Name: 에서 Thymic 림프종 T - 세포 라인의 유도 ATM - / -과 p53의 - / - 마우스 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 17 min 59 s
Description: 배우세요 ATM-/- 및 p53-/- 마우스에서 흉선 림프종 T세포주를 유도하는 방법을. 이 프로토콜은 종양 면역학 및 암 생물학 연구에 활용됩니다.

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저자는 도움이 토론을 위해 컬럼비아 대학에서 미생물학과 면역학의학과에서 박사 보리스 Reizis 감사하고 싶습니다. 우리는 또한 유동세포계측법 및 비디오 편집과 지원 루 후앙과 기술 지원에 대한 동물용 의약품의 대학, 코넬 대학에서 미생물학과 면역학의학과에서 박사 마가렛 바이노 박사 로드먼 겟첼 및 Deequa Mahamed 감사하고 싶습니다. / - - 생쥐 저자는 또한 p53의를 사육 및 genotyping에 대한 와이즈 실험실에서 자신의 중요한 원고와 비디오 제작의 검토, 그리고 스테파니 Yazinski에 대한 듀하멜 와이즈 실험실의 구성원을 감사하고 싶습니다. 동물 실험은 코넬 대학 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다. 이 연구는 농업의 미국학과, 협동 상태 연구, 교육 및 연장 서비스, 동물 건강 및 질병 연구 프로그램 (검정 고시 및 RSW)을하고 NIH 보조금 R03 HD058220 및 R01CA108773 (RSW)을 제공한 자금에 의해 부분적으로 지원되었다. 비디오 듀하멜 &amp; 와이즈 연구소의 인력에 의해 자체 시설을 사용하여 제작되었습니다.

