Name: 인간의 두피 조직에서 Aβ Multimers의 SDS-PAGE/Immunoblot 감지는 항원 에피토프 검색을 사용 Homogenates (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-23T04:53:00.000+00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: 배우세요 인간 대뇌피질 조직에서 Aβ 다중체를 SDS-PAGE와 면역블로팅으로 검출하는 방법을. 항원 에피토프 회복 기법을 활용하여 알츠하이머병 병리 연구에 활용할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

일레인 Pranski 우수한 기술 지원 캐롤린 Suwyn와 해리 레빈 III, M. 폴 머피, 중요한 대화를 게어링 말라 많은 감사드립니다. 기금은 RR - 00165, PO1AG026423, P50AG025688, AG030539, 우드러프 재단과 에모리 대학 조사위원회에 의해 제공되었다.

1 부 : 명확히 조직 homogenates의 작성 <ol><li> 약 30도 유봉 스트로크로 (즉, 추가 400μl 버퍼 - 얼음처럼 차가운 버퍼 (플러스 2X 프로 테아제 억제제 칵테일 [산타크루즈] 0.1M 인산 버퍼 호수 [와 MG + + 무료 칼슘 + +])의 4 번 볼륨에서 수정되지 않은 대뇌 피질의 조직을 균질 다운스 100mg 조직). </li><li> 3000 5 분 스핀 homogenates g (4 ° C). 조심스럽게 -80에서 명확히 supernatants 이들 추출물의 저장 aliquots를 제거 ° C를 사용까지. </li><li> 제조 업체의 지침 (ThermoFisher)에 의하면, bicinchoninic 산성 (BCA) 분석을 사용하여 명확히 homogenates에 대한 총 단백질 농도 (μg / μl)를 결정합니다. </li></ol> 2 부 : SDS - PAGE 샘플 준비 <ol><li> 물론 10으로 10~20% Tricine 젤 (Invitrogen), 잘마다 로드할 수있는 최대 볼륨 ~ 25μl이다. 총 볼륨 2X SDS 샘플 버퍼와 10X 감소 에이전트를 포함, 잘마다 로드할 수 명확히 homogenate의 최대 볼륨이 10μl가되도록. 20% (W / V) 명확히 피질 homogenates는 당 잘 50μg 총 단백질에 대한 허용, 5 μg / μl 이상의 총 단백질 농도가 있어야합니다. 이하 5mg/ml 단백질과 샘플 당 자 이하 총 단백질을 로딩 할거 것입니다. 그러나, 높은 단백질 수준은 monomeric 및 집계 Aβ의 검색 (50 - 60μg 총 단백질이 최적입니다)에 최적입니다. 항상마다 잘 총 단백질의 동일한 금액을로드합니다. </li><li> 각 젤 들면 SeeBlue Plus2 (Invitrogen)로 분자량 마커의 10μl와 적어도 하나를로드합니다. 긍정적인 제어로, 합성 Aβ40 또는 다른 우물에 Aβ42 펩타이드 (1xPBS에 희석) 10 - 100ng 실행합니다. </li><li> 갓 해동, 명확히 homogenates을 사용하여 얼음에서 반응 혼합물을 준비합니다. 5-10초에 대한 소용돌이 튜브, 100에서 건조 욕조에 열을 ° C 5 분 후, 신속하게 모자의 결로를 제거하는 모든 샘플을 스핀. </li></ol> 파트 3 : SDS - PAGE 젤 전기 영동 <ol><li> , 제조 업체의 지침 (Invitrogen)에 따라, Tricine SDS 실행 버퍼를 사용하여 XCell 물론 잠금 미니 셀 Gelbox에 10~20%의 Tricine 젤로 vortexed 샘플을로드 </li><li> 약 90 분 동안 125V의 일정한 전압에서 젤을 실행합니다. 4KDa 마커 밴드가 젤의 바닥에서 1cm에 대한 때까지 샘플을 실행하자. </li></ol> 4 부 : 젤에서 세포막으로 전송 단백질 <ol><li> 조심스럽게 제조 업체의 지침 (Invitrogen)에 따라, 플라스틱 케이스에서 젤류를 제거하고 XCell II 얼룩 모듈 내부 전송 샌드위치를​​ 조립. 사전 서부 유럽 표준시 트리스 - 글리신 전송 버퍼 (20 % 메탄올)과 패드와 0.2μm nitrocellulose 막을 모래 바닥, 그리고 모래 바닥 패드 또는 여과지 / 멤브레인 샌드위치에서 모든 거품을 제거하십시오. </li><li> XCell Gelbox에서 전송 버퍼와 내부 챔버를 기입 dIH 2 O (메탄올의 노출 시간이 지남에 따라 플라스틱 gelbox을 입을 수)와 외부 챔버를 입력합니다. </li><li> 25mA의 일정한 암페어에서 2~3시간에 대한 전송을 실행합니다. </li><li> 전송이 완료되면, 샌드위치를 ​​재조 두 사각형 플라스틱 배양 접시에 1xPBS (또는 다른 적절한 컨테이너)에 dIH 2 O와 점막에 젤 넣습니다. </li><li> 단백질 전송의 효율성을 시각화하기 위해, 젤 단순히 블루 SafeStain (Invitrogen) 물들일 수 있으며, 개양귀비빛의 S 붉은 얼룩 (시그마 알드리치)와 안정, 두 제조 업체의 지시에 따라. 