Name: 혈액 - 뇌 장벽 장애의 쥐 모델 Neurovascular 치료학 타겟이 분명한 허용하려면 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: 배우세요 쥐 모델에서 혈액-뇌 장벽을 파괴하는 방법을 통해 신경학적 치료제 전달을 개선하는 기술입니다. 마니톨을 경동맥에 주입하여 약물이 뇌로 진입할 수 있게 합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 JB 마샬 재단에 의해 지원되었다.

1. 절차에 대한 동물 및 장비 준비 <ol><li> 수술을 시작하기 전에 수술 지역과 동물을 준비합니다. PE50 튜브 12의 한쪽 끝 &quot;에 23 게이지 무딘 바늘을 삽입하여 경동맥 카테터를 확인합니다. 카테 테르의 반대편에 약 45 ° 베벨을 잘라 요. 이전 절차 장비를 소독. 머리 모자, 수술 마스크를 착용 및 멸균 장갑. </li><li> 수술이 수행 될 표면에 가열 패드를 놓습니다. 을 활성화하고 따뜻하게 할 수 있습니다. 흡수 벤치 패드와 지역을 커버. </li><li> 당신이 결정하지 않고 솔루션 25 % 마니 톨이 있는지 확인하십시오. 결정이 존재하는 경우, 80 ° C에서 온수 욕조에 병을 배치하고 정기적으로 교반하여 친구를 분해. </li><li> 동물의 질량을 기록합니다. </li><li> 0.8 MG / 0.1 ML / 분의 속도로 kg / 분에서 배달을 위해 propofol 희석하십시오. </li><li> 3 분의 유도 상자에 쥐를 놓습니다. 설정 : 5 % isoflurane, 2 L / 분환풍기에 대한 유량. </li><li> 일회용 수건의 상단에서 목을 모두 안쪽 허벅지를 면도. </li></ol> 2. 쥐를 Intubate <ol><li> 3 분의 유도 상자에 동물을 다시 놓으십시오. </li><li> IV 카테터와 endotracheal 튜브를 준비합니다. 이 크기와 쥐의 변형의 경우, 우리는 18 GA 카테터를 사용합니다. 튜브 손상을 초래하지 않고 적절한 공기 흐름을 허용 할 수있을만큼 큰, 그러나기도에 들어갈만큼 작해야합니다. 플라스틱 카테터의 바늘 아웃을 잡아 당겨 조심스럽게 바늘 약을 깰. 그 날카로운 끝에서 1cm. bunted 바늘은 스타일러스 될 것입니다. 바늘 다시 카테터에 넣어. </li><li> 각진 표면에 날카로운 이빨로 쥐를 잡아. </li><li> 동물의 목에 대해 직접 빛을 발하고 귀 사이에 정렬했습니다. </li><li> 작은 주걱 약을 삽입합니다. oropharynx에 3cm. 부드럽게 입에서 혀를 뽑아 동안 위쪽으로 들어 올려. </li><li> 기도의 개통을 표시합니다. 당신은 SE됩니다EA 작은 구멍은 각 숨 가까이 열고. </li><li> 부드럽게 구멍에 카테터를 삽입합니다. 당신은 가끔 플라스틱 기관의 연골을 입력 느낄 수 있습니다. 기관이 민감하다. 카테터를 강제하지 마십시오. </li><li> 1 L / 분 60 BPM과 2 % isoflurane에 환풍기를 설정합니다. </li><li> 운영 표면에 환풍기와 테이프 튜브에 카테터를 연결합니다. </li><li> 동물이 발가락 핀치을 수행하여 anesthetized 확인합니다. </li></ol> 3. Propofol IV의 마취를 확립 <ol><li> 운영 표면에 사지와 꼬리를 녹화하여 쥐를 고정합니다. </li><li> 면도 목 chlorhexidine 비누로 사타구니 사이트 세 번 씻어. chlorhexidine 세 번 씻어과 다음 씻어. </li><li> IV 확장 집합에 propofol의 주사기를 연결합니다. 주입 펌프에 주사기를 탑재합니다. </li><li> 면도 허벅지의 피부를 잘라내 메스를 사용합니다. 근육을 절단하지 마십시오. </li><li> 힘으로 절개를 엽니 다PS는 넙 다리 정맥을 시각화합니다. </li><li> 혈관을 노출 할 수있는 동맥을 통해 조직을 멀리 당겨. </li><li> 정맥에 26 GA monoject 동물 IV 카테터를 삽입합니다. 바늘이 정맥의 벽을 구멍하면은 밀어 쉽게 될 수있을 것입니다. 바늘을 철회하고 혈관에 카테터를 밀어. </li><li> 0.1 ML / 분에서 propofol 주입을 시작합니다. </li><li> 3-5 분 propofol 주입을 시작 후, 50 % O 2 50 % N 2 O의 혼합물로 마취 가스를 전환하고 isoflurane을 종료합니다. </li></ol> 4. 온목 동맥의 분기를 노출 <ol><li> 메스 블레이드와 목의 중간 선 절개를합니다. </li><li> 가위 또는 메스 두 개의 큰 침샘 사이에 자른다. </li><li> 경동맥을 노출 할 수있는 중간 선에 측면 조직​​을 멀리 해부. 조직의 레이어를 열 집게를 사용하십시오. 귀하는 포셉으로 노출되는 부분을 제거하고 minimall로 결정 가위를 사용할 수 있습니다Y 혈관. 거즈, 면봉, 그리고 소작 필요한 경우에 피를 흘리고을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 무거운 출혈에 적당한있을 경우 3 ML 생리 IP를 삽입. </li><li> 경동맥에서 조직을 멀리 끌어 견인기를 사용합니다. 분기를 찾습니다. </li><li> 분기에서 불과 말초 뒤통수 동맥을 쉽게받을 수 있습니다. 포셉 사이에 부식 및 electrocautery로 구분합니다. </li><li> 완전히 경동맥 분기 가능한 ECA의만큼 노출 집게를 사용하십시오. </li><li> 뒤통수 동맥 말초 ECA을 가지 우수한 갑상선 동맥을 쉽게받을 수 있습니다. 포셉 사이에 부식 및 electrocautery로 구분합니다. </li></ol> 5. 외부 경동맥을 ...에 카테 테르를 꽂다 <ol><li> ECA 아래 4 / 0 실크의 2 길이를 놓으십시오. </li><li> 귀하의 hemostat와 봉합의 1 길이를 잡고 (쥐의 발을 향해) 다시 caudally ECA를 철회. </li><li> 수 w로 다른 봉합를 타고 (쥐의 입쪽으로) cranially까지 묶어i 번째 외과 의사의 매듭. 이 ECA를 희생 할 수있는 영구적 인 끈을 형성한다. </li><li> 첫 번째 hemostat (꼬리 장력을 적용 된 1) 제거하고 다른 봉합 (ECA 주변의 매듭이 하나를) 잡아 hemostat와 cranially 부드러운 긴장을 적용 할 수 있습니다. </li><li> 느슨하게 다른 외과 의사의 매듭을 묶게 (보호하지 않습니다 - 거의 묶어두고) 분기 및 영구 끈에 근위에 말초. </li><li> 1 %가 동맥을 휴식을 lidocaine과 관개. </li><li> heparinized 생리와 카테터를 입력합니다. </li><li> 가까이 가능한 분기에 임시 선박 클립을 놓습니다. catheterization을위한 공간을 극대화 할 수있는 각도로 배치 선박 클립. 클립 대한 느슨한 매듭을 슬라이드. </li><li> microscissors를 사용하여 끈으로 단지 근위 ECA의 작은 arteriotomy (컷)을 확인합니다. 클립과 끈이 안전하더라도 출혈이 없어야합니다. </li><li> ECA 벽을 제어하는​​ 집게를 사용하여 혈관에 카테터의 beveled 끝을 먹이. </lI&gt; <li> 느슨한 봉합 매듭으로 카테터를 고정합니다. 카테터 주위의 동맥을 묶어주세요. </li><li> 클립을 제거하고 면봉으로 영역을 청소하십시오. </li><li> 분기에 말초 약 1 mm로 카테터을 부활 시켰습니다. 선박이 고정되어 있는지 확인 할 수있는 매듭에 인접 포셉으로 동맥을 잡아. </li></ol> 6. 마니 톨를 관리 <ol><li> 모든 기포를 생성하지 않고 8 &quot;IV 확장 세트 마니 톨과 6 ML의 주사기를 채우기 37 보육에서이 작업을 저장 ° C. 참고 : 작업을 신속하게 마니 톨과 함께 - 그게 쉽게 상온에서 솔루션에서 침전됩니다.. </li><li> BBBD 시각화하기 위해, 당신은 에반스 청색 색소를 관리 할 수​​ 있습니다하고 장벽이 중단 된 뇌의 영역을 입력 봐. 