항 체에 의해 그 대상 인플루엔자 바이러스 조류 Fc 중재 effector 기능 활성화를 측정 하는 방법을 설명 합니다. 이 분석 결과 또한 Fc 중재 면역 유도의 단일 클론 항 체 또는 polyclonal 세라 다른 바이러스 표면 glycoproteins를 대상으로 능력을 평가 하기 위해 적응 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
항 체 항 원 바인딩 도메인 Fc 영역을 통해 바이러스 성 병원 체에 대 한 타고 난 및 적응형 면역 응답 커플링에 중요 한 역할을 한다. 여기, 우리가 활성화를 측정 하는 방법에 설명 Fc의 단일 클론 항 체는 활성화 표현 유전자 조작된 Jurkat 세포 라인의 사용으로 인플루엔자 바이러스 조류를 대상으로 하 여 이펙터 기능 입력 1 Fc-FcγR. 전송 시각:이 메서드를 사용 합니다 특정 Fc-FcγR 상호 작용 면역 글로불린에 의해 수 여의 생체 외에서 분석 결과 사용 하 여 확인할 수 있습니다.
서론
계절 독감 백신에서 제공 하는 면역은 전통적으로 hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과1, 대상으로 하는 조류의 수용 체 바인딩 사이트 항 체의 존재를 측정 하 여 평가 되었습니다. 이러한이 활성 항 체 살 균 면역을 부여 수 있습니다 하지만 일반적으로 인플루엔자 바이러스의 단지 선택 몇 가지 계통에 면역을 제공 하는 보호의 그들의 범위에서 좁은. 격리 및 조류 (HA)를 인식 하는 광범위 하 게 반응 단일 클론 항 체의 특성화 제안 범용 인플루엔자 백신의 개발은 도달 시간2,,34, 5 , 6 , 7 , 8. 인플루엔자 바이러스9,10,,11
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프로토콜
이 원고에서 preformed 실험 윤리 및 규정의 다음 아이 칸의 학부의 기관 코드를 완료 했다.
1. 인플루엔자 바이러스 조류 Transfection 또는 감염의 표현
Transfection:
- 플레이트 인간 미 발달 신장 (HEK 293T) 셀 셀/잘 백색 조직 문화에서에서 2 x 104 의 밀도에서 96 잘 접시를 처리 하 고 (와 함께 5% CO2) 37 °C 배양 기에서 4 h 동안 앉아 보자.
- 100 셀 transfect DNA 바이러스 조류 및 50 μ의 전체 볼륨에 잘 당 transfection 시 약 0.2 μ에 대 한 코딩의 ng.
참고: 모두 Opti-최소 필수 미디어 (MEM) 감소 된 혈 청 매체 x 1에 플라스 미드 그리고 transfectant 시 약 희석 하. - 플레이트 18 h 5% CO2 와 37 °C 배양 기에서 배양 후 transfection 미디어를 제거 합니다.
2입니다. 감염
- <....
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결과
우리는 시연 스토킹 전용 mAb, 6F12, 하지만 하지 머리 전용 머리 전용 mAb, PY102, upregulating CD107a 및 인터페론 γ19에 의해 기본 자연 킬러 세포를 활성화할 수 있었습니다. 모델링 기본 인간 NK 세포를 활성화 하는 스토킹 특정 항 체의 능력, 우리 스토킹 관련 mAb, 6F12, 튼튼하게 의해 murine FcγRIV 표현 수정된 Jurkat 세포를 활성화할 수 있습니다 보여 ~ 14-fold. 다른 한편으로, 머리 전용 mAb, PY102 및 제어 IgG (그림 2)28하지 않습니다.
X31 (reassortant 인플루엔자 바이러스는 조류와 응집의 A/Hong 홍콩/1/68 (H3N2)와 MDCK 세포 감염 우리 조사 감염 (MOI)의 다양성 murine FcγRIV 표현 Jurkat 세포의 유도 영.......
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토론
여기에 설명 된 메서드를 사용 하면 murine FcγRIV 참여 하 특정 단일 클론 항 체의 능력을 측정 하 수 있습니다. 대상 항 인플루엔자 바이러스 조류 바이러스 또는 플라스 미드 DNA의 transfection 감염 후 세포의 표면에 표현 된다. 분석 결과 (인간 또는 murine) 다른 FcγRs와 함께에서 다른 표면 표현 바이러스 성 단백질을 사용 하 여 의무가 더 이다. 또한, 우리는 세라 샘플 사용 Fc effector 기능 (데이터 표시 되지 않음), 유도 컨텍스트를 polyclonal 항 체의 능력을 평가 하기 위해 감염에 의해 유도 된 적합 한 면역 반응 공부 때 보다 관련성이 높은 정보를 제공할 수 있습니다 또는 예방 접종입니다. 우리는 또한 직접 수용 성 단백질으로 플레이트를 코팅 하 여 내부 바이러스 성 단백질을 인식 하는 항 체의 유도 측정 하는 분석 결과 수정할 수 있습니다 추측 하고있다. 그러나,이 방법론은 엄격 하 게 테스트 되지.
유도의 항 체 .......
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공개 사항
저자는 관심 없음 충돌 선언합니다.
감사의 글
이 프로젝트는 자금을 일부 알레르기 국립 연구소와 전염병에서 연방 자금, 건강의 국가 학회, 학과의 보건 및 인적 서비스, CEIRS 아래 계약 P01AI097092-04S1 (P.E.L.).
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| A549 셀 | ATCC | CCL-185 | 선암성 인간 폐포 기저 상피 세포 |
| HEK 293T 세포 | ATCC | CRL-3216 | 인간 배아 신장 세포 |
| Lipofectamine 2000 | Life Technologies | 11668019 | Transfection 시약 |
| 1X Opti-MEM Reduced Serum Medium | ThermoFisher Scientific | 51985-034 | |
| 백색 조직 배양 처리된 96-웰 플레이트 | Corning, Inc. | 3917 | 분석 플레이트 |
| 10X MEM | Gibco | 11430-030 | |
| 쥐를 발현하는 Jurkat 세포 FcgRIV | Promega | M1201 | 키트는 세포, Bio-Glo Luciferase 분석 시스템, 1X RPMI 및 저 IgG 혈청 |
| Jurkat 세포를 제공합니다. 인간 FcgRIIIa | Promega | G7010 | 키트는 세포, Bio-Glo Luciferase 분석 시스템, 1X RPMI 및 저 IgG 혈청 |
| 을 제공합니다.인간 FcgRIIa | Promega | G9901 | 에는 세포, Bio-Glo Luciferase 분석 시스템, 1X RPMI 및 저 IgG 혈 |
| 광도계 | BioTek | Synergy H1 다중 모드 리더 | 발광 플레이트 리더 |
| Bio-Glo Luciferase 분석 시스템 | Promega | G7940 | luciferase 분석 버퍼와 luciferase 분석 기질 |
| Madin Darby 송곳니 세포 | .ATCC | CCL-34 | 개 신장 세포 |
참고문헌
- Hobson, D., Curry, R. L., Beare, A. S., Ward-Gardner, A. The role of serum haemagglutination-inhibiting antibody in protection against challenge infection with influenza A2 and B viruses. J Hygiene. 70 (04), 767-777 (1972).
- Throsby, M., et al.
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재인쇄 및 허가
