광택 및 강화 된 얇은 두개골 (포트) 두개골 창 glioblastoma (GBM) 세포 주입을 결합함으로써, 우리는 glioma의 개시와 길이 방향 라이브 마우스의 뇌에 주입 GBM 세포의 성장을 관찰 할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
Glioma은 인간 암의 가장 치명적인 형태의 하나입니다. 날짜 수술에 대한 가장 효과적인 glioma 치료는 방사선에 의해 다음 대부분의 환자가 glioma 재발의 1,2에 의한 진단 후 5 년 이상 생존하지 않는 한, 환자에게 단 겸손한 이익을 치료 - 제공합니다. 인간의 뇌 종양에서 암 줄기 세포의 발견은 glioma 3 소설 치료 전략의 개발에 엄청난 영향을 미치고을위한 약속을 보유하고 있습니다. 암 줄기 세포는 자신의 능력 - 자기를 갱신하고 차별화 모두에 의해 정의되며, 새로운 종양 4 대를 시작하는 능력이 종양에서 유일한 세포가 될 것으로 생각됩니다. Glioma 재발 다음과 방사선 요법은 치료 glioma의 줄기 세포의 저항 (GSCs)에서 발생하는 것으로 생각됩니다 5-10. 생체에서 GSCs들은 줄기 세포와 같은 특성 11-14을 유지하는 것이 중요합니다 perivascular 틈새에 거주하는 표시됩니다 . organi의 핵심GSC 틈새의 zation은 12 혈관 내피 세포 수 있습니다. 기존 증거가 혈관 내피 세포와 GSCs와 상호 작용 종양 개발을 위해 소중하게 생각하고 있으며, glioma에 중요한 치료 목표로 내피 세포와 GSCs과 상호 작용을 확인하는 것이 좋습니다. GSCs의 존재는 orthotopic 이식 15시 새로운 종양를 시작하기 위해 자신의 능력에 의해 실험적으로 결정됩니다. 이것은 일반적으로 인간의 종양에서 심각하게 immuno-결핍 생쥐의 뇌, 또는 congenic 호스트 마우스의 뇌에 마우스 GBM 세포에 고립 GBM 세포의 특정 번호를 주입에 의해 달성된다. 종양 성장을위한 Assays는 다음 주입 GBM 세포 간의 GSCs 새로운 종양 - 일반적으로 몇 주 또는 몇 달을 야기 할 할 수 있도록 충분한 시간에 따라 수행됩니다. 따라서, 기존의 assays는 생체 내 단일 GSCs에서 종양 개시의 중요한 병리 과정의 시험을 허용하지 않습니다. 따라서, 필수 전종양 개시의 초기 단계에서 혈관 내피 세포와 GSCs과 상호 작용의 특정 역할에 nsights이 부족합니다. 이러한 통찰력은 glioma에 대한 새로운 치료 전략을 개발하기위한 중요한 있으며, 환자 glioma의 재발을 방지하기위한 좋은 영향을 미칠 것입니다. 우리는 여기 포트에게 두개골 창 프로 시저 16 적응하고 생체에 두 광자 현미경은 살아있는 마우스의 뇌에 주입 GBM 세포에서 종양 개시의 시각화를 허용 할 수 있습니다. 우리 기술은 glioma의 개시시 GSCs와 혈관 내피 세포 사이의 키 신호 메커니즘을 명료하게하다하는 미래의 노력의 길을 열어 것입니다.
프로토콜
1. 프로토콜
- 0.1 MG의 케타민과 체중 1g 당 xylazine의 0.01 밀리그램의 복용량에서 케타민과 xylazine으로 마우스를 마취. Carprofen (체중 1g 당 0.005 밀리그램)이 진통제에 사용되며, preoperatively 관리합니다.
- 치과 드릴 비트를 포함하여 수술 도구, 모든 압력솥에 소독 증기 있습니다. 일괄 수술이 수행 할 경우, 수술 계기의 팁은 이후 수술 전에 유리 구슬 살균기 (정밀 과학 도구 FST 250)로 다시 소독해야합니다.
- 마우스가 발가락 핀치에 대한 응답의 부재로 평가 마취의 수술 비행기를 도달되면, 그 다음 ~ 37 ° C.의 체온을 유지하기 위해 온수 패드에 배치되어있는면 패드에 위치 마취의 깊이는 수술 중에 자주 모니터링된다.
