Name: 쥐에서 동맥 경화 수스 Myointimal 증식을 유도 : 두 개의 유효한 모델의 소개 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: 배우세요 쥐에서 동맥 경화와 근육내피 증식을 유도하는 두 가지 유효한 모델을 소개합니다. 풍선 카테터화와 식이 조작을 통해 혈관 병리 메커니즘을 연구할 수 있습니다.

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저자는 기술 지원을 크리스티안 Pahrmann 감사합니다. SS는 독일 Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/3-2 및 SCHR992/4-2)로부터 자금을 받았다.

모든 동물 연구는 중요한 동물 관리 지침에 따라 수행되어야한다. 이전에 시작 프로토콜 동물 작업 기관의 승인을 얻습니다. 1. Myointimal 증식 모델 (A) 내막 증식증 모델의 경우, C57BL/6J (주문 번호 000664, C57BL/6J) 약 25 g의 무게 팔주 세의 나이에 마우스를 구입할 수 있습니다. 기존의 조건에서 이러한 실험을위한 주택의 마우스; 마우스 표준 마우스 우를 공급하고 임의 량의 물을 제공합니다. <ol><li> 마우스 준비 : 유도 챔버를 이용한 이소 플루 란 (2 %)와 마취 상태로 마우스를 소개합니다. <ol><li> 그 뒷면에 마우스를 놓고 마취를 보장하기 위해 안면 마스크로 코와 입을 커버, 머리 트리머를 사용하여 복부의 머리를 제거합니다. </li><li> 프로보 - 요오드, 2 사이클에서는 80 % 에탄올이어서 보편적 복부 영역을 소독. </li><li> 이 없음을 보증마취의 충분한 깊이를 모니터하기 위해 뒷다리를 곤란에 의한 반사의. </li><li> 복부 장기를 노출하는 두 단계로 리네아 알바을 따라 피부와 근육을 분리합니다. </li><li> 식염수 보습 장갑에 내장을 놓습니다. 습기를 유지하기 위해 내장 주변의 장갑을 감싸십시오. </li><li> 주의 깊게 복부 대동맥 천축 지방 조직을 제거하다. 어떤 지점의 혈관을 손상하지 않도록주의하면서 아래의 분기점에 신동맥 대동맥을 노출합니다. </li><li> 첫째, 혈액의 흐름을 차단하기 위해, 근위에 신동맥 대동맥을 미세 수술 클램프를 놓습니다. 이제, 대동맥 분기 옆에 두 번째 원심 클램프를 적용합니다. </li><li> 혈액의 흐름이 중단되면, 근위 클램프 부근 대동맥에 작은 절개 부위를 만든다. </li><li> 0.9 %의 식염수에 수분 된 풍선 팁 카테터를 삽입하고 대동맥의 말초 클램프를 향해 전진. </li><li> 내피 손상의 경우, balloo 팽창하여 대동맥을 발가 벗기다N 신중하고 천천히 근위 클램프의 방향으로 카테터를 당겨. </li><li> 두 번 삭박 기동을 반복합니다. </li><li> 카테터를 제거하고 10-0 prolene의 실행 봉합사를 이용하여 대동맥 절개를 닫습니다. </li><li> 조심스럽게 말초 클램프를 엽니 다. aortotomy 사이트에서 출혈의 경우에는, 필요에 따라, 다시 클램프를 닫 출혈을 찾아 추가 중단 바늘을 배치. </li><li> 제공된 출혈이 관찰 될 수있는 경우, 천천히 근위 클램프를 연다. </li><li> 대동맥 펄스는 절개에서 원심 볼 수 있어야합니다. 이제 내장은 현장에 다시 배치 될 수있다. </li><li> 예열 멸균 식염수를 이용하여 복강을 씻어. </li><li> 복부 벽 6-0 prolene의 실행 봉합사를 이용하여 근육 층으로 시작 닫습니다. </li><li> 다음 5-0 prolene을 수행하는 실행 봉합사의 사용에 따라 피부를 적응. </li><li> 시간 동안 마우스가 여전히 마취, 피하 인제을 통해 4 ~ 5 ㎎ / ㎏ Carprofen을 적용의 ction. </li><li> 통증 조절을 위해 마시는 물 (100 ㎖ 당 50 밀리그램의 Metamizol)에 Metamizol를 첨가하고 3 일 수술 후 계속. 