배트 메이저 조직적합성 복합클래스 1등급 의 안정성 및구조 β 2-마이크로글로불린

Di Zhang; Kefang Liu; Dan Lu; Pengyan Wang; Qingxu Zhang; Peipei Liu; Yingze Zhao; Yan Chai; Jianxin Lyu; Jianxun Qi; William  J. Liu

doi:10.3791/61462

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방법 논문

배트 메이저 조직적합성 복합클래스 1등급 의 안정성 및구조 β 2-마이크로글로불린

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DOI:

10.3791/61462

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2021년 3월 10일

Di Zhang^*¹^,² , Kefang Liu^*³^,⁴ , Dan Lu^*²^,⁵ , Pengyan Wang¹^,² , Qingxu Zhang¹^,² , Peipei Liu² , Yingze Zhao² , Yan Chai⁴ , Jianxin Lyu¹ , Jianxun Qi⁴ , William J. Liu¹^,²

¹School of Laboratory Medicine and Life Sciences, Wenzhou Medical University, ²NHC Key Laboratory of Biosafety, National Institute for Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, ³Faculty of Health Sciences, University of Macau, ⁴CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, ⁵Savaid Medical School, University of Chinese Academy of Sciences

^* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 다른 종으로부터 잠재적 인 β₂-microglobulin (β_2m)대체를 통해 안정적인 주요 조직 적합성 복합체 (MHC) 클래스 I를 얻는 실험 방법을 설명합니다. 동종 β_2m에의해 안정화된 MHC I의 구조적 비교가 조사되었다.

초록

주요 조직 적합성 복합체(MHC)는 전염병 및 종양 발달에 대한 항원 펩타이드 프리젠테이션 및 T 세포 면역 반응에서 중추적인 역할을 한다. _이종β2-마이크로글로불린(β_2m)으로복합된 하이브리드 MHC는 체외에서 안정화될 수 있다. 이것은 동종 β_2m를사용할 수 없을 때 포유류의 MHC I를 연구하는 가능한 수단입니다. 한편, 포유류 β_2m대체가 펩타이드 프리젠테이션에 크게 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 그러나, 이종성 β 2-마이크로글로불린(β_2m)으로복합된 하이브리드 MHC에 대한 방법론 및기술에 관한 요약이 제한되어 있다. 본명, 이종성의 타당성을 평가하는 방법은 MHC에서_2m치환β 연구가 제시된다. 이러한 메서드에는 식 구문 준비가 포함됩니다. 포함 체의 정화 및 MHC 복합체의 재접기; 단백질 열안정성의 결정; 크리스탈 스크리닝 및 구조 결정. 본 연구는 MHC I의 기능 및 구조를 이해하기 위한 권장 사항을 제공하며, 또한 전염병 및 종양 면역 요법 중 T 세포 반응 평가를 위해 유의하다.

서론

주요 조직 적합성 복합체 (MHC)는 모든 척추 동물에 존재하며 전염성 병원체에 대한 세포 매개 면역을 결정하는 유전자 세트입니다. MHC 클래스 I는 바이러스 감염시 생성된 바이러스 성분과 같은 내인성 펩티드를^CD8+ T 세포 표면에 T 세포 수용체(TCR)에 제시하여 세포 면역을 중재하고 면역 조절^1에참여한다. 펩티드에 결합하는 MHC I의 구조 연구는 CD8⁺ T 세포 면역 반응 및 백신 개발의 평가에 중요한 역할을 하는 MHC I 분자에 의한 펩티드 결합 모티프 및 프리젠테이션 기능에 관한 정보를 제공합니다.

BJorkman 외^2에의한 MHC I 분자의 첫 번째 결정화 및 구조적 결정 이후, MHC I 분자의 결정 구조 분석은 펩티드가 MHC I 분자에 결합하는 방법에 대한 이해를 크게 촉진하고, 무거운 사슬 및 펩티드와 광사슬의 상호 작용을 이해하는 데 도움이 된다. 일련의 후속 연구는 광 사슬을 코딩하는 유전자가 MHC와 관련이 없지만, 광 사슬은 MHC I 분자^3,^4의조립을 위한 핵심 단백질임을 나타냈다....