1. 종양의 해부 <ol><li> 종양 절개 들어, 깨끗한 종이 타월이나 일회용 외과 드레이프는 해부 패드에 위치하고 있으며 70 %의 에탄올로 뿌렸어요. </li><li> 이 프로토콜에 대한 생쥐가 일상적으로 CO 2 euthanized 있습니다. 절개 패드에 euthanized 마우스를 놓고 에탄올과 동물의 양쪽을 스프레이. 마우스는 다리를 통해 삽입 70 % 에탄올로 철저하게 뿌려놓은 4 개 이상의 푸시 핀을 사용하여 절개 패드에 장소에서 개최됩니다. </li><li> 정중선을 통해 피부는 기본 근육을 피하와 본문 충치에 관통하면서, 멸균 가위를 사용하여 치골에서 머리의 기본으로 들어가있다. </li><li> 무균 가위와 내부 장기를 손상하지 않도록주의하는 포셉의 새로운 쌍을로 복강을 엽니다. </li><li> 해부 및 손상 혈관없이 종양을 나타내기 위해 갈빗대을 왜곡하여 흉강을 엽니다. </li><li> 다른 장기에서 종양을 분리하고, 차가운 PBS로 작품 전체 종양의 약 40~50%를 (약 최대 1.5 X 0.8 X 0.8 cm) 전송 얼음이 있었죠. </li><li> 종양의 나머지 부분은 다른 assays 저장 수 있으며 완벽한 검시이 시간에 수행할 수 있습니다. </li></ol> 2. Culturing의 림프종 세포 <ol><li> 70 % 에탄올과 biosafety 캐비닛에 전송으로 해부하는 종양을 포함하고있는 튜브를 스프레이. </li><li> 멸균 150mm 2 페트리 접시에 배지 10 ML을 추가합니다. </li><li> 피펫과 부드러운 흡입하여 페트리 접시에 종양의 조각을 전송합니다. </li><li> beveled 측면을 마주보고 두 멸균 18 게이지 바늘을 구부. </li><li> 벤트 바늘을 사용하여 종양을 떼어 놓다. </li><li> 소용돌이 접시를 부드럽게 탭 및 종양의 큰 조각을 피하면서, 측면에 세포 현탁액을 수집하는 각도로 놓으십시오. </li><li> 종양의 큰 조각을 피하면서 50 ML 원뿔 튜브에 세포 현탁액과 전송 대기음. </li><li> 종양의 큰 조각을 피하는 동안 같은 튜브에 매체 및 전송의 10 ML과 접시를 씻으십시오. </li><li> 부드럽게 lymphocytes와 stromal 세포로 구성된 세포 현탁액을 혼합하고 T - 75 조직 배양 플라스크에 T - 25 조직 문화 플라스크 10 ML에 5 ML을 전송하기만하면됩니다. 부드럽게 소용돌이 flasks합니다. </li><li> 2.5 ML 최종 볼륨 (문화 선박의 여러 유형을 사용하여 서로 다른 밀도에 culturing 세포 T 세포 라인을 확립 가능성을 극대화) 2, 4, 10100 1000 배 dilutions를 만들기 위해 나머지 세포 현탁액을 사용합니다. </li><li> 6 잘 접시의 각각의 우물에 각 희석의 플레이트 2.0 ML. 부드럽게 소용돌이 접시합니다. </li><li> 공기 humidified CO 2 분위기에서 48 H에 대한 세포를 품어. </li></ol> 3. 림프종 세포를주고 <ol><li> 부화 48 H 후, 세포의 최소한의 방해와 벽 함께 T - 75 플라스크에 T - 25 플라스크와 매체의 10 ML 중간의 5 ML를 추가합니다. </li><li> 세포의 최소한의 방해와 벽을 따라 6 잘 플레이트의 각 물론 중간 2 ML을 추가합니다. </li><li> 추가 72 H.에 대한 세포를 품어 </li></ol> 4. 림프종 세포를 Passaging <ol><li> 초기 통로 <ol><li> 원래 flasks 및 접시 (첫 번째 구절 중에 약 3x106 / ML의 농도에서 세포 밀도를 유지의 성공적인 구축을 촉진 유지하면서 부화의 다섯 번째 하루의 끝에서, 세포는 1:1 비율로 passaged 아르 연속 세포주). <ol class="lalpha"><li> T - 25 플라스크의 경우, 매체의 5 ML을 포함하는 새로운 플라스크에 세포 현탁액의 5 ML을 전송. 원래 플라스크에 매체의 5 ML을 추가합니다. </li><li> T - 75 플라스크 들어, 중간의 10 ML을 포함하는 새로운 플라스크에 세포 현탁액의 10 ML을 전송. 원래 플라스크에 배지 10 ML을 추가합니다. </li><li> 6 - 잘 접시, 각 우물에 중간 2 ML을 포함하는 새 접시의 해당 우물에 각 우물에서 세포 현탁액 2 ML을 전송. 원래 우물의 각 우물에 미디어 2 ML을 추가합니다. </li></ol></li><li> 추가 72 H. 