이 얼룩은 immunoblotting 영향을주지 않습니다. 얼룩은 비효율적인 단백질 전송을 공개하는 경우 3 단계에서 전송 시간을 수정합니다. </li></ol> 제 5 부. 항원 - 에피토프 복구 및 Immunoblotting <ol><li> 항원 검색은 immunoblotting 동안 항체 바인딩을위한 멤브레인에 Aβ epitopes을 드러내는에서 중요한 단계입니다. 100 일정한 온도를 유지 ° 모든 증기선, 전자렌지, 또는 물이 욕조가 C는 충분합니다. 기선의 항원 검색을 위해, 상온에서, 1xPBS 가득한 강력 Kapak 플라스틱 주머니에서 막을 열 - 인감. 미리 온수 기선의 평면 주머니 라이, 파우치는 추가로 15 분 동안 품어, 확장하기 시작 한때. 멤브레인가 과도하게 주름을 방지하기 위해, 주머니에서 제거하기 전에 천천히 냉각 수 있습니다. </li><li> 상온에서, 신중하게 피어오르는 주머니에서 멤브레인를 제거하고 5 분 (0.05 % 트윈 - 20과 함께 살린, 산도 8.0을 트리스 버퍼 TBS - T에 린스 다음 1xPBS 5 분 동안 멤브레인을 린스 [시그마] ), 궤도 흔드는에. 떨고 한 시간 동안 차단 솔루션에 멤브레인 (TBS - T에서 2.5 %의 무지방 우유)를 품어. rinsing없이, 피하 풍선 (1:1,000 [1μg/ml] 1:5,000 [0.2μg/ml] 희석, Covance에서 6E10) 차단 솔루션에 희석 기본 항체를 포함하는 음식 또는 플라스틱 주머니에 막를 전송S. 4 떨고 ° C (더 이상 부화 더 나은 신호를 줄 수 있습니다.) 1 시간 후 24~48시간에 대한 실온에서 궤도 흔드는에 품어 </li><li> TBS - T 30 분 동안 막을 린스 (한 빠른 3 X 10 분 rinses 다음 린스). </li><li> 상온에서 흔드는에서 90 분간 차단 솔루션 1:10,000에서 희석 HRP - 복합 이차 항체에 멤브레인 (애머스햄 ECL 양 안티 - 마우스, GE 헬스케어)을, 알을 품다. </li><li> TBS - T 30 분 동안 막을 린스 (한 빠른 3 X 10 분 rinses 다음 린스). </li><li> 흔드는에서 플라스틱 시트 보호 장치 사이에 보푸라기가없는 필터 종이에 여분의 시약을 얼룩 및 필름 카세트에 막을 장소, 5 분 갓 만든 SuperSignal 웨스트 피코 Electrochemiluminescence 시약 (ThermoFisher)에서 막을 품어. 먼지없는 Kimwipes 필요한 경우와 추가 SuperSignal 시약을 얼룩. </li><li> 30 분정도 30 초 간격에 대한 코닥 Biomax MR 필름에 노출 및 필름 개발에 개발할 수 있습니다. 오분 후, Aβ 모노머 밴드는 아마 포화됩니다. </li><li> 세포막은 복원에 떨고 플러스 실온에서 30 분 버퍼가 벗겨진하고 원하는 경우 추가 항체와 reprobed하여 (TBS - T에 rinsing 이후) 송두리째 수 있습니다. </li></ol> 6 부 : 대표 Immunoblot : <img src="/files/ftp_upload/1916/1916fig1a.jpg" alt="그림 1a" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1A"> <img src="/files/ftp_upload/1916/1916fig1b.jpg" alt="그림 1b" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1B"> <img src="/files/ftp_upload/1916/1916fig1c.jpg" alt="그림 1c" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1C"> 7 인간의 과목에서 50μg 총 단백질을 포함하는 수치 1A - C. 명확히 homogenates는 multimeric Aβ와 APP의 존재에 대해 분석하고 있습니다. 항체 6E10와 Immunoblotting 것은 Aβ 단량체, dimers, trimers, tetramers, 그리고 알츠하이머의 경우 APP (상단 밴드)뿐만 아니라,이 광고의 경우에 풍부 고분자량 Aβ의 multimers를 보여줍니다. 합성 Aβ40은 낮은 분자량 밴드의 신원을 확인합니다. AD : 알츠하이머 질환, DLB : Nondemented 인간 (A) 30 분 필름 노출, (B) 5 분 필름 노출, (C) 30초 필름 노출 :. Lewy 기관, ND와 치매.

