기계적 균질화에 의한 마우스 뇌에서 여러 세포 유형 격리(Isolation of Multiple Cell Types from a Mouse Brain by Mechanical Homogenization)

0 views • 3:27 min • July 8th, 2025

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

티슈 그라인더 구성 요소를 얼음 위에 놓는 것부터 시작하십시오. 이 장치에는 절구와 직경이 다른 두 개의 유봉이 포함됩니다.

식힌 소금 완충액을 절구에 부은 다음 마우스 뇌 조직을 추가합니다.

완충액은 삼투압 균형을 유지하여 세포 구조와 기능을 보존합니다.

조직을 기계적으로 더 작은 조각으로 깎는 더 작은 직경의 유봉을 사용하여 여러 번 부드러운 스트로크로 조직을 갈

아줍니다.

다음으로, 더 큰 직경의 유봉으로 스트로크하여 조직이 구성 세포로 더 분해

되도록 합니다.

혼합물을 튜브로 옮기고 원심분리합니다.

상청액을 제거합니다.

식힌 소금 완충액을 첨가하고 소용돌이치게 하여 세포 덩어리와 미엘린을 부수십시오.

다음으로, 밀도 구배 배지를 추가하고 원심분리합니다.

모양과 질량의 차이로 인해 세포는 하층에 침전하고 파편과 미엘린은 최상층에 축적됩니다.

상청액을 버리십시오.

추가 사용을 위해 다중 세포 현탁액을 얻기 위해 적절한 용액을 추가합니다.

조직 균질화를 위해 Dounce 조직 분쇄기의 사전 냉각된 유리 모르타르에 사전 냉각된 HBSS 3밀리리터를 추가하고 수확된 뇌 중 하나의 절반을 모르타르로 옮깁니다. 유봉 A를 10회 침지한 다음 유봉 B를 10회 침지한 다음 균질화된 혼합물을 새로운 15밀리리터 원추형 튜브로 옮깁니다.

원심분리를 위해 미리 냉각된 HBSS로 튜브를 최종 부피 10밀리리터까지 채우고 샘플을 얼음 위에 보관하기 전에 소용돌이가 있는 7밀리리터의 신선한 HBSS에 펠릿을 재현탁합니다. 파편 제거를 위해 분해 또는 균질화된 각 샘플에 사전 냉각된 등장성 용액 3밀리리터를 추가하고 샘플을 부드럽게 소용돌이치게 하여 균일하게 혼합되었는지 확인합니다.

다음으로, 샘플을 원심분리하고 용액 표면에 떠 있는 희끄무레한 파편과 미엘린의 디스크를 조심스럽게 제거합니다. 파편이 버려지면 펠릿을 방해하지 않고 각 튜브에서 마지막 100마이크로리터를 제외한 상청액을 모두 수집합니다. 개별 1.5밀리리터 미세 원심분리기 튜브로 옮기기 위해 각 펠릿을 1밀리리터의 FACS/BL 용액에 재현탁합니다.

입자 용액으로 원심분리한 후에는 시료 손실을 방지하기 위해 세포 펠릿을 제거하지 않고 파편 디스크와 상청액을 매우 조심스럽게 제거하는 것이 중요합니다.

원심분리 후, 각 튜브에서 상청액을 조심스럽게 흡인하고 튜브당 350마이크로리터의 신선한 FACS/BL에 펠릿을 재현탁합니다.

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Last updated: 27 June 2026