모든 flasks과 접시를 품어 우리의 경험에서 대부분의 세포 라인은 이러한 통로 한 문화 (첨부된 stromal 세포를 통해 느슨하게 자기편 서스펜션 셀 집계의 존재가 설립 세포주의 초기 표시이다)에서 설정됩니다. </li><li> 적게 또는 전혀 느슨하게 자기편 서스펜션 세포 집계와 문화, 신중하게 중간마다 72 H.의 약 50 %를 대체하여 flasks이나 접시를 피드 원래 문화의 세포를 제거 방지하기 위해, 문화 선박이 뜨는 매체의 부드러운 열망 전에 중력에 의해 아래에있는 세포의 퇴적물을하도록 서있는 최소한 5 분 그대로 남아 있습니다. </li></ol></li><li> 설립 세포 라인을 유지 <ol><li> 설립 셀 라인은 새로운 flasks 및 플레이트로 passaged 있습니다. T - 25 T - 75 flasks 들어, 원본 또는 5 ML을 추가중간 5 ML에 통과 한 현탁액. 6 - 잘 접시 들어, T - 25 플라스크에 중간 7 ML에 원본 또는 통로 한 셀 서스펜션 3 ML를 추가합니다. 피드 신선한 배지로 제거 볼륨을 대체하여 원본 또는 통로 한 문화를 유지합니다. </li><li> 통로는 새로운 T - 25 flasks로 셀 라인을 설립하였습니다. 셀 라인은 18-24 H.의 두 배로 시간을 문화가 일상적으로 1 3x106 / ML의 밀도 유지, 3 일마다 passaged 있습니다. 10 ML까지 할 수있는 새로운 매체 이전에 통과 문화의 필요한 볼륨을 추가합니다. 피드와 원래의 문화를 유지합니다. </li><li> 몇 구절 후, 비 점착 성의 세포가 자기 점착 성의 stromal 세포없이 유지되며, 자기편 세포의 작은 숫자는 각 통로로 이월됩니다. 이 시점 이외에도, 문화가 T - 25 flasks을 처리하지 않는 조직 문화를 유지하실 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 5. 림프종 세포 라인을 동결 복구 <ol><li> 셀 라인 20% FBS 및 10 % DMSO를 포함하는 신선한 RPMI 1640 배지에 냉동 수 있습니다. </li><li> T - 25 플라스크 (약 1.5x10 6 셀 / ML)에 48 H 옛 문화의 세포는 상온에서 5 분 1,500 rpm으로 centrifuged 있습니다. 폐기 뜨는 후, 세포는 추위 동결 중간 2 ML에 다시 일시 중지됩니다. 각각의 플라스크에서 세포 현탁액의 두 1.0 ML 볼륨 즉시 -80시 냉동, 동결 튜브에 배치됩니다 ° C, 그리고 그 다음날 액체 질소로 전학 왔어. </li><li> 전지는 빠른 해동하고, 신선한 문화 매체 10 ML에있는 내용을 resuspending하여 액체 질소 저장에서 복구됩니다. 또는, 갓 해동 세포는 신선한 문화 매체의 10 ML에 resuspending 전에 DMSO를 제거하는 따뜻한 문화 매체에 한 번 세탁하고 있습니다. 세포는 이후 통과하기 전에 최소한 72 H에 대한 양식입니다. </li></ol> 6. 대표 결과 ATM은 - / - T - 세포 라인이 프로토콜을 사용하여 개발된 및 지정 DWJ - ATM - 1 반 인 경우에는 3 번 CD - FITC, 안티 - CD4 - APC 및 안티 CD8 - PE 및 유동세포계측법 분석 (Figure1)와 얼룩에 의해 특징되었습니다. T - 세포의 90 % 이상 인 경우에는 3 번 CD, CD4 및 CD8 트리플 긍정했다. <img src="/files/ftp_upload/2598/2598fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1.이 프로토콜을 사용하여 개발된 T - 세포 라인의 특성화. / - - 설립 ATM의 세포 표면 마커 세포 라인 DWJ - ATM - 1과 얼룩을 특징으로했다 지정한 안티 인 경우에는 3 번 CD - FITC, 안티 - CD4 - APC, 안티 - CD8 - PE 및 유동세포계측법 분석. 간단히, 1X10 6 신선한 세포는 차가운 PBS (1500 RPM / 5 분)에 한 번 씻어, 그리고 4 incubated 있었다 ° 1 % BSA와 PBS에서 1:200 희석에서 항체 칵테일 (각 항체의 μL 200 10 분 C. 신선한 이상 분석을 위해 고정. 수정된 세포가 4 % (권 / 권) 최종 농도에 추가 중립 버퍼 포르말린에 의해 준비 및 원심 분리에 의해 수확 30 분 (4 ° C에서 incubated하는 동안 세포는 즉시 검사 수있는 1,500 RPM / 5 분) 및 1 % BSA와 PBS 200 μL에 resuspended. 1 X 10 4 세포의 총 BD 외과 Calibur 분석기 및 CellQuest 소프트웨어 (BD ​​Biosciences, 산호세, CA)를 사용하여 분석되었다.

