De baja tensión Ruta de Aprendizaje Usando el laberinto Lashley III en ratones

En el laberinto de Lash tres, los ratones aprendieron a navegar a través de una serie de brazos para llegar a un entorno de jaula pseudo hogareña. En los ensayos repetidos al comienzo de un juicio, los ratones se colocan en el Starbucks, que está separado del laberinto por una puerta. Una vez que se abre la puerta, los ratones ingresan a los brazos del laberinto y se les permite explorar libremente el camino que toma el ratón.

El laberinto se registra, incluidas las entradas en zonas de error sin salida. Al entrar en la caja dorada, se cierra otra puerta para evitar la reentrada del laberinto y dirigir al ratón para que entre en la pseudo jaula de casa. Concluyendo la prueba de laberintos, el rendimiento de los laberintos se compara en grupos de edad o cepas para evaluar el papel en el aprendizaje y la memoria.

Hola, soy Amanda Bressler. Trabajo en el laboratorio de Anne Andrews aquí en la Universidad Estatal de Pensilvania. Hoy te voy a mostrar cómo usar el laberinto de los tres de Lashley.

Utilizamos este laberinto principalmente en nuestro laboratorio para estudiar ratones modificados genéticamente envejecidos. Así que aquí vamos. Primero, veamos cómo es el laberinto de los tres de Lashley.

El laberinto de la caja de inicio, los brazos y la caja dorada son modulares para permitir la limpieza y la modificabilidad del laberinto. Las paredes de la caja de inicio, el laberinto, los brazos y la caja dorada están construidas de plexiglás negro para eliminar las señales visuales del exterior y del interior del laberinto. Los brazos del laberinto miden 45 centímetros de largo, siete centímetros de alto y cinco centímetros de ancho.

Las puertas que conducen a los brazos consecutivos de la maza son de cuatro centímetros por cuatro centímetros y están situadas a 11 centímetros de las paredes exteriores de la maza, la caja de oro mide 19,5 centímetros de largo por siete centímetros de alto por cinco centímetros de ancho. La caja de salida es de ocho centímetros por 9,5 centímetros por siete centímetros. Se colocan piezas separadas de plexiglás transparente en la parte superior del laberinto de Starbucks y la caja dorada para permitir la visualización de cada mouse a medida que avanza por el laberinto.

Al mismo tiempo que evita que los ratones escapen, el laberinto descansa sobre una base construida de plexiglás rojo que es lo suficientemente grande como para contener las tres piezas del laberinto, además de una pseudo jaula doméstica que es del mismo tamaño que la jaula doméstica estándar del animal. Para preparar las jaulas pseudo caseras antes del primer ensayo de MACE, agregue material de cama fresco a los fondos de las jaulas individuales con puertas cortadas en los lados, coloque la parte superior de alambre en la jaula y los fondos y nómbralos individualmente uno para cada animal en una cohorte de prueba. Estas jaulas servirán como jaulas individuales pseudo hogar para cada animal durante la duración del período de prueba.

Con el laberinto preparado, veamos cómo realizar pruebas de comportamiento al menos una hora. Antes de la prueba, traslade a los animales a la sala de pruebas de comportamiento para que puedan aclimatarse al entorno de pruebas. 30 minutos Antes de la prueba, retire la comida y el agua de todas las jaulas domésticas.

Mantenga la comida y el agua en la sala de pruebas de comportamiento, pero fuera del alcance de los ratones. El experimento suele ser de tiempo para que la comida y el agua se retiren 30 minutos después del cambio de la fase clara a la fase oscura, cuando se produce el pico de alimentación. Esto garantiza que la mayoría de los animales estén saciados con comida y agua antes de las pruebas con fines de demostración.

En este video, mostramos este procedimiento bajo luz brillante. La prueba generalmente se realiza durante la fase oscura del ciclo de luz y oscuridad. Cuando haya transcurrido el período de prueba previa de 30 minutos, limpie el laberinto con etanol al 70%.

Deja la puerta que conduce desde el Starbucks al laberinto. Brazos cerrados. Las puertas en ambos extremos de la caja dorada deben dejarse abiertas.

Ahora coloque la jaula pseudo casera correspondiente al primer animal. Al final de la caja dorada, lleva el primer ratón al laberinto. Ahuecándolo en tu mano.

Coloque el mouse en el Starbucks y vuelva a colocar la tapa. Cuando esté en posición de observar el laberinto sin obstrucciones, abra la puerta de la caja de inicio e inmediatamente ponga en marcha tres cronómetros. Cuando las cuatro patas del ratón hayan salido de la caja de inicio, cierre la puerta de la caja de inicio y detenga el primer temporizador con la mano.

