0 조회수 • 2:38 분 • July 8th, 2025
다양한 강성의 하이드로겔로 코팅된 커버슬립에서 성장한 부착성 신경능선 세포 배양물을 섭취하십시오. 완충액으로 세포를 세척하십시오.
파라포름알데히드를 첨가하여 세포를 고정하고 세포 형태를 보존합니다.
과도한 파라포름알데히드를 제거하기 위해 완충액으로 세포를 세척합니다.
다음으로, 비이온성 세제를 첨가하여 세포막을 투과화합니다.
과도한 세제를 제거하기 위해 완충액으로 세포를 세척하십시오.
그런 다음 비특이적 결합을 방지하기 위해 차단 솔루션을 도입합니다.
액틴 필라멘트에 결합하는 고친화성 필라멘트 액틴 프로브와 함께 세포를 배양합니다.
버퍼로 세포를 세척하여 결합되지 않은 프로브를 제거합니다.
형광 핵 염료를 첨가하여 핵을 염색한 다음 완충액으로 세척하여 여분의 염료를 제거합니다.
커버슬립에 마운팅 매체를 바르고 형광 현미경으로 염색된 세포를 검사합니다.
더 단단한 하이드로겔에서 성장한 세포는 더 부드러운 하이드로겔에서 성장한 세포보다 액틴 필라멘트 형성이 증가하고 더 퍼진 형태를 보여줍니다.
핀셋을 사용하여 커버슬립을 새 플레이트로 운반하여 플레이트에 직접 성장한 세포의 잘못된 신호를 최소화합니다. 그런 다음 실온에서 500마이크로리터의 0.1% Triton X-100으로 세포를 처리하기 전에 500마이크로리터의 4% 파라포름알데히드를 사용하여 10분 동안
세포를 고정합니다.15분 후, 250마이크로리터의 10% 당나귀 혈청으로 세포를 차단합니다. 10% 당나귀 혈청 250마이크로리터에 1 내지 400의 희석액으로 팔로이딘으로 세포를 염색한 다음 DAPI와 함께 10분 동안 배양합니다.
각 웰에 3-4방울의 마운팅 배지를 추가하기 전에 PBS로 2분 동안 세포를 세척합니다. 형광 현미경에서 개별 채널과 병합 채널을 생성하는 하이드로겔 샘플당 최소 3개의 무작위 프레임의 이미지를 캡처합니다.