복구를 통해 동물을 모니터링합니다. 참고 :이 모델의 관찰 기간은 28 일입니다. </li></ol></li></ol> 이. 죽상 경화증 모델 (B) 사주의 나이에 마우스 (주문 번호 002052, B6.129P2-Apoetm1Unc / J), 다음 4-6개월에 공급되는 동맥 경화 모델의 경우, 아포 지단백 E 결핍을 (- - / 아포)를 구입. 기존의 조건에서 이러한 실험을위한 주택의 마우스; 쥐에게 도착시 높은 지질 서부 다이어트 (할렌 연구소 TD.88137)를 공급하고 4~6개월의 기간 동안 임의 량의 물을 제공합니다. <ol><li> 마우스 준비 : <ol><li> 아포 피드 - / - 서부 다이어트와 마우스 시대 4 주에서 시작. 식이 조작 도착시 직접 시작해야합니다. </li><li> 실험 기간에 걸쳐 서양 식단을 유지한다. &lt;/ 리&gt; </ol></li></ol> 3. 분석 <ol><li> Myointimal 증식증 모델 (A) 이 모델에 대한 관심의 영역은 &quot;병변의 영역&quot;이다. 분석을위한 옵션 내강 말살을 포함, I / M 비율 (내막 / 미디어 비율), 최대 myointima 두께, myointimal 지역, 섬유증에 대한 트리 크롬 염색, 및 단핵 세포에 대한 H &amp; E 염색 (그림 1A-1C에 도시 된 바와 같이). 과학적인 문제에 따라 Picrosirius 콜라겐 빨간색, 면역 조직 화학 염색 및 공 초점 방법 등 많은 다른 염색에 적용 할 수있다. </li><li> 죽상 경화증 모델 (B) 이 모델에 대한 관심의 영역은 대동맥 판막, 대동맥 궁뿐만 아니라 하행 대동맥이다. 분석을위한 옵션 : 수단 빨간 지질에 대한 염색 및 대동맥 판막, 대동맥 궁과 하행 대동맥 (그림 1D에 도시 된 바와 같이)의 트리 크롬 염색. 이 모델은 또한 같은 다른 염색의 다양한 옵션을 산출중성 지질, Picrosirius 레드, 면역 조직 화학 염색 및 공 초점 방법 예를 들어 오일 레드 O하십시오. <ol><li> 수단 레드 염색 : 갓 수확 대동맥 조직의 수단 레드 염색을 수행합니다. <ol><li> 수확하기 전에 다이어트 6H를 제거합니다. </li><li> 유도 챔버를 이용한 이소 플루 란 (2 %)와 마취 상태로 마우스를 소개합니다. 마취의 충분한 깊이를 모니터링하는 뒷다리 곤란하여 반사의 부재를 확신한다. </li><li> 가슴을 열고; 마음의 정점을 차단하고 대동맥을 해결하기 위해 대동맥 루트를 통해 4 % PFA (3 ㎖) 다음에, 첫 생리 식염수 (3 ㎖), 좌심실을 통해 perfuse. </li><li> 그 분기점에 루트에서 대동맥을 확보. 지방 조직에게 가능한 한 많이 제거하려고합니다. </li><li> 심장과 대동맥 루트를 차단하고, 조직 검사를위한 4 % PFA에 저장합니다. </li><li> 조직학의 경우 대동맥 루트는 신중하게 AOR의 절단을 허용하는 수직으로 파라핀 블록에 배치 할 수있다3 밸브 모양의 전단지를 표시 TIC 루트 생성 슬라이드. </li><li> 대동맥 나무의 한쪽 끝을 잘라 미세 핀에 실리콘 층에 고정합니다. 길이 방향으로 대동맥을 열고 대동맥 조직을 고정합니다. </li><li> 50 % 에탄올로 조직을 씻어. 약 15 분 동안 수단 III 염색 용액으로 조직을 담가. </li><li> 초과 수단 III를 제거하기 위해 50 %의 에탄올로 가볍게 씻어. dH보다 2 O 씻어하고, 추가 분석을 위해 사진을 찍어 ​​(50 % 에탄올이 떨어져 염료를 세척 할 수 있습니다. 참고). </li></ol></li></ol></li></ol>

