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방법 논문

쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

19.8K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/50014

⸱

2013년 2월 16일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, University of Florida , 2Department of Anatomical Sciences, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran , 3Department of Physiology and Functional Genomics, University of Florida , 4Department of Neurology, University of Florida

이 논문에서

요약

대뇌 국소 빈혈의 여러 동물 모델은 스트로크의 인간의 조건을 시뮬레이션하기 위해 개발되었습니다. 이 프로토콜은 쥐의 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 (동부 표준시-1) 유발 중간 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델에 대해 설명합니다. 또한 중요한 고려 사항, 장점,이 모델의 단점은 설명되어 있습니다.

초록

뇌졸중은 2009 년 1, 2에 미국에서 추정 70,000,000,000달러 비용이, 장애 세계에서 사망의 세 번째 주요 원인의 최고의 원인입니다. 대뇌 국소 빈혈의 여러 모델은 뇌졸중의 인간의 조건을 모방하기 위해 개발되었습니다. 그것은 중간 대뇌 동맥 (MCA) 영역 3 허혈성 손상에서 모든 스트로크 결과의 80 %에있는을 제안하고 있습니다. 1990 년대 초, 엔도 테린-1 (동부 표준시 - 1) (4) craniotomy 후 MCA의 표면에 직접 인접를 적용하여 국소 빈혈을 유발하는 데 사용되었다. 나중에,이 모델은 초점 뇌성 국소 빈혈을 생산하기 위해 MCA에 동부 표준시-1 인접의 stereotaxic 주사를 사용하여 5 바뀌 었습니다. 이 모델의 주요 장점은 신속하게 절차를 수행 할 수있는 능력, 동부 표준시 - 1의 복용량을 변경하여 동맥 수축을 제어 할 수있는 기능 제공, 뇌에 혈액을 공급뿐만 아니라 점차적으로 reperfusi extracranial 혈관을 조작 할 필요없이 포함가격에있는 더 밀접하게 5-7 인간 reperfusion을 모방 한 것이 었지요. 한편, 동부 표준시-1 모델은 craniotomy의 필요성뿐만 아니라, 뇌졸중 볼륨 8 높은 가변성을 포함 단점이 있습니다. 이 변화는 동부 표준시-1 주입하는 동안 대뇌 국소 빈혈을 확인하기 위해 레이저 도플러 flowmetry (LDF)의 사용을 줄일 수 있습니다. 스트로크 변화에 영향을 미칠 요소는 주입과 동부 표준시-1의 배치의 정밀도가 6을 사용하여 포함되어 있습니다. 또 다른 중요한 고려 사항은 비록 reperfusion 인간 뇌졸중의 일반적인 발생 점입니다, 동부 표준시-1 유도 MCAO에 대한 가림의 기간은 밀접하게 인간 뇌졸중으로 많은 환자가 폐색 9에 따라 일 시간 동안 부분 reperfusion을 가지고있는 것을 모방해서는 안됩니다 10. 이 프로토콜은 상세 쥐의 허혈성 뇌졸중에 대한 동부 표준시-1 유도 MCAO 모델에 대해 설명합니다. 또한 절차를 통해 특별 고려 사항과 잠재적 인 단점에 관심을 끌기합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 플로리다 대학 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되고 준수는 "케어에 대한 가이드 및 실험실 동물의 사용"(여덟째 판, 과학 국립 아카데미, 2011)되었다.

자료

  1. 동물 : 수술시 250~300그램 무게 여덟 주 된, 남성, Sprague Dawley 쥐 (찰스 강 (Charles River)의 농장, 윌 밍턴, 미국 MA,).
  2. 마취
    1. 흡입 마취 시스템 (VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA)
    2. Isoflurane 마취 (박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA)
  3. Stereotaxic 시스템 (데이비드 Kopf 기기, Tujunga, CA, USA)
    1. 작은 동물 stereotaxic 시스템
    2. 쥐에 대한 비 파열 귀 바
    3. 쥐에 대한 가스 마취 헤드 홀더
  4. 온도 조절
    1. BAT-12 microprobe 온도계 (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA)
    2. T / PUMP, TP60....

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결과

1. 포스트 사설 신경 평가

동물이 의식을 회복 한 후 테스트 다양한 종류의 균형, 그립 강도, 동물의 발자국 배치, 자세가 비대칭과 등산 계단 등의 신경 결손을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 해바라기 씨 작업은 모터와 경색 볼륨 7, 12 중요한 상관 관계가 감각 기능의 총 평가입니다. 열기와 5 해바라기 씨 소모하는 동안이 작업에는 쥐가 시간이 초과되어 있습니다. 다섯 씨는 비어있는, 건조, 플라스틱 케이지 중 하나를 코너에 배치되어 씨앗을 조작 소요 시간이 기록됩니다. 또한, 모든 씨앗이 열리고 소비 한 후 케이지에서 쉘 조각의 번호가 기록됩니다. 더 신경 적자와 쥐가 씨앗을 열고 소비하는 데 시간이 오래 걸릴 더 많은 조각으로 껍질을 깰 수 있습니다. 이 작업을하지 공식적인 부분이지만, 자주 mishandling와 해바라기 씨의 하락을 관찰하기 쉽다실험 뇌졸중 후 쥐가 s입니다. 이 열 시도하는 동안 껍질 물고 주로 한 앞발, 그리고 효과의 사용이 포.......