이 작업을 수행하려면 propofol 주입에 contralateral 다리에 새로운 IV 사이트를 통해 동물에게 2퍼센트 에반스 블루의 2 ML / kg을 제공합니다. </li><li> 필터링 및 공기 온것을 제거 할 마니 톨로 작성 5 μm로 설정 확장을 첨부bles. 그런 다음 거품을 만들지 않고 꼭지이 첨부하십시오. </li><li> 0.09 25 ML / 초 초에 마니 톨을 관리 할 수​​ 있습니다. ICA에 불과 근위 지점에 온목의 흐름과 평형에 도달 할 마니 톨을 보내드릴 것입니다. 이 쥐의 심장 박동 펄스에 나타납니다. 마니 톨은 단순히 마음으로 아래로 흐르는 경우 쥐의 혈액 압력을 극복했습니다. 이 생명을 위협하는 합병증 및 가난한 BBBD가 발생할 수 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Abbott, N. J., Patabendige, A. A. K., Dolman, D. E. M., Yusof, S. R., Begley, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+disease%22%5BJournal%5D)">Structure and function of the blood-brain barrier.</a> Neurobiology of disease. 37, 13-25 (2010).</li>
<li>Smith, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The Blood-Brain Barrier.</a> 89, 193-208 (2003).</li>
<li>Kroll, R. A., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outwitting+the+blood-brain+barrier+for+therapeutic+purposes%3A+osmotic+opening+and+other+means%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Outwitting the blood-brain barrier for therapeutic purposes: osmotic opening and other means.</a> Neurosurgery. 42, 1083(1998).</li>
<li>Kroll, R. A., Pagel, M. A., Muldoon, L. L., Roman-Goldstein, S., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+volume+of+distribution+to+the+brain+with+interstitial+infusion%3A+dose%2C+rather+than+convection%2C+might+be+the+most+important+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Increasing volume of distribution to the brain with interstitial infusion: dose, rather than convection, might be the most important factor.</a> Neurosurgery. 38, 746-754 (1996).</li>
<li>Butt, A. M., Jones, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+histamine+and+antagonists+on+electrical+resistance+across+the+blood-brain+barrier+in+rat+brain-surface+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Effect of histamine and antagonists on electrical resistance across the blood-brain barrier in rat brain-surface microvessels.</a> Brain research. 569, 100-105 (1992).</li>
<li>Inamura, T., Black, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bradykinin+selectively+opens+blood-tumor+barrier+in+experimental+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Bradykinin selectively opens blood-tumor barrier in experimental brain tumors.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 14, 862-870 (1994).</li>
<li>Matsukado, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+tumor+uptake+of+carboplatin+and+survival+in+glioma-bearing+rats+by+intracarotid+infusion+of+bradykinin+analog%2C+RMP-7%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Enhanced tumor uptake of carboplatin and survival in glioma-bearing rats by intracarotid infusion of bradykinin analog, RMP-7.</a> Neurosurgery. 39, 125(1996).</li>
<li>Kroll, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+drug+delivery+to+intracerebral+tumor+and+surrounding+brain+in+a+rodent+model%3A+a+comparison+of+osmotic+versus+bradykinin+modification+of+the+blood-brain+and%2For+blood-tumor+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Improving drug delivery to intracerebral tumor and surrounding brain in a rodent model: a comparison of osmotic versus bradykinin modification of the blood-brain and/or blood-tumor barriers.</a> Neurosurgery. 43, 879(1998).</li>
<li>Kinoshita, M., McDannold, N., Jolesz, F. A., Hynynen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+localized+delivery+of+Herceptin+to+the+mouse+brain+by+MRI-guided+focused+ultrasound-induced+blood-brain+barrier+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Noninvasive localized delivery of Herceptin to the mouse brain by MRI-guided focused ultrasound-induced blood-brain barrier disruption.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 103, 11719-11723 (2006).</li>
<li>Neuwelt, E. A., Dahlborg, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy+administered+in+conjunction+with+osmotic+blood-brain+barrier+modification+in+patients+with+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuro-oncology%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy administered in conjunction with osmotic blood-brain barrier modification in patients with brain metastases.</a> Journal of neuro-oncology. 4, 195-207 (1987).</li>