<ol><li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297, 353-356 (2002).</li>
<li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration%3A+lessons+from+the+Alzheimer%27s+amyloid+beta-peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 8, 101-112 (2007).</li>
<li>Walker, L. C., LeVine, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cerebral+proteopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Aging%22%5BJournal%5D)">The cerebral proteopathies.</a> Neurobiol. Aging. 21, 559-561 (2000).</li>
<li>Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging%2C+amyloid%2C+and+Alzheimer%27s+disease%3A+a+perspective+in+honor%5BTitle%5D)+AND+%22of+Carl+Cotman.+Neurochem.+Res%22%5BJournal%5D)">Aging, amyloid, and Alzheimer's disease: a perspective in honor.</a> of Carl Cotman. Neurochem. Res. 28, 1705-1713 (2003).</li>
<li>Walsh, D. M., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abeta+oligomers+-+a+decade+of+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Abeta oligomers - a decade of discovery.</a> J. Neurochem. 101, 1172-1184 (2007).</li>
<li>Swerdlow, P. S., Finley, D., Varshavsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+immunoblot+sensitivity+by+heating+of+hydrated+filters%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Enhancement of immunoblot sensitivity by heating of hydrated filters.</a> Anal. Biochem. 156, 147-153 (1986).</li>
<li>Ida, N., Hartmann, T., Pantel, J., Schröder, J., Zerfass, R., Förstl, H., Sandbrink, R., Masters, C. L., Beyreuther, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+hetergeneous+A4+peptides+in+human+cerebrospinal+fuid+and+blood+by+a+newly+developed+sensitive+Western+blot+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Analysis of hetergeneous A4 peptides in human cerebrospinal fuid and blood by a newly developed sensitive Western blot assay.</a> J. Biol. Chem. 271, 22908-22914 (1996).</li>
</ol>

알츠하이머 병 1,4,5의 pathogenesis에서 Aβ 집합의 중요성에도 불구하고, 몇 가지 연구가 설명 또는 인간의 대뇌 피질의 조직 샘플 2 다양한 Aβ multimers의 분포를 계량 있습니다. 일반적으로 사용되는 immunohistochemical 기법은 고정 피질 조직에서 서로 다른 multimeric Aβ 종의 차별에 대한 허용하지 않습니다. 떼어낸 피질 조직 homogenates에서 Aβ multimers는 분리와 화학적 겔 전기 영동과 항체 기반의 탐지 방법을 사용 평가하실 수 있습니다. 그러나, 타겟으로하는 Aβ epitopes는 감지 및 집계 Aβ의 정확한 양을 정함 방지, 집계 및 사후 translationally 수정 펩타이드 구조 내에 숨겨져있을 수 있습니다. SDS - PAGE와 Aβ 6,7의 N - 터미널 지역에 항체와 immunoblotting와 결합하여 열을 유발 항원 에피토프 검색을 사용하여, 우리는 별도의 자연 인간의 두뇌에서 격리...