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토론

동부 표준시-1 유도 MCAO는 정기적으로 여러 쥐 종자에 사용되는 실험 허혈성 뇌졸중의 오래된 모델입니다. 이 모델 5, 14을 사용하면 이러한 쥐 변형, 동물 연령, 체온, 마취 방법, 그리고 연산자 전문 등 많은 변수가 경색 권 증가 다양성 될 수 있습니다. 그러나, 몇 가지 조사는이 모델의 장점은 상대적으로 비 침습적 방식, 동부 표준시 - 1 뇌성 혈액 흐름의 선량 반응, 그리고 의식 쥐 14, 15 동부 표준시-1의 주입에 의해 모두 마취를 방지 할 수있는 능력을 포함하는 것으로 나타났습니다. 그것은 문학에서 사용 쥐 변형 및 나이에 많은 차이가 있다는 것을 주목할이며 다른 stereotaxic 좌표가이 변수에 따라보고되는 놀라운 일이 아닙니다. 우리 프로토콜에 사용되는 좌표는 팔주 세의 남자 Sprague Dawley 쥐에 최적화되어 있습니다. 이 변형, 성별, 또는 연령에서 조금이라도 벗어나면 가능성이 intracerebral이 주입 필요합니다염료 이온이 절차의 유효 기간.......

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공개 사항

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

감사의 글

이 작품은 미국 심장 협회 상급 동남아 계열 (09GRNT2060421), 미국 의학 협회에서와 플로리다 임상 병진 과학 연구소의 대학에서 보조금에 의해 지원되었다. 아담 메카는 NIH / NINDS, NRSA predoctoral 동료 (F30 NS-060335)입니다. 로버트 Regenhardt은 고혈압의 플로리다 종합 교육 프로그램의 대학 (T32 HL-083810)에서 predoctoral 교제 지원을 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
  1. 동물 : 수술시 250~300그램 무게 여덟 주 된, 남성, Sprague Dawley 쥐 (찰스 강 (Charles River)의 농장, 윌 밍턴, 미국 MA,).
  2. 마취
    1. 흡입 마취 시스템 (VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA)
    2. Isoflurane 마취 (박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA)
  3. Stereotaxic 시스템 (데이비드 Kopf 기기, Tujunga, CA, USA)
    1. 작은 동물 stereotaxic 시스템
    2. 쥐에 대한 비 파열 귀 바
    3. 쥐에 대한 가스 마취 헤드 홀더
  4. 온도 조절
    1. BAT-12 microprobe 온도계 (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA)
    2. T / PUMP, TP600 열 담요 (Gaymar 산업 주식회사, 오차드 파크, NY, USA)
  5. 수술기구
    1. 메스 핸들과 # 11 블레이드 아이리스 포셉, Graefe 포셉, 드라이버 겸자의 견인기,, 26 게이지 바늘 beveled (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA)을 갖춘 10 μl 주사기
    2. Micromotor 훈련과 stereotaxic 홀더, 전형적인 Stereotaxic 주입기 (Stoelting, 우드 데일, IL, USA)
    3. 1.0 mm 원형 드릴 버, 1.0 mm 역 콘 드릴 버 (Roboz 외과 인스트루먼트 (주), 주식회사, 게이스 버그, MD, USA)
  6. 외과 용품
    1. 2.4 mm 축 길이, 21 게이지 가이드 캐뉼라 [긴 받침대 아래에 4mm]와 캐뉼라 더미 (플라스틱 하나 로어 노크, VA, USA)와 나사에게 0-80 X 32분의 3 마운트
    2. 제트 의치 아크릴, 액체 (랭 치과 제조 유한 주식회사, 휠링, IL, USA)
    3. 3.0 나일론 봉합 (오아시스 (Oasis), Mettawa, IL, USA)
    4. 면봉, Puralube 눈 연고 (피셔 ScientifiC, 피츠버그, PA, USA)
    5. 전기 헤어 가위 (Oster, 섭리, RI, USA)
  7. 화학 제품
    1. 엔도 테린-1 (미국 펩타이드, 서니 베일, CA, USA)
    2. Chlorhexidine 2% (Agrilabs, 세인트 조셉, MO, USA)
    3. Buprenorphine HCL (Hospira 주식회사, 레이크 포레스트, IL, USA)
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    2. 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화은 (시그마 - 알드리치 (주) 세인트 루이스, MO, USA) PBS에 0.​​05 %로 희석
    3. 평판 스캐너 (엡손 정보를 완벽 V30, 엡손 아메리카, 주식회사, 롱 비치, CA, USA)
    4. 이미지 J 소프트웨어 (ImageJ 1.42q 소프트웨어, 건강의 미국 국립 연구소, 베데스다, MA, USA)

참고문헌

  1. Stroke--1989. Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke. 20, 1407-1431 (1989).
  2. Lloyd-Jones, D., et al.

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