골수의 생성은 2 광자 영상에서 사용하기 위해 Murine 돌기 세포를 유래

요약

돌기 세포에 의해 이차 림프​​ 장기의 항원 프레 젠 테이션은 T 세포 적응 면역 반응을 중재의 개시를 위해 중요합니다. 여기서 우리는 골수의 문화 파생 murine 돌기 세포, 활성화 및 2 광자 이미징에 대한 라벨을 보여줍니다.

초록

murine 돌기 세포의 준비를 위해 여러 가지 방법이 문헌에서 찾을 수 있습니다. 여기, 우리는 문화에 이상 85% CD11c 높은 돌기 세포를 생산하는 방법을 제시 것을 피하 주입 및 항원 구체적인 T 세포 (동영상 참조) 현재 항원 후 배수 림프절의 고향. 또한, 우리는 일 10시 교양 세포의 형태가 성숙 돌기 세포와 세포의 <85% CD11chigh 아르의 전형이며, 돌기 세포 성숙을 추적하기 위해 에센 악기에게 Incucyte을 사용합니다. 2 - 광자 이미징에 의해 주변 림프절에 항원 프레 젠 테이션의 연구는 돌기 세포와 T 세포 상호 작용 ^{1, 2의} 세 개의 서로 다른 단계가있다는 것을 밝혔다. 페이즈 I는 매우 운동성이있는 특정 항원 T 세포와 돌기 세포 ^{1, 2를} 들고 항원 사이의 간단한 시리얼 연락처로 구성되어 있습니다. 차 두 항원에 특정한 T 세포와 돌기 세포 ^{1, 2} 베어링 항원 사이에 장시간 접촉에 의해 표시됩니다. 마지막으로, 단계 III는 운동성을 회복하고 ^{1, 2,을} 분할하기 시작, 돌기 세포에서 분리 T 세포에 의해 특징입니다. 이것은 항원 -로드 셀 추적 염료 분류 돌기 세포의 2 광자 영상으로 분석할 수 항원 특정 상호 작용의 유형의 한 예입니다.

프로토콜

1) 쥐 한마리에서 모두 대퇴골의 뼈를 제거

1. 근육 버려야하고 (무릎 및 고관절) 이상과 관절 아래의 대퇴골 뼈를 노출 해부 가위를 사용합니다. 해부의 족집게로 대퇴골의 중심을 파악하고 최대한 그대로 epiphysis의를 떠나 위의와 관절 아래 컷.
2. 작은 해부 가위를 사용하여 가능한 한 많은 근육으로 닦아. RPMI 한 접시에 몽둥이를 전송합니다.
3. 모든 절차는 무균 미디어, 악기, 피펫 팁 문화 요리를 사용하여,이 시점부터 후드에서 수행되어야합니다.

2) 대퇴골의 뼈를 소독 :

1. 후드에서 RPMI에서 얼음에 70 % 에탄올로 가득 작은 문화 요리에 유골​​을 전송할 수 있습니다.
2. 뼈가 얼음에 5 분 에탄올에 담그다 수 있습니다.

3) 무균 조건 하에서 골수를 수집합니다

1. 무균 여과 기본 DC 문화 매체를 포함하는 작은 문화 요리에 유골​​을 전송합니다.
2. 멸균 핀셋으로 폐기 접 관을 통해 뼈를 보유하고 멸균 가위로 (뼈의 종료) 각 epiphesis 잘라. 절단은 뼈의 중앙에 밝은 빨간색으로 골수를 노출해야합니다.
3. 멸균 주사기 (26....

토론

돌기 세포는 적응 면역 반응과 날짜에 특징이 가장 효율적인 항원 제시 세포의 핵심 중재자입니다. 문학 인간 및 마우스의 돌기 세포 배양을위한 방법은 다른 돌기 세포 유형의 발전에 영향을 미치는 데 사용 크린 시토킨의 종류에 차이가 있습니다. 특히, GM - CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF - 알파와 IFN - 감마는 성숙 미숙, 염증 및 정상 상태 체외 ^3-7에서 돌기 세포를 파생 murine 골수와 같은 생산하는 다른 조합에 사용됩니다. 여기, 우리는 능력이 성숙 murine 돌기 세포의 생산을위한 간단한 방법을 제시 유도, 피하 주사 후 림프절을 고갈 T 세포를하신 나 항원 및 활성화를 제시합니다. 그 결과 돌기 세포 인구는 일반적으로 LPS 활성화시 CD80/86의 inducible 표현과 함께> 85 % CD11chigh입니다. 일 7 문화 TNF - 의 추가는 선택 사항이며보다 성숙한 phenotype8을 생산하고 있습니다. 체외 Langerhans 돌기 세포 배양에의 유지 보수,.......