<li>Doolittle, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+a+multicenter+study+using+intraarterial+chemotherapy+in+conjunction+with+osmotic+opening+of+the+blood-brain+barrier+for+the+treatment+of+patients+with+malignant+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of a multicenter study using intraarterial chemotherapy in conjunction with osmotic opening of the blood-brain barrier for the treatment of patients with malignant brain tumors.</a> Cancer. 88, 637-647 (2000).</li>
<li>Guillaume, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-arterial+chemotherapy+with+osmotic+blood-brain+barrier+disruption+for+aggressive+oligodendroglial+tumors%3A+results+of+a+phase+I+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Intra-arterial chemotherapy with osmotic blood-brain barrier disruption for aggressive oligodendroglial tumors: results of a phase I study.</a> Neurosurgery. 66, 48(2010).</li>
<li>Remsen, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+anesthetic+choice%2C+PaCO2%2C+and+other+factors+on+osmotic+blood-brain+barrier+disruption+in+rats+with+brain+tumor+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+%26+Analgesia%22%5BJournal%5D)">The influence of anesthetic choice, PaCO2, and other factors on osmotic blood-brain barrier disruption in rats with brain tumor xenografts.</a> Anesthesia & Analgesia. 88, 559-559 (1999).</li>
<li>Nilaver, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+herpesvirus+and+adenovirus+to+nude+rat+intracerebral+tumors+after+osmotic+blood-brain+barrier+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Delivery of herpesvirus and adenovirus to nude rat intracerebral tumors after osmotic blood-brain barrier disruption.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 92, 9829(1995).</li>
<li>Fortin, D., McCormick, C. I., Remsen, L. G., Nixon, R., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unexpected+neurotoxicity+of+etoposide+phosphate+administered+in+combination+with+other+chemotherapeutic+agents+after+blood-brain+barrier+modification+to+enhance+delivery%2C+using+propofol+for+general+anesthesia%2C+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Unexpected neurotoxicity of etoposide phosphate administered in combination with other chemotherapeutic agents after blood-brain barrier modification to enhance delivery, using propofol for general anesthesia, in a rat model.</a> Neurosurgery. 47, 199(2000).</li>
<li>Neuwelt, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+CNS+lymphoma+treated+with+osmotic+blood-brain+barrier+disruption%3A+prolonged+survival+and+preservation+of+cognitive+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+oncology%22%5BJournal%5D)">Primary CNS lymphoma treated with osmotic blood-brain barrier disruption: prolonged survival and preservation of cognitive function.</a> Journal of clinical oncology. 9, 1580(1991).</li>
<li>Remsen, L. G., Trail, P. A., Hellström, I., Hellström, K. E., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+delivery+improves+the+efficacy+of+a+tumor-specific+doxorubicin+immunoconjugate+in+a+human+brain+tumor+xenograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Enhanced delivery improves the efficacy of a tumor-specific doxorubicin immunoconjugate in a human brain tumor xenograft model.</a> Neurosurgery. 46, 704(2000).</li>
<li>Neuwelt, E. A., Pagel, M. A., Kraemer, D. F., Peterson, D. R., Muldoon, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+chemoprotection+without+compromise+of+chemotherapy+efficacy+in+a+rat+brain+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Bone marrow chemoprotection without compromise of chemotherapy efficacy in a rat brain tumor model.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 309, 594-599 (2004).</li>
</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