<table><tbody><tr><td>Complete Protease Inhibitor Cocktail 정제</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>Sc-29130</td><td>25ml 완충액당 정제 1알</td></tr><tr><td>BCA Protein Assay 키트</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>XCell SureLock Mini-Cell 및 XCell II Blot Module 키트 CE Mark</td><td>Invitrogen</td><td>EI0002</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tricine SDS 샘플 완충액 (2X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC1676</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 샘플 환원제 (10X)</td><td>Invitrogen</td><td>NP0004</td><td></td></tr><tr><td>SeeBlue Plus2 Pre-Stained Standard</td><td>Invitrogen</td><td>LC5925</td><td></td></tr><tr><td>Novex 10-20% Tricine Gel 1.0 mm, 10 well</td><td>Invitrogen</td><td>EC6625BOX</td><td></td></tr><tr><td>Nitrocellulose 막, 0.2 &amp;mu;m 공극 크기</td><td>Invitrogen</td><td>LC2000</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tricine SDS Running 완충액 (10X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC1675</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tris-Glycine Transfer 완충액 (25X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC3675</td><td></td></tr><tr><td>SimplyBlue SafeStain</td><td>Invitrogen</td><td>LC6060</td><td>면역염색을 방해하지 않음</td></tr><tr><td>ATX Ponceau S Red 염색액</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>09276</td><td>면역염색을 방해하지 않음</td></tr><tr><td>Kapak 열 밀봉 가능 플라스틱 샘플 파우치</td><td>Fisher Scientific</td><td>0181225AA</td><td></td></tr><tr><td>A&amp;#946;(1-16)에 대한 6E10 마우스 단클론 항체</td><td>Covance</td><td>SIG-39320</td><td>WB용으로 1:1,000에서 1:5,000까지 희석</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>ECL Mouse IgG, HRP-Linked Whole A&amp;#946; (sheep 유래)</td><td>GE Healthcare</td><td>NA931-1ML</td><td>1:10,000으로 희석</td></tr><tr><td>SuperSignal West Pico 화학발광 기질</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>34077</td><td></td></tr><tr><td>Kodak Biomax MR 필름</td><td>Carestream Health</td><td>870 1302</td><td></td></tr></tbody></table>

인간의 두피 조직에서 aβ multimers의 sds-page/immunoblot 감지는 항원 에피토프 검색을 사용 homogenates

SDS-PAGE/Immunoblot Detection of A&beta; Multimers in Human Cortical Tissue Homogenates using Antigen-Epitope Retrieval

β - 아밀로이드의 변칙 접지와 중합도 (Aβ) 펩타이드는 알츠하이머 질병 pathogenesis에 neurodegenerative 층계를 시작 생각됩니다<sup&gt; 1</sup&gt;. 알츠하이머 질환에서 대뇌 치매 plaques의 코어에서 발견되는 β - 시트 풍부한 아밀로이드 원섬유로 자체 집계하는 경향이 있거나 42 아미노산 펩타이드 - Aβ는 주로 40. 증거를 증가하면 해당 낮은 분자량이 용해 Aβ의 multimers가 원섬유의의 Aβ의 아밀로이드보다 독성이 제안<sup&gt; 2</sup&gt;. 뇌 조직에서 낮은과 높은 분자량 multimeric Aβ 종의 식별 및 부량는 알츠하이머 질병 연구에 필수적인 목적이며, 또한 고용 방법은 다른 proteopathies에 독성 multimers의 식별 및 특성에 적용할 수있는<sup&gt; 3</sup&gt;. 자연스럽게 발생 Aβ multimers는 Aβ 특정 항체와 immunoblotting 다음 SDS - polyacrylamide 젤 전기 영동에 의해 감지하실 수 있습니다. 그러나, multimeric Aβ의 분리 및 검출은 고농도 대뇌 피질 homogenates 작은 기공 크기 nitrocellulose의 점막에서 항원 검색의 사용을 필요로합니다. 여기서 우리는 명확히 인간의 대뇌 피질 homogenates의 준비를 위해 기술, SDS - PAGE에 의해 단백질의 분리, 그리고 항원 에피토프 복구 / Aβ 펩타이드의 N - 터미널 지역에 항체 6E10과 모래 바닥 서양을 설명합니다. 이 프로토콜을 사용, 우리는 지속적으로 알츠하이머의 병리와 인간에서 Aβ 단량체, dimers, trimers, tetramers 및 대뇌 피질의 조직에서 높은 분자량의 multimers을 감지.

우리는 명확히 인간 대뇌 피질 homogenates, SDS - PAGE로 단백질 분리, 항원 검색 및 Aβ 펩타이드에 대한 항체와 immunoblotting의 준비를위한 기술을 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 지속적으로 알츠하이머의 병리 현상과 인간의 대뇌 피질 조직에서 monomeric 및 multimeric Aβ를 감지합니다.

