Name: 햄스터의 지느러미 피부에 피부 Leishmaniasis : Antileishmanial 약물의 상영을위한 유용한 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 36 s
Description: 배우세요 피부 리슈마니아시스 연구를 위한 햄스터 모델 최적화 방법을. 피내 접종 기법으로 병변 특성화와 치료 적용을 개선하며 동물 복지를 유지합니다.

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COLCIENCIAS과 열대 질병에 대한 제품 개발을위한 센터 - - CIDEPRO이 연구는 Antioquia 대학 (CODI), 과학 기술 개발을위한 콜롬비아 연구소에서 연구위원회에서 교부금에 의해 지원되었다.

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관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

피부 leishmaniasis는 열대와 neotropics의 발병이다. 그것은 종종 있기 때문에 작은 피부 nodules에서 총 점막 조직 파괴에 이르기까지 임상 발현의 다양한 스펙트럼의 질병의 그룹로 언급됩니다. 대부분의 사용 가능한 약물은 비용이 많이 드는이며, 장기 치료 regimens가 필요하고 새로운 약물의 발견 necessitating, 점점 비효 해지고 있습니다. 마우스 모델은 널리 사용되고 있지만, 일부 단점을 가지고있다. 높은 BALB / C에서 본대로 확대 궤양 병변을 특징으로 영구적인 감염 취약하고 따라서 예를 들어, dermotropic Leishmania 종의 promastigotes의 intradermal 주입 후 개발 병변에 근거하여, 생쥐는 세 그룹으로 나눌 수 DBA / 2, DBA / 3 생쥐, CBA / H, C3H/He 및 A / J와 매우 강한 그룹에서 따로 병변 typi에서 본대로 병변은 8 주 이내에 해결할 수있는 비교...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 유형 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 케타민을 </td><td> 시약 </td><td> 홀리데이 - 스콧 SA </td><td></td></tr><tr><td> Xilacine </td><td> 시약 </td><td> 합성 </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 시약 </td><td> GIBCO </td><td> 14190-136 </td></tr><tr><td> 디지털 캘리퍼스 </td><td> 장비 </td><td> 어부 </td><td> 15-077-958 </td></tr><tr><td> Giemsa </td><td> 시약 </td><td> 시그마 </td><td> GS1L-1L </td></tr><tr><td> 포르말린 </td><td> 시약 </td><td> 노바 실험실 </td><td> 11,273 </td></tr><tr><td> 파라핀 </td><td> 시약 </td><td> Pechiney 플라스틱 포장 </td><td> PM-996 </td></tr><tr><td> Haemotoxilin </td><td> 시약 </td><td> 노바 실험실 </td><td&gt; 10870103 </td></tr><tr><td> Eosin </td><td></td><td> 노바 실험실 </td><td> 10870203 </td></tr><tr><td> 코닥 Ektachem 건식 화학 </td><td> 장비 </td><td> 코닥 Ektachem </td><td> DT-60 </td></tr><tr><td> meglumine antimoniate </td><td> 시약 </td><td> Aventis </td><td></td></tr><tr><td> 현미경 사용법 </td><td> 장비 </td><td> 니콘 </td><td> YS2-T </td></tr></tbody></table>

햄스터의 지느러미 피부에 피부 leishmaniasis : antileishmanial 약물의 상영을위한 유용한 모델

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

전통적으로, 햄스터는 실험적으로 주둥이이나 노상 강도에 주사한다. 그러나 이들 사이트에 궤양이 항상 발생하지, 병변 크기의 측정이 어려운 절차이며 동물 때문에 병변으로 인해 먹고 호흡하며 이동하기 어려움을 보여줍니다. 피부 leishmaniasis, 젊은 성인 남성과 여성의 골든 햄스터를위한 햄스터 모델을 최적화하기 위해서는 (Mesocricetus auratus) 1-1.5 X L0 7 Leishmania 종의 promastigotes 이후 병변의 진행과 함께 지느러미 피부에 intradermally 주입되었다이 최대에 대한 평가되었다 16주 게시물 감염. 그들은 다른 종족에 의해 감염에 감염될만큼 그것이 Leishmania 상대로 마약을 평가할 바이오 모델이 적절한 것으로 간주되기 때문에 골든 햄스터가 선택되었다. 만성하지만 제어 병변, 그리고 인간에서 관찰 이들과 유사한 증상과 임상 진화의 햄스터 결과의 피부 감염. 따라서 식당 Oindurations 및 궤양의 면적에 따라 병변의 크기를 측정하여 감염의 F 정도는 가능합니다. 이러한 접근 방식은 접종시의 다양성과 쉬운 관리를 입증되었습니다 다른 치료 후 임상 샘플을 다른 방법과 취득을 통해 전형적인 병변 (궤양), 트리 트먼트의 응용 프로그램을 후속 조치 및 특성. 이 방법은 운동과 관련하여 동물의 삶의 질, 음식, 물, 놀이와 isalso가 보존 사회 활동에 대한 검색을 사용함으로써.

