동맥류 고지혈증 마우스 모델에서 오일 레드 O-염색된 전체 대동맥 병변의 이미징 및 분석

요약

이 프로토콜은 마우스에서 죽상경화성 부담을 분석하기 위한 단계별 절차를 제공한다. 연구자는이 프로토콜을 사용하여 다른 동물에서 죽상 경화성 병변의 풍부도, 위치 및 크기를 비교할 수 있습니다.

초록

Apolipoprotein E (Apoe)- 또는 저밀도 지단백 수용체 (Ldlr)-결핍 고지혈증 마우스는 죽상동맥경화증 연구에 가장 일반적으로 사용되는 두 가지 모델이다. 그들은 죽상 경화성 병변 형성에 대한 다양한 유전 적 요인과 다양한 세포 유형의 영향을 연구하고 새로운 치료법의 개발을 테스트하는 데 사용됩니다. 단리, 전체 대동맥의 절제, 및 Oil Red O 염색된 죽상경화성 병변의 정량화는 죽상경화성 부담을 평가하기 위해 사용되는 기본적인 형태학적 방법 이다. 이 프로토콜의 목표는 Oil Red O로 마우스 대동맥에서 죽상 경화성 병변을 해부, 퍼퓨즈 고정, 분리, 염색, 이미지 및 분석하기 위해 최적화 된 단계별 수술 방법을 설명하는 것입니다. 무신동맥경화성 병변은 대동맥 전체 트리의 어느 곳에서나 형성될 수 있기 때문에, 이러한 전체 대동맥 오일 레드 O 염색 방법은 단일 마우스의 전체 대동맥 및 모든 가지에서 지질이 함유된 플라크를 평가할 수 있는 장점이 있다. Oil Red O 염색 이외에, 신선한 분리된 전체 대동맥은 다양한 시험관내 및 생체내 실험 및 세포 분리에 사용될 수 있다.

서론

미국에서 사망의 주요 원인 인 관상 동맥 질환은 일반적으로 동맥 벽 내부에 플라크가 쌓이는 과정 인 죽상 동맥 경화증에 의해 유발됩니다¹. 고지혈증이 발생하기 쉬운 Apoe- 및 Ldlr-결핍 마우스는 죽상동맥경화증과 그 합병증 및 치료법 개발의 조사의 중심입니다2,3,4,5. en face aorta로부터의 죽상경화성 병변의 정량화는 상이한 세포 유형에서 유전자 조작의 영향을 평가하기 위한 중요한 종점 분석이다. 또한 죽상 경화성 질환 개시, 진행 및 퇴행에 영향을 미치도록 고안된 새로운 치료법을 연구하는 데 도움이됩니다. 죽상 경화성 병변은 대동맥과 그 가지 (즉, 가슴의 상완골, 경동맥 및 쇄골 하부 동맥뿐만 아니라 횡격막 아래의 신장, 일반적인 장골 및 대퇴골 동맥)⁶의 어느 곳에서나 형성 될 수 있습니다. 죽상 경화증 부담과 적절한 치료에 대한 포괄적 인 평가는 종종 간과되는 도전 과제 인 다른 위치에서의 질병 부담에 대한 평가가 필요합니다....

프로토콜

mT/mG(재고 번호 007676) 및 Apoe-^/-(재고 번호 002052) 마우스를 Jackson Laboratory에서 구입했습니다. Myh11-CreERT2 마우스는 Stefan Offermanns의 선물이었습니다 (Jackson Laboratory에서 재고 번호 019079로 제공됨). Tgfbr2fl^/fl 마우스는 해롤드 L. 모세(밴더빌트 대학교)로부터 수득하였다. 모든 동물 절차는 예일 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회에서 승인 한 프로토콜을 사용하여 수행되었습니다.