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</ol>

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두 질환은 환자와 유사한 증상을 초래할 있지만, 플라크 개발의 기본 메커니즘에 따라서 치료 방법은 2 매우 다릅니다. 동맥 협착의 다른 형태의 환자에서 임상 연구 결과뿐만 아니라 플라크 개발의 기간은 기본 메커니즘에 따라 달라집니다. 환자의 임상 연구 결과에 따라, 시료 분석의 다른 방법은 5,15를 수행해야합니다. 그것은 선택된 모델 (14)에 의해 모방 될 질병 특성 분석 결과에 적응할 필요가있다. 그 반대의 경우도 마찬가지, 연구되고 질병에 따라, 가장 실현 가능한 적절한 동물 모델을 선택해야합니다. 또한, 신약 기작 모델과 일치해야하는 것이 중요하다. 이 책에 소개 된 두 모델은 빠르게 수행하기 쉽고 재현성이 있습니다. 어떤 엄마가있다모델 사이 조 차이. 죽상 경화성 플라크의 발달이 4-6개월 17 필요한 예를 들어, myointimal 증...

산업화 된 국가에서 허혈성 심장 질환 사망률 1의 주요 원인이 남아있다. 관상 동맥 협착에 대한 원인은 매니 폴드이며 가장 일반적인 치료 전략이 잔존 재관류와 myointimal 증식뿐만 아니라 아테롬성 동맥 경화증을 포함한다. 분명히 내막 증식증과 죽상 경화증의 기계적인 경로를 구분 연구 모델은 동맥 플라크 개발 병인 학적 및 병태 생리 학적 과정을 조사하는 것이 필수적이다. 이 비디오에서는 myointimal 증식 또는 죽상 경화증의 개발 중 하나를 연구하는 데 두 개의 서로 다른 마우스 모델을 소개합니다. Myointimal 증식증 원래 죽상 3에 대해 기재된 &quot;응답 투 부상&quot;패러다임을 통해 형성하는 것이 가정된다. 내피 층의 기계적 중단 주변 분비 효과에 의해 강화 강렬한 리모델링에 이르게한다. 여러 디가 있습니다fferent 동물 모델은 일반적으로 myointimal 증식을 연구하는 데 사용됩니다. 일부 그룹은 쥐 4의 대동맥에서 금속 장치를 사용한다. 풍선 카테터 수행 대동맥 삭박 모델은 또한 일반적으로 실험실 쥐 5,6에서 사용된다. 실험용 쥐 (7)에서 수행 내막 증식증 모델 경동맥의 결찰을 구현하고 myointimal 8 병변을 유도한다. 우리 실험실에서, 복부 대동맥 삭박 모델 -뿐만 아니라 인간 답게 스텐트 재 협착 모델 (9) 일반적으로 사용되는 - myointimal 증식의 개발을 연구한다. 이 비디오는 적절한 실험 동물 모델을 선택하는 것이 동맥 협착의 기계적 또는 병태 생리 학적 연구에 중요한 것을 강조한다. Myointimal 증식 모델은 동맥 경화 모델을 구별해야합니다. 후자의 경우, 아포 리포 단백질 E가 결핍 (아포 - / -) 서부 다이어트와 함께 마우스는 일반적으로 atheroscl을 유도하는 데 사용됩니다에로틱 병변 10,11,12,13. 생쥐 myointimal 질병의 이러한 유형의 모두의 유도에 대한 예는 혈관 협착 (14)를 분석하기 위해 다른 모델 적응 옵션과 함께 표시되어 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Thyoglycollate Broth 3%</td><td>Fluka</td><td>70157</td><td>분말</td></tr><tr><td>PFA 4%</td><td>전자 현미경 과학</td><td>#157135S</td><td>20%</td></tr><tr><td>수단 III 염색 용액</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S4131</td><td>분말</td></tr><tr><td>마우스 C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratories</td><td>재고 # 0006664</td><td></td></tr><tr><td>마우스 ApoE -/-</td><td>Jackson Laboratories</td><td>재고 #002052</td><td></td></tr><tr><td>Western Diet</td><td>Harlan Laboratories</td><td>TD.88137</td><td></td></tr><tr><td>이발기</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td></td><td>Isoflurane</td></tr><tr><td>미세 수술 클램프</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>Micro-Serrefine - 4mm</td></tr><tr><td>클램프 애플리케이터</td><td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td></td></tr><tr><td>카테터</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 프롤렌 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>788G</td><td></td></tr><tr><td>6-0 프롤렌 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>8709H</td><td></td></tr><tr><td>5-0 프롤렌 봉합</td>사 <td>Ethicon</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>Rimadyl</td><td>Pfizer</td><td></td><td>Carprofen</td></tr><tr><td>Metacam 1.5 mg/ml</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td></td><td>Metamizol</td></tr></tbody></table>

