방법 논문

교배된 쥐 계통과 그 조직학적 분석을 기반으로 한 치수염 동물 모델

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DOI:

10.3791/69786

⸱

2026년 2월 27일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Operative Dentistry, Dow Dental College, Dow University of Health Sciences, 2Dow Institute of Advanced Biological and Animal Research, Dow University of Health Sciences, 3Department of Pathology, Dow International Medical College, Dow University of Health Sciences, 4Department of Oral Pathology, Dow Dental College, Dow University of Health Sciences, 5Qatar University

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

여기서는 NMRI(해군 의학 연구소) 쥐에서 치수염 모델을 만드는 프로토콜을 소개합니다. 또한, 턱 후퇴 클립 제작 및 동물 턱에서 조직학 슬라이드를 준비하는 단계도 설명되어 있습니다. 표준 프로토콜을 따르면 방법론과 결과의 차이를 피할 수 있습니다.

초록

해군 의학 연구소(NMRI) 쥐가 치과 치수 염증 모델을 개발한 사례는 이전에 보고된 적이 없습니다. 이 프로토콜에서는 NMRI 마우스를 이용한 동물 모델을 제시하고, 재현성을 보장하기 위해 치수염 모델에 대한 상세한 조직학적 절차를 제공합니다. 우리는 2그룹에 무작위로 배정된 70마리의 NMRI 쥐를 포함했습니다: A그룹(n=35)은 치수 노출만으로 유도되었고, B그룹(n=35)은 치수 노출 후 자이모산 도포를 받았습니다. 오른쪽 상악어금니의 치수 노출 후, 동물들은 지정된 시간대(0, 6, 9, 12, 24, 48, 72h)에 희생되었다. 상악골은 조직학 및 정량적 조직형태학적 분석을 위해 채취되었다. 두 그룹 모두에서 시간에 따라 점진적으로 염증이 증가하는 것이 관찰되었습니다. 두 동물 모델 모두 최대 72시간까지 염증 연구를 가능하게 했습니다. 이 논문에서 제시된 기법은 재현 가능하며 치수염의 조직학적 연구를 표준화하는 데 도움이 될 것입니다.

서론

다양한 동물 모델이 치수근1, 2, 3, 4 연구를 위해 사용되었습니다. 이 중 C57BL/6과 BALB/c 기반의 쥐 모델은 실질 염 연구 5,6,7,8에서만 보고되었습니다. 두 마리 모두 근친교배이며 번식에 엄격한 요건이 있습니다 7,9. 현재 프로토콜에 사용되는 NMRI 마우스는 교배된 계통으로, 근친교배 계통에 비해 여러 가지 장점을 제공합니다. 설치 및 유지보수 비용이 낮습니다. 높은 번식, 더 나은 면역, 낮은 사망률은 군체의 더 빠르고 빠른 교체를 가능하게 합니다10. 따라서 물류적, 재정적으로더 실현 가능하다. 더불어, 이 모델에서 생성된 치수 염증의 질병 프로필은 이전에 보고된 근친교배 쥐모델과 유사함을 보여줍니다. 5,6,8. 더불어, NMRI 마우스는 치수가 자이모산에 노출되어도 최대 72시간 동안 견딜 수 있어 관찰 가능한 질병 프로파일을 형성합니다. 이는 다른 근친교배 계통에 대한 실질적인 대안으로 치수12 연구를 위한 실질적인 대안입니다.

자이모산은 사카로마이세스 세레비시아의 세포벽에서 추출한 것으로, 주로 키틴, 만난, 만노단백질, 그리고 ß-글루칸으로 구성되어있습니다. 자이모산과 칸디다 알비칸은 유사한 세포벽 구조를 공유하며, C형 렉틴(병원체 인식 수용체)인 Dectin-1을 통해 숙주 선천 면역에 의해 검출됩니다14. 덱틴-1은 주로 수지상 세포와 대식세포에 의해 발현됩니다. 이 연구소는 곰팡이 병원체 내 ß-글루칸을 검출하고, Syk/CARD9 경로를 이용해 염증 매개체 형성을 수행합니다15. 따라서 자이모산은 C. 알비칸스의 노출이 치수 질환에 미치는 영향을 연구하는 데 적합한 대안으로 사용된다. 이는 이전에 발표된 결과들로도 뒷받침되는데, 이 결과들은 Zymosan에 노출된 치수에서 Dectin-1 전사체가 조기에 검출되었음을 보여줍니다. 마찬가지로, CD68+ve를 발현하는 Dectin-1도 관찰되었습니다.