의 intradermal 주입하여 피부 leishmaniasis에 대한 실험 햄스터 모델의 최적화<em&gt; Leishmania</em&gt; 지느러미 피부에 promastigotes. 이 방법은 접종시, 후속, 병변의 특성, 치료의 적용과 임상 샘플을 얻는 데 유용합니다. 음식과 물 공급을 위해 운동, 검색은 연극과 사회 활동이 보존됩니다.

햄스터의 지느러미 피부에 피부 Leishmaniasis : Antileishmanial 약물의 상영을위한 유용한 모델

전통적으로 햄스터는 코 또는 발바닥에 실험적으로 접종합니다. 하지만 이러한 부위에서는 궤양이 항상 발생하는 것은 아니며, ...의 측정은

피부 리슈마니아증(cutaneous Leishmania)의 햄스터 모델을 최적화하기 위해, 본 논문에서는 등 쪽 피부에 피내 접종을 수행하는 방법을 설명합니다. 이 접근 방식은 접종 시점의 관리와 추적 관찰의 용이성, 전형적인 병변의 특성 분석, 다양한 경로를 통한 치료제 적용, 부수적 임상 시료 채취, 그리고 모델의 삶의 질을 크게 저하시키지 않으면서 유망한 다양한 화합물의 데이터를 얻는 데 있어 그 다각적인 활용 가능성이 입증되었습니다.이동, 먹이 및 물 탐색, 놀이 및 사회적 활동에 관하여, 신중하고 확실하며 안정적인 동작으로, 햄스터가 가진 풍부한 피부 조직을 이용하여 손가락으로 목 기부를 잡아 동물을 고정해야 합니다. 동물이 편안함을 느낄 수 있도록 손바닥을 이용하여 지지면을 제공합니다. 동물이 안정되면, 검지와 엄지로 목과 볼주머니의 피부를 늘리고, 나머지 손가락으로는 주머니 피부를 손바닥 쪽으로 단단히 눌러 동물을 완전히 움직이지 못하게 고정합니다.암컷의 뚜렷한 특징은 생후 1주 차부터 명확하게 나타나는 Mi Mary 라인의 가시화입니다. 또 다른 특징은 짧은 생식기-항문 거리입니다. 수컷의 성별 확인의 경우, 고환이 포함된 다람쥐낭(squirrel sac)을 관찰할 수 있습니다.이와 더불어, 결과적으로 항문과 피부의 4분면 사이의 거리가 더 멀어집니다. 동물의 목 기저부를 단단히 잡고, 사전에 교정된 저울 위에 놓인 트랩이나 상자에 넣은 뒤 몇 초간 대기합니다. 동물이 해당 공간에서 안정을 찾으면, 무게를 측정하고 즉시 적절한 양식에 기록합니다.햄스터 식별을 위해 가장 흔히 사용되는 방법은 피리산(piri acid)을 이용한 피부 영역 염색과 귀 천공 후 염색입니다. 피리산을 사용하는 절차는 다음과 같습니다. 앞서 언급한 방법으로 동물을 잡고, 피리산에 적신 면봉으로 표식할 부위(통상적으로 좌측 또는 우측의 전지나 후지)를 적십니다. 이때 표식이 실험 종료 시까지 유지될 수 있도록 충분한 양을 사용하십시오. 이 식별 방법을 사용할 때는 동물을 진정시키거나 마취 상태로 둘 것을 권장합니다.엄격하게 필수적인 것은 아니지만, U to 태그를 선택하고 알코올로 소독합니다. 그 후, 혈관이 있는 부위를 피해 천공할 위치를 선택합니다. 그런 다음 설치류용 이어 펀치를 사용하여 귀를 뚫으며, 이 과정은 신속하면서도 단호하고 안전하게 수행되어야 합니다.