쥐에서 동맥 경화 수스 myointimal 증식을 유도 : 두 개의 유효한 모델의 소개

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

동맥 협착의 유도에 대한 다양한 생체 실험 쥐 모델은 허혈성 심장 질환, 예를 들어 관찰, 동맥 플라크 형성 및 협착 등의 질병을 모방하기 위해 설립되었다. 두 재현성 마우스 모델 - 두 동맥 협착의 결과로하지만, 각 개발의 다른 경로를 기본는 - 여기에 소개합니다. 모델은 동맥 협착의 가장 일반적인 두 가지 원인을 나타냅니다; 즉 하나의 마우스의 각 myointimal 증식을위한 모델 및 죽상 동맥 경화증이 표시됩니다. myointimal 증식을 유도하기 위해, 복부 대동맥의 풍선 카테터의 부상이 수행된다. 죽상 경화성 플라크의 발달을 위해, 아포 - / - 서부 지방 다이어트와 함께 마우스 모델이 사용된다. 결과의 측정 및 평가를위한 다른 모델 적용 옵션이 원고에 이름과 설명되어 있습니다. 이 두 모델의 도입과 비교 INFORMAT를 제공합니다과학자가 물었다 과학적 질문에 따라 적절한 동맥 협착 모델을 선택하는 이온.

그림 1은 서로 다른 분석 옵션과 두 모델의 유도 된 질병 상태를 보여줍니다. 내막 증식증 모델의 경우, 트리 크롬 염색 대표적인 단면의 분석이 표시됩니다. 이러한 단면에서, I / M 비율, 최대 플라크 두께, 루멘에서 최대의 내막 두께, 퍼센트 내강 폐색뿐만 아니라 플라크 지역과 같은 결과를 측정하여 계산 될 수있다. 죽상 동맥 경화증 모델의 결과를 평가하기 위해, 위에 언급 된 모든 방법을 사용할 수 있습니다. 또, 복부 대동맥에서 정량적 플라크 영역, 대동맥판, 대동맥 궁과 하행 대동맥에서 플라크 형성의 정도는 트리 크롬 염색을 통해 측정 할 수있다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51459/51459fig1highres.jpg" src=...

이 동영상은 쥐의 동맥 내막 플라크 개발의 두 가지 모델을 보여주고 myointimal 증식과 죽상 경화증의 차이를 강조한다.