이전 출판물에서 설명된 조직학적 기법은 신인 연구자들이 자신 있게 재현하기에 종종 부족합니다. 그 결과, 조직학적 절차 최적화 과정에서 불필요한 동물 손실이 발생하는 광범위한 시행착오가 발생합니다. 본 프로토콜은 슬라이드 준비 기법을 표준화했으며, 쥐에도 성공적으로 적용되었습니다17. 여기서는 턱 후퇴를 위한 재현 가능한 방법, 치수 노출에 의한 치수염 유도, Zymosan을 이용한 치수 염증 유도, 그리고 이후 조직학적 분석 등 치수근 모델의 모든 필수 단계를 자세히 설명합니다.

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프로토콜

현재 동물 연구는 ARRIVE 지침에 따라 설계되었습니다. 다우 보건과학대학교의 동물 연구 및 윤리 기관심사위원회는 이 동물 연구를 승인했습니다(서신 번호. AR. IRB-06/DUHS/승인/2016/05). 프로토콜에는 총 70마리의 NMRI 마우스가 포함되었습니다. 이 동물들은 다우 고등생물학 및 동물 연구소의 '중앙 동물 하우스 시설'에서 입수했습니다. 이 프로토콜의 표본 크기는 이전 연구를 기반으로합니다.

1. 동물

참고: 연구에 선정된 동물들은 26-30g의 체중을 기준으로 표준 우리에 보관되었으며, 다음 조건에서 ±21 °C, 상대 습도 ±55%, 12시간 동안 자유롭게 여과된 물과 표준 사료(일반 사료)를 제공함. 공격성, 불편함, 자극의 징후가 있는지 정기적으로 모니터링했습니다. 통증이나 불편함 시 디클로페낙 나트륨(피하 200 μL, 25 mg/mL)이 사용되었습니다. 실험 전에 2주간 적응할 수 있도록 허용되었습니다. 각 동물 10마리가 적절히 라벨이 붙은 우리에 보관되었습니다. 동물 식별을 위해 꼬리에 표식을 붙였다.

  1. 동물들(n=70)을 무작위로 두 그룹으로 나눕니다: 그룹 A (n=35), 그룹 B (n=35).
  2. 그룹 A에서는 치수 노출만으로 치수염을 유도합니다(4.1.1단계에서 4.1.9단계 참조).
  3. 그룹 B 동물의 경우, 노출된 치수 위에 자이모산 용액을 발포하세요(4.2.1 단계부터 4.2.3 단계 참조).

2. 자이모산 용액

  1. 아래에 설명된18번 기준으로 이전에 발표된 자이모산 용액 제조 방법을 따르십시오.
  2. 인산 완충 식염수(PBS)를 사용해 1 mL 용액을 만듭니다.
  3. 용액을 121°C에서 15분간 오토클레이브합니다.
  4. 용액을 실온까지 1시간 식히세요.
  5. 용액을 4°C, 300 x g 에서 10분간 원심분리합니다.
  6. 상청액은 버리고 얼음처럼 차가운 멸균 PBS로 다시 원심분리하여 펠릿을 세 번 세척합니다.
  7. 용액은 4 °C에서 보관하다가 추가 사용 후 보관하세요.
    참고: 용액은 30일 이내에 사용해야 하며, 그 이후에는 폐기할 수 있습니다.

