Name: 쥐의 뇌에서 뇌 표면 Vasculature 및 관련 Meninges의 해부 및 맥락막 얼기의 시각적 설명 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 31 s
Description: 학습하세요 쥐 뇌에서 뇌막 및 동맥 혈관과 측뇌실 맥락막을 정밀하게 해부하고 채취하는 방법을. 이 기법은 뇌혈류와 뇌척수액 항상성 연구에 필수적인 신경혈관 구조 분석에 활용됩니다.

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동영상에 표시되지 않지만, 쥐가 먼저 미만의 3 분의 마취의 결과로, pentobarbital 300 밀리그램 / kg의 과다 복용을 부여하고 목 베기에 의해 사망​​했다. 그들의 두뇌는 빠른 속도로 다음했지만주의 깊게 두개골에서 제거하고 5 분을 위해 얼음처럼 차가운 정상적인 생리에 냉각. 그것은 이전에 MAV가 (레이어 I 상단) 피질의 표면에서 분리 될 수 있도록 MAV을 해부 할 시간이 양의 뇌는 쿨하게하는 것이 중요합니다. 뇌 그런 다음 얼음처럼 차가운 정상적인 생리 또는 0.1 M의 인산 나트륨 버퍼 생리 산도 = 7.4의 가득 얼음을 쉬고있는 유리 페트리 접시 (1cm 깊이)의 하단에 배치되었습니다. 모든 해부는 생리에 익숙해 대부분 뇌가 이루어집니다. 1. 뇌의 송과선의 제거 <ol><li> 뇌 등쪽 측면까지를 (페트리 접시의 바닥에 상대적으로) 배치합니다. 뇌의 송과선은 t에 불과 뱃 부리 장식이있는 두 반구 사이에 가장 꼬리 복부 지역에 위치하고 있습니다그는 소뇌 (솔방울 모양의 리 세스)를 아래 또는 colliculi를 통해 meninges의 표면에 있습니다. 처음 두 개의 작은 구부러진 팁 집게를 사용하여 뇌의 송과선을 제거합니다. 이 피질과 같은 색상으로 분홍색이지만, 종종 혈액과 뇌 제거에서 잔류 vasculature의 흔적에 둘러싸여 있습니다. </li></ol> 2. MAV의 제거 <ol><li> &quot;거꾸로&quot;를 통해 뇌를 뒤집기과 척추 동맥, forebrain의 meninges과 vasculature에서 폰스를 덮고 작은 동맥과 meninges를 구분합니다. forebrain MAV의 제거 그 다음 시작됩니다. 이 분해 과정에 ventrally 시작하는 것이 중요합니다. 윌리스의 원의 큰 동맥, 중, 뇌동맥 (MCA)와 앞 동맥 강한하고있는에 &quot;비계&quot;역할을 pial의 작은 표면 동맥과 arterioles 막은 다음 meninges의 나머지 부분과 피질에서 제거 할 수 있습니다. m에 대한 Scremin에 7 리뷰보기광석 시각적 표현과 대뇌 표면 vasculature에 대한 자세한 내용. </li><li> 두 반구를 시작으로, 내부 경동맥 시점에 바로 뒤 뒤 교통 동맥을 잘라야 작은 구부러진 팁 집게를 사용합니다. 따라서, forebrain의 더 앞쪽과 뒤쪽 동맥 나무를 분리. contralateral 반구에 대해 동일한 과정을 반복합니다. </li><li> MCA와 포셉과 앞쪽 동맥 그립, 복부 앞쪽 피질 (piriform, 후각 결절)을 덮고있는 MAV가 후각 기관을 통해 주위를 둘러 해제 될 수 있도록 앞 - 등쪽 방향으로 부드럽게 당겨. 이 훨씬 앞 피질 (cingulated 및 궤도) 커버 MAV의를 제거합니다. </li><li> 페트리 접시에 45-90 ° 각도로 뇌를 켜십시오. 측면 대뇌 피질의 영역을 (세분화 된 섬나라, 보조 somatosensory 및 청각 피질) 주변 MAV의 측면보다 앞쪽 영역은 MCA 및 관련 arter을 그립하여 피질에서 해방 될 수있다이거 야는 부드럽게 피질을 따라 dorsally 당겨. 필요한 경우, 포셉의 끝은 절개 중에 피질에서 주요 동맥를 들고 확보하는 데 사용할 수 있습니다. </li><li> 이제 MAV의 더 뒤쪽 측면 영역을 제거합니다. (참고, 그것은 MAV는 추위와 수화 상태를 유지하려면이 수확 과정에서 다른 한 반구에서 전환하는 것이 가장 좋습니다. 또한, 피질에서 MAV를 자유롭게에 저항이 일시적으로 contralateral 반구 한 반구의 스위치가 발생하는 경우 그리고 나중에 원래 남반구로 이동합니다.) </li><li> 기본 somatosensory을 둘러싼 MAV의 가장 등쪽의 영역을 제거하고 모터 피질 뇌 등쪽 측면까지를 (페트리 접시의 바닥에 상대적으로) 설정하려면 다음과 같이하십시오. 결국 뇌에서 MAV를 확보하려면 sagital 굴을 따라 포셉의 끝 부분을 사용합니다. 수확 MAV의이 부분은 어느 테스트 및 분석을 할 때까지 얼음 차가운 생리에 일시적으로 보관거나 그 이상의 처리를 위해 냉동 할 수 있습니다. 자주피질의 가장 뒤쪽 / 꼬리 지역 (entorhinal 영상 및 대부분의 꼬리 청각 cortices) 덮고있는 MAV는 피질에 부착 남아 있습니다. 의 제거는 retrosplenial 피질과 colliculi 놓인 사이의 MAV가 해부하는 동영상에 나중에 표시됩니다. </li></ol> 3. 