쥐에서 동맥 경화 수스 Myointimal 증식을 유도 : 두 개의 유효한 모델의 소개

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

다음 실험의 전반적인 목표는 서로 다른 기전에 의해 대동맥 협착을 유도하는 두 가지 유효한 동물 모델을 소개하는 것입니다. 첫 번째 모델은 대동맥의 풍선 카테터 삽입술을 통해 근중막 증식을 유발하는 모델입니다. 우선, 신하부 복부 대동맥을 노출시키고 클램프로 고정합니다.그 다음 대동맥을 횡절개하여 개방하고 풍선 카테터를 삽입합니다. 팽창된 카테터로 대동맥의 내피를 박리하면 수술이 완료됩니다. 두 번째 모델은 APOE 결핍 형질전환 마우스의 식이 조절을 통해 죽상경화반을 생성하는 방식입니다.이 마우스들은 표준 조건에서 사육되었으며, 4~6개월 동안 고지질 서구식 식단을 섭취하였습니다. 결과적으로, 수술로 유도된 근내막 증식과 식단 제한 모델의 조직학적 분석을 통해 두 모델이 서로 다른 내강 협착을 유발한다는 것을 알 수 있습니다. 오늘은 풍선 카테터를 사용하여 혈관 손상을 유도하는 마우스 모델과 동맥경화 모델이라는 두 가지 서로 다른 내강 협착 유도 모델을 보여드리겠습니다.서구식 식이요법을 적용한 형질전환 생쥐와 풍선 카테터 모델을 통해 협착증 분야의 핵심 질문들에 대한 답을 얻을 수 있습니다. 형질전환 동형 접합 upper E 변이 생쥐 모델은 죽상동맥경화증의 병태생리를 연구하는 데 사용됩니다. 내막 증식 모델의 경우, 무게가 약 25g인 C 57 black six J 생쥐를 준비하십시오.일반적인 식단과 함께 정상 조건에서 마우스들을 사육합니다. 2% isof fluorine으로 마우스를 마취시킨 후, 복부 털을 제거하고 진통을 위해 carprofen을 피하 주사합니다. 다음으로, Provo iodine과 80% ethanol을 사용하여 피부를 두 차례 교대로 소독합니다.이제 발가락 집기(toe pinch)를 통해 반사 반응이 없는지 확인합니다. 백선(linear alba)을 따라 피부와 근육을 분리하여 수술을 시작합니다. 다음으로, 식염수에 적신 장갑으로 장을 감싼 후, 주의 깊게 지방 조직을 제거하여 복부 대동맥을 노출시킵니다.이제 신장하 대동맥을 분지 지점까지 노출시키십시오. 이때 분지 혈관이 손상되지 않도록 주의하십시오. 이제 대동맥을 클램프로 차단하십시오.먼저, 혈류를 차단하기 위해 신장하 대동맥 근위부에 미세 수술용 클램프를 장착합니다. 둘째로, 대동맥 분지부 옆에 두 번째 원위부 클램프를 장착합니다. 혈류가 차단되면, 근위부 클램프 근처의 대동맥에 작은 절개를 가합니다.대동맥의 원위부 클램프 방향으

inducing-myointimal-hyperplasia-versus-atherosclerosis-mice-an

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 우리의 마우스 이식 arteriosclerois (GA) 같은 근친 교배 균주의받는 사람에 마우스 선박 세그먼트의 개재를 포함 모델에 대한 프로토콜을 설명합니다. 용기 기증자에 추가 유전자 변화를 교잡에 의해, 모델은 GA에 특정 유전자의 효과를 평가할 수 있습니다.

이식 동맥 경화에 대한 마우스 모델

조직화학적 및 면역조직화학적 분석과 결합된 대동맥동 및 상행 대동맥의 정밀 절단을 사용하여 마우스 모델에서 죽상경화성 병변을 정량화하고 특성화하는 절차를 설명합니다.