3. 턱 리트랙션 클립

  1. 0.7mm 스테인리스 스틸 교정 와이어를 사용해 턱 리트랙션 클립을 만드세요.
  2. 길이 100mm의 전선을 중앙에 5mm 직경의 루프를 만듭니다.
  3. 와이어 두 부분을 고리에서 5mm 떨어진 곳, 그리고 급격한 굽힘 없이 직각으로 총 15mm 돌리세요.
  4. 회전 지점에서 25mm 떨어진 곳에서 홈을 만들고 남은 끝을 바깥쪽으로 돌립니다. 가이드는 그림 1A 를 참고하세요.

4. 동물 모델

  1. A 조 (n = 35)
    1. 동물을 마취할 때는 0.1 mL/20 g 케타민-자일라진 혼합물(87.5 mg/kg 케타민 + 12.5 mg/kg 자일라진) 복강내 주사를 투여합니다.
    2. 모든 시술에는 10배 경사 장암 입체현미경을 사용하세요(그림 1B). 기울어진 팔을 동물의 후퇴된 상악 치아가 직접 보이도록 배치하세요. (그림 1C)
    3. 클립을 짜서 상악과 하악 앞니 양쪽에 홈이 있는 부분을 끼우세요.
    4. 클립을 풀고 나면 접착 테이프의 도움으로 끝을 고정하세요(그림 1C).
    5. 사용하지 않는 손으로 치과용 핀셋을 사용해 동물의 볼을 확장하세요. (그림 1D, E).
      참고: 과도한 압력을 피하세요. 핀셋으로 인한 부상은 치명적인 출혈과 동물의 사망을 초래할 수 있습니다.
    6. #1/4 원형 카바이드 버와 E타입 저속 핸드피스를 전기 마이크로모터에 10배 배율로 사용해 오른쪽 상악어 제1어금니 중앙에 깊이의 절반으로 배치해 클래스 1 충치를 만든다. 이 순간에는 치수의 그림자가 보일 수 있습니다(그림 1D,E).
    7. 버를 천천히 휘두르며 부드럽게 휘두르세요. RPM을 제어하기 위해 전기 모터를 사용하세요.
    8. K-type 번호 15 근관 치료 파일을 사용해 치수를 노출하세요(그림 2B).
      참고: #15 근관치료 손 기구 사용은 매우 부드럽게 해야 하며, 그렇지 않으면 분기점 천공이 발생할 수 있으며, 이는 조직학 슬라이드가 준비될 때까지 확인되지 않습니다. #1/4 라운드 카바이드 버의 직경은 0.25mm이며, #15K형 파일은 폭이 0.15mm입니다. 따라서 0.15 mm가 치수 노출 크기가 됩니다(그림 2C).
    9. 치수염 유도를 위해 노출된 치수를 열어두세요
  2. 그룹 B (n = 35)
    1. 4.1단계에서 제시된 모든 단계를 다음 사항을 추가하여 반복하세요.
    2. 마이크로피펫(0.2-2 μL)을 사용해 노출된 치수 위에 미리 준비된 자이모산 용액 0.2 μL을 바릅니다.
      참고: 자이모산 용액을 투여할 때는 주의가 필요합니다. 용액이 구강 안으로 우연히 흘러나오면 동물의 사망에 이를 수 있습니다. 따라서 거즈를 사용해 치아를 덮어 과도한 자이모산 용액이 거즈에 흡수되도록 합니다(그림 2D).
    3. 처리된 치수를 열어두어 자이모산 용액으로 치수염 유도를 받으세요.

5. 샘플 준비

  1. 0, 6, 9, 12, 24, 48, 72시간에 각 그룹에서 다섯 마리의 동물을 이산화탄소 흡입으로 희생한다.
  2. 7.25리터 안락사 챔버를 사용하세요.
  3. CO2로 챔버를 미리 충전하지 마세요.
  4. 동물들을 바로 챔버에 넣으세요.
  5. 분당 챔버 부피의 30%에서 70% 사이의 충전 속도로 100%CO2 를 추가하세요.
  6. CO2의 유량을 5L/min으로 유지하세요.
  7. CO2를 데워서 챔버 내 공기와 섞도록 두세요.
  8. 23분 이내에 동물들이 의식을 잃었는지 관찰하세요.
  9. 동물들이 호흡을 멈추거나 눈이 회색으로 변하는지 관찰하세요.
  10. 호흡이 끝난 후 최소 1분 이상CO2 의 흐름을 유지하세요.
  11. 동물의 죽음을 확인한 후 챔버에서 꺼내세요. 호흡이 없고 눈이 창백해 보이는지 확인하세요.
  12. 안락사 직후 동물의 머리를 분리하세요.
  13. 0시에 희생된 동물의 왼쪽 상악어금니를 치료하지 않은 상악어금니를 대조군으로 사용하세요.
  14. 적절히 라벨링된 15mL 원뿔 튜브에 10% 완충 포르말린을 사용하여 상악턱을 2일간 보관합니다.

