양육 먼저 먹이 제브라 피쉬의 전체 및 업데이트 "로티퍼 다종 양식 방법"

Rotifer Polyculture Method의 전반적인 목표는 염수 윤충류의 자연적인 생산성과 생물학적 특성을 활용하여 빠른 성장을 촉진하는 환경을 조성하고 첫 번째 먹이를 주는 유충 제브라피쉬의 생존을 극대화하는 것입니다. 이 기술의 주요 장점은 연구 실험에 사용하기 위해 많은 수의 제브라피시 유충을 성공적으로 사육하는 데 필요한 시간과 공간을 크게 줄일 수 있다는 것입니다. 사료 배양 용기(FCV)를 수족관 소금 리터당 10g이 투여된 깨끗하고 탈염소 처리된 담수로 용량의 90%까지 채워 윤충류 배양 유지 관리를 시작합니다.

물이 완전히 섞이고 모든 소금이 완전히 녹았는지 확인하십시오. 그런 다음 롤링 끓는 상태를 유지하도록 공기 흐름을 용기로 설정합니다. 굴절계로 액체의 염도를 측정하십시오.

다음으로, 배양 용기 또는 CV에서 윤충류를 샘플링합니다. 배양이 잘 혼합되었는지 확인하십시오. 그런 다음 배양의 다른 부분에서 전사 피펫을 사용하여 2-3밀리리터 샘플 3개를 수집하고 샘플들을 튜브에 결합합니다. 결합된 시료 중 1-2ml를 페트리 접시에 옮깁니다.

해부 현미경으로 샘플을 시각화하고 배양의 품질을 확인합니다. 100마이크로리터의 50% Lugol의 요오드 용액을 샘플에 추가하여 윤충류를 고정시키고 계수합니다. 즉시 플라스틱 피펫으로 2ml 하위 샘플을 채취하여 1ml를 Sedgewick Rafter 계수 슬라이드에 분배합니다.

해부 현미경을 사용하여 최대 100개의 온전한 윤충류와 윤충류에 부착된 총 알의 수를 계산하는 데 필요한 만큼 슬라이드 영역을 계산합니다. 그런 다음 나중에 사용할 수 있도록 밀리리터당 윤충류 수를 계산합니다. 공기 공급 장치와 치실 필터를 제거하여 수확을 시작합니다.

CV 하단의 밸브를 천천히 열고 물이 53미크론 메쉬 스크린이 있는 플랑크톤 수집기로 부드럽게 흐르도록 합니다. 수집기 바닥에서 흘러나오는 물을 양동이에 여과하거나 배수한 후 모으십시오. 다음으로, 깨끗한 소금물 1리터당 10-15g을 병에 채웁니다.

FCV 위로 스크린을 뒤집고 부드러운 소금물 흐름으로 윤충류를 FCV로 씻습니다. 프로그래밍 가능한 계량 타이머 또는 PMT를 시작하여 FCV에 피드를 전달합니다. 그런 다음 깨끗한 스크럽 패드로 CV 내부 전체를 문지릅니다.

수확으로 손실되는 물의 양을 대체하기 위해 5갤런 양동이에 리터당 15g의 새로운 혼합물을 만듭니다. 혼합물이 완전히 용해될 때까지 용액을 세게 저어줍니다. 그런 다음 CV에 용액을 추가하고 고압 스프레이로 치실 필터를 헹굽니다.

치실 필터에 이물질이 없으면 CV로 되돌립니다.각 투여 이벤트의 지속 시간을 변경하여 CV에 전달되는 조류의 공급 속도를 조정합니다. 24시간 후 이 과정을 반복하여 FCV에 남아 있는 윤충류의 수확을 시작합니다. 윤충류를 소금 1리터당 5g과 함께 신선하고 깨끗한 탈염소 처리된 물 2리터에 농축합니다.

이들은 예비 공급으로 섭씨 4도에서 저장하거나 이 프로토콜에 설명된 것 이상으로 물고기의 후기 단계를 먹이는 데 사용할 수 있습니다. 산란 이벤트에서 생성된 배아를 차 여과기에 부어 제브라피시 배아를 수집합니다. 그런 다음 세면병에 담긴 멸균 생선 물로 페트리 접시에 부드럽게 헹굽니다.

모든 배아가 채취되면 배아를 배양합니다. 부화한 유충의 90% 이상이 물기둥에서 활발하게 헤엄칠 때 다품종 배양 단계를 시작합니다. FCV에서 직접 500ml의 윤충류 배양물을 3.5리터 종묘장 탱크에 추가합니다.

다음으로, 하나의 페트리 접시에 있는 유충을 보육 탱크에 부드럽게 붓습니다. 접시에 유충이 남아 있지 않은지 확인하십시오. 전용 수원에서 탱크로 500ml의 깨끗하고 컨디셔닝된 생선 물을 최종 부피 1리터와 최종 염도 리터당 5g에 추가합니다.

적어도 하루에 한 번 다품종 배양 탱크를 관찰하여 윤충류와 물고기가 존재하고 성장하고 있는지 확인하십시오. 윤충류가 물기둥 전체에 보이는지 확인하십시오. 물고기가 물기둥 안에서도 볼 수 있고 윤충류 사이에서 수영하고 있는지 확인하십시오.

매일 각 수조의 상태를 평가하여 모든 물고기 유충이 사용할 수 있는 윤충류가 살아 있고 수영하고 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 윤충류와 물고기가 자라고 있다는 확신이 들면 탱크를 통해 정상적인 물 흐름을 시작하십시오. 마지막으로, 배수구 위에 스크린을 놓아 유충이 탱크 밖으로 흘러나오지 않도록 합니다.

윤충류 배양의 일반적인 성능은 30일 동안 모니터링되었으며 평균 배양 밀도는 밀리리터당 932개의 윤충류였습니다. 그리고 밀리리터당 최대 1, 330개의 윤충류. 제브라피시가 있는 다품종 배양 탱크의 윤충류 개체군은 평균 윤충류 밀도가 밀리리터당 589.4입니다.

밀리리터당 최소 481 윤충류는 이전에 발표된 연구보다 10배 더 좋습니다. 제브라피시는 5일 동안 평균 총 길이 3.9mm에서 5.4mm로 매일 꾸준히 성장했습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 첫 번째 먹이를 주는 제브라피쉬의 영양 요구 사항을 충족하기 위해 고안된 다품종 배양 시스템에서 사용하기 위해 윤충류를 배양하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.