Zebrafish의 일반 관리 및 유지 관리 (

본 프로토콜에서는 제브라피쉬 실험실의 정기적인 관리 및 유지 보수 방법을 설명합니다. 제브라피쉬 연구에 대한 관심이 높아짐에 따라 제브라피쉬 사육 시설을 구축하고 유지해야 할 필요성 또한 증가하고 있습니다. 제브라피쉬 실험실 유지 관리에 관한 문헌은 존재하지만, 간결한 비디오 프로토콜은 부족한 실정입니다.

이 영상에서는 제브라피쉬 유생의 시스템 유지 관리, 먹이 공급, 번식 및 사육 방법에 대해 설명합니다. 안녕하세요, 대학교 의과대학의 ABH입니다. 안녕하세요, Thee Institution의 Manchi입니다.

오늘은 제브라피쉬 실험실의 정기적인 관리 및 유지보수 방법을 보여드리겠습니다. 제브라피쉬는 유전학, 약리학 및 행동 연구 분야에서 널리 활용되고 있습니다. 유지관리가 쉽고 발달 속도가 빠르기 때문에 유전자 변형이 용이하며 고효율 약물 스크리닝에 적합합니다.

이 파트에서는 제브라피시 사육법에 대한 아이디어를 물고기를 사용하는 사용자들과 새로운 수조 시설 구축을 고려하고 있는 연구자들에게 제공하고자 합니다. 그럼 시작하겠습니다. 여러 회사에서 어류 사육 시스템을 제공하고 있지만, 여기서는 aquatic habitats의 시스템을 사용합니다.

본 연구실에서 제브라피쉬는 26~28.5 °C의 온도와 14:10의 명암 주기로 사육됩니다. 제브라피쉬는 시스템 수를 지속적으로 여과하고 폭기하는 순환 시스템에서 사육됩니다. 건강한 수생 환경에 필요한 수질을 유지하기 위해, 본 시스템 내에서는 다양한 유형의 필터 세트를 활용합니다.

수조의 물은 다시 수조로 순환되기 전에 필터 패드, 캐니스터 필터, 생물학적 필터, 활성탄 필터 및 UV 필터를 통과합니다. 제브라피쉬 시스템에는 염소를 제거하거나 숙성시킨 물을 사용합니다. 물은 최소 48시간 동안 숙성시켜 염소를 제거할 수 있습니다.

매일 시스템 용수의 pH를 확인하고 6.8에서 7.5 사이로 유지하십시오. 탄산수소나트륨을 사용하여 어항을 정기적으로 세척해야 합니다. 어항을 세척하려면 해당 어항으로 가는 물의 흐름을 차단하고, 어항을 뒤로 기울여 과잉수를 배출한 후 시스템에서 어항을 조심스럽게 분리하십시오.

깨끗한 수조를 준비하고 시스템 워터를 채웁니다. 뜰채를 사용하여 물고기를 이 수조로 조심스럽게 옮깁니다. 뚜껑을 닫고 수조 이름표를 주의해서 다시 부착합니다.

탱크를 시스템에 배치합니다. 튜브를 다시 탱크에 넣고 용수 공급 장치를 켭니다. 70% ethanol로 뜰채와 탱크를 살균합니다.

물로 헹군 후 건조시키십시오. 재사용하기 전에 순환 시스템의 필터를 정기적으로 점검하고 교체하여 적절한 기능이 유지되도록 해야 합니다.

120 micron 필터 패드는 매일 확인하여 물의 흐름 방향으로 재배치하고, 이후 교체합니다. 캐니스터 필터는 매주 교체해야 합니다. 캐니스터 필터를 교체하려면 렌치나 손을 사용하여 제거하십시오.

물이 쏟아지는 것을 방지하기 위해 아래에 플라스틱 시트나 수건을 깝니다. 새 캐니스터와 필터를 삽입하고 장치를 시스템에 다시 장착합니다. 손과 렌치를 사용하여 조심스럽게 조입니다.

필요한 경우, 활성탄 필터를 2주마다 교체해야 합니다. 활성탄 필터를 교체하려면 필터를 조심스럽게 제거하십시오. 렌치를 사용하여 필터 내의 기존 활성탄을 버리고 새 활성탄으로 교체하십시오.

카본 홀더를 다시 장착하고 필터 유닛에 다시 넣습니다. 필터 유닛을 시스템에 다시 장착합니다. 시스템의 전원을 켜고 물이 필터로 흐르는지 확인합니다.

생물학적 필터는 6개월마다 세척해야 합니다. 생물학적 필터를 교체하려면 시스템에서 필터를 제거하십시오. 압력 해제 버튼을 눌러 필터의 압력을 해제하십시오.

필터를 돌려 빼고 뚜껑을 제거합니다. 내용물을 체 거름 용기에 부어 Cy Oex를 물과 분리합니다. Cy Oex가 매우 오염된 경우 교체하십시오.