6. 조직학

  1. 고정된 턱을 10% 포름산에 3일간 탈석화하세요.
    참고: 3일 이후에는 수술용 칼이 턱을 자를 수 있는지 확인하세요. 그래도 충분히 부드러우지 않으면 다시 10% 개미산에 담가 매일 점검하여 수술용 칼로 자를 수 있을 때까지 확인하세요.
  2. 턱을 22번 칼로 자르세요. 절개는 교합면과 평행하게 시상면을 따라 하며, 칼날은 상악어금니의 구개 교두의 구개 쪽에 바로 위치하도록 유지합니다(그림 3A).
  3. 모든 치아의 교합면을 인도 잉크로 표시하세요.
    참고: 이 표시는 절개 시 교합면을 인식하는 데 도움이 됩니다(그림 3B).
  4. 절단된 턱을 파라핀 왁스에 박아 스테인리스 스틸 베이스 몰드 케이스에 몰드 바닥에 평평하게 놓고, 절단면이 베이스를 향하게 합니다.
    참고: 이렇게 임베딩하면 절단면이 먼저 미세절기 안으로 들어가고, 샘플 방향이 정확하며, 그림 3E에 나타난 것처럼 시상 절편이 생성되도록 보장합니다.
  5. 임베딩 카세트를 베이스 몰드에서 분리하여 미세토름에 넣습니다.
  6. 두께 3 μm 두께의 시상체 절편을 만들어 깨끗하고 전하가 전하된 현미경 슬라이드에 올려놓으세요(그림 3C).
  7. 복합 현미경으로 염색되지 않은 슬라이드를 관찰하세요.
    참고: 절개 부위를 계속 관찰하여 교합면에 공동이 보일 때까지 확인하세요. 절개가 상악 제1어금니의 긴 축을 따라 시상면을 따라 올바르게 이루어지면, 한 개 또는 두 개의 뿌리와 치수 방이 보이는 치수 공간 전체를 관찰할 수 있습니다(그림 3E). 이 시점부터는 노출 크기가 0.15 mm이므로 한 단면에서 50장의 슬라이드를 만들 수 있습니다. (3 μm = 0.003 mm, 0.003 x 50 = 0.15)
  8. 선택한 슬라이드에 대해 헤마톡실린과 이오신 염색 절차를 표준 단계로 수행하며, 한 개 또는 두 개의 뿌리와 전체 치수 챔버를 함께 보입니다.
  9. 복합 현미경으로 착색된 슬라이드를 관찰하세요.
  10. 최대 치수 공간을 관찰할 수 있도록 시간당 다섯 장의 최적의 슬라이드를 선택하세요.

7. 통계 분석

  1. 표준 통계 소프트웨어를 사용하여 통계 분석을 수행합니다.
    참고: 정량적 조직형태학적 분석을 위해 각 시간 구간의 관찰된 슬라이드는 이전에 발표된 기준에 따라 점수를 매겼습니다(표 1)8. Kruskal-Wallis H 검정과 p=0.0018의 Bonferroni 보정을 사용하여 서로 다른 시간 구간의 점수를 비교하였습니다. Mann-Whitney U 검정은 P ≤ 0.05에서 A와 B군을 비교하기 위해 사용되었습니다. 모든 비교는 표준 통계 소프트웨어를 사용하여 수행되었습니다.

