여기에서는 쥐의 장간막 림프관을 캐뉼로화하는 기술을 설명하며, 이를 통해 장 전달 후 림프계를 통한 지질 및 약물 수송을 정량화할 수 있습니다. 이 기술은 장간막 림프 농도 및/또는 유체, 면역 세포, 펩타이드, 단백질 및 친유성 분자의 수송을 평가하는 데 적용할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
장 림프 시스템은 유체 수송, 지질의 흡수와 면역 기능에 중요한 역할을한다. 림프 장간막 림프절 덕트 수렴 림프관 및 일련의 노드를 통해 소장에서 직접 흐른다. 장간막 림프절 덕트의 캐 뉼러 따라서 소장에서 흐르는 장간막 림프절의 수집을 할 수 있습니다. 장간막 림프 및 지단백 분획 (지질, 친 유성 분자와 아포 단백질) (사이토 카인과 장 호르몬 등의 유체, 펩타이드 및 단백질) 면역 세포 (99 % 림프구), 수성 부분의 세포 부분으로 구성되어 있습니다. 장간막 림프절 덕트 삽관 모델 따라서 림프계를 통해 농도 및 소장에서 다양한 요인의 이송 속도를 측정하는데 사용될 수있다. 다른 도전에 대한 응답에서 이러한 요소의 변경 (예를 들면, 다이어트, 항원, 약물)과 질병 (예를 들어, 염증성 장 질환, HIV는 당뇨병)도 수 b전자는 결정. 관심을 확대 영역은 장 지질 흡수 경로와 연관 경구 투여 친 유성 약물과 전구 약물의 흡수에 림프 수송의 역할이다. 여기에 우리가 설명, 세부 사항, 장 배달 다음 몇 시간 동안 림프 시스템을 통해 속도와 지질 및 약물 수송의 정도의 평가를 할 수있는 장간막 림프절 덕트 유관 쥐 모델. 방법은 림프 다른 파라미터의 측정에 용이하게 적응할 수있다. 우리는 실험 성공을 확인하고 얻은 데이터를 해석하는 방법에 대한 교육을 제공하기 위해이 복잡한 수술 방법을 설정할 때 발생할 수있는 문제에 대한 자세한 설명뿐만 아니라, 실패와 성공의 실험에서 대표 데이터를 제공합니다.
서론
림프는 각 소장 융모 1에 포함 된 단일 lacteals에서 유래 단방향 프로세스를 통해 소장에서 흐른다. Lacteals 따라서 유체, 거대 분자 및 세포 림프 형성에 상대적으로 투과성 lacteals에 이러한 요소의 항목으로 시작한다. lacteals의 초기 림프 이후 림프 미세 혈관의 네트워크, 수집 (구 심성) 림프관, 장간막 림프절 궁극적으로 사후 노드 (원심성) 림프 혈관의 시리즈를 통해 소장에서 흐른다. 노드 내 림프 교환 혈액에서 노드를 입력 노드에 상주 면역 세포뿐만 아니라 물질로 발생하는 수질 부비동의 시리즈를 통해 전달합니다. 소장에서 흐르는 모든 림프 결국 원심성 장간막 림프절 덕트 및 이후 치스 테르 나디 라티 나에 chyli에 수렴한다. 치스 테르 나디 라티 나에 chyli 또한 림프 꼬리 주변 조직을 배출, intest를 수집원고 판은, 간 및 요추 지역과는 종격동과 몸의 뇌 부분에서 림프와 함께 흉부 림프 덕트를 결합한다. 흉부 림프 덕트는 왼쪽 경정맥과 쇄골 하 정맥의 교차점에 정맥 시스템에 직접 림프를 비 웁니다. 장간막 림프절에서 직접 림프 덕트의 수집을 가능하게 기재되어있는 프로토콜, 따라서 장 림프계를 통해 전신 (일반)에 순환 부위에서 직접 천이 다양한 인자의 분석을 용이하게한다.