BBBD의 효능을 극대화 몇 수단이 있습니다. 이 컷 다운 단계에서 출혈을 최소화하는 것이 중요합니다. 혈압과 심장 박동을 상당한 출혈에 의해 영향을받을 수 있으며, 이러한 요소는 BBBD 13 정도에 영향을 미치는 것으로 알려져 있습니다. 출혈은 같은 뛰어난 갑상선과 구분되어야한다 뒤통수 동맥과 같은 주요 혈관을 ligate에 봉합을 사용하여 줄일 수있다. 또한, electrocautery는 혈관을 분할하고 풍부한 혈액 공급이 영역을 해부하는 데 사용할 수 있습니다. 특히 경동맥 카테 테르 -이 동물에 배치 모든 라인에서 공기와 고체를 유지하는 것도 중요합니다. 마니 톨과 함께 신속하게 협력 결정은 주사기 나 튜브 내부에 형성되지 않도록하는 데 도움이됩니다. 그것은이 실험에 사용 된 쥐의 크기와 변형에 효과적입니다 마니 톨 유량을 사용하는 것이 중요합니다. 마니 톨 주입의 유량은 쥐의 일반적인 caroti에 압력을 일치해야합니다이러한 D 동맥 손상을 일으...

<table border="1"><tbody><tr><td> 재료 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 논평 </td></tr><tr><td> 긴 에반스 쥐 </td><td> 할란 연구소 </td><td></td><td> 2백10~2백50g 남성 </td></tr><tr><td> PE 50 배관 </td><td> Beckton - 디킨슨 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 18 게이지 X 2.5 &quot;IV 카테터 </td><td> Terumo </td><td></td><td> 동부 표준시 튜브에 대한 </td></tr><tr><td> 30 &quot;IV 확장 설정 </td><td> 애보트 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 26 게이지 수의학 IV 카테터 </td><td> Monoject </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 에반스 청색 색소 </td><td> 시그마 </td><td> E2129 </td><td></td></tr><tr><td> 이극의 </td><td> Codman </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 필터, 5 μm </td><td> 브라운 </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