- 모피는 대략 삼각 지역의 등쪽 머리 ~ nares에 꼬리 3mm에서 제거 CE에 caudally 연장됩니다rvical 척추. 안과 연고는 탈수와 염증에서 그들을 보호하기 위해 눈에 적용됩니다.
- 마우스는 복부 recumbancy에 배치되고 피부 외과 요오드, 70 % 에탄올 및 멸균 면봉으로 소독합니다. 두개골의 전두엽과 정수리 뼈의 등 측면을 다루는 피부의 0.8 X 1.0 cm 플랩은 고급 가위를 사용하여 제거됩니다.
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토론
성공적으로 포트를 두개 창에 키는 숱이와 연마입니다. 시닝 초기 신속 수행 할 수 있지만,주의 넓은 지역에 걸쳐 두개골의 숱이 동질적인 보장하기 위해주의해야한다. 우리는 일반적으로 생리 식염수가 microdrill 한 번 두개골을 통해 통과 한 직후에 증발하는 등, 두개골에 생리의 얇은 층을 적용하고 얇은 두개골 원 패스 한 번에. 이것은 두개골 우리에게 느리지 만 homogenously 더 얇은 수 있습니다. 현미경으로 침착도 중요합니다. 두개골 - 시닝는 의도 두께를 가까워하면, 우리는 일반적으로 주석 산화물을 사용하여 이후에 연마와, 10-15 분에 대한 얇게 두개골을 연마하는 다이아몬드 붙여 넣기 사용합니다. 우리는 다이아몬드 페이스트로 먼저 얇게 두개골을 연마하는 것이 일반적으로 더 나은 연마 결과를 얻을 발견, 또한 우리가 얇게 두개골 지역에 많은 압력을 적용하지 않고 두개골 지역의 얇은 넓은 지역을 증진 할 수 있습니다.
우리는 포트 CR을 선택오히려 다음과 같은.......
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공개 사항
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
감사의 글
이 작품은 잭슨 연구소 암 센터 파일럿 그랜트와 메인 암 재단이 지원됩니다.
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재료
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 코멘트 (선택 사항) |
| 나트륨 Pyruvate와 DMEM/F12 (1:1) | 열 문화 Hyclone | SH3026101 | |
| B-27 세럼 무료 보충 (50x) | Invitrogen | 17504-044 | |
| GlutaMax-1 보충 | Invitrogen | 35050061 | |
| 페니실린 - 스트렙토 마이신 솔루션 | 열 문화 Hyclone | SV30010 | |
| Accutase - 효소 셀 부대 매체 | eBiosciences | 00-4555-56 | |
| T25 플라스크 - 벤트 캡 녹색 | SARSTEDT | 83.1810.502 | |
| 70 %의 알코올 | 잭스 LAHS | ||
| 10% povidone-요오드 국소 솔루션 | 잭스 LAHS | ||
| 케타민 HCL | 버틀러 동물 건강 공급 | NDC # 11695-0550-1 | |
| Xylazine | Akorn 주식회사 | 나다 # 139-236 | |
| Carprofen | 잭스 LAHS | ||
| 안과 연고 | Dechra 동물 제품 | 17033-211-38 | |
| 0.5 % Lidocaine HCL | 리젠트 주식회사 | NDC 0517-0625-25 | |
| 시아 노 아세틸렌 접착제 | 헨켈 주식회사 | 46,551 | |
| 멸균 스왑 | 피셔 과학 | 23-400-114 | |
| 다이아몬드 붙여 넣기 | 위젯 공급 | BBE60 | |
| 주석 산화물 | LORTONE 주식회사 | 591-038 | |
| 라이너 본드 2V | KURARAY 의료 주식회사 | 1921-KA | |
| Clearfil AP-X | KURARAY 의료 주식회사 | 1721-KA | |
| 함수호 | 잭스 LAHS | ||
| 유리 커버 | 워너 악기 | 64-0720 | |
| 헥스 너트 | 작은 부품 주식회사 | HNX-0090-C | |
| 주사기 펌프 | Syringepump.com | NE-1000 | |
| 두 광자 이미징 시스템 | 사용자 정의 내장 (모든 상용 시스템이 겠어일) |
참고문헌
- Paulino, A. C., Teh, B. S. Treatment of brain tumors. N. Engl. J. Med. 352, 2350-2353 (2005).
- Stupp, R., et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).
- Singh, S. K., et al.
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재인쇄 및 허가
