Isolating Immune Cells from Mouse Choroid Plexuses

0 조회수4:13 • July 8th, 2025

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

마우스의 뇌 등쪽을 위로 향하게 합니다.

현미경으로 대뇌 반구를 분리합니다. 피질을 당긴 다음 해마를 당겨 측심실과 제3뇌실을 노출시킵니다.

두 개의 측면 맥락막 신경총을 수집합니다. 이들은 긴 베일처럼 측뇌실을 감싸고 있는 면역 세포가 풍부한 뇌 구조입니다.

상 표면을 가진 짧은 구조인 제3뇌실 맥락막 신경총을 수집합니다.

소뇌를 분리하여 제4뇌실을 노출시킵니다.

상 표면을 가진 긴 구형 구조인 제4뇌실 맥락막 신경총을 수집합니다.

조직 무결성을 유지하기 위해 완충 식염수가 담긴 튜브에 모든 맥락막 신경총을 넣습니다.

소화 효소 용액을 첨가하고 교반하면서 배양합니다.

효소는 세포외 기질을 분해하고 세포를 느슨하게 합니다.

효소를 비활성화하기 위해 적절한 완충액을 추가합니다.

세포를 침전시키기 위해 원심분리기. 상청액을 버리고 추가 분석을 위해 세포를 새로운 완충액에 재현탁합니다.

시작하려면 C57 검은색 6 마우스 등쪽에서 해부된 뇌를 페트리 접시에 배치하고 접시를 쌍안 확대경의 대물렌즈 아래에 놓습니다. 겸자를 사용하여 뇌를 제자리에 유지하면서 반구 사이의 정중선을 통해 다른 한 쌍의 겸자의 두 끝

을 아래로 삽입합니다.

집게를 사용하여 뇌골과 해마가 있는 피질을 중격에서 멀리 당겨 측심실과 제3뇌실의 일부를 노출시킵니다. 외측 맥락막 신경총을 측심실을 감싸고 양쪽 끝이 벌어지는 긴 베일로 식별합니다. 그런 다음 얇은 겸자의 두 끝을 사용하여 외측 맥락막 신경총을 수집합니다. 해마의 뒤쪽 주름에 가려진 삼각형 뒤쪽 부분을 모으도록 주의하십시오.

다음으로, 반대쪽 반구의 뇌량과 해마가 있는 피질을 중격에서 멀리 당겨 전체 제3뇌실과 반대쪽 측뇌실을 노출시킵니다. 미세한 집게를 사용하여 입상 표면 측면을 가진 짧은 구조로 식별된 세 번째 맥락막 신경총을 수집합니다. 그런 다음 다른 외측 맥락막 신경총을 수집합니다.

그런 다음 집게의 두 끝을 소뇌와 중뇌 사이에 삽입하고 뇌교와 수질에서 소뇌를 분리하여 제4뇌실을 노출시킵니다. 그런 다음 네 번째 맥락막 신경총을 소뇌와 수질 사이의 측면 오른쪽 끝에서 왼쪽 끝까지 네 번째 뇌실을 늘어선 입상 표면 측면을 가진 긴 구형 구조로 식별합니다. 미세한 집게를 사용하여 네 번째 맥락막 신경총을 수집합니다.

수집된 모든 맥락막 신경총을 콜라게나제 IV와 함께 배양한 후, 약 10회 부드럽게 위아래로 피펫팅하여 해리를 마무리합니다. 그런 다음 튜브를 MACS 완충액으로 1.5밀리리터까지 채워 콜라게나제 IV 활성을 중지합니다. 다음으로, 세포를 원심분리하고 상청액을 버린 후 1.5밀리리터의 MACS 완충액으로 세포를 세척합니다. 적절한 보상 비드와 항체 용액을 첨가한 후 샘플을 얼음 위에서 30-45분 동안 배양하여 빛 노출로부터 보호합니다. 그런 다음 튜브에 1.5밀리리터의 MACS 완충액을 채웁니다.

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마지막 업데이트: 18 7월 2026