히스토트립시 및 리틱 약물의 혈전용 효능을 측정하는 체외 시스템

요약

히스토트립시 에이드 리시 전달 또는 리소트립시 심부 정맥 혈전증 치료를 위해 개발 중입니다. 시험관 내 절차는 이 조합 치료의 효험을 평가하기 위하여 여기에서 제출됩니다. 응고 모델에 대한 주요 프로토콜, 이미지 지침 및 치료 효능 평가에 대해 설명합니다.

초록

깊은 정맥 혈전증 (DVT)은 글로벌 건강 문제입니다. 중요한 장애물을 위한 혈관 재냉화를 달성하기 위한 1차적인 접근은 카테터 지향 혈전성 (CDT)입니다. 가성 부작용및 CDT와 관련되었던 긴 처리 시간을 완화하기 위하여는, 보조및 대체 접근은 개발되고 있습니다. 이러한 접근 방법 중 하나는 히스토트립시, 거품 구름 핵형성을 통해 조직을 축산하는 집중초음파 요법이다. 전 임상 연구는 혈전 분해를 위한 히스토트립시와 혈전 분해 사이의 강한 시너지 효과를 입증했습니다. 이 보고서는 히스토트립시 보조 혈전용 요법 또는 리소트립시의 효능을 평가하는 벤치탑 방법을 간략하게 설명합니다.

신선한 인간 정맥 혈액에서 제조 된 혈전은 그 크기와 아쿠스토 기계적 특성이 일로페모랄 정맥을 모방 흐름 채널로 도입되었다. 채널은 플라즈마와 리틱 재조합 조직 형 플라스미노겐 활성제로 침투하였다. 기포 구름은 대퇴 정맥 혈전의 치료를 위해 설계된 집중 초음파 소스와 응고에서 생성되었다. 전동 포지셔너는 응고 길이를 따라 소스 포커스를 변환하는 데 사용되었습니다. 각 음광 위치에서 버블 클라우드의 음향 방출이 수동적으로 기록되고 빔을 형성하여 수동 캐비테이션 이미지를 생성했습니다. 치료 효능을 측정하는 메트릭에는 응고 질량 손실(전체 치료 효능) 및 퍼퓸에서 D-디머(fibrinolysis) 및 헤모글로빈(혈전)의 농도가 포함되었다. 생체 외 디자인에 이에 제한이 있다, 생체 내 부작용 또는 혈전 lyses로 유량의 동적 변화를 평가 하는 수단의 부족을 포함 하 여. 전반적으로, 설정은 DVT를 취급하기 위하여 히스토트립시 기지를 둔 전략의 효험을 평가하는 효과적인 방법을 제공합니다.

서론

혈전증은^순환을방해하는 건강한 혈관에서 응고 형성의 상태입니다^1,2. 정맥 혈전 색전증은 미국에서 375,000-425,000 의 경우와 함께, 7-100 억 달러의 연간 의료 비용을 가지고^3. 폐 색전증은 폐 동맥의 방해이며 정맥 혈전 색전증의 가장 심각한 결과입니다. 폐 방해의 주요 근원은 깊은 정맥 혈전, 주로 일리오페랄 정맥 세그먼트^4,5,6에서. 깊은 정맥 혈전증 (DVT)은 폐 장애물 외에 내재 된 후유증을 가지고 있으며, 통증, 붓기, 다리 궤양 및 사지 절단^7,8,9의장기 합병증을 앓고 있습니다. 중요한 장애물의 경우 카테터 지향 혈전용성(CDT)은 선박^{재방수(10)의}최전선 접근법이다. CDT의 결과는 혈전 나이, 위치, 크기, 조성, 병인학 및 환자 위험 범주....

프로토콜

여기에 제시 된 결과에 대 한, 정맥 인간의 혈액 지역 내부 검토 위원회에서 승인 후 혈전을 형성 하기 위해 그려진 (IRB #19-1300) 자원 봉사 기부자에 의해 제공 된 서면 통보 된 동의^24. 이 섹션에서는 lysotripsy 효능을 평가하기 위한 설계 프로토콜을 간략하게 설명합니다. 프로토콜은 볼렌 외^24에의해 이전 작품을 기반으로합니다.

1. 혈전 모델링

참고: 혈전 안정성을 보장하고 회수^28을최대화하기 위해 실험 일 3일 전에 2주 이내에 혈전을 준비한다. 지역 기관 검토 위원회의 승인에 따라 응고를 준비합니다.

1. 혈액을 저장하기 위한 보로실리케이트 파스퇴르 파이펫을 준비하십시오(파이펫 사양을 위한 재료 표 참조). 보로실리케이트 튜브는 혈소판 활성화 및 응고^{회수(29)를}촉진하는 물질의 친성특성 때문에 사용된다. 번센 버너 위로 가열하여 파이펫 끝을 밀봉합니다.
2. 신선한 인간의 정맥 혈액을 그립니다. Aliquot는 원하는 응고당 2mL 단위로 그려....

