종양 개발의 평가를 위해 마이크로 컴퓨터 단층 촬영을 사용하고 후속 치료에 대한 반응의를 폐암의 마우스 모델에서

요약

마이크로 컴퓨터 단층촬영을 사용하여 선암종 마우스 모델의 폐에서 종양 결절 발달을 감지하는 방법과 시간 경과에 따른 결절 크기 및 치료에 대한 반응 변화를 모니터링하는 데 사용하는 방법을 설명합니다. 평가의 정확성은 종말점 조직학적 정량화로 확인되었습니다.

초록

폐암은 세계에서 가장 치명적인 암입니다. 폐암에 대한 새로운 치료법을 찾기 위해 전 세계적으로 집중적인 연구가 진행되고 있습니다. 폐암의 여러 마우스 모델을 사용하여 암 발생 메커니즘을 연구하고 다양한 치료 전략을 실험하고 있습니다. 그러나 생쥐의 폐에서 종양 결절의 발달을 확인하고 다양한 실험 및 치료 개입에 대한 반응으로 종양 결절의 크기 변화를 모니터링할 수 있는 실시간 기술이 없기 때문에 질병의 경과와 치료에 대한 적시 반응에 대한 정확한 설명을 얻을 수 있는 능력이 저하되고 있습니다. 본 연구에서는 폐선암종의 마우스 모델에서 폐 종양의 발생을 감지하기 위해 마이크로 컴퓨터 단층 촬영(CT) 스캐너를 사용하는 방법을 설명합니다. 다음으로, micro-CT를 이용한 월간 추적 관찰을 통해 추가 결절의 출현, 이전에 검출된 결절의 크기 증가, 치료에 대한 반응으로 결절의 크기 감소 또는 완전한 해상도와 같은 폐 종양의 동적 변화를 확인할 수 있음을 보여줍니다. 마지막으로, 이 실시간 평가 방법의 정확성은 종말점 조직학적 정량화를 통해 확인되었습니다. 이 기술은 폐암 동물 모델에 대한 보다 복잡한 실험을 계획하고 수행할 수 있는 길을 열어주며, 시간과 자원을 절약하면서 발암 메커니즘과 다양한 치료 방식의 효과를 더 잘 이해할 수 있도록 합니다.

서론

폐암은 세계 ¹ 주위에 암 사망의 주요 원인이다. 폐암의 예방, 조기 진단 및 치료에 대한 연구는 전 세계에 걸쳐 ^2,3- 많은 연구소에서 진행되고있다. 폐암 여러 동물 모델이 개발되었으며, 이들은 암 줄기 세포의 존재를 결정하는 폐 발암과 원래 셀의 기전 연구에 유용하게 입증하고 다양한 신규 한 치료 전략 ^4를 검토한다. 이전 모델 마우스 ^(5)의 민감한 균주에 발암 물질에 의한 종양 개시에 의존했다. 폐암 특이 유전자 조작 병변의 결과로서 발생하는 넉 아웃 형질 전환 마우스 모델의 발전은 실질적으로 종양 유도 및 인간 간암 ⁴ 모방 여러 측면을 제어하는 능력이 개선되었다. 그러나, 폐암 동물 모델의 사용에서 주요한 문제는 실시간에있어서의 부재이며정확하게 파악하고 마우스의 폐에서 종양의 발생과 발전을 모니터링하고 치료에 반응에서의 지속적인 성장 또는 감소로 그 크기에 이후의 변화를 문서화 할 수 있습니다. 이 작업은 몇 시간, 노력, 자원 소모 기술 종양을 파악하고 자신의 실험 결과를 평가에 의존하는 연구자를 강제하고있다. 종양 유도에 응답하여 고유 한 마우스 간 변동의 존재는 데이터의 변동을 줄이기 위해 각 실험군의 동물의 다수의 이용을 필요로한다. 실시간으로 치료에 대한 종양의 성장 또는....

프로토콜

동물 실험은 게이오 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.

참고 :이 연구에서 우리는 Sftpc-rtTA 및 폐 선암이 빠르게 독시 싸이클린 ^{6,7를 포함하는} 우를 공급함으로써 유도 한 후 개발하는 트레 - Fgf9-IRES-EGFP DT 마우스를 사용했다. 그러나, 모든 평가 절차는 다른 폐암의 마우스 모델에 적용될 수있다.