<ol><li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atm-deficient+mice%3A+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li>
<li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li>
<li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Atm-%2F-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Chemother+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li>
<li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li>
<li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li>
<li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL%2FLMO1+double+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li>
<li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li>
<li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이 프로토콜에서는, 우리는 두 개의 다른 마우스 genotypes에서 murine T - 세포 라인을 확립하기위한 자세한 절차를 제공한다 - / - [FVB/N- ATM tm1Led / J]와 p53의 - / - ATM [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] . / - - 세 (5 시도 아웃) p53의 - / -이 프로토콜, 6 총 (7 시도 아웃) ATM을 사용하여 murine T - 세포 라인은 우리 연구실에서 설립되었습니다. / - - 그 세포주 DWJ - ATM - 1, ATM 보여주는 대표적인 데이터 셀 라인은 세포 표현 인 경우에는 3 번 CD, CD4 및 CD8 표면 마커보다 90 % 이상 그 clonal T - 세포 라인이 수...

<ul><li> 아이스 버켓 </li><li> 70 % 에탄올 </li><li> 알루미늄 호일과 핀이으로 덮여 거품 블록으로 구성된 해부 패드 </li><li> 작은 무균 가위와 집게 두 세트 </li><li> 무균 150mm 2 페트리 접시 (써모 피셔 과학, 월섬, MA;. 고양이 # 08-757-13) </li><li> 멸균 18 게이지 바늘 </li><li> 50 ML 원뿔 튜브 (코닝 주식 회사, 코닝 NY, 고양이 # 430829) </li><li> 10 % 포르말린 버퍼 </li><li> 조직 문화 flasks <ul><li> T - 25 (TPP, Trasadingen, 스위스, 고양이 # 90025) </li><li> T - 75 (TPP, Trasadingen, 스위스, 고양이 # 90075) </li></ul></li><li> 6 - 잘 접시 (코닝 주식 회사, 코닝 NY, 고양이 # 3506) </li><li> 멸균 인산은 생리 산도 7.2 (PBS)를 버퍼 </li><li> 문화 매체 <ul><li> 25 MM HEPES, L - 글루타민은 (Lonza, 워커스빌, MD, 고양이 # 12 - 115F) 200 MM와 RPMI 1640 다음과 보충 : <ul><li> inactivated 10 % 열 (56 ° C, 30 분) 태아 소 혈청 (FBS; Hyclone, 로건, UT, 고양이 # SH30088.03) </li><li> 1퍼센트 페니실린과 스트렙토 마이신 (Mediatech, 머내서스, VA, 고양이 # 30-002 - CI) </li><li> 1퍼센트 불필요한 아미노산 (Mediatech, 고양이 # 25-025 - CI) </li><li> 55 MM 2β - 메르 캅 토 에탄올 (시그마, 세인트 루이스, MO, 고양이 # M752) </li></ul></li></ul></li><li> 디메틸 sulfoxide (DMSO, Calbiochem, 라 호야, CA, 고양이 # 317275) </li><li> 항체 (eBioScience, 샌디에고, CA) <ul><li> 안티 인 경우에는 3 번 CD - FITC (cat. # 11-0031-85) </li><li> 안티 - CD4 - APC (cat. # 17-0041-83) </li><li> 안티 - CD8 - PE (cat. # 12-081-85) </li></ul></li><li> 보빈 알부민 혈청 (BSA, 생명 기술, 그랜드 아일랜드, NY,. 고양이 # 11018-017) </li><li> Concanavalin A (시그마 고양이 # C5275) </li><li> 1.8 ML 동결 튜브 (Nunc, 로스킬레, 덴마크, 고양이 # 368632) </li></ul>

에서 thymic 림프종 t - 세포 라인의 유도 atm - / -</sup과 p53의 - / -</sup 마우스

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

설립 세포 라인은 연구 실험 동물의 사용을 줄일 수있는 중요한 연구 도구입니다. 특정 같은 ATM과 같은 유전자 변형 생쥐의 변종 - / -와 p53의 - /이 - 일관되게 일찍 삶 1,2에서 thymic 림프종을 개발하고, 따라서, murine T - 세포 라인의 유도를위한 신뢰할 수있는 소스로 검색할 수 있습니다. 여기는 이전의 프로토콜 1,3에서 설명한 interleukins를 추가할 필요없이 설립 murine thymic T - 세포 림프종 라인의 개발을위한 세부적인 프로토콜을 제시한다. 종양은 hunched 자세의 관찰을 바탕으로 눈에 보이는 종양의 초기 표시에서 3~6개월 세 생쥐에서 수확 호흡, 가난한 정리하고 민감한 스트레인 1,4의 낭비를 보람 있었다. / - - [FVB/N- ATM tm1Led / J] 2 p53의 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 5 쥐가 우리는 성공적으로이 프로토콜을 사용하여 여러 개의 T - 세포 라인과 ATM의 근친 변종을 설립했습니다. 우리는 더 이상 기존 T - 세포 인구의 90 % 이상이 인 경우에는 3 번 CD, CD4와 CD8을 표현 것을 보여줍니다. 안정 설립 세포 라인과 일치, 현재 프로토콜을 사용하여 발생하는 T - 세포는 일년 이상 passaged되었습니다.

이 비디오에서는 마우스 thymic 림프종 세포 라인을 확립 프로토콜을 보여줍니다. 및 p53의 - / - - thymic 림프종과 생쥐이 프로토콜에 따라, 우리는 성공적으로 여러 ATM - /에서 T - 세포 라인을 설립했습니다.

에서 Thymic 림프종 T - 세포 라인의 유도 ATM - / -</sup과 p53의 - / -</sup 마우스

확립된 세포주는 연구에서 실험 동물의 사용을 줄일 수 있는 중요한 연구 도구입니다. 유전적으로 변형된 특정 계통의...

