0 조회수 • 3:17 분 • August 31st, 2026
대부분의 세포가 게놈 내에 통합된 휴면 상태의 파지 DNA를 보유하고 있는 라이소젠성 박테리아의 하룻밤 배양액을 준비합니다.
신선한 배지에 접종하여 배양하십시오.
일부 박테리아는 자발적 유도를 통해 용해성 주기(lytic cycle)로 진입하며, 이 과정에서 파지 DNA가 절제 및 복제되고 바이러스 단백질이 생성됩니다.
새로 조립된 감염성 파지는 세포 용해를 통해 방출됩니다.
정해진 간격으로 배양 샘플을 수집합니다.
생존한 비유도 라이소젠을 계수하기 위해, 각 샘플의 단계 희석액을 한천 배지에 도말하고 배양합니다.
콜로니 수를 세어 콜로니 형성 단위(CFU)를 계산합니다.
감염성 파지를 계수하려면, 항생제 내성 지표 숙주 세포가 미리 도말된 항생제 한천 배지에 동일한 희석액을 스팟합니다. 라이소젠은 항생제에 민감하므로, 내성 숙주만이 성장할 수 있습니다.
파지는 세포를 감염시켜 용해함으로써 투명한 플라크를 형성합니다.
플라크를 계수하여 플라크 형성 단위(PFU)를 계산합니다. PFU 수치가 낮을수록 자발적 유도 사건이 적음을 나타냅니다.
시간 경과에 따른 CFU와 PFU를 그래프로 작성합니다. 박테리아 성장의 초기 대수 증식기 동안에는 CFU 대비 PFU가 가장 낮으며, 이는 자발적인 파지 유도가 최소화되었음을 나타냅니다.
먼저, 하룻밤 동안 배양한 배양액을 1:100 비율로 100 mL의 LB에 접종하여 신선한 라이소젠 및 지표 숙주 배양액을 준비합니다. 180 RPM으로 흔들어주며 37 °C에서 배양합니다.
라이소젠의 성장을 모니터링하기 위해, 접종 시점부터 8시간 동안 매시간 1 mL의 샘플을 수집합니다. 해당 배양액 100 µL를 900 µL의 LB 배지에 첨가하여 연속 희석합니다. 최대 속도로 볼텍싱하고, 10⁻¹에서 10⁻⁹까지 희석 시리즈를 계속합니다.
필요한 희석액 10 µL를 LB agar 플레이트에 스팟합니다. 건조시킨 후 30 °C에서 18~24시간 동안 배양합니다. 배양 후, 콜로니 수를 측정하고 주어진 공식을 사용하여 생존 박테리아 세포 수를 계산합니다.
다음으로, 시간별 샘플 내의 감염성 파지 입자 수를 산출하기 위해, 리팜피신과 함께 대수 증식기 단계의 리팜피신 내성 지시 숙주 세포 100 µL를 용융된 top agar에 첨가합니다. 연속 희석된 라이소젠 배양액 10 µL를 접종된 top agar 층에 스팟팅합니다. 이를 건조시킨 후 37 °C에서 18~24시간 동안 배양합니다.
배양 후, 플라크 수를 세고 제시된 공식을 사용하여 감염성 파지 입자 수를 계산합니다.