필터를 새 cy ax로 채웁니다. 장치에 시스템 워터를 채웁니다. 필터 뚜껑을 닫고 장치를 다시 장착한 후 전원을 켭니다.

UV 필터는 생물학적 오염물을 제어하는 데 사용되며 9~10개월마다 교체해야 합니다. 제브라피쉬는 건조 사료나 브라인 쉬림프와 같은 생먹이를 통해 먹이를 줄 수 있으며, 브라인 쉬림프 알은 지역 반려동물 용품점에서 구입하여 여기 설명된 간단한 단계를 따라 실험실에서 부화시킬 수 있습니다. 시스템 워터에 적해염을 녹여 리터당 30~35 g의 용액을 만듭니다.

브라인 쉬림프 부화기에 소금물을 채우고, 리터당 1.2 큰술의 농도로 새우 알을 추가합니다. 에어 펌프로 부화기를 강하게 폭기하며 브라인 쉬림프 알을 약 48시간 동안 부화시킵니다. 에어 파이프를 제거하고 배양액이 4~5분 동안 가라앉도록 둡니다.

수정된 브라인 쉬림프가 부화기의 바닥에 모이면, 부화기 하단의 탭을 사용하여 수정되지 않은 알이 포함된 첫 번째 흐름을 버립니다. 그런 다음 수정된 브라인 쉬림프를 수집합니다. 소금물에서 브라인 쉬림프를 분리합니다.

브라인 쉬림프 수집망을 사용합니다. 시스템수를 사용하여 브라인 쉬림프를 용기에 헹굽니다. 브라인 쉬림프가 용기 바닥에 고농도로 모이면 제브라피쉬에게 먹일 준비가 된 것입니다. 피펫이나 스포이드를 사용하여 물고기에게 브라인 쉬림프를 공급합니다.

사료 공급량은 개별 수조의 개체 수에 따라 달라집니다. 물속에 사료를 주입하면 배고픈 물고기들이 브라인 쉬림프를 잡기 위해 헤엄치며, 이는 물고기의 규칙적인 운동을 위해 중요합니다. 건식 급이는 수중 서식지 전용 사료 공급기나 단순한 스푼을 사용하여 수행할 수 있습니다.

제브라피쉬는 빛이 들어오는 시점에 산란을 시작합니다. 알은 집단 산란(inta) 또는 쌍 산란(pairwise breeding)을 통해 얻을 수 있습니다. 집단 산란은 노동 효율성이 더 높아 일반적인 배아 수집에 사용되는 반면, 유전자나 돌연변이 스크리닝이 필요한 경우에는 쌍 산란이 선호됩니다. 수조 내 산란을 위해서는 수조용 산란 장치를 조립하여 수조에 천천히 넣으십시오.

조명이 켜진 후, 물고기가 교배할 수 있도록 브리딩 세트를 수조 안에 약 15분 동안 둔 다음, 브리더를 수조에서 꺼내 알을 수집합니다. 쌍별 브리딩은 늦은 오후에 브리딩 수조를 조립하고 시스템 워터를 채워 준비합니다. 암컷 한 마리와 수컷 한 마리를 수조의 서로 반대편에 넣습니다.

암컷은 배가 더 크기 때문에 수컷과 구별할 수 있습니다. 다음 날 아침에 격리판을 제거하십시오. 점등 후 곧바로, 물고기를 방해하지 않고 20분 동안 또는 탱크 바닥에 충분한 수의 배아가 산란될 때까지 짝짓기를 하도록 둡니다.

교배 후, 물고기를 수조로 돌려보냅니다. 체를 사용하여 알을 수집합니다. 배아를 철저히 세척합니다.

시스템수로 헹굽니다. 배아 스트레이너를 배아 배지로 헹구어 배아를 페트리 접시에 옮깁니다. 배아를 현미경으로 관찰할 수 있습니다.

바늘과 피펫을 사용하여 미수정란을 수정란으로부터 분리해야 합니다. 수정란을 미수정란과 분리한 후, 부화할 때까지 약 28.5 °C의 배양기에서 72시간 동안 보관합니다. 이제 유생들이 난막(CORs)을 벗어나 자유롭게 헤엄칩니다.

치어는 수정 후 5일부터 먹이를 급여해야 하며, 시스템으로 옮기기 전 며칠 동안 정지된 물에서 유지해야 합니다. 치어를 약 300에서 400 µm 크기의 작은 배플이 들어 있는 수조로 조심스럽게 옮기십시오. 14일 후, 치어 수조를 시스템 선반에 배치하고 순환수가 소량으로 흐르도록 공급할 수 있습니다.

유충과 성어의 크기에 따라 서로 다른 크기의 배플을 사용해야 합니다. 배아가 성적으로 성숙한 성어로 발달하는 데는 보통 3개월이 걸립니다. 시청해 주셔서 감사하며, 귀하의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.