한 케이지당 2~3마리의 동물을 수용해야 합니다. 연간 최대 2개의 구멍을 낼 수 있습니다. 동물에게 마취제를 투여할 때는, 햄스터의 움직임을 방지할 수 있도록 서두에 언급된 방식대로 동물을 고정해야 합니다.앙와위 상태에서 70% alcohol을 사용하여 약물이 투여될 복부 부위를 소독하고 깨끗한 솜으로 건조시킵니다. 장기가 이동할 수 있도록 동물의 머리 쪽을 약간 기울인 상태에서 복강 내 투여 경로를 사용합니다. 바늘은 척추와 약간 평행하게 완전히 삽입합니다.장기가 천자되지 않았음을 확인하기 위해 먼저 흡인을 수행한 후, 동물에 접종할 피부 부위를 제모하기 위해 약물을 도포합니다. 적절한 위치를 선정하여 꼬리 기저부에서 2cm 떨어진 지점에 표시를 합니다. 생물안전작업대 내에서 가위를 사용하여 약 2cm²의 면적을 조심스럽게 제모하여 부상을 방지하며, 마취된 햄스터에게 1mL 주사기를 사용하여 대수 증식기(logarithmic phase)의 알려진 양 100µL를 접종합니다.leishmania에 감염된 생쥐를 준비합니다. 사고를 방지하기 위해 주사기에 바늘을 단단히 고정해야 합니다. 멸균 식염수를 적신 솜을 사용하여 동물의 제모 부위를 한 방향으로 닦아냅니다.그 후 바늘의 사면이 위를 향하게 하여 햄스터의 피부를 관통시키되, 바늘이 피하 조직에 천천히 점진적으로 진입하도록 합니다. 접종액을 주입하여 피하 팽진을 형성한 후, 바늘을 약간 회전시키며 당겨 제거합니다. 사용한 모든 재료는 폐기합니다.leishmania에 의해 생성된 피부 병변을 모니터링하기 위한 생물 보안 표준에 따라, 병변의 정확한 측정을 용이하게 하기 위해 동물을 트랩에 넣어 초기 고정하는 것이 권장됩니다. 접종된 피부 부위를 촉진하여 경결 및 형성된 궤양의 범위를 정하고, 디지털 캘리퍼를 사용하여 궤양의 너비를 측정한 후 임상 모니터링용으로 설계된 양식에 밀리미터(mm) 단위로 기록합니다. 마찬가지로 궤양의 길이 또한 측정하며, 이는 피하 접종 후에도 반드시 기록되어야 합니다.제시된 것과 유사한 전형적인 병변을 얻기까지는 보통 4주에서 5주의 대기 시간이 소요됩니다. 인간의 경우, 동물은 병변이 있는 등 부위를 노출시킬 수 있도록 설계된 특수 고정 장치에 고정됩니다.스포이드를 사용하여 화합물을 상처 부위에 가한 후, 액체가 마를 때까지 기다렸다가 동물을 케이지로 돌려보냅니다. 위 그림과 같이 동물을 단단히 고정한 상태에서, 가장 능숙한 손을 사용하여 알코올과 솜으로 해당 부위를 한 방향으로 소독합니다. 그런 다음 동일한 손을 사용하여 최대 200 µL 용량의 약물이 담긴 주사기를 조작합니다.약물은 뒷다리의 반건양근(semitendinosus muscle) 또는 반막양근(semimembranosus muscle)을 통해 주사합니다. 약물을 수일 동안 투여해야 하는 경우, 동물의 불편함과 손상을 방지하기 위해 투여 부위(사지)를 교체해야 합니다. 숙련도가 낮은 경우, 앞서 설명한 대로 동물을 고정합니다. 