맥락막 얼기의 제거 <ol><li> 뇌 등쪽면을 배치하고 큰 집게는 반구 사이의 중간 선을 통해 작은 포셉을 밀어 후 상단에 피질과 코퍼스 callosum (bregma에서 ≈ -3.3 mm)를 통해 구멍에 끝을 사용과 장소에서 개최 해마의 중간 선. </li><li> 측면 뇌실의 대부분을 노출 등쪽 해마와 심장에서 떨어져 callosum과 피질을 끌어 포셉을 사용합니다. 맥락막 얼기가 자리 잡고 있으며 길이를 실행하는 주요 동맥을 demarcating 빨간색 물결 모양 선으로 식별 할 수 있습니다. 세 번째 벤처의 측면 벽을 놀리려는 포셉의 두 끝을 사용하여tricle과 가장 꼬리 끝 (bregma 8에서 ≈ -4.3 mm)에서 확대. </li><li> 작은 집게 사용하여 맥락막 얼기 무료의 끝을 당겨. 그런 다음 심장과 꼬리가있는 / putamen 사이의 매우 앞 지역 (대부분의 뱃 부리 장식이있는 범위 내에서, Bregma에서 ≈ 1.6 mm)로 이동하여 포셉은 심실의이 섹션을 확대하고 맥락막 얼기 무료로 당겨와 함께. 두 번째 남은 맥락막 얼기를 얻기 위해 contralateral 반구에 동일한 절차를 수행합니다. 다시 조직은 하나 테스트 및 분석을 할 때까지 얼음 차가운 생리에 일시적으로 보관거나 그 이상의 처리를 위해 냉동 할 수 있습니다. </li></ol> 4. Retrosplenial, 청각 및 Visual 컴퓨터에 접속을 포함한 피질의 더 꼬리 지역에서뿐만 아니라 그 시상과 Colliculi 놓인 제 3 뇌실에 남아있는 MAV의 제거 <ol><li> 시상 및 colliculi 이상 MAV를 노출 두 반구에서 전체 해마를 제거합니다. 의 제거MAV이 부분은 피질 이상 MAV의 제거보다 훨씬 덜 어렵습니다. </li><li> 시상의 앞쪽 부분을 놓인 부드럽게 caudally 당겨 큰 vasculature을 쥐었고하여 MAV 무료의이 부분을 당겨. 이 vasculature는 위에의 collicular 네트워크에 연결되어 등쪽 해마와 등쪽 시상 네트워크에 혈액을 공급하고 있습니다. 꼬리 동맥 원 vasculature의 마지막 부분에 도달 할 때까지 caudally 점차적으로 무료 supracollicular 네트워크를 그냥 버려 당겨. 이 시점에서, 더 많은주의를 세분화 retrosplenial, 기본 청각 및 시각 cortices의 표면에 남아있는 뒤 복부 MAV를 제거하려면주의해야합니다. 피질의 더 앞쪽 부분을 덮고 MAV의 다른 부분과 마찬가지로,이 조직은 하나 테스트 및 분석을 할 때까지 얼음 차가운 생리에 일시적으로 보관하거나 나중에 처리하기 위해 고정. 이 두 번째 MAV 섹션에서 수확 남은 뒤 복부 MAV는 제거해야합니다그들은 개별적으로 분석 할 경우 d는 피질을 다루는 첫 번째 해부하는 MAV 섹션에 추가되었습니다. </li></ol> 5. 대표 결과 절개가 제대로 실행되면, 결과 MAV의 조직은 45-35에 대한 MG 총 무게가이 그대로 단체에 있어야합니다. 피질의 대부분을 둘러싼 처음 해부하는 MAV 25 밀리그램 및 시상를 덮고있는 MAV에 대해 무게해야 colliculi과 뒤통수 피질 약 15 밀리그램 무게해야합니다. 이 vasculature의 잔류 혈액의 색이 약간 분홍빛이 도는해야합니다. 양국 맥락막 얼기 수확은 각 무게 1-2 MG 두 개의 그대로 조직 샘플에 있어야합니다. 초과 물이 조직 손실을 방지하기 위해, 이러한 렌즈 청소에 사용하는 등 조직 종이를 사용하여 저장 또는 처리하기 전에 MAV에서 제거 할 수 있지만이 해부하는 맥락막 얼기에서 초과 물을 제거하는 좋은 생각이 아닙니다. 그림 1에 생성되었습니다 표현 profil을 비교<html> 사용 제어 조건 하에서 세 지역에서 에스 (striatum, 정수리 피질과 MAV) 애질런트을 014,879 전체 쥐 게놈 4x44K 60mer oligonucleotide 어레이 (G4131F, 애질런트 테크놀로지스, 팔로 알토 (Palo Alto), CA, NCBI GEO 가입 # GPL7294, GSE23093과의 존재 GSE29733 NCBI GEO 저장소). 1) striatum의 정수리 피질에 비해 2) MAV는 정수리 피질에 비교하여 그림에서 두 플롯은 pictorially 표현을 보여줍니다. 이 striatum와 정수리 피질이 훨씬 더 밀접하게 MAV보다 서로 관련이있는 것이 분명하다. MAV로 맥락막 얼기를 비교 데이터는 향후 출판물에 표시됩니다. 그러나, MAV 및 맥락막 얼기의 표현 프로필이 더 가깝게는 striatum와 정수리 피질에보다 서로 관련되어있을 것입니다. 그림 2는 MAV의 차동 유전자 표현 고열에 대응 (EIH) 대 AMPH는 비교 표시 제어하고 서로합니다. 내용은 &quot;&gt; 제어 동물의 MAV의 공식 NCBI 유전자 기호가있는 이상 11,000 유전자의 유전자 발현은 striatum와 정수리 피질에 기록 된 사람들에 비해되었다.이 유전자 2000 이상 MAV의 2.5 배 이상 차이가 표현을했다 두 neuronal이 풍부한 조직에 비해, 그리고 550 유전자 표현의 10 배 이상 차이가 있었다. 이들 중 좀 더 40보다 % (253)는 10 배 또는 MAV에 이상 감소 표현과 유전자 있었고, 관련되었다 neuronal 기능.와 343 유전자는 정수리 피질과 striatum에 비해 MAV의 10 배 이상 표현으로이있었습니다. 