파지 - 표시 합성 항체 라이브러리의 확장 성 높은 처리량 선택

Shane Miersch; Zhijian Li; Rachel Hanna; Megan E. McLaughlin; Michael Hornsby; Tet Matsuguchi; Marcin Paduch; Annika Sääf; Jim Wells; Shohei Koide; Anthony Kossiakoff; Sachdev S. Sidhu

doi:10.3791/51492

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방법 논문

파지 - 표시 합성 항체 라이브러리의 확장 성 높은 처리량 선택

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DOI:

10.3791/51492

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2015년 1월 17일

Shane Miersch¹^,² , Zhijian Li¹^,² , Rachel Hanna¹^,² , Megan E. McLaughlin¹^,² , Michael Hornsby¹^,³ , Tet Matsuguchi¹^,³ , Marcin Paduch¹^,⁴ , Annika Sääf¹^,⁴ , Jim Wells¹^,³ , Shohei Koide¹^,⁴ , Anthony Kossiakoff¹^,⁴ , Sachdev S. Sidhu¹^,²

¹The Recombinant Antibody Network, ²The Banting and Best Department of Medical Research, University of Toronto, ³Antibiome Center, University of California, San Francisco at Mission Bay, ⁴Department of Biochemistry and Molecular Biology, The University of Chicago

이 논문에서

요약

방법은 항원 동시에 수백 대해 파지 디스플레이 조합 항체 라이브러리의 합성 확장, 고 스루풋 선택을 수행하기위한 시각적 반주하여 설명한다. 이 병렬 접근 방식을 사용하여, 우리는 표준 면역의 기능적인 다양한 항원에 대한 높은 친화력과 특이성을 나타내는 항체 단편을 격리했다.

초록

모두 기초 연구 및 임상 응용의 요구를 충족하는 항체에 대한 수요가 높고, 향후 대폭 증가 할 것이다. 그러나, 기존의 단일 클론 기술이 작업까지 혼자가 아니라는 것을 알 수있다. 이것은 프로테옴의 모든 요소들에 접근 고품질 재생 친 화성 시약에 대한 수요를 충족시키기 위해 대안적인 방법의 개발을 유도 하였다. 이를 위해, 파지 표시 합성 항체 라이브러리에서 선택을 수행하기위한 높은 처리량 방법은 다양한 항원을 포함하는 애플리케이션을 위해 고안되었으며, 빠른 처리 속도 및 성공에 최적화. 여기서, 프로토콜은 비디오 시연 수동 96 채널 액체 핸들러 또는 로봇 자동화 된 시스템을 사용하여 타겟의 수백에 대해 높은 다이버 시티의 Fab 라이브러리로부터 파지 클론의 선택을 도시 평행 상세하게 설명한다. 이 프로토콜을 이용하여, 사용자는 하나의 항원을 생성 할 수있는 수백,병렬로 항체를 선택 6-8 주 이내에 항체 결합을 확인합니다. 강조는 다음과 같습니다 ⅰ) 가능한 항원 형식, ⅱ) 사전 선택 항원의 특성, ⅲ) 중요한 특정 및 선호도가 높은 클론의 선택에 영향을 미치는 단계, 및 ⅳ) 모니터링 선택 효과와 초기 항체 클론 특성화 방법. 이 방식으로, 우리는 단일 막 통과 수용체, 단백질 분비 호르몬, 멀티 도메인, 세포 내 단백질을 포함하는 많은 타겟 클래스 합성 항체 단편 (Fab를)를 얻었다. 이 조각은 쉽게 전체 길이 항체로 변환하고 높은 친화력과 특이성을 나타내는 것으로 확인되었다. 또한, 그들은 웨스턴 블로 팅, ELISA, 세포 면역, 면역 및 관련 분석을 포함하여 표준 면역의 다양한 기능으로 입증되었다. 이 방법은 항체 발견을 촉진하고 궁극적으로 목표 O를 실현 가까이 우리를 가져올 것이다F 프로테옴에 재생 고품질 항체를 생성하는 단계를 포함한다.

서론

포스트 게놈 시대의 시작과 함께, 특징 및 단백질을 조절하는 고품질의 결합 시약의 가용성은 새로운 연구 및 치료 길을 열 필수적이다. 항체는 기초 연구 및 진단 도구 및 잠재적 치료제로 모두 학문과 산업 연구원에 중요한 계속. 당연히, 사용자 정의 항체를 생성하기 위해 기존의 하이 브리 도마 기술에 의존하는 대부분의 계약 항체 개발 기업의 인상적인 성장이 있었다. 그럼에도 불구하고, 파지 디스플레이 항체 라이브러리를 사용하여 체외 선택은 기존의 기술 한계 ^{1, 2에 직면} 수있는 고유의 장점과 성공을 제공 할 수있는 강력한 대안 기술이되고있다.

연구 도구, 생성하는 두 가지 주요 과제로 높은 품질의 항체에 대한 상당한 수요에 비추어 신 재생 항체는 1) 선택 처리량과 2) 항원 유명하다ailability. 그룹 번호는 현재 처리량 및 항체 인식의 속도를 향상 목적 체외 선택 파이프 라인에서 설명 하였다. 이러한 설명 세부 전체 길이 중 하나에 선택 등이 가능한 다양한 접근 방식을 ^사용, 2, ^{3, 4} 대상으로, 또는 구조적 도메인 ^5,6,7 관련 중 하나 비드 기반 ^{6,8 또는 3,4} 항원 고정화 방식을 기반 접시입니다. 또한,....