본 영상에서는 마우스 흉선 림프종을 확립하는 프로토콜을 시연합니다. 세포주. 종양은 육안으로 확인 가능한 종양이 가장 먼저 나타났을 때 3~6개월령의 마우스에서 수확하였습니다.굽은 자세, 호흡 곤란, 그루밍 불량 및 체중 감소 관찰을 통해, 본 프로토콜을 사용하여 여러 ATM null 및 P 53 null 흉선 림프종 세포주를 성공적으로 구축하였습니다. 첫 번째 파트에서는 종양을 가진 마우스에서 흉선 림프종을 수확하는 방법을 설명합니다. 본 프로토콜에 사용되는 마우스는 통상적으로 이산화탄소로 안락사시킵니다.해부 패드 위에 깨끗한 종이 타월을 놓고 70% ethanol을 분사합니다. 안락사시킨 마우스를 해부 패드 위에 올립니다. 동물의 양면에 ethanol을 분사합니다.마우스를 해부 패드 위에 고정하고 70% ethanol로 충분히 분무합니다. 멸균 가위와 핀셋을 사용하여 체강을 뚫지 않도록 주의하며 피부를 절개합니다. 새로운 멸균 도구를 사용하여 복강을 엽니다.장기에 손상이 가지 않도록 주의하십시오. 혈관을 손상시키지 않으면서 종양이 드러나도록 흉곽을 절개하고 벌려 흉강을 엽니다. 이 마우스는 흉강 전체를 차지할 정도로 종양이 잘 발달해 있습니다.종양을 다른 장기에서 분리하고, 종양 부피의 약 40~50%에 해당하는 조각을 절제합니다. 절제한 종양 조각을 차가운 PBS로 옮깁니다. 종양의 다른 조각을 추가로 채취하여 10% 포르말린에 고정합니다.조직학적 분석을 위해 종양의 남은 부분을 보관할 수 있습니다. 다른 분석을 위해, 이때 다른 장기들을 추가로 검사하고 고정할 수 있습니다. 본 섹션에서는 채취한 종양으로부터 흉선 림프종 세포를 배양하는 방법을 설명합니다.적출된 종양이 담긴 튜브를 70% ethanol로 소독한 후 조직 배양 후드로 옮깁니다. 멸균된 페트리 접시에 10 milliliters의 배양액을 넣습니다. bevel 방향이 바깥쪽을 향하도록 두 개의 멸균된 18 gauge 바늘을 구부려 피펫으로 조심스럽게 흡입하여 종양 조각을 페트리 접시로 옮깁니다.구부러진 바늘을 사용하여 종양 조각을 분리합니다. 디쉬를 가볍게 흔든 다음, 큰 종양 조각이 섞이지 않도록 기울여 세포 현탁액이 한쪽으로 모이게 합니다. 세포 현탁액을 흡입하여 50 milliliter 원심 분리 튜브에 옮깁니다.큰 종양 조각이 포함되지 않도록 주의합니다. 플레이트를 10 milliliters의 배지로 세척하고 동일한 튜브로 옮깁니다. 큰

derivation-of-thymic-lymphoma-t-cell-lines-from-atm-and-p53-mice

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

유도된 pluripotent 줄기 (IPS) 세포로부터 T lymphocytes의 생성은 T 세포 기반 immunotherapy에 대한 배아 줄기 세포를 사용하는 대체 방식을 제공합니다. 방법 중 하나를 이용하여...

T Lymphocytes쪽으로 유도 Pluripotent 줄기 세포의 분화 감독

이 동영상은 3차원 흉선 배양 시스템을 사용하여 iPSC 유래 미성숙 T 세포에서 기능적 항원 특이적 T 세포를 생성하는 프로토콜을 보여줍니다. iPSC 유래 미성숙 T 세포를 내인성 림프구가 고갈된 마우스 태아 흉선엽과 함께 배양한 결과, T 세포가 성공적으로 성숙하여 CD8αβ+ MHC 클래스 I+ iPSC 유래 흉선 이민자(iTE)를 형성했습니다.

iPSC 유래 흉선 이민자를 생성하기 위한 3차원 흉선 배양 시스템

마우스 배아 줄기 세포는 OP9-DL1 공동 배양 시스템을 사용하여 in vitro에서 T 세포로 분화할 수 있습니다. 이 절차를 성공적으로 수행하려면 시약/세포 유지 관리 및 주요 기술에 민감한 단계에 세심한 주의를 기울여야 합니다. 여기에서는 이러한 중요한 매개변수에 대해 논의하고 이 기술의 채택을 장려하기 위한 자세한 프로토콜을 제공합니다.