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결과

이 프로토콜에서는 NMRI 마우스의 치수 염증을 측정하는 두 가지 동물 모델에 대한 상세한 단계별 절차와 그에 따른 조직학적 방법을 제시합니다. 적절한 장비 사용은 프로토콜의 성공을 위해 필수적입니다. 이와 관련해 10배 경사 장암 입체현미경이 가장 중요한 장비입니다. 클래스 1 캐비티 준비는 전기 마이크로모터를 최대 속도의 약 3분의 1(35,000rpm)으로 사용하여 수행되어, 이 과정을 관리하기 쉽고 압축 공기의 필요성을 없앴습니다.

그림 1과 그림 2 는 이 동물 모델에서 기울어진 장암 입체현미경의 유용성을 보여줍니다. 기울어진 팔은 동물의 구강을 직접 시각화할 수 있게 해줍니다. 그림 1A 는 턱 클립의 크기를 보여줍니다. 측정값은 제공되지만 정확한 치...

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토론

현재 프로토콜은 NMRI 마우스에서 처음으로 제3형 치과 손상 모델(가역적 치수염)을 개발한 사례를 보고된 문헌에서 제시합니다. 또한 Zymosan에 의해 유발된 치수 염증의 조직학적 분석과 동물 턱에서 조직학 슬라이드를 복제 가능한 방법으로 준비하는 방법을 제공합니다.

이 프로토콜에 따라 NMRI 마우스에서 3형 치아 손상 모델이 제작되었습니다. 이전 연구는 쥐, 토끼, 개에 대해 수행되었습니다. 구강 크기 때문에 대형 동물에서 치수 염증 모델을 만드는 것이 상대적으로 쉽습니다. 쥐 같은 작은 동물은 구강 공간이 매우 좁지만, 표본 크기가 크고 윤리적 문제가 적다는 장점이 있습니다

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공개 사항

저자들은 이해 상충을 선언할 필요가 없습니다.

감사의 글

이 연구는 자비로 진행되었습니다. 저자들은 다우 보건과학대학 조직학과의 무함마드 아딜 씨의 조직학 지원을 인정합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
기본 몰드역사 계통 연구소, 이탈리아R4166C2:D23시료를 파라핀에 박기 위해
카바이드 버 #1/4 탄환중서부, 위치타폴스, 텍사스389101
복합 현미경 모틱 BA310모틱 주식회사 홍콩https://moticmicroscopes.com/products/ba310e
디클로페낙 나트륨 25mg/mL인더스 파르마 (DYCLO)https://sahar.ph/product/dyclo-diclofenac-sodium-25-mg-ml-im-iv/200µ 피하 L
E형 저속 핸드피스 Rose201-M4중국 포산에 대해https://www.beingfoshan.com/en/h-pd-353.html
카세트 삽입 및 nbsp;역사 계통 연구소, 이탈리아R4004
안락사 챔버ConductScience, 미국 일리노이CS-EUTH2A7.25리터 용량, 쥐와 쥐 [최대 500g]
팔콘 튜브 15ml둥지188271
포르말린 시그마-올드리치, 미주리주 세인트루이스, 미국158127버퍼드 
개미산 영국 풀 BDH 실험실 공급사와 nbsp;2842810%
균질화 및 nbsp;옴니 믹서 호모지나이저, 옴니 인터내셔널, 미국 조지아https://omni-inc.com/high-shear-lab-homogenizers/omni-th-0-2ml-100ml/omni-tissue-homogenizer-th
인디아 잉크시그마-올드리치, 미주리주 세인트루이스, 미국198285
K 타입 번호 15 근관 치료 파일마니, 일본https://www.mani.co.jp/en/product/dental_01.html
케타민-자일라진 칵테일브룩스 파마 Pvt Ltd / 마일랩 (Pvt.) Ltd.87.5mg/kg 케타민 + 12.5mg/kg 자일라진
미세토놈 HM 315 R마이크롬, 독일901100
마이크로모터 마라톤-IIIBT-마라톤, 새양 마이크로테크 주식회사 한국https://www.saeyang.com/theme/basic/sub/product/view.php?it_id=1752202111최대 속도의 1/3에서 사용
마이크로피펫 0.2-2 및 마이크로; L 길슨, 프랑스https://www.gilson.com/default/<브레르/> pipetman-p2-0-2-2-micro-l-metal
-ejector.html?srsltid=AfmBOoobE
0iSWY_902ZHGZ7AoJ6wzN5PI
0H4V4vkxHQgK1mq7Wg2kkbS		0.2-2 & 마이크로; L 
인산염 완충 식염수와 nbsp;시그마-올드리치, 미주리주 세인트루이스, 미국P4417
사회과학 통계 패키지IBM, 아몬크, 뉴욕SPSS for Mac 버전 23.0  그리고 nbsp;
입체 현미경 BMK-3 LED메이지 테크노, 일본https://meijitechno.com/product/bmk-3-led-stereo-microscope/
수술용 칼날 22호깃털 수술용 칼날, 깃털 안전 면도기 주식회사, 오사카, 일본페이스북. 12
자이모산 A시그마-올드리치, 미주리주 세인트루이스, 미국Z4250 번호1 mL 자이모산 중 1mg/mL