다른 한 손으로는 구강 또는 위장 프로브를 조작합니다.1 mL 주사기와 연결하여 200 µL 이하의 양을 편리하게 투여할 수 있는 14게이지 바늘을 사용합니다. 햄스터는 처리 부위가 노출되도록 고정 장치로 단단히 고정하며, 해당 부위를 멸균 솜과 식염수로 한 방향으로 한 번 닦아냅니다. 1 mL 주사기의 바늘 끝(bevel)을 아래로 향하게 하여 100 µL 이하의 부피로 병변의 정점에서 단일 피하 접근법을 수행하며, 희생 전 병변 부위 전체를 덮도록 약물을 서서히 투여합니다. 동물은 안락사 과정을 위해 앞서 설명한 방식대로 마취합니다.햄스터를 이산화탄소 실린더 또는 네트워크에 연결된 밀폐된 아크릴 챔버로 옮깁니다. 박제 표면에 고정된 희생 햄스터를 샘플링하기 위해 밸브를 수분 동안 천천히 엽니다. 피부와 내부 장기의 흔적을 확인하기 위해 유리 조명이 필요합니다.조직병리학적 샘플을 위한 10% formalin이 담긴 15 milliliter falcon tube와 해부 도구, 가위, 핀셋, 메스, 핸들 및 메스날이 준비물로 포함됩니다. 마지막으로, 피부 병변 또는 흉터, 간, 비장, 신장 및 팝리트 림프절(popliteal lymph nodes) 샘플 내 leishmania의 존재 여부를 Giemsa 염색 도말 표본 검사와 해당 조직의 조직병리학적 검사를 통해 직접 확인합니다. 생검 표본은 10% formalin으로 고정하고 파라핀에 포매합니다.고정된 조직을 5 µm 두께로 절편하여 헤마톡실린-에오신(hematoxylin and eosin)으로 염색한 후, 1000배 오일 침강 렌즈가 장착된 광학 현미경으로 관찰하였습니다. 이는 미세 구조, 세포 침윤의 특성 및 기생충의 유무를 연구하기 위함입니다. 이후 광학 현미경 사진을 촬영하고 디지털 이미지를 캡처하였습니다.모든 재료는 생물학적 폐기물 처리를 위한 생물안전 규정에 따라 폐기해야 합니다. 골든 햄스터 Mi는 구세계 및 신세계 리슈마니아 종 모두에 의해 유발되는 피부 병변을 연구하는 데 특히 유용함이 입증되었습니다. 프로마스티고트(promastigotes)를 접종하면 접종 후 1~2개월 사이에 피부 병변이 발생할 수 있습니다.햄스터는 실험적 감염 후 예측 가능한 질병 진행 과정을 보이며, 이는 인간에게서 관찰되는 것과 유사한 병변의 발생을 특징으로 합니다. 햄스터 모델에서 피부 병변의 만성적인 특성 덕분에 장기간에 걸친 치료적 개입의 모니터링이 가능합니다. 전통적으로 햄스터는 코 또는 발바닥에 실험적으로 접종되지만, 이러한 부위에서는 결절이 항상 발생하는 것은 아닙니다. 또한, 병변 크기의 측정이 어렵고 햄스터가 먹이 섭취, 호흡 및 이동에 어려움을 겪는 문제가 있습니다.요약하자면, 이 접근 방식은 햄스터의 등 피부에 유도된 피부 리슈만편모충증(cutaneous leishmaniasis)의 임상 병리학적 특징이 인간의 질병과 매우 유사하지만, 일반적으로 사용되는 해양성 모델과는 현저히 다르다는 것을 보여줍니다. 따라서 햄스터의 등 피부를 이용한 실험적 감염은 항리슈만편모충제(anti-leishmanial drugs) 후보 화합물의 잠재력을 검증하는 데 유용한 모델이 됩니다.