1. 생쥐

1. 생산 MYH11-CreERT2, mT / mGf / ^f; Apoe-/- 및 MYH11-CreERT2; Tgfbr2f/f;mT/mGf^/f; 앞서 기술한 바와 같은 Apoe-^/- 마우스

결과

이 프로토콜에서, TGFβR2iSMC-Apoe 마우스의 죽상경화성 병변을 HCHF 식이⁷ 상에서 4개월 후에 분석하였다. 광범위한 죽상 동맥 경화증 외에도,이 마우스는 이전에 보도 된 바와 같이 흉부 및 복부 대동맥류를 개발했습니다. Apoe-^/- 마우스와 비교했을 때, TGFβR2iSMC-Apoe 마우스 대동맥벽은 심각한 죽상동맥경화증을 나타내어 병변을 해부하기 어렵게 만들었다(그림 2C,D,E). 또한, 동맥류는 특히 suprarenal 대동맥 아래에 광범위하며, 진행된 인간 대동맥류를 연상케합니다.

HCHFD 공급 ^{TGFβR2iSMC-Apoe} 마우스로부터의 대표적인 미개봉 대동맥 오일 레드 O 염색 이미지를 도 3E에 .......

토론

Apolipoprotein E (Apoe) 및 저밀도 지단백 수용체 (Ldlr) 결핍 마우스는 죽상 동맥 경화증의 개발 및 치료를 연구하는 데 유용합니다. 조사관은 전체 대동맥9의 Oil Red O 염색을 사용하여 죽상동맥경화증 관련 질환 개시, 진행 및 퇴행에 대한 유전학 및 치료 조작의 영향을 평가할 수 ^있다. 대동맥 오일 레드 O 염색 및 병변 정량화는 죽상 동맥 경화증 연구를위한 황금 표준 종점입니다. 이 기술은 저렴하며 특수 장비가 필요하지 않습니다¹⁰. 그러나, 고품질의 Oil Red O 염색 조직을 얻는 것은 쉽지 않습니다. 이전 경험을 바탕으로이 프로토콜에는 세 가지 중요한 단계가 있으며 전체 절차에는 연습과 인내가 필요합니다. 첫 번째 중요한 단계는 Oil Red O 염색 전후에 대동맥 주변의 모든 혈관 주위 지방 조직과 그 가지를 해부, 제거 및 청소하는 능력입니다 (그림

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1.5 mL Eppendorf tube	DENVILLE	C2170
10 mL 주사기	BD	302995
16% 포름알데히드	Polysciences	18814-10
70% 에탄올	VWR	RC2546.70-5	해부 도구를 청소하려면
검은색 해부 왁스	CR Scientific	C3541
옥수수 기름	Sigma	C8267	Tamoxifen
DNeasy 혈액 및 용 용제 조직 키트	QIAGEN	69506	쥐 귀에서 DNA를 분리하려면
Dulbecco' s 인산염 완충 식염수(1X DPBS), pH 7.4	Gibco	14190-144
미세 가위	Fine Science Tools	14059-11	마우스 피부를 자르고 흉곽을 열려면
Fisherbrand Economy Plain Glass Microscope Slides	Fisher Scientific	12-550-A3
고콜레스테롤 고지방 다이어트	연구 다이어트	D12108	죽상동맥경화증을 유발하려면
이미징 소프트웨어	National Institutes of Health	Image J	대동맥 병변 정량화
이소프로판올		VWR JT9079-5
Kimwipes	Fisher Scientific	06-666A	유리 현미경 슬라이드를 청소하려면
McPherson-Vannas Micro Dissecting Spring Scissors	ROBOZ	RS-5602	심장과 대동맥을 분리하고 대동맥과 대동맥 가지를 절단합니다.
현미경 제어 소프트웨어	Olympus	DP 컨트롤러	대동맥 이미징
Minutien pins	Fine Science Tools	26002-10
Needle-25G	BD	305124
NonWoven Sponge	McKesson	94442000
Oil Red O	Sigma	O-0625	죽상 동맥 경화증 병변을 염색하기 위해
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통계 소프트웨어	GraphPad	Prism 8	정적 분석
실체 현미경	Nikon	SMZ1000	동맥 해부
실체 현미경 Olympus		SZX16	대동맥 이미징
용 Tamoxifen	Sigma	T5648	Cre-loxP 재조합
유도 Tissue-Tek OCT 화합물, Sakura Finetek	VWR	25608-930
핀셋 스타일 4	전자 현미경 과학	0302-4-PO	마우스 피부를 자르고 흉곽을 열려면
핀셋 스타일 5	전자 현미경 과학	0302-5-PO	해부 및 청소 대동맥

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