참고문헌

  1. Haddad, M., Lefranc, G., Aftimos, G. Local application of IGF1 on dental pulp mechanically exposed; in vivo study on rabbit. Bull Group Int Rech Sci Stomatol Odontol. 45 (1), 12-17 (2003).
  2. Huang, J., et al. Dynamic Regulation of Delta-Opioid Receptor in Rat Trigeminal Ganglion Neurons by Lipopolysaccharide-induced Acute Pulpitis. J Endod. 41 (12), 2014-2020 (2015).
  3. Shahravan, A., Ghoddusi, J., Eslami, B., Rategar, A. F. A histopathological study of the pulp of dogs' teeth after induction of experimental pulp inflammation for different periods of time. J Microsc. 237 (2), 119-121 (2010).
  4. Siddiqui, Y. D., et al. Resolvin D2 Induces Resolution of Periapical Inflammation and Promotes Healing of Periapical Lesions in Rat Periapical Periodontitis. Front Immunol. 10, 307(2019).
  5. Mutoh, N., Tani-Ishii, N., Tsukinoki, K., Chieda, K., Watanabe, K. Expression of toll-like receptor 2 and 4 in dental pulp. J Endod. 33 (10), 1183-1186 (2007).
  6. Mutoh, N., Watabe, H., Chieda, K., Tani-Ishii, N. Expression of Toll-like receptor 2 and 4 in inflamed pulp in severe combined immunodeficiency mice. J Endod. 35 (7), 975-980 (2009).
  7. Sasaki, H., et al. Endodontic Infection-induced Inflammation Resembling Osteomyelitis of the Jaws in Toll-like Receptor 2/Interleukin 10 Double-knockout Mice. J Endod. 45 (2), 181-188 (2019).
  8. He, Y., et al. Pulpal Tissue Inflammatory Reactions after Experimental Pulpal Exposure in Mice. J Endod. 43 (1), 90-95 (2017).
  9. Patidar, A., et al. Barley beta-Glucan and Zymosan induce Dectin-1 and Toll-like receptor 2 co-localization and anti-leishmanial immune response in Leishmania donovani-infected BALB/c mice. Scand J Immunol. 92 (6), e12952(2020).
  10. Tuttle, A. H., Philip, V. M., Chesler, E. J., Mogil, J. S. Comparing phenotypic variation between inbred and outbred mice. Nat Methods. 15 (12), 994-996 (2018).
  11. Zhang, W., et al. Genome-Wide Association Mapping of Quantitative Traits in Outbred Mice. G3 Genes|Genomes|Genetics. 2 (2), 167-174 (2012).
  12. Hasan, A., et al. Expression of Toll-like receptor 2, Dectin-1, and Osteopontin in murine model of pulpitis. Clini Oral Investig. 27 (3), 1177-1192 (2023).
  13. Rogers, N. C., et al. Syk-dependent cytokine induction by Dectin-1 reveals a novel pattern recognition pathway for C-type lectins. Immun. 22 (4), 507-517 (2005).
  14. Ruiz-Herrera, J., Elorza, M. V., Valentin, E., Sentandreu, R. Molecular organization of the cell wall of Candida albicans and its relation to pathogenicity. FEMS Yeast Res. 6 (1), 14-29 (2006).
  15. Takeuchi, O., Akira, S. Pattern recognition receptors and inflammation. Cell. 140 (6), 805-820 (2010).
  16. Peters, B. M., Noverr, M. C. Candida albicans-Staphylococcus aureus Polymicrobial Peritonitis Modulates Host Innate Immunity. Infect Immun. 81 (6), 2178-2189 (2013).
  17. Niazi, F. H., et al. Dentin-Pulp Complex Response in Molars of Rats after Occlusal and Cervical Restorations with Conventional Glass Ionomer Cement and Nano-Hydroxyapatite Silica Glass Ionomer Cement. Appl Sci. 13 (5), 3156(2023).