결과

이 연구에서 설명된 프로토콜은 정맥 응고 모델링, 응고 중단을 위한 리소트립시 및 DVT의 체외 설정에서 초음파 이미징의 세부 사항을 강조합니다. 채택된 절차는 rt-PA 및 히스토트립버블 클라우드 활동의 결합된 효과로 인해 응고 중단을 평가하는 데 필요한 단계를 보여줍니다. 벤치탑 설정은 정맥 일리오페랄덕 정맥의 특성을 모방하도록 설계되었습니다. 도 1A는 일리오페랄 정맥의 음향, 기계적 및 기하학적 특성을 가지는 모델 용기를 나타낸다. 응고는 부분적으로 폐색 혈전을 모방하기 위해 모델 용기 내부에 배치됩니다. 혈전은 0.65 mL/min의 속도로 저수지에서 가져온 플라즈마 및 rt-PA로 perfused됩니다. 이 속도는 고도로 가려진^{선박(34)의}느린 유량과 일치한다.

9cm 축, 7cm 축, 6cm 초점길이(도 2A)를가진 1.......

토론

제안된 프로토콜은 리소트립시의 치료 효능을 정량화하는 모델을 제시한다. 주요 세부 사항에 대해 논의되었지만 이 프로토콜의 성공을 고려해야 할 중요한 측면이 있습니다. rt-PA의 효소 활성은 아레니우스 온도^의존30을가지고 있습니다. 온도는 또한 물과 조직의 소리 속도에 기여하는 요인이며, 온도의 변화는 초점 영역 지오메트리의 사소한 변화를 일으킬 수 있습니다. 따라서 수온은 37°C에서 신중하게 조절되어야 한다. 프로토콜(2.68 μg/mL)에 사용되는 rt-PA의 투여량은 다른 약동체 혈전 절제술^{전략(42)에}대해 임상적으로 사용되는 것과 일치한다. 5.8 단계에서, 30mL의 플라즈마는 저수지로 옮겨지는 반면 35mL 알리쿼트단계3.1.3에서 주목된다. 이 추가 플라즈마는 대기압에 대한 평형을 위해 37°C로 따뜻해지면 몇 시간 동안 증발로 인해 플라즈마의 손실을 차지합니다.

치료 트랜스듀서의.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
흡수 시트,	정밀 음향	F28-SMALL-M	, 300mm x 300 mm x 10 mm
붕규산 파스퇴르 피펫,	Fisher Scientific	1367820A	길이 14.6 cm, 용량 2 mL
원심분리기 튜브	Eppendorf	22364111	1.5 mL 용량
Drabkin's assay	Sigma Aldrich	D5941-6VL
드로우 시린지	Cole-Parmer	EW-07945-43	60 mL 용량
필터 백	McMaster-Carr	5162K111	최대 1 미크론의 입자 크기 제거
플로우 채널 튜빙	McMaster-Carr	5154K25	폴리에틸렌 라이닝 EVA 플라스틱 튜빙 (외경 : 3/8 ", 내경 : 1/4"
발열체	Won Brothers	HT 300 티타늄	티타늄 막대를 탱크 바닥에 배치)
이미징 어레이	Verasonics	L11-5v	-55 - -49 dB의 감도를 가진 128 요소
저겔화 아가로스	Millipore Sigma	A9414
모델 용기	McMaster-Carr	5234K98	길이 6.6cm, 내경 0.6cm, 두께 1mm
나노 순수	Barnstead	나노 다이아몬드	ASTM 유형 I, 18 Mohm-cm 저항
플라즈마	Vitalant	4PF000	플라즈마 24 시간 이내 냉동
플레이트 리더	Biotek	Synergy Neo HST 플레이트 리더	헤모글로빈 정량화
용 프로브 커버	Civco	610-362
프로그래밍 플랫폼	MATLAB (the Mathworks, Natick, MA, USA)
재조합 조직 형 플라스미노겐 활성제 (rt-PA)	Genentech	Activase
Reservoir	Cole-Parmer	EW-07945-43	60mL 용량
주사기 펌프	Cole-Parmer	EW-74900-20	펌프를 주사기에 부착하여 미리 결정된 fized rate로 흐름 채널의 흐름을 끌어옵니다.
	사내 맞춤형		8개 요소, 타원형 초점 변환기(9cm 장축, 7cm 단축 및 6cm 초점 거리)로 맞춤 설계 및 제작된 클래스 D로 구동됩니다. 증폭기 및 매칭 네트워크
초음파 스캔 시스템	Verasonics		Vantage Research 초음파 시스템
물 탱크	고급 아크릴	C133	14 x 14 x 12, 1/2"

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