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프로토콜
이 논문에 기술 된 연구는 지역의 동물 윤리위원회의 승인을하고, 연구 및 교육 지침에 동물의 관리에 대한 호주와 뉴질랜드위원회에 따라 실시 하였다. 모든 동물의 절차를 시작하기 전에 적절한 권한 로컬 기관 / 조직을 통해 얻을 수 있는지 확인합니다. 모든 동물 수술과 마찬가지로 수술은 무균 조건에서 윤리적이고 성공적인 결과를 보장하기 위해 필요한 경우 마취제, 진통제와 항생제 투여되어, 적절히 훈련 된 운영자에 의해 수행되어 있는지 확인합니다.
1. 준비 일 수술 전에
- 필요한 경우 수술 전에 쥐에게 밤을 고속으로. 쥐를 확인하는 것은 물에 무료로 액세스 할 수 있습니다.
- 준비 솔루션은 쥐에 투여한다.
- 멸균 식염수 또는 링거 용액으로 재수 솔루션을 준비합니다.
- 준비심미적 솔루션은 필요에 따라. 여기에 기술 된 실험에 사용 마취제 "케타민 100 mg을 1.9 ㎖ / ㎖, 크 실라 100 ㎎ / ㎖, 0.5 ㎖, ml의 아세 프로 마진 10 ㎎ / 0.2 ㎖의 생리 식염수를 2.5 ㎖의 결합에 의해"칵테일 1 "제조 이루어져 케타민 100 ㎖ ㎎ / 0.1 ml의 아세 프로 마진 10 ㎎ / ㎖ 1 ㎖ 이루어진 칵테일 2 ". 주 : 오랜 기간 동안, 수술 적 단계의 마취....
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결과
대표적인 실험의 결과는도 4 및도 5에 도시되어 장간막 림프절 삽관 모델을 이용하여 장내 전달 다음 림프계를 통해 누적 범위와 지질 및 약물 수송 속도를 정량화한다.이 실험에서, 모델 친 유성 200 μg의를 포스페이트 완충에 5.6 ㎖의 5 mM의 나트륨 타우로 콜산에 분산 및 7.1 mg의 2 모노 올레 인 - 약물 할로 판 트린 40 mg의 올레산 (5 μCi를 14 C-올레산 2 포함) 아세트산 함유 제제에서 2 시간 동안 쥐의 십이지장 내로 투여했다 식염수의 pH가 6.9. 제제 투여 후 래트를 2.8 ㎖ / 십이지장 내로 주입 된 생리 식염수와 시간의 속도로 재수 화 하였다. 림프는 10 시간 동안 매 시간을 변경 튜브에 지속적으로 수집 하였다. 모두 동일한 COMPON 함유 제제에 대한 전술 한 프로토콜에 따라, 제형을 제조하고, 실험을 수행그것을 제외하고 엔트는 2 모노 올레 인 (43)을 포함하지 않았다.
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토론
쥐 장간막 림프절 삽관 모델은 다양한 물질로 도전하는 농도와 다양한 세포와 소장에서 림프에 응답하여 발생하는 이들에 대한 변경 (예 : 지질 및 약물 등) 분자의 전송 속도를 직접 정량화 할 수 있습니다 (다이어트 항원 약물, 제형 등) 10,27 질병 (암, 바이러스, 대장염, 인슐린 저항성 등) 5-7. 림프 수집 성분은 또한 상기 추가의 실험에 이용 될 수있다. 예를 들어, 셀 (44), 분획 지질 단백질과 림프 또는 지질 단백질이나 세포와 같은 구성 요소는, 약물, 방사능 표지 및 형광 프로브를 포함하여 마커로드 배양 할 수있다. 이는 더 직접적으로 그 기능, 신진 대사, 통관 및 / 또는 조직 처분 패턴 45-47을 평가받는 동물로 재 주입 할 수 있습니다. 랫트 림프 삽관 모델 OTH 여러가지 장점을 갖는다어 시험관, 현장에서, 실리코, 그리고 생체 내 모델 도입에 설명 .......
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
호주 연구 위원회(ARC)와 국립 보건 및 의학 연구 위원회(NHMRC)의 자금 지원에 감사드립니다.
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참고문헌
- Barrowman, J. A., Tso, P. Gastrointestinal lymphatics. Comprehensive Physiology. , 1733-1777 (2010).
- Karaman, S., Detmar, M. Mechanisms of lymphatic metastasis. J Clin Invest. 124 (3), 922-928 (2014).
- Mossel, E. C., Ramig, R. F.
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