유전자의이 목록은 MAV에서 매우 높은 농축과 유전자를 결정하는있는 출발점으로 사용되었습니다. 표 MAV 15 배 표현보다 더 큰 1 목록 유전자는 정수리 피질과 striatum에 비해과 기능에 대해를 분류합니다. 이러한 유전자의 대부분은 혈관 시스템 및 / 또는 면역 시스템에 관련된되었다.이 t는유전자의 ypes은 5에 대한 풍부한해야 - 10 -로 인해 증가 vasculature 자체와 그 안에 존재하는 혈액의 이동이 포착되었다. 그러나, 알려진 일반적인 혈관 기능을 가진 유전자를 들어, 15 배 이상 증가 MAV의 농축을 나타냅니다. 유전자의 숫자였다 매우 큰 배 변화도있었습니다, 1) 세포 외 기질 단백질 (특히 vasculature 관련이 없습니다), 2) 용질 수송 및 3) 지질 및 retinoic 산성 대사. 물론, 몇 가지 성장과 차별화 유전자 나 전사 인자가 발견되었습니다 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> 1 그림. 정수리 컴퓨터에 접속하고 Striatum와 MAV의 유전자 발현의 비교. 정수리 피질과 striatum (위 플롯)와 정수리 피질과 MAV (아래의 음모)의 유전자 발현 수준을 비교 화산 줄거리. 빨간색 기호가 크게 다른 betwe있는 유전자를 나타냅니다실내 P에서 지역 &lt;0.05와 지역 사이 1.5 배 이상 차등 표현되어 있습니다. 검은 색 기호는 크게 (P&gt; 0.05) 지역 사이에 차이가없는 유전자를 대표하고 1.5 배 식에 서로 다른 미만의 거리에 있습니다. 핑크 기호는 P는 &lt;0.05에서 표현의 1.5 배 차이보다하지만, 통계적으로 크게 다른과 유전자를 나타냅니다. 노란색 기호는 1.5 배 이상 표현이 유전자를 식별하지만,이 변경 사항은 P에서 &lt;0.05 통계적으로 의미가 없습니다. 약어 AMPH의 암페타민 EIH 환경에서 비롯된 고열이었을 MAV의 meninges 및 관련 뇌성 vasculature 규격 normothermic 컨트롤 <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> 그림 2. 비교 고열과 MAV의 유전자 발현에 암페타민의 효과. 화산 플롯3 시간의 시점에서 생리, EIH 또는 AMPH 후 MAV의 유전자 발현 수준. 빨간색 기호가 검은 점 / 원은 크게 지역 사이에 차이가없는 유전자를 대표하면서 전혀 다른 것으로 간주되는 유전자를 나타냅니다. 추가 통계 분석 관리 및 치료 사이의 차이가 통계적으로 의미가 사실상 된 표현을 확인하는 데 사용되었다. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> MAV의 표현 뇌 표현 </td><td fo:width="4.5in"> NCBI 유전자 기호 </td><td fo:width="1.5in"> 조직 특이성 또는보고 기능 (들) </td></tr><tr><td> &gt; 50 배 </td><td> Col8a1 Anxa2, 데, Esm1, Glycam1, KL, Lect1, Lepr, Lum, Myh11, Ogn, Tagln, Thbs2, Tnnt2 </td><td> Vasculature &amp; 하트 </td></tr><tr><td> &gt; 50 배 </td><td> Ccl19, Cd74, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, PLa2g5, Prg4, RT1-BB, RT1 - 다 </td><td> 면역 시스템 </td></tr><tr><td> &gt; 50 배 </td><td> Adh1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 </td><td> Retinoic 산성 및 지질 처리 </td></tr><tr><td> &gt; 50 배 </td><td> Cdh1, Col3a1, Col1a2, Colec12, Cpxm2, Cpz, Dcn, Emp3, Gpc3, Nupr1, Omd, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 </td><td> 세포 외 기질 및 세포 세포 접합 </td></tr><tr><td> &gt; 50 배 </td><td> Aqp1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, TTR </td><td> 이온 및 용질 항상성 </td></tr><tr><td> &gt; 50 배 </td><td> Alx3, Cdkn1c, Foxc2, Igfbp2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, Osr1, Prrx2, Sfrp1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> 개발 및 스크립트 규정 </td></tr><tr><td> &gt; 50 배 </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> 알 수없는 및 기타 </td></tr><tr><td> 30-50 배 </TD&gt; <td> Anxa1, Angpt2, C6, Gjb2, Ptgis, Thbd, Timp1 </td><td> Vasculature &amp; 하트 </td></tr><tr><td> 30-50 배 </td><td> Casp12, Ccl2, Ccr1, Cd14, Cxcl10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 </td><td> 면역 시스템 </td></tr><tr><td> 30-50 배 </td><td> Col6a3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, MGP, Nid2 </td><td> 세포 외 기질 및 세포 세포 접합 </td></tr><tr><td> 30-50 배 </td><td> CP, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, 스코틀랜드, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> 이온 및 용질 항상성 </td></tr><tr><td> 30-50 배 </td><td> CFD, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> Retinoic 산성 및 지질 처리 </td></tr><tr><td> 30-50 배 </td><td> Bmp6, Casp12, Dab2, Folr1, Igf2, Msx1, Tbx18, Twist1, Wnt5b </td><td> 개발 및 스크립트 규정 </td></tr><tr><td> 30-50 배 </td><td> Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, VIM </td><td> 알 수없는 및 기타 </td></tr><tr><td> 15 30 배에 </td><td> ADM, Angpt1, Angptl2, Bgn, Cklf, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, 훈제 연어, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1 - 바, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip , Vamp5, Vtn </td><td> Vasculature &amp; 하트 </td></tr><tr><td> 15 30 배에 </td><td> 에이다, Bst2, Ccl6, Cd40, Cd68, Ctsc, DAP, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, MSC, Nfatc4, RT1 - Db1, Serpinb1a, Tir4, Tubb6 </td><td> 면역 시스템 </td></tr><tr><td> 15 30 배에 </td><td> Adamtsl4, Col1a1, Crb3, Dpt, Egfl3, Fbn1, Fbln1, Fbln5, Fn1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, Timp3 </td><td> 세포 외 기질 및 세포 세포 접합 </td></tr><tr><td> 15 30 배에 </td><td> Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9A2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> 이온 및 용질 항상성 </td></tr><tr><td> 15 30 배에 </td><td> Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, Pon3, Rbp1, Rbp4 </td><td> Retinoic 산성 및 지질 처리 </td></tr><tr><td> 15 30 배에 </td><td> Atf3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, Ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 </td><td> 개발 및 스크립트 규정 </td></tr><tr><td> 15 30 배에 </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, Cyp1b1, DSE, Enpep, Enpp2, Epn3, Flna, Fmo3, Gnmt, Gprc5c, Hspb1, Klc3, Krt18, Krt19, MDK, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, Plp2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> 알 수없는 및 기타 </td></tr></tbody></table> * 표에 포함 된 유전자는 striatum과 pariet에 두 개 이상의 15 배 이상 표현해야합니다알 피질과 배경 레벨 위의 5 배. 각 유전자의 두 비율 (MAV / striatum 또는 MAV / 정수리 피질)의 낮은은 그룹화에 사용되었다. 유전자는 내피 세포에서 발견뿐만 아니라, 가능성이 면역 반응을 중재에 중요한 역할을하고 있습니다. 표 1. 15 배 * 또는 striatum와 정수리 피질에 비해 MAV에 더 증가 표정으로 유전자.