  18. Erdo, F., Torok, K., Aranyi, P., Szekely, J. I. A new assay for antiphlogistic activity: zymosan-induced mouse ear inflammation. Agents Actions. 39 (3-4), 137-142 (1993).
  19. Underwood, W., Raymond, A. AVMA guidelines for the euthanasia of animals. , 2020 edition, (2020).
  20. Bernardino, ÍdM., Farias, ÍdL., Cardoso, A., Xavier, A., Cavalcanti, A. Use of Animal models in Experimental Research in Dentistry in Brazil. Pesqui Bras Odontopediatria Clin Integr. 14 (1), 17-21 (2014).
  21. Alzarea, B. Selection of Animal Models in Dentistry: State of Art Review Article. J Anim Vet Adv. 13 (18), 1080-1085 (2014).
  22. Hasan, A., et al. A novel experimental model to investigate fungal involvement shows expression of Dectin-1 in periapical lesion pathogenesis. J Oral Rehab. 50 (10), 1043-1057 (2023).
  23. Song, M., et al. Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice. J Vis Exp. (119), e54973(2017).
  24. Balto, K., White, R., Mueller, R., Stashenko, P. A mouse model of inflammatory root resorption induced by pulpal infection. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 93 (4), 461-468 (2002).
  25. De Rossi, A., Rocha, L. B., Rossi, M. A. Interleukin-10, Intercellular adhesion molecule-1, and chemokine receptor 5, but not interleukin-4, attenuate the development of periapical lesions. J Endod. 34 (1), 31-38 (2008).
  26. da Silva, R. A., Ferreira, P. D., De Rossi, A., Nelson-Filho, P., Silva, L. A. Toll-like receptor 2 knockout mice showed increased periapical lesion size and osteoclast number. J Endod. 38 (6), 803-813 (2012).
  27. Kawashima, N., Stashenko, P. Expression of bone-resorptive and regulatory cytokines in murine periapical inflammation. Arch Oral Biol. 44 (1), 55-66 (1999).
  28. Balto, K., Müller, R., Carrington, D. C., Dobeck, J., Stashenko, P. Quantification of periapical bone destruction in mice by micro-computed tomography. J Dent Res. 79 (1), 35-40 (2000).
  29. Ramirez, I., et al. Is dental pulp inflammation capable of causing central inflammation, behavioral, and sensory alterations? A pre-clinical study. Arch Oral Biol. 177, 106320(2025).
  30. Li, J. G., et al. Melatonin attenuates inflammation of acute pulpitis subjected to dental pulp injury. Am J Transl Res. 7 (1), 66-78 (2015).
  31. Shi, X., Li, Z., He, Y., Jiang, Q., Yang, X. Effect of different dental burs for experimental induction of pulpitis in mice. Arch Oral Biol. 83, 252-257 (2017).
  32. Kim, S., Lee, S., Jung, H. S., Kim, S. Y., Kim, E. Development of a mouse model for pulp-dentin complex regeneration research: a preliminary study. Restor Dent Endod. 44 (2), e20(2019).
  33. Mohaved, S. B., et al. Apical periodontitis-induced mechanical allodynia: A mouse model to study infection-induced chronic pain conditions. Molecular Pain. 16, 1744806919900725(2020).
  34. Chung, M. K., Lee, J., Duraes, G., Ro, J. Y. Lipopolysaccharide-induced pulpitis up-regulates TRPV1 in trigeminal ganglia. J Dent Res. 90 (9), 1103-1107 (2011).