혈액 - 뇌 장벽 장애의 쥐 모델 neurovascular 치료학 타겟이 분명한 허용하려면

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

지하 막과 astrocyte 최종 피트와 함께 꼭 접속점과 내피 세포는 혈액 - 뇌 장벽 하나를 형성하기 위해 대뇌 혈관을 둘러싸고 있습니다. 장벽은 선택적으로 혈액과 크기와 비용에 따라 뇌 간 이동에서 분자를 제외합니다. 이 기능은 신경 장애 치료학의 전달을 방해 할 수 있습니다. chemotherapeutic 약물의 수는 예를 들어, 효율적으로 종양 세포 2를 도달 할 혈액 - 뇌 장벽을 통과하지 않습니다. 따라서, 혈액 - 뇌 장벽에 걸쳐 약물의 전달을 향상하는 것은 관심의 영역입니다. 뇌에 약물의 전달을 향상을위한 가장 널리 방법은 직접 대뇌 주입하고 혈액 - 뇌 장벽 중단 3아르. 치료법은 뇌에 도달 직접 intracerebral 주입 보장하는, 그러나,이 방법은 약물에게 4 분산 할 수있는 제한된 능력을 갖추고 있습니다. 혈액 - 뇌 장벽 장애 (BBBD) 알순환 시스템에서 직접 흐름에 낮은 약물 뇌에 있으며 따라서보다 효율적으로 분산 종양 세포에 도달합니다. 장벽 장애의 세 가지 방법은 삼투 장벽 파괴, 약리 차단 중단하고, microbubbles과 중심 초음파가 포함되어 있습니다. Neuwelt에 의해 개척 삼투 중단은 그들의 꽉 접합을 축소하고 방해하는 원인이되는 혈액 - 뇌 장벽의 세포를 dehydrates 25 % 마니 톨의 hypertonic 솔루션을 사용합니다. 장벽 장애는 또한 히스타민 5, bradykinin 6과 같은 vasoactive 화합물과 pharmacologically 수행 할 수 있습니다. 이 방법은 그러나, 주로 뇌 종양이 장벽을 7 선택합니다. 또한, RMP-7, bradykinin 펩타이드의 아날로그은 25 % 마니 톨 8 삼투 BBBD으로 정면을 비교했을 때 열악한 것으로 발견되었다. 또 다른 방법 microbubble 초음파 대비 에이전트와 함께 집중 초음파 (FUS)는도 표시되었습니다가역적으로 혈액 - 뇌 장벽 9 엽니 다. FUS에 비해하지만, 25 %의 마니 톨은 병진 연구 10-12를위한 입증 된 도구 만드는 인간의 환자 안전의 긴 역사를 가지고 있습니다. BBBD 달성하기 위해, 마니 톨은 직접 뇌의 동맥 순환에 높은 속도로 전달해야합니다. 인간에 ​​endovascular 카테터가 빠른 직접 흐름이 수행 할 수 있습니다 뇌에 안내되어 있습니다. 이 프로토콜 모델 인간 최대한 BBBD. 컷 다운 온목 동맥의 분기에 따라 카테터는 ECA에 역행 삽입과 속목 동맥 (ICA) 순환에 직접 마니 톨을 제공하는 데 사용됩니다. Propofol과 N 2 O의 마취는 장벽 파괴 13의 효과를 극대화 할 수 있는가에 대한 능력을 사용합니다. 제대로 실행하는 경우이 절차를 안전하게, 효율적으로, 그리고 가역적으로 혈액 - 뇌 장벽과 즉흥을 열 수있는 능력을 가지고전자 일반적으로 뇌 8,13,14에 도달하지 약물의 전달.

<img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/50019/50019fig1.jpg" /> 1 그림. 에반스 청색 색소의 넘쳐 흐름을 통해 혈액 - 뇌 장벽 혼란을 시각화. 에반스 청색 색소은 알부민에 바인딩 및 생리 조건 하에서 뇌에 extravasated되지 않는 안료입니다. 뇌의 한쪽에있는 혈액 - 뇌 장벽의 파괴가 아닌 중단 반구는 변함 동안 에반스는 파란색 중단 반구의 파란색를 입력하고 얼룩 할 수 있습니다. 따라서, 그것은 혈액 - 뇌 장벽 장애의 유용한 표시입니다. 그림 1A는 혈액 - 뇌 장벽 장애없이 뇌의 예입니다. 그림 1B는 25 % 마니 톨을 사용하여 삼투 BBBD 후 뇌 스테인드 푸른 색의 예입니다. 다른 유적은 흠없는 반면 남반구는 파란색 얼룩이되어 있습니다. 일부 블루 ​​t에서 혈액 흐름의 혼합의 결과로 중간 종...

혈액 - 뇌 장벽 장애는 뇌에 특정 약물의 전달을 에이즈. 마니 톨은 물리적 장벽을 방해하기 위해 간 arterially 혈관을 수축 주변 세포를 전달했습니다.