T 세포의 유도 체외 마우스 배아 줄기 세포에서

현재의 2D 배양 시스템이 in vivo 시나리오를 모방하지 않기 때문에 in vitro에서 수질 흉선 상피 세포를 연구하는 것은 대체로 성공적이지 못했습니다. 본 명세서에 기술된 3D 배양 시스템(변형된 피부 유기형 배양 모델)은 mTEC 증식, 분화 및 난잡한 유전자 발현의 유지를 재현하는 데 탁월한 것으로 입증되었습니다.

수질 흉선 상피 세포의 증식, 분화 및 무차별 유전자 발현을 지원하는 3D의 Organotypic 공동 문화 모델

이 보고서는 면역 결핍 마우스 수혜자의 신장 캡슐 아래에 다른 노화 기증자 마우스의 쥐 흉선을 이식하는 방법에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 이 접근법의 목표는 생체 내에서 T 세포 발달 및 흉선 선택 이벤트를 모델링하는 것입니다.

분리 및 다른 세 쥐 흉선 이식의 이식.

이 기사는 T 세포 자손의 생성, 표현형 및 수의 동역학을 분석하여 흉선 침전 전구 세포를 특성화하는 생체 내 및 시험관 내 방법론에 대해 설명합니다.

흉선의 특성 사용하여 마우스 배아에서 전구 세포를 정착<em&gt; 생체</em&gt;와<em&gt; 체외</em&gt; 분석 실험

bm12 림프구가 C57BL/6 수용자로 이식되는 것은 전신 홍반성 루푸스의 확립된 모델입니다. 여기에서는 이 모델을 사용하여 질병을 시작하는 방법과 유세포 분석을 통해 T 여포 보조 세포, 생식 중심 B 세포 및 형질 세포를 특성화하는 방법을 설명합니다.

C57BL / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

이 종이에 우리는 ELISA를 사용 하 여 마우스에서 T-종속 및 T-독립 면역 글로불린 (Ig) isotype 응답 하는 프로토콜을 설명 합니다. 이 방법은 단독으로 사용 하거나 흐름 함께에서 cytometry 쥐 T-종속 및 T 독립적인 항 원 면역 다음에 Ig 중재 하는 B 세포 isotype 응답 차이 식별 하는 연구를 수 있게 됩니다.

Thymus 종속 및 독립 Thymus 면역 글로불린 Isotype 반응 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 결과 사용 하 여 마우스의 특성

본 문서에서는 3차원(3D) 흉선 배양 시스템에 의해 종양 항원 특이적 유도 만능 줄기 세포 유래 흉선 이주자(iTE)를 생성하는 새로운 방법을 설명한다. iTE는 증식, 기억 형성 및 종양 억제 능력을 가진 순진한 T 세포와 밀접하게 관련된 T 세포의 균질한 서브세트이다.

뮤린 유도 만능 줄기 세포 유래 종양 항원 특이적 흉선 유이주자를 생성하는 3차원 흉선 배양 시스템

이 프로토콜은 추가 기능 분석을 위해 델타와 같은 4-발현 골수 기질 세포주 공동 배양 시스템(OP9-DL4)에서 레트로바이러스 형질도입 및 공동 배양에 이어 마우스 흉선에서 이중 음성 흉선 세포를 분리하는 것을 설명합니다.

T 세포 백혈병에서 종양 유전자를 연구하기 위해 델타와 같은 4-발현 간질 세포에서 쥐 흉선세포의 공동 배양 및 형질도입

현재 연구는 바이러스 특이적 TFH 세포의 조기 운명 헌신을 평가하고 이러한 세포에서 유전자 발현을 조작하기 위한 프로토콜을 보여줍니다.

급성 LCMV에 감염된 마우스에서 바이러스 특이적 여포 도우미 CD4+ T 세포의 조기 분화에 접근

배우세요 ATM-/- 및 p53-/- 마우스에서 흉선 림프종 T세포주를 유도하는 방법을. 이 프로토콜은 종양 면역학 및 암 생물학 연구에 활용됩니다.

에서 Thymic 림프종 T - 세포 라인의 유도 ATM^{- / -과 p53의^{- / - 마우스}}

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