1. 실험 개요 :

1. 기준선에서 폐의 상태를 식별 :
   1. 종양 유도하기 전에, DT 마우스가 8 일 때 - 12 주 오래 된, 최초의 마이크로 CT 스캔 (아래 2 항과 3 항 참조) 수행합니다. 이는 폐 기준 검사로서의 트랜스 누설로 인한 자발적 개발 노쥴의 유무를 확인하고, 종양 유도 전에 기존 폐 병변이없는 문서.
2. 종양 유도를 시작합니다 :
   1. 일반 채널에서 DT 마우스 스위치독시 싸이클린 차우에 아야 폐포 세포에서 섬유 아세포 성장 인자 (FGF) 9 발현을 유도하는 종양 개발을 시작합니다. 독시 싸이클린 우 (200 ppm의) 광고 무제한을 제공합니다.
3. 마....

결과

폐의 이상으로 쥐의 식별 기준에서 수행되었다. DT는 마우스가 8했다 종양 유도, 전 - 연령 12 주, 모든 쥐의 폐는 마이크로 CT로 스캔했다. 놀랍게도, 마우스의 약 50 %는 후속 연구에 포함하기에 부적합하다고 우리를 강제 이상을 보여 주었다. 이러한 이상이 결절 모양의 그림자, 큰 하나 또는 여러 개의 작은 기종 수포 및 / 또는 엽성 무기폐 (그림 1A, C, DE, GH)이었다. 그 후, FGF9의 유전자와 종양 유도 (이상 없음) 정상 폐 검사를 보였다 마우스는 폐포 세포 및 후속 종양 개발에 FGF9의 발현을 유도 독시 싸이클린 우 정기적 우로 전환했다 activated.Only했다. 종양 유도 개시에서 십주 후 마우스 폐에 종양 결절의 발전을 확인 마이크로 CT 스캔을 수행하기 위해 실시 하였다. 이들은 D 밝혀모든 마우스에서 변수 크기의 여러 결절의 evelopment (그.......

토론

종양 결절의 발달 등 계획 폐암과 관련된 실험을 실시하고 과학자있게 폐암 동물 모델에서 치료에 대한 반응의 실시간 폐 기형의 식별 및 모니터링을 위해 여기에 설명 된 마이크로 CT 기반 방법 정확하고 효율적인 실험 시간과 자원을 절약하면서. 우리는 이전에 같은 목적으로 ⁶ MRI를 사용했습니다. MRI와 폐 결절의 검출을위한 스캔 임계 값의 명확성이 연구 ^6에 기재된 마이크로 CT 스캔과 것과 떨어진다.

(다른 유전 적 배경과 종양 유도 방법과) 유사한 폐 선암 마우스 모델을 사용하는 이전의 연구는 분명 피하거나 그들이 마이크로 CT 스캐닝 ^{9, 10을} 사용했다 향상되었습니다 수있는 몇 가지 단점을 가지고 있었다. 그들은 이렇게 교란 위험, 어떤 사전 유도 폐 이상 또는 결절을 식별 할 수단이 없었다부적합한 동물을 포함하여 그 결과. 또한 유도 후 또는 (차 종양을 유도하는) 야생형 마우스에 암 세포를 전파 한 후 종.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마이크로-X-레이– 컴퓨터 단층 촬영	Rigaku	R_mCT2
NanoZoomer RS 디지털 병리학 시스템	하마마츠	RS C10730
NDP.view2  시청 소프트웨어	하마마츠	U12388-01
http://www.hamamatsu.com/jp/en/U12388-01.html Isoflurane 기화기 - 퍼넬 필	VETEQUIP	911103
유도 챔버, 2 L  W9.5 &배; D23 &횟수; H9.5	VETEQUIP	941444
Isoflurane	Mylan	ES2303-01
AZD 4547	LC Labratories	A-1088
Pentobarbital	Kyoritsu	SOM02-YA1312
G24 캐뉼라	Terumo	SP-FS2419
파라포름알데히드	Wako	163-20145
Microtome	Leica	RM2265
독시사이클린	SLC 일본/PMI Nutrition International	5TP7
ImageJ 소프트웨어	국립 보건		http://imagej.nih.gov/ij/
Puralube vet 연고 (구식 윤활제)	Dechra	NDC 17033-211-38

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