혈액 - 뇌 장벽 장애의 쥐 모델 Neurovascular 치료학 타겟이 분명한 허용하려면

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

이 절차의 전반적인 목표는 혈액-뇌 장벽을 파괴하는 것입니다. 이것은 먼저 기관내 기도와 함께 동물을 IV 마취에 놓음으로써 수행됩니다. 다음으로, 총경동맥의 분기점이 노출됩니다.그런 다음 카테터를 외부 경동맥에 삽입합니다. 마지막으로 만니톨을 투여합니다. 궁극적으로 Evan's Blue Dye의 유출을 통해 혈액 뇌 장벽 파괴를 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.기존 동맥 내 치료 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 생리학적 조건에서 일반적으로 혈액-뇌 장벽을 통과하지 않는 약물이 뇌에 들어갈 수 있다는 것입니다. 이는 혈액-뇌장벽을 통과할 수 있는 능력이 좋지 않은 새로운 치료법을 테스트할 수 있게 해주기 때문에 신경과학 분야에 시사하는 바가 있습니다. 이 기술의 의미는 신경 종양학으로 확장되어 많은 화학 요법제가 혈액 뇌 장벽을 통과하지 못하기 때문입니다.글쎄요, 이 방법은 새로운 종양학에 대한 통찰력을 제공하지만, 혈액 뇌 장벽 투과성이 좋지 않은 약물로 치료되는 다른 신경학적 디스 장애에 대한 정보도 제공할 수 있습니다. 우리는 이 방법의 시각적 시연을 통해 동물 수술에 익숙한 연구원들이 실험실에서 이 기술을 사용할 수 있기를 바랍니다. 시작하려면 25% 만니톨 용액을 준비하고 결정이 없는지 확인합니다.결정이 있는 경우 바이알을 섭씨 80도의 수조에 넣고 교반하여 분해합니다. 주기적으로 동물의 질량을 기록하고 분당 0.1 밀리리터의 속도로 전달되는 프로포폴 12cc 주사기 2개를 준비합니다. 유도실에서 동물을 마취한 후 일회용 수건에 올려 놓고 목과 허벅지 안쪽을 면도합니다.동물을 다시 유도실에 3분 동안 눕힙니다. 쥐의 삽관을 준비하려면 먼저 IV 카테터로 기관내관을 준비합니다. 튜브는 적절한 공기 흐름을 허용할 수 있을 만큼 충분히 커야 하지만 손상을 일으키지 않고 기관에 들어갈 수 있을 만큼 작아야 합니다.스타일러스를 만들려면 플라스틱 카테터에서 바늘을 빼내고 조심스럽게 바늘을 부러뜨립니다. 날카로운 끝에서 약 1cm 떨어진 곳에 바늘을 카테터에 다시 넣습니다. 다음으로, 비스듬한 표면에 쥐의 이빨을 매달아 놓고 귀 사이에 정렬된 동물의 목에 직접 빛을 비춥니다.다음으로 구인두에 작은 주걱을 삽입합니다. 약 3cm. 혀를 입 밖으로 부드럽게 빼내면서 위로 들어 올립니다.기관의 개구부를 열리고 닫히는 작은 구멍으로 시각화합니다. 숨을 쉴 때마다 카테터를 구멍에 부드럽게 삽입하고 민감한 기관의 연골에 억지로 밀어 넣지 않도록 합니다. 인공호흡기를 분당 1리터, 60BPM으로 설정한 다음 불소를 2%로 설정한 다음 카테터를 인공호흡기에 연결하고 튜브를 수술 표면에 테이프로 붙입니다.발가락 꼬집기를 수행하여 동물이 마취되었는지 확인합니다. 꼬리에 있는 네 개의 팔다리를 모두 작동 표면에 테이프로 붙여서 경로를 고정합니다. 면도한 목과 사타구니 부위를 클로르헥시딘 비누로 세 번 문지릅니다.그런 다음 클로르헥시딘으로 문지릅니다. 세 번 헹굽니다. 프로포폴 주사기를 IV 확장 세트에 부착하고 주입 펌프에 주사기를 장착합니다.다음으로, 메스를 사용하여 근육을 자르지 않고 면도 한 허벅지의 피부를 잘라냅니다. 그런 다음 집게를 사용하여 절개 부위를 열고 대퇴 정맥을 찾은 다음 동맥 위의 조직을 당겨 혈관을 노출시킵니다. 26G 모노 배출 수의학 IV 카테터를 정맥에 삽입합니다.바늘이 정맥 벽을 뚫으면 정맥을 밀기가 더 쉬워집니다. 바늘을 집어넣고 3-5분 동안 카테터를 혈관 안으로 밀어 넣습니다. 