인간의 두피 조직에서 Aβ Multimers의 SDS-PAGE/Immunoblot 감지는 항원 에피토프 검색을 사용 Homogenates

$\beta$-아밀로이드(A$\beta$) 펩타이드의 비정상적인 접힘과 중합은 알츠하이머병의 신경퇴행성 폭포 현상을 유발하는 것으로 생각됩니다...

본 프로토콜은 인간 피질 조직 내의 beta malters 검출을 가능하게 합니다. 먼저 균질화된 조직을 프로브 초음파 처리하고 저속 원심분리를 통해 청징화합니다. 다음으로 SDS 버퍼에서 끓여 환원시킨 샘플을 폴리아크릴아마이드 겔에 로딩합니다.겔 단백질을 니트로셀룰로오스 막으로 전이시킨 후, 인산염 완충 식염수(phosphate buffered saline)에서 막을 증기로 가열합니다. 마지막으로 궤도 쉐이커(orbital shaker) 위에서 막을 1차 항체, HRP 결합 2차 항체 순으로 하룻밤 동안 인큐베이션하고, x-ray 필름에 노출시키기 전 루미날 과산화물 시약(luminal peroxide reagent)으로 처리합니다. 안녕하세요, 저는 에모리 대학교 예르케스 국립 영장류 연구 센터 신경과학과의 Larry Walker 교수님 연구실 소속 Rebecca Rosen입니다.오늘은 열 유도 항원 회복법을 이용한 SDS 겔 전기영동 및 면역 블로팅을 통해 Abeta 다량체와 피질 균질물을 검출하는 방법을 보여드리겠습니다. 저희 실험실에서는 이 절차를 사용하여 알츠하이머병 환자의 인간 및 고령의 비인간 영장류에서 유래한 비고정 피질 조직 내 서로 다른 Abeta 다량체의 수준과 분포를 연구합니다. 그럼 시작하겠습니다.고정되지 않은 피질 조직 약 100mg을 준비하고, 얼음처럼 차가운 버퍼 약 400µL에서 페스틀로 약 30회 균일하게 스트로크하여 균질화합니다. 중량 대 부피 비율(w/v) 20%를 기준으로, 조직 무게 대 버퍼 부피의 비율은 1mg당 4µL가 되어야 합니다. 균질화 후 균질물을 4mL 폴리프로필렌 튜브로 옮기고, 출력 5에서 5초간 3회 프로브 초음파 처리(probe sonicate)합니다.초음파 처리를 마친 후 균질액을 1.5 milliliter 마이크로 원심분리 튜브로 옮기고 3000 G에서 5분 동안 원심분리하십시오. 투명해진 상층액을 조심스럽게 제거하고, 이 추출액을 50 microliter씩 분주하여 사용 시까지 minus 80 degrees Celsius에서 보관하십시오. 다음으로, 제조사의 지침에 따라 bio acid 또는 BCA assay를 사용하여 갓 해동한 투명 균질액 분주액의 총 단백질 농도를 측정하십시오. 투명해진 20% 피질 균질액의 단백질 농도는 5 micrograms per microliter보다 높아야 하며, 따라서 플레이트 리더의 측정 범위 내에 들어오도록 1

sds-pageimmunoblot-detection-multimers-human-cortical-tissue

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

단백질 palmitate의 치료뿐만 아니라이 세포 내 단백질 인신 매매의 중요한 조절기입니다. 이것은 많은 시냅스 단백질이 palmitoylated 아르 뉴런에 특별한 관심입니다. 우리는 여러 세포 유형과 조직에 적용 할 수 있습니다 교양 뉴런에 palmitoylated 단백질을 감지하는 간단한 생화학 방법을 사용합니다.

Immunoprecipitation 및 아실-비오틴 거래소 (아베)에 의한 양식 Hippocampal 뉴런의 단백질 Palmitoylation의 감지

인간과 쥐의 뇌 조직을위한 요소 / 티오 / SDS 버퍼를 사용하는 일반적인 단백질 추출 프로토콜은 허용 2D-DIGE 미니 2DE의 면역 블롯에 의해 그들의 연속 특성에 의한 단백질의 indentification. 이 방법은 인간의 조직 검사 및 실험 모델에서 더 많은 재현성 및 신뢰성있는 결과를 얻기 위해 하나를 할 수 있습니다.

