - 갇힌 CAMP | BioLog | B016 |
| 소 혈청 알부민 (BSA) | 시그마 | A8806 |
| CaCl2 표준 용액 0.1 M | Fluka | 21,059 |
| 갇힌 CA : DMNP - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) | Invitrogen | D6814 |
| 시스테인 | 시그마 | C9768 |
| Concanavalin A 형 V (ConA) | 시그마 | C7275 |
| CsCl | 시그마 | C4036 |
| DMSO | 시그마 | D8418 |
| DNAse I | 시그마 | D4527 |
| EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) | 시그마 | E9884 |
| EGTA | 시그마 | E4378 |
| 포도당 | 시그마 | G5767 |
| HEPES | 시그마 | H3375 |
| KCl | 시그마 | P3911 |
| 코이 | 시그마 | P1767 |
| 류펩틴 | 시그마 | L0649 |
| MgCl2 | Fluka | 63,020 |
| Papain | 시그마 | P3125 |
| 폴리 - L - 라이신 | 시그마 | P1274 |
| NaCl | 시그마 | S9888 |
| NaOH | 시그마 | S5881 |
| NaPyruvate | 시그마 | P2256 |
참고문헌
- Ellis-Davies, G. C. R. Caged compounds: photorelease technology for control of cellular chemistry and physiology. Nat. Methods. 4, 619-628 (2007).
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