프로포폴 주입을 시작한 후에, 50%O2와 50%N 2 O의 혼합물로 마취 가스를 전환하고 isof 불소를 차단하십시오.총경동맥의 분기점을 드러내려면 먼저 메스 날을 사용하여 목의 정중선을 절개합니다. 기관 위의 흉골 설골 근육에 도달하기 위해 정중선을 따라 표재성 근막을 절단합니다. 조직을 옆으로 움직여 집게나 가위로 쥐 경동맥 삼각형을 형성하는 흉골 설골, 위, 흉골 유양돌기의 세 가지 근육 그룹을 시각화합니다.경동맥을 노출시키기 위해 경동맥 삼각형의 근육 사이에 있는 근막을 분리합니다. 양극성 소작기를 사용하여 거즈 및 면봉과 함께 작은 혈관을 나누십시오 출혈을 조절하려면 견인기를 사용하여 집게로 근육을 분리하십시오. 경동맥에서 조직을 제거하고 분기점을 찾습니다.분기점 바로 원위부에 있는 후두 동맥을 노출시킵니다. 집게 사이에 소작하고 전기 소작기를 사용하여 집게로 분리하십시오. 경동맥 분기점과 외부 경동맥 또는 ECA를 가능한 한 많이 노출시킵니다.ECA 원위부에서 후두 동맥으로 분기하는 상갑상선 동맥을 노출시킵니다. 겸자 사이에 소작하고 분리하여 ECA에 카테터를 삽입하십시오. 그 아래에 4 개의 실크를 두 개 길이로 놓습니다.지혈제를 사용하여 한 길이의 봉합사를 잡고 다른 봉합사와 함께 ECA를 다시 속살로 집어넣습니다. 외과 의사의 매듭으로 가능한 한 두개골 멀리, 분기점 원위부, 영구 결찰부 근위부에 묶습니다. 다른 외과 의사의 매듭을 느슨하게 묶어 동맥을 이완시킵니다.1%리도카인을 세척하고 카테터에 헤파린 식염수를 채웁니다. 다음으로, 분기점에 최대한 가까운 각도로 임시 용기 클립을 배치합니다. 그런 다음 마이크로 가위를 사용하여 느슨한 매듭을 클립 쪽으로 밉니다.합자 바로 근위부에 있는 ECA를 작게 자릅니다. 클립과 합자가 고정되어 있으면 겸자를 사용하여 출혈이 없어야 합니다. ECA 벽을 제어하려면 카테터의 비스듬한 끝을 느슨한 외과 의사의 매듭으로 혈관에 공급합니다.카테터를 고정합니다. 카테터 주위의 동맥을 묶은 다음 클립을 제거하고 면봉을 사용하여 해당 부위를 청소합니다. 카테터를 분기점에서 원위부로 약 1mm 전진시킵니다.겸자를 사용하여 동맥을 매듭 근위부로 잡고 혈관이 움직이지 않도록 합니다. 만니톨을 투여합니다. 8인치 IV 확장 세트와 6ml 주사기에 기포를 생성하지 않고 만니톨을 채웁니다.섭씨 37도에서 보관하여 혈액-뇌 장벽 파괴를 시각화하거나 BBBD는 프로포폴 주입과 반대쪽 다리의 새로운 IV 부위를 통해 2%Evans Blue를 킬로그램당 2밀리그램씩 투여합니다. 확장 세트를 5미크론 필터에 부착하고 미놀로 채워 기포를 제거합니다. 그런 다음 거품을 생성하지 않고 스톱 콕에 부착합니다.초당 0.09밀리리터로 만니톨을 투여합니다 25초 동안 만니톨이 내부 경동맥에 바로 근접한 지점에서 공통 경동맥의 흐름과 평형에 도달하는 것을 관찰하면 쥐의 심박수에 따라 맥박이 뛰는 것처럼 보여야 합니다. 만니톨이 심장 쪽으로 흐르지 않도록 해야 하는데, 이는 만니톨이 쥐의 혈압을 극복하고 심각한 합병증을 유발할 수 있음을 나타냅니다. 뇌의 한쪽에 있는 혈액-뇌 장벽이 파괴되면 Evan의 파란색이 들어가 파괴된 반구를 파란색으로 염색할 수 있지만 비파괴 반구는 변하지 않은 상태로 유지됩니다.여기에 보이는 것은 혈액 뇌 장벽 파괴 또는 BBBD가 없는 뇌의 예이며, 다음은 삼투압 BBBD 후 파란색으로 염색된 뇌의 예이며, 오른쪽 반구가 염색되고 일부 파란색이 Willis의 원에서 혈류의 혼합의 결과로 내측 세로 균열 근처의 왼쪽 반구로 들어갔다는 것을 주목하십시오. 이 기술은 연구자들이 쥐 모델에서 혈액-뇌 장벽을 통과하지 않는 치료법을 탐구할 수 있는 길을 열어줍니다. 이 비디오를 시청한 후에는 경동맥에 카테터를 삽입하고 매니톨 용액을 뇌에 직접 주입하여 흐릿한 뇌 장벽을 파괴할 수 있을 것입니다.