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우리는 공개 할 아무 것도 없습니다. 여기에 제시된 작품은 반드시 식품 의약품 안전청의 의견을 대표하지 않을 수 있습니다.

기술 MAV의 측면과 맥락막 얼기의 해부 그보다는 뇌가 생리 인산염은 버퍼 정상적인 생리 또는 나트륨에 대부분의 시간을 &#39;잠수&#39;할 MAV의 해부 동안 중요합니다. MAV, 피질은 절개 중에 탈수 할 수 있도록하는이 MAV 및 / 또는 피질에서 이러한 준수 MAV 섹션을 제거 할 수 없다는의 결과 수확 대뇌 피질의 조직의 양을 증가 대뇌 피질의 레이어 I.에 단단히 준수 MAV가 발생합니다. 또한, 인내는 해부시 필요합니다. 한 해부 동안 한 반구에서 피질에서 MAV를 제거하는 일부 저항을 발생한다면, 다른 반구로 전환 및 저항가 발생했습니다 옆에 나중에 다시 이동합니다. 이 방법은 완벽하게 연습을 수행하고 MAV 조직의 지속적으로 균일 한 수확이 달성되기 전에 15-5에 대한 &#39;실천&#39;dissections이 필요합니다. 해부와 레모을 시작하는 방법뇌의 바닥에있는 동맥 원에서 MAV의 발 지원으로 큰 vasculature를 사용하여 meninges의 제거 촉진 &quot;비계를.&quot; 대부분 원래 희생 후 MAV의 vasculature에있는 혈액은 절개 중에 배출해야하고, MAV에서 수확 RNA의 5 % 이하의 피가 기원해야합니다. 그것은 전에 목 베기 및 뇌 제거에, 조직 학적 기술을 사용하여, 생리의 50-70 ML과 동물을 관류하여 거의 모든 혈액을 제거 할 수 있습니다. 그러나 다음 해부 동안 MAV 조직을 시각화하기가 훨씬 더 어렵습니다. MAV의 조직의 &quot;오염&quot;의 세 가지 가능성이 가장 높은 소식통은 뇌의 송과선, 대뇌 피질의 레이어 I 조직 및 잔여 후각 망울 조직이지만이 준비 뇌하수체 조직을 얻을 수도 있습니다. MAV에 솔방울 모양의 오염은 색이 진한 빨간색 원형 1~2밀리미터 직경 영역을 포함하는 MAV에 의해 검출된다. 주요 기능뇌의 송과선의는 일반적으로 MAV에서 완전히 다른 것으로 간주됩니다. 의 주요 기능은 circadian 리듬 9 측면을 조절 멜라토닌, 그리고 지질 전구체의 lipoxygenation 10을 생산하는 것입니다. lipoxygenase 활동을 조절 유전자 훈제 연어가 주로 뇌의 송과선 10 성인에 존재하는 것으로 생각되었지만, 결과는 또한 MAV에 상당한 수준의 지속적 존재 나타냅니다. 거기에 동봉 색상의 훨씬 창백 일부 1~2mm의 밀도의 조직을 갖는 분홍빛이 도는 웹과 같은 MAV 조직에 잔류 피질이나 후각 망울 오염 결과. 이것은 버퍼의 표면에 MAV &quot;를 떠&quot;다음 두 해부 집게를 사용하여 무거운 대뇌 피질이나 전구 조직을 제거하여 발견 할 수 있습니다. 대뇌 피질의 레이어 나 조직, hypothalamic 조직 또는 뇌의 송과선에서 MAV의 오염이 존재하는 경우, 여러 유전자가 signifi을해야합니다&quot;새로&quot;해부에 일반적으로 존재하는 것보다 더 cantly 표현. 뇌의 송과선과 MAV의 오염은 arylalkylamine 멜라토닌의 합성에 필요한입니다 (Aanat) N-아세틸 높은 표현하게됩니다. 솔방울 모양의 오염 MAV를 해부하는 동안 발생하는 경우 불행하게도, MAV의 훈제 연어의 수준을 정확하게 결정 할 수 없습니다. 대뇌 피질의 조직과 MAV의 오염은 hippocalcin (Hpca), parvalbumin (Pvalb) 및 / 또는 neuronal pentraxin 수용체 (Nptxr)와 같은 신경 세포 특정 유전자의 이상 표현하게됩니다. hypothalamic 조직과 MAV의 오염은 성장 호르몬 1 (Gh1), ​​proopiomelanocortin (Pomc)의 높은 표현하게됩니다. 수확 조직의 일부 오염 물질이 존재하는 경우,이 유전자의 대부분은 식별 및 유전자 발현 분석에 사용되지 수 있습니다. 이 순환 blo에 존재하는 유전자에 특히 중요합니다아직 MAV 또는 맥락막 얼기에 존재 할 수 있습니다 OD. 수확 MAV 및 맥락막 얼기에서 유전자 발현 데이터를 Interpretting 관련 meninges (MAV)과 맥락막 얼기와 함께 뇌성 표면 (표면) vasculature은 대 혈액 흐름과 뇌척수 (CSF) 항상성 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 필요합니다. 조직 수확은 생화학 및 생리학 분석에 적합하며, MAV는 유전자 발현 분석을 통해 암페타민과 고열의 1,2에서 생산 손상에 민감 할 표시되었습니다. 이러한 결과는 심각한 고열 및 일반 18,19,20에서 뇌 vasculature에 암페타민에 노출에 대해 알려진 무엇에 상응합니다. 인간 임상 데이터는 경막 하 vasculature는 암페타민과 메스암페타민 (21, 22)에 의해 손상에 민감 있다는 믿음을 지원합니다. 뿐만 아니라, 전공 및 부전공 뇌성 vasculatures은 includ두부 외상 23,24 25 진탕 종류를 조사 할 때 잠재적으로 높은 관심을 끌 수있는 MAV에 수확하는 meninges의 pial 층에 사람들을 들죠. MAV에서 나왔고 현재 유전자 발현 프로필은 pial 그리고 아마도 거미집 모양의 수막 멤브레인은 CSF의 구성을 조절에 예상보다 큰 역할을 할 수 있음을 나타냅니다. 앞으로 현미경 기술을 해부의 사용을 통해, 그것은 더 pial와 거미집 모양의 멤브레인은 큰 동맥 vasculature 존재에서 그리고 아마도 서로 분리 될 수 있도록 MAV를 포함하는 조직을 분리 할 수​​도 있습니다. 이것은 수확 MAV의이 3 구성 요소의 각각의 기능의 더 나은 해석을 수있게 될 것입니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 장비의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> 보통 식염 (9g 생리 / 1 리터 H 2 O) </td><td> 사내 </td><td></td><td> 해부 버퍼 </td></tr><tr><td> 0.1 M의 인산 나트륨의 pH를 7.4 </td><td> 사내 </td><td></td><td> 해부 버퍼 </td></tr><tr><td> 뼈 Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> 해골 뼈 제거 </td></tr><tr><td> 집게 - 구부러진 팁 (4 &quot;길이 및 0.8 mm 폭 팁) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 또는 RS-5137 </td><td> 해부 포셉 </td></tr><tr><td> 집게 - 스트레이트 팁 (5.5 &quot;길이) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 또는 RS-8104 </td><td> 엄지 드레싱 포셉 </td></tr></tbody></table>