Registre el camino. El ratón viaja mientras navega por el laberinto. En una hoja de puntuación, un ratón entra en una nueva zona o brazo del laberinto cuando las cuatro patas han cruzado a esa zona.

Cuando las cuatro patas entren en la caja de la portería, cierre la puerta entre el laberinto y la caja dorada y detenga el segundo cronómetro. Cuando el ratón haya entrado por completo en la jaula del pseudo hogar, cierre la puerta entre la caja dorada y la jaula. Detén el tercer cronómetro.

Registre los tiempos de los tres cronómetros y cuente el número de errores que ha cometido el ratón. Un error se define como una entrada a una zona de callejón sin salida o un viaje de regreso a través de un brazo del laberinto ya recorrido. Deje al animal en la jaula pseudo casera durante un minuto antes de devolverlo a su jaula doméstica.

Después de probar a todos los ratones de la cohorte, espere 30 minutos y luego devuelva la comida y el agua a todos los ratones. Finalmente, regrese a los animales a su sala de colonias. Repita este procedimiento en noches consecutivas con un ensayo por día de prueba por animal hasta que todos los ratones de la cohorte hayan alcanzado un criterio de aprendizaje definido o hasta que se haya realizado un número predeterminado de ensayos de prueba.

Un ratón se clasifica como que ha aprendido el laberinto cuando puede realizar la tarea con cero a uno errores en dos intentos consecutivos. Los ratones se prueban en el mismo orden en ensayos sucesivos. Ahora mostraremos algunos resultados representativos del comportamiento.

Aquí vemos datos de ratones jóvenes de dos meses y envejecidos, machos de 24 meses, C 57 negros de seis y CR que fueron entrenados en el laberinto de Lashley durante hasta 15 ensayos. En la figura dos A, los ratones jóvenes aprendieron el laberinto en un promedio de 7,6 días. Por el contrario, los animales envejecidos tardaron 11,7 días en alcanzar el criterio.

Había una fuerte tendencia a que los ratones C 57 envejecidos, seis ratones negros NCR R tardaran más en aprender a usar la maza. El índice de aprendizaje es la relación entre las entradas correctas del brazo y el total de segmentos de ruta recorridos en un solo ensayo cuando el índice de aprendizaje se calcula en la figura dos B. Ambos grupos de edad tienen una relación de aproximadamente 0,50 para el primer ensayo. Tanto los ratones jóvenes como los ancianos muestran un aumento constante en el índice de aprendizaje de los ensayos dos a cuatro, pero no hubo diferencias significativas entre los dos grupos. Mostrado.

Aquí hay datos de estudios que examinan el efecto de la tensión de fondo en el comportamiento de aprendizaje. Se compararon machos jóvenes, C 57, seis ratones negros NCR y ratones control CD uno de cuatro a cinco meses. Los ratones C 57 black six son los mismos ratones que la cohorte joven de la figura dos.

En la figura tres, un ratón CD one aprende el laberinto de lashley tres en 4,5 días. No hubo diferencias significativas entre las cepas en los días necesarios para alcanzar los criterios. Por el contrario, el examen del índice de aprendizaje de la figura 3 B muestra que, mientras que todos los animales navegaban por el laberinto en la primera prueba por casualidad, los ratones CD uno aprendieron la tarea más rápidamente.

Esto se ilustra por el aumento estadísticamente significativo en el índice de aprendizaje en los ensayos dos a cuatro en ratones CD uno en comparación con los ratones C 57, BL six y CR. Curiosamente, si los ratones CD uno continúan siendo entrenados en el laberinto más allá del punto de alcanzar el criterio, exhiben un comportamiento indicativo de sobreentrenamiento En la figura cuatro A, hay un aumento en el número de errores cometidos después del día cinco. El quinto día fue el día en que los ratones CD uno alcanzaron el criterio.

Los ratones CD uno también pasaron más tiempo dentro del MACE después de adquirir la tarea, lo que se puede ver en la figura cuatro B.So acabamos de mostrarles cómo usar el laberinto de Lashley tres para medir el aprendizaje y la memoria y los ratones. Al implementar este experimento en su propio laboratorio, puede ser necesario realizar algún trabajo piloto, ya que diferentes cepas de ratones adquirirán los MA a diferentes velocidades y pueden estar sujetas a sobreentrenamiento. Gracias por mirar y buena suerte en tus futuros experimentos.