rat-model-blood-brain-barrier-disruption-to-allow-targeted

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

혈액 - 뇌 장벽 (BBB)​​의 Microbubble-매개 집중 초음파 장애는 두뇌의 비침습 타겟 약물 전달을위한 유망...

쥐 모델에서 Transcranial 집중 초음파를 사용하여 혈액 - 뇌 장벽의 MRI를 유도 장애

이 비디오에서는 혈액-뇌 종양 장벽을 모방한 체외 모델을 구축하기 위한 포괄적인 프로토콜에 대해 설명합니다. 이 모델은 뇌종양 치료를 위한 치료제의 전달을 이해할 수 있는 가능성을 가지고 있습니다.

혈액-뇌종양 장벽 또는 BBTB 모델: 종양에 대한 치료제 전달을 평가하기 위한 혈액-뇌 장벽 또는 BBB 모델의 적응

혈액 - 뇌 장벽 (BBB)​​의 인체 모델의 확립 BBB 장애와 관련된 뇌 상태에 대한 연구를 혜택을 누릴 수 있습니다. 우리는 여기서, 다공질 막의 양측에 인간 성상 세포와 뇌 내피 세포의 공동 배양을 허용 접촉 BBB 모델의 제조를위한 개선 된 기술을 설명한다.

방법 혈액 - 뇌 장벽의 인간 세포 기반의 연락 모델의 준비를 위해 개선

본 연구의 목적은 쥐의 동계 내피 세포와 성상 세포의 공동 문화를 포함하는 생체 BBB 모델의 재현성을 확인하는 것이 었습니다. 내피 세포 단일 층은 높은 봉사자 낮은 LY 투과성을 발표했다. 특정 TJ 단백질의 발현은 염증과 운송 및 수용체의 기능에 기능적인 응답은 평가했다.

설정 - 업<em&gt; 체외</em쥐 뇌 혈관 벽의&gt; 모델 (BBB)​​ : BBB 불 침투성 및 수용체 매개 운송에 초점

여기 우리는 마우스 뇌 혈관 침투성 분석 결과 형광 추적기 관류 뇌혈관 장애의 동물 모델에 적용 되는 다음의 복 주사를 사용 하 여 현재. 한 반의 두뇌 양적 침투성을 평가 하 고 추적 프로그램 시각화/immunostaining에 대 한 다른 사용 됩니다. 절차 10 쥐에 대 한 5-6 시간 걸립니다.

Vivo에서 혈액-뇌 장벽 침투성 분석 결과 사용 하 여 마우스에 붙일 추적기 표시

이 절차의 전반적인 목표는 비보에 허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 평가 대 한 높은 재현 기법을 제공 하는입니다.

허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 비보에 평가

여기에 우리가 현재에 cellulo BBB (혈액 뇌 장벽)의 설정을 설명 하는 프로토콜-Minibrain 폴리에스터 다공성 막 문화 인간의 BBB에 걸쳐 생체 또는 전염 성 요원의 전송 평가 시스템 삽입 및 그들의 이웃 뇌 세포에 생리 적 영향입니다.

병원 체 또는 의약품 및 두뇌와 그들의 상호 작용에 의해 장벽 횡단 연구를 인간의 혈액-뇌 인터페이스 모델

마약 중추 신 경계 종양을 대상으로 하는 것은 주요 도전 이다. 여기는 murine 및 인간의 세포를 사용 하 여 혈액 뇌종양 장벽의 생체 모방을 생산 하 고 중추 신 경계 종양 vivo에서 대상의 예측 가능성에 대 한 그들의 관련성을 토론 하는 프로토콜에 설명 합니다.

예측의 Vivo 페이로드 배달 접시에 혈액 종양-배리어를 사용 하 여

혈액 뇌 장벽 (BBB) 단단히 뇌 항상성을 조절 하는 다세포 신경 혈관 단위. 인간 iPSCs와 오르간 온 칩 기술을 결합하여 질병 모델링 및 CNS 약물 침투성 예측에 적합한 맞춤형 BBB 칩을 생성했습니다. BBB 칩의 생성 및 작동에 대해 상세한 프로토콜이 설명된다.

인간 iPSC 기반 혈액-뇌 장벽 칩 생성

이 프로토콜은 인간 혈액-뇌 장벽(BBB) 시험관내 모델을 확립하는 방법을 설명합니다. 내피 세포와 혈관주위세포는 삽입 필터의 양쪽(혈액 구획)에 파종되고 성상세포는 하단 웰(뇌 구획)에 파종됩니다. 상기 모델 특성화는 나노입자 수송 실험에 사용되었다.

인간 혈액-뇌 장벽을 모델링하는 삼중 배양 세포 시스템

혈액뇌장벽(BBB)은 안정적이고 건강한 뇌 환경을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다. BBB 기능 장애는 많은 신경 질환과 관련이 있습니다. 우리는 뇌혈관 병리, BBB 무결성, BBB가 유전학 및 질병에 의해 어떻게 변형되는지 조사하기 위해 BBB의 3D 줄기세포 유래 모델을 개발했습니다.

신경 질환을 모델링하고 치료적으로 표적화하기 위한 체외 혈액-뇌 장벽 재건

배우세요 쥐 모델에서 혈액-뇌 장벽을 파괴하는 방법을 통해 신경학적 치료제 전달을 개선하는 기술입니다. 마니톨을 경동맥에 주입하여 약물이 뇌로 진입할 수 있게 합니다.

혈액 - 뇌 장벽 장애의 쥐 모델 Neurovascular 치료학 타겟이 분명한 허용하려면

더 많은 동영상 탐색