쥐의 뇌에서 뇌 표면 vasculature 및 관련 meninges의 해부 및 맥락막 얼기의 시각적 설명

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

이 비디오 프리젠 테이션을 지원하는 forebrain 기능, 적절한 뇌 내에 거주하지, 가장 중요한 두 높은 혈관 구조를 수확하는 방법을 보여 만들어졌습니다. 그들은 관련된 meninges (MAV)와 뇌성 혈액 흐름과 뇌척수 (CSF) 항상성에 필요한 맥락막 얼기와 함께 대뇌 표면 (표면) vasculature 있습니다. 수확 조직 생화학 및 생리학 분석에 적합하며, MAV는 암페타민과 고열의 1,2에서 생산 손상에 민감 할 표시되었습니다. 머리 외상의 진탕 종류를 조사 할 때뿐만 아니라, MAV에 수확 전공 및 부전공 뇌성 vasculatures 가능성이 높은 관심입니다. 이 프리젠 테이션에 해부하는 MAV는 pial과 meninges의 거미집 모양의 막 (이하 경질)과 전공 및 부전공 뇌성 표면 vasculature의 일부 구성되어 있습니다. 신경 얼기는 해부하는 맥락막은 리터에 거주 구조입니다Oldfield와 매킨리 3,4,5,6에 의해 설명 된대로 ateral은 심실이 수축하지. 이 두 조직을 수확에 사용되는 방법은 meninges과 더 큰 뇌성 표면 vasculature이없는 지역 대뇌 피질의 조직의 수확을 촉진하고, 등이 소요 두 조직의 절개 등 striatum, 시상 하부, 해마 같은 다른 뇌 조직을 수확과 호환됩니다 5-10 분 총에서. 그림과 같이이 프리젠 테이션에 설명 된 해부하는 MAV 및 맥락막 얼기의 유전자 발현 수준은 NCBI GEO 저장소에서 GSE23093 (MAV)와 GSE29733 (맥락막 얼기)에서 찾을 수 있습니다. 이 데이터되었으며, 더 MAV 및 맥락막 얼기의 기능을 이해하는 방법과 신경성 등 심각한 고열과 AMPH 등의 이벤트가 부정적인 자신의 기능에 영향을 미칠하는 데 사용하고 있습니다.

이 동영상 프리젠 테이션 forebrain 기능을 지원하는 가장 중요한 두 높은 혈관 구조를 수확하는 방법을 보여줍니다. 그들은 관련된 meninges (MAV)와 뇌성 혈액 흐름과 뇌척수 (CSF) 항상성에 필요한 맥락막 얼기와 함께 대뇌 표면 (표면) vasculature 있습니다.

쥐의 뇌에서 뇌 표면 Vasculature 및 관련 Meninges의 해부 및 맥락막 얼기의 시각적 설명

본 영상 프레젠테이션은 뇌 내에 위치하지 않으면서 가장 중요한 두 가지 고혈관성 구조물을 채취하는 방법을 보여주기 위해 제작되었습니다...