쥐의 대동맥 부비동의 동맥 경화 병변의 정량 분석​​ 및 특성

동물 모델은 만성 염증의 발달에 기여하는 호스트와 병원체의 특정 메커니즘을 규정하는 매우 중요한 도구로 입증되었다. 여기서 우리는 로컬 및 전신성 염증 부위에서의 진행을 평가하기 위해 인간 병원체 Porphyromonas 진지 발리 및 세부 방법론 경구 감염 마우스 모델을 설명한다.

로컬 및 전신 사이트에서 병원체에 의한 만성 염증을위한 마우스 모델

재 협착 마우스 대퇴 동맥 와이어 손상 모델 기술적 도전이다. 이 프로토콜에서 우리는 성공적으로 재 협착의 연구에 대한 일관성있는 신생 내막을 유도하는 와이어 부상을 수행하기위한 주요 기술 세부 사항은 필수 보여줍니다.

동맥 재 협착의 쥐 모델 : 대퇴 와이어 부상의 기술적 측면

이 연구는 마우스에 있는 가속된 죽상 경화증의 유도를 위한 침략적인 절차를 기술합니다. 전기 또는 극저온 유도 된 상해를 사용하는 다른 방법에 비해, 기계적 으로 인한 상해는 재변 치료 후 restenosis의 인간의 상태를 모방하고 관련된 분자 메커니즘의 연구에 이상적입니다.

마우스에서 가속 죽상 경화증의 유도: "와이어 부상" 모델

이 문서에서는 대동맥 풍선 부상 후 murine 모델 myointimal 증식 (수소)의 개발 연구를 보여줍니다.

풍선-기반 부상 마우스 복 부 대동맥에서 Myointimal 증식을 유도 하

죽상 동맥 경화증의 뮤린 모형은 분자 수준에 병원성 통로를 조사하기 위하여 유용한 공구입니다, 그러나 병변 발달의 표준화한 정량화가 요구됩니다. 이 프로토콜은 대동맥 근, 대동맥 아치 및 brachiocephalic 동맥을 포함하여 주요 동맥 혈관에 있는 병변 크기를 결정하기 위하여 최적화된 방법을 기술합니다.

마우스에서 동맥 경화증의 정량화

이 문서는 작은 절개를 가진 마우스에 있는 심각한 허혈을 확립하기 위하여 능률적인 외과 접근을 보여줍니다. 이 방법은 실험실 업그레이드없이 대부분의 연구 그룹에 의해 적용 될 수있다.

ApoE에서 뒷다리 허혈의 변형 된 수술 모델-/- 소형 절개를 사용하여 마우스

여기에서는 대퇴 동맥 문합을 위한 쥐 모델을 제시하여 연구자들에게 혈관 문합 협착증을 연구하고 시뮬레이션할 수 있는 귀중한 동물 모델을 제공합니다. 이러한 발전은 이 질환의 기저에 있는 병태생리학에 대한 이해를 증진하고 혈관 질환에 대한 보다 정확하고 효과적인 연구를 촉진하는 데 매우 중요합니다.

대퇴동맥 해부성 협착증에 대한 쥐 모델 개발

이 문서에서 제시 constricting 커프스는 murine 공통 경동맥에서 죽상 경화증을 유발하기 위해 설계되었습니다. 이식 커프스가 다른 염증성 phenotypes의 atherosclerotic 병변의 발전을 게재 낮은 높이 oscillatory 전단 응력의 잘 정의된 영역을 생성하는 자사의 내부 루멘의 원뿔 모양으로 인해.

마우스의 전단 응력 유발 죽상 경화증을 실행을위한 경동맥 혈압계의 주입

배우세요 쥐에서 동맥 경화와 근육내피 증식을 유도하는 두 가지 유효한 모델을 소개합니다. 풍선 카테터화와 식이 조작을 통해 혈관 병리 메커니즘을 연구할 수 있습니다.

쥐에서 동맥 경화 수스 Myointimal 증식을 유도 : 두 개의 유효한 모델의 소개

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