  35. Tang, Y., Yu, C., Li, F., Wang, H., Ye, L. Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research. J Vis Exp. (200), (2023).
  36. Xiao, Z., Xu, M., Lan, L., Xu, K., Zhang, Y. R. Activation of the P2X7 receptor in the dental pulp tissue contributes to the pain in rats with acute pulpitis. Mol Pain. 18, 17448069221106844(2022).
  37. Gantner, B. N., Simmons, R. M., Canavera, S. J., Akira, S., Underhill, D. M. Collaborative induction of inflammatory responses by dectin-1 and Toll-like receptor 2. J Exp Med. 197 (9), 1107-1117 (2003).
  38. Monroe, L. L., et al. Zymosan-Induced Peritonitis: Effects on Cardiac Function, Temperature Regulation, Translocation of Bacteria, and Role of Dectin-1. Shock. 46 (6), 723-730 (2016).
  39. Olynych, T. J., Jakeman, D. L., Marshall, J. S. Fungal zymosan induces leukotriene production by human mast cells through a dectin-1-dependent mechanism. J Allergy Clin Immunol. 118 (4), 837-843 (2006).
  40. Rosenzweig, H. L., Clowers, J. S., Nunez, G., Rosenbaum, J. T., Davey, M. P. Dectin-1 and NOD2 mediate cathepsin activation in zymosan-induced arthritis in mice. Inflamm Res. 60 (7), 705-714 (2011).
  41. Chattipakorn, S. C., Sigurdsson, A., Light, A. R., Narhi, M., Maixner, W. Trigeminal c-Fos expression and behavioral responses to pulpal inflammation in ferrets. Pain. 99 (1-2), 61-69 (2002).
  42. Kawanishi, H. N., Kawashima, N., Suzuki, N., Suda, H., Takagi, M. Effects of an inducible nitric oxide synthase inhibitor on experimentally induced rat pulpitis. Eur J Oral Sci. 112 (4), 332-337 (2004).
  43. Kawashima, N., Nakano-Kawanishi, H., Suzuki, N., Takagi, M., Suda, H. Effect of NOS inhibitor on cytokine and COX2 expression in rat pulpitis. J Dent Res. 84 (8), 762-767 (2005).
  44. Li, M., et al. Histology-based profile of inflammatory mediators in experimentally induced pulpitis in a rat model: screening for possible biomarkers. Int Endod J. 54 (8), 1328-1341 (2021).
  45. Rutherford, R. B., Gu, K. Treatment of inflamed ferret dental pulps with recombinant bone morphogenetic protein-7. Eur J Oral Sci. 108 (3), 202-206 (2000).
  46. Renard, E., et al. Immune Cells and Molecular Networks in Experimentally Induced Pulpitis. J Dent Res. 95 (2), 196-205 (2015).
  47. Cleaton-Jones, P., Duggal, M., Parak, R., Williams, S., Setzer, S. Pulpitis induction in baboon primary teeth using carious dentine or Streptococcus mutans. Sadj. 59 (3), 119-122 (2004).
  48. Eba, H., et al. The anti-inflammatory effects of matrix metalloproteinase-3 on irreversible pulpitis of mature erupted teeth. PLoS One. 7 (12), e52523(2012).
  49. Fuks, A. B., Jones, P. C., Michaeli, Y., Bimstein, E. Pulp response to collagen and glutaraldehyde in pulpotomized primary teeth of baboons. Pediatr Dent. 13 (3), 142-150 (1991).
  50. Oliveira, L. A., Barbosa, S. V. The reaction of dental pulp to Escherichia coli lipopolysaccharide and Enterococcus faecalis lipoteichoic acid. Braz J Microbiol. 34 (2), 179-181 (2003).

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