합의 뇌 유래 단백질, 2D-DIGE 미니 2DE 면역 블롯을 모두 사용하여 인간과 쥐과 뇌 프로테옴 연구를 위해 추출 프로토콜

여기에서는 사후 인간 뇌 조직에서 점점 더 불용성/응집된 알파-시누클레인(α-syn)을 분리하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 세제 강도가 증가하는 완충액과 고속 초원심분리 기술을 통해 병든 조직과 그렇지 않은 조직에서 α-syn 응집의 다양한 특성을 검사할 수 있습니다.

파킨슨 뇌에서, 수용성 알파 시누 클레인의 순차 추출

우리는 특정 카파(Vκ) 경쇄를 가진 인간 및 마우스 IgM 항체에 대한 항원을 포함하는 단백질 부분을 식별하는 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 IgM 계열 항체에 국한되지 않고 면역침전 중에 충분히 높은 친화력으로 항원을 표적으로 하는 모든 면역글로불린 동형에 적용됩니다.

카파 (Vκ)에 대한 항체 결합 특이성 빛 체인 함유 인간 (IgM의) 항체 : Polysialic 산 (PSA) 사례 연구로 NCAM에 첨부

안정화 신규 이차원 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동에 결합 된 아민 반응성 단백질 가교제를 사용하여 변성 조직 파쇄물로부터 천연 단백질 복합체를 분리하는 방법 (PAGE) 시스템이 제공된다.

다량 체-PAGE : 생물학적 샘플에서 캡처하는 방법 및 해결 단백질 단지

여기에서 저자는 도트-블롯 하이브리드화를 통해 정제된 단클론 항체와 펩타이드 스캐닝을 사용하여 선형 항원 항원결정기를 정의하는 간단하고 효율적인 프로토콜을 제시합니다. 그런 다음 식별된 항원결정기를 치료 및 진단 응용 분야에 사용할 수 있습니다.

펩타이드 모노클로 날 항체 인식 선형 B 세포 에피토프의 확인을 스캔 보조

인간의 사후 뇌에서 세제 불용 성 단백질의 농축에 대 한 약식된 분류 프로토콜 설명 되어 있습니다.

인간의 사후 뇌에서 세제 불용 성 단백질의 농축

이 프로토콜 분석 blotting 점이 상대적인 양의 Aβ 올리고 머를 평가 하는 합성 펩 티 드에 생체 외에서 에서 Aβ 올리고 준비 하는 방법을 설명 합니다.

A11-긍정적인 β 아 밀 로이드 올리고 머 준비 및 평가 분석 Blotting 도트를 사용 하 여

이 작품은 탈리도마이드 유사체의 표적인 E3 유비퀴틴 리가세 세레블론(CRBN)의 유비퀴틴화 및 분해를 유도하는 새로운 접근법으로서 포말리도마이드 계, 이중 기능적 호모-PROTAC의 합성 및 특성화를 설명한다.

포말리도마이드 기반 호모-PROTACs에 의한 E3 유비퀴틴 리가세 세레블론의 화학적 불활성화

단백질-단백질 상호작용은 표적 단백질의 기능을 규명하는 데 중요하며, co-IP(co-immunoprecipitation)를 통해 PPI를 쉽게 확인할 수 있습니다. 에피토프 태그 단백질을 인코딩하는 플라스미드를 HEK-293 세포에 임시로 transfection하고 두 타겟 단백질의 결합을 쉽게 확인할 수 있는 면역침전 방법을 개발했습니다.

단백질-단백질 상호 작용을 연구하기 위한 Anti-Epitope Tag Affinity Gel을 사용한 면역침전

여기에서는 인간 γ-세크레타아제를 재구성하는 효모 시스템에 대해 설명합니다. 이 시스템을 통해 활성에 영향을 미치는 돌연변이를 식별 및 연구하고 γ-secretase 억제제(GSI)를 스크리닝할 수 있습니다. 가족성 알츠하이머병 돌연변이의 기능 상실 특성을 활용하여 γ-secretase 조절제(GSM)를 스크리닝할 수 있습니다.

Saccharomyces cerevisiae γ-Secretase에 의한 아밀로이드 베타 생산에 영향을 미치는 유전자, 돌연변이 및 화학 물질을 스크리닝하는 알츠하이머병 모델

배우세요 인간 대뇌피질 조직에서 Aβ 다중체를 SDS-PAGE와 면역블로팅으로 검출하는 방법을. 항원 에피토프 회복 기법을 활용하여 알츠하이머병 병리 연구에 활용할 수 있습니다.

인간의 두피 조직에서 Aβ Multimers의 SDS-PAGE/Immunoblot 감지는 항원 에피토프 검색을 사용 Homogenates

더 많은 동영상 탐색