이 절차의 전반적인 목표는 전뇌 피질, 중뇌, 시상 및 뇌량의 표면을 덮고 있는 뇌막의 외막과 지주막 부분 및 관련 동맥 혈관계를 효율적이고 신속하게 박리하고, 측뇌실에서 맥락총을 채취하는 것입니다. 이는 먼저 송과선을 제거하고 전뇌에 인접한 뇌막과 동맥계를 분리함으로써 달성됩니다. 둘째로, 윌리스환(circle of Willis)의 복측 부위부터 시작하여 배측 피질 표면으로 진행하며 피질 표면의 동맥과 세동맥을 조심스럽게 제거하며, 이때 외막과 나머지 지주막이 혈관계에 붙어 있도록 유지하고 인접한 피질 표면 조직의 채취를 최소화해야 합니다.다음으로, 피질과 교차 섬유를 중격 및 해마로부터 박리하여 맥락총을 채취할 수 있도록 측뇌실을 노출시킵니다. 마지막으로 해마를 제거하여 시상과 중뇌의 뇌량 부분을 노출시킵니다. 그 후 이 부위를 덮고 있는 뇌막과 관련 혈관들을 박리합니다.결과적으로, 박리된 뇌수막과 관련 동맥 혈관계, 그리고 맥락총의 무결성과 특이성은 각 영역의 유전자 발현 프로파일을 비교함으로써 결정할 수 있습니다. 이 방법은 뇌 기능을 지원하는 혈관계와 관련된 연구의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 여기에는 혈류, CSF 기능, 신경독성 손상 및 뇌 외상과 관련하여 뇌수막 및 관련 동맥 혈관계와 비교한 맥락총 기능의 유사점, 비교 및 차이점이 포함됩니다.이 프로토콜을 시작하려면, 안락사 직후 적출한 쥐의 뇌를 얼음처럼 차가운 생리식염수에 5분 동안 담그십시오. 박리를 시작하기 전 이 정도의 시간 동안 뇌를 냉각시키는 것이 중요한데, 이는 뇌막과 관련 동맥 혈관 구조(MAV)를 피질 표면에서 분리하기 위함입니다. 다음으로, 1cm 두께의 얼음처럼 차가운 생리식염수 또는 pH 7.4의 0.1 M 인산나트륨 완충식염수(PBS)가 담긴, 얼음 위에 놓인 유리 페트리 접시 바닥에 뇌를 놓으십시오.모든 해부는 뇌의 대부분이 식염수에 잠긴 상태에서 이루어져야 합니다. 해부를 시작하려면, 뇌의 배측면이 위로 오도록 페트리 접시에 놓고, 두 반구 사이의 가장 내측 복측 부위에 위치한 송과선을 찾으십시오. 이는 소뇌의 바로 앞쪽(rostral), 그리고 뇌수막의 바로 아래 또는 표면에 위치합니다.colli 위쪽에서 두 개의 작은 굽은 팁 핀셋을 사용하여 송과선을 제거합니다. 송과선은 피질과 같이 분홍색을 띠지만, 뇌 제거 과정에서 남은 혈액 잔해와 혈관 조직에 둘러싸여 있는 경우가 많으므로 주의하십시오.다음으로, 페트리 접시 안에서 뇌를 뒤집습니다. 그런 다음 뇌교를 덮고 있는 척추동맥과 더 작은 동맥들 및 뇌수막을 전뇌의 뇌수막 및 혈관계로부터 분리합니다. 이어서 MAV 제거를 시작합니다.해부 과정에서는 윌리스 환(circle of Willis)의 주요 동맥, 중대뇌동맥 및 전대뇌동맥부터 복측에서 시작하는 것이 중요합니다. 다음으로, 어느 한쪽 반구부터 시작하여 작은 굽은 팁 핀셋을 사용하여 내경동맥 접합부 바로 뒤쪽의 후교통동맥을 절단함으로써 전뇌의 전방 및 후방 동맥계를 분리합니다. 그 다음 반대쪽 반구에 대해서도 동일한 과정을 반복합니다.이제 포셉으로 MCA와 전동맥을 잡고 전배측 방향으로 부드럽게 당겨, 복측 전두피질을 덮고 있는 MAV가 후각로 위와 주변으로 들어 올려지게 합니다. 이렇게 하면 전두피질을 덮고 있는 MAV의 상당 부분이 제거됩니다. 뇌를 페트리 접시와 45~90도 각도로 돌려 외측 피질 부위를 둘러싸고 있는 MAV의 더 앞쪽 외측 부위가 피질에서 분리될 수 있도록 한 뒤, MCA와 관련 동맥들을 잡고 피질을 따라 배측으로 부드럽게 당깁니다.필요한 경우, 박리 과정에서 포셉의 끝을 사용하여 주요 동맥을 들어 올려 피질로부터 분리할 수 있습니다. 이제 MAV의 더 후방 외측 부위를 제거하십시오. 이 수확 과정 동안 MAV가 차갑고 촉촉한 상태로 유지되도록 한쪽 반구에서 다른 쪽 반구로 번갈아 가며 작업하는 것이 가장 좋습니다. 또한 MAV를 피질에서 분리할 때 저항이 느껴지는 경우에도 반구를 교체하여 작업하십시오.마지막으로, 일차 체성 감각 및 운동 피질을 둘러싸고 있는 MAV의 가장 등쪽 부위를 제거하기 위해 뇌의 등쪽이 위로 향하게 돌려 이 부분을 뇌에서 분리하며, 시상 정맥동을 따라 포셉의 끝부분을 사용합니다. 이렇게 수집된 MAV 부위는 테스트 및 분석에 필요할 때까지 얼음처럼 차가운 식염수에 일시적으로 보관하거나, 추후 처리를 위해 냉동 보관할 수 있습니다. 종종 피질의 가장 후측부 부위를 덮고 있는 MAV는 부착된 상태로 남아있기도 합니다.그 제거 방법은 이 영상의 다음 섹션에서 보여드립니다. 맥락총을 제거하려면 먼저 뇌의 등쪽이 위로 오도록 배치하고 큰 포셉으로 고정합니다. 그런 다음 작은 포셉을 양쪽 반구 사이의 정중선을 따라 아래로 밀어 넣어, 포셉 끝으로 피질과 뇌량에 구멍을 내어 해마 정중선의 상단부까지 도달하게 합니다.다음으로, 핀셋을 사용하여 뇌량(callosum)이 포함된 피질을 등측 해마와 중격에서 분리하여 측뇌실의 대부분이 노출되도록 합니다. 