cutaneous-leishmaniasis-dorsal-skin-hamsters-useful-model-for

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

라이브 호스트에 트렌스 제닉 Leishmania의 기생충의 생체내 이미징에서

감염 THP1 셀과 기생충 - 구조 및 변화...

세포에 붙어 Antileishmanial 검사에 대한 기생충 구조 및 변화 분석<em&gt; Leishmania donovani</emTHP1 인간 급성 백혈병 Monocytic 셀 라인에서&gt; Amastigotes

이 기사는 이미지 획득 및 분석을 위한 특정 방법론과 함께 생체 내 현미경 이미징을 사용하여 마우스 간 혈관 구조의 개별 혈관 내 혈류 속도를 동적으로 측정하고 정량화하는 자세한 방법에 대해 보고합니다.

다음 간 생체 내에 현미경 이미징<em&gt; 슈만 편모충</em&gt; 감염 : 간 혈류의 평가

여기에서, 우리는 Leishmania amazonensis를가진 마우스의 절단 감염을 평가하기 위하여 컴파일된 프로토콜을 제출합니다. 이것은 기생충 바이러스를 공부하기 위한 믿을 수 있는 방법, 감염에 척추동물 호스트 반응의 체계적인 보기를 허용하.

리슈마니아 아마존과 생체 감염에서 마우스에서 기생충 독성을 평가하기 위해

여기에서는 pLEXSY 시스템을 사용하여 안정적인 통합 이식 유전자로서 eGFP에 대한 유전자를 발현하는 L . panamensis 및 L . donovani 균주를 생성하는 데 사용되는 방법론을 설명합니다. 형질주입된 기생충은 희석을 제한하여 클로닝하고, 두 종 모두에서 가장 높은 형광 강도를 갖는 클론을 약물 스크리닝 분석에 추가로 사용하기 위해 선택했습니다.

eGFP의 구성적 발현을 통한 리슈만편모충 종 균주의 개발

여기에서는 생물 발광 이미징 및 PCR에 의해 L. infantum-Luc에 복강내(IP) 또는 치은내(IG)를 통해 감염된 골든 햄스터에 대한 종단 평가를 제시합니다. 햄스터는 감염 후 1일(1dpi), 감염 1주일(8dpi), 감염 후 3주(22dpi)에 평가를 받고 50번째 dpi와 감염 후 8개월에 안락사시켰다.

생체 내 루시페라아제를 발현하는 Axenic Amastigotes의 치은 접종에 의한 Leishmania infantum-infected Hamsters의 이미징

손쥐 골수 이식은 인간에 이식 - 대 - 호스트 질병에 관한 면역 메커니즘을 연구 할 수있는 널리 사용되는 기술이다. T 세포 거래 패턴을 모니터링 할 수있는...

이식 - 대 - 호스트 질병의 유도 및<em&gt; 생체 내</emMHC 검색 손쥐 모델을 사용&gt; T 셀 모니터링

thermostability 공학 분야에 해당 소설 감독 진화 방법은 bacteriolytic 효소 용으로 개발하고 결과적으로 확인되었습니다. 고온의 부화 후 야생 형 단백질에 비해 무작위 mutagenesis의 한 라운드, 발전 bacteriolytic 효소, PlyC 29C3는 두 번 잔류 활동보다 더 큰 표시 한 후.

내열 Bacteriolytic 효소의 감독 진화에 대한 새로운 검사 방법

바이러스에 의한 유전자 침묵은 식물의 nonhost 저항성에 관련된 유전자를 식별하기위한 유용한 도구입니다. 우리는 nonhost 병원균에 감염 유전자 침묵 식물을 식별 GFPuv을 표현 세균성 병원체의 사용을 보여줍니다. 이 방법은 빠르고, 간단하고 대규모 검사와 유사한 프로토콜이 다양한 식물 미생물 상호 작용을 연구에 적용 할 수있는 용이하게합니다.

유전자의 식별을위한 VIGS - 중재 앞으로 유전학 검사는 Nonhost 저항에 참여

이 프로토콜은 슬라이드 챔버 모델을 사용하여 숙주 인자에 노출된 후 생물막 발달의 시각화를 설명합니다. 이 모델을 사용하면 컴퓨터 소프트웨어 프로그램을 사용하여 생물막 매개변수를 분석할 뿐만 아니라 생물막 개발을 직접 시각화할 수 있습니다.

챔버의 coverglass 모델을 사용하여 바이오 필름 개발에 객담의 효과를 시각화

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햄스터의 지느러미 피부에 피부 Leishmaniasis : Antileishmanial 약물의 상영을위한 유용한 모델

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