맥락총(choroid plexus)은 그 길이를 따라 뻗어 있는 주요 동맥을 나타내는 물결 모양의 붉은 선으로 위치를 찾아 식별할 수 있습니다. 핀셋의 두 끝을 사용하여 제3뇌실의 측벽을 벌리고, 가장 좁은 끝부분을 확장합니다.그런 다음 소형 포셉을 사용하여 맥락총의 이쪽 끝부분을 당겨 분리합니다. 이어서 포셉을 이용해 중격과 미상핵-피각 영역 사이의 매우 앞쪽 부위를 확장하고, 이쪽 끝에서도 맥락총을 당겨 분리합니다. 반대측 반구에서도 동일한 절차를 수행하여 나머지 두 번째 맥락총을 얻습니다.다시 한번 언급하자면, 이 조직은 나중에 처리하기 위해 얼음, 냉각 식염수 또는 냉동 상태로 일시적으로 보관할 수 있습니다. 피질의 가장 후방 구역을 덮고 있는 나머지 MAV를 제거하려면, 먼저 양쪽 반구에서 해마 전체를 제거하여 시상과 구(colliculi) 위의 MAV를 노출시킵니다. MAV의 이 부분을 제거하는 것은 나머지 MAV를 피질에서 제거하는 것보다 훨씬 수월하다는 점에 유의하십시오.시상 전면부를 덮고 있는 더 큰 혈관들을 잡고 조심스럽게 당기면, 이 혈관들이 상교차 네트워크와 연결되어 있으며 등쪽 해마 및 등쪽 시상 네트워크에 혈액을 공급하고 있음을 알 수 있습니다. 계속해서 조심스럽게 당기면 결국 상위 네트워크가 분리되고, 마지막 단계에서 교차 동맥륜의 잔여 부분에 도달할 수 있습니다. 이 시점에서는 과립형 후선상 primary, 청각 및 시각 피질 표면에 남아 있는 모든 MAV를 제거하는 데 더욱 세심한 주의를 기울여야 합니다.두 번째 시상 및 뇌량 MAV 절편과 함께 수확한 잔여 후복측 피질 MAV는 별도로 분석할 경우 제거하여 첫 번째 피질 MAV 절편에 추가해야 합니다. 다음으로, 대조 조건 하에서 선조체, 두정엽 피질 및 MAV 영역 간의 유전자 발현 프로파일을 비교하기 위해 Agilent 0 1 4 8 7 9 whole rat genome, four by 44, 060 mer oligonucleotide array를 사용하여 유전자 발현 분석을 수행할 수 있습니다. 처리, 스캔 및 초기 데이터 저장에 대한 자세한 내용은 Thomas et al.에서 확인할 수 있습니다.해부가 정확하게 수행되었을 때, 결과적으로 얻은 MAV 조직은 총 약 35~45 mg인 두 개의 온전한 개체여야 합니다. 처음 해부하여 피질의 대부분을 둘러싸고 있는 MAV는 약 25 mg이어야 하며, 시상, 뇌량 및 후두 피질을 덮고 있는 조직은 약 15 mg이어야 합니다.조직은 혈관 내에 남아 있는 혈액으로 인해 약간 분홍빛을 띠어야 합니다. 채취한 양측 맥락총은 여기 보이는 것처럼 각각 1~2 mg 무게의 온전한 두 개의 조직 샘플 형태여야 합니다. 여기서는 대조군 조건에서 선조체, 두정엽 피질 및 MAV의 유전자 발현 프로필 비교를 볼 수 있습니다.상단 그래프는 두정엽 피질과 비교한 선조체의 발현을 보여줍니다. 하단 그래프는 두정엽 피질과 비교한 MAV의 발현을 보여주며, 선조체와 두정엽 피질이 MAV보다 서로 훨씬 더 밀접하게 연관되어 있음을 알 수 있습니다. 여기서는 대조군 대비 고열 반응, 대조군 대비 암페타민 반응, 그리고 고열 대 암페타민 반응에 따른 MAV의 차등 유전자 발현을 확인할 수 있습니다.마지막으로, 여기 두정엽 피질 및 선조체와 비교하여 MAV에서 15배 이상의 발현을 보이는 유전자들을 기능별로 특성화하여 확인하였습니다. 이러한 유전자 중 상당수는 혈관계 또는 면역계와 관련이 있습니다. 매우 큰 배수 변화를 보이는 다른 유전자들은 세포외 기질 단백질, solute 수송체, 그리고 지질 및 레티노익산 대사와 관련되어 있습니다.이 절차를 수행할 때, MAV를 해부하는 동안 인내심을 갖는 것이 중요합니다. 또한, 해부 전 과정 동안 뇌가 등장성 식염수 또는 인산염 완충 식염수에 잠겨 있도록 유지하는 것이 중요합니다. 아울러, 실험 데이터 생성용 조직을 얻기 전에 4~5마리의 쥐를 대상으로 MAV 절단 연습을 하는 것을 권장합니다.

a-visual-description-dissection-cerebral-surface-vasculature

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

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본 연구의 목적은 쥐에서 두개골 절제술 후 영구적이고 선택적인 중뇌동맥 폐색을 수행하는 재현 가능한 방법을 확립하여 운동 및 공간 기억 결손에 대한 실험 연구에 적용하는 것이었습니다.

쥐의 중뇌동맥 선택적 및 영구 폐색: 운동 및 공간 기억 결손 연구를 위한 실험적 접근법

학습하세요 쥐 뇌에서 뇌막 및 동맥 혈관과 측뇌실 맥락막을 정밀하게 해부하고 채취하는 방법을. 이 기법은 뇌혈류와 뇌척수액 항상성 연구에 필수적인 신경혈관 구조 분석에 활용됩니다.

쥐의 뇌에서 뇌 표면 Vasculature 및 관련 Meninges의 해부 및 맥락막 얼기의 시각적 설명

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