Name: 일반 마 취 기계를 사용 하 여 프로시저에 대 한 마우스에 웰빙의 체계적인 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: 배우세요 마우스의 웰빙을 체계적으로 평가하는 방법으로, 일반 마취 후 행동 지표와 글루코코르티코이드 대사물질을 분석합니다. 이 프로토콜은 EU 지침 2010/63에 따른 심각도 분류를 지원하며 동물 복지 연구의 윤리 기준을 향상시킵니다.

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샘플 컬렉션,에 디스 Klobetz-Rassam FCM의 분석에 대 한 지원에 대 한 Sabine 제이콥스 감사 PD 박사 중견 기업 수 의사. habil입니다. 통계 분석을 위한 Roswitha Merle 그리고 Wiebke Gentner 원고를 교정에 대 한. 연구의 일부인 베를린-브란덴부르크 연구 플랫폼 BB3R (www.bb3r.de)와 독일 연방 교육부의 연구에 의해 투자 되었다 (허가 번호: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).

학문과 독일 동물 복지 행위에 의해 규정 하는 지침에 따라 수행 했다 베를린 국가 기관에 의해 승인 되었다 ("Landesamt 위한 Gesundheit und Soziales", 허가 번호: G0053/15).
참고:이 프로토콜의 주요 목적은 glucocorticoid metabolites에 반복 된 마 취의 효과 조사 했다. 샘플 크기를 계산 하는 사용 되는 동물의 수를 결정 하기 위해 수행 되었다: n ≥ 2 × (s/μ1-μ2)2 × (zα +βz)2. μ1-μ2 는 전력 및 샘플 크기 계산 만들어집니다 모집단 평균 차이 (α = 5%, β = 80%); zα = 1.96 및 zβ = 0.84는 표준 정규 분포의 quantiles. 그림 1 에서는이 프로토콜의 타임 라인을 보여 줍니다. 매개 변수는 프로토콜의 제어 수준 차이 보여줍니다, 동물을 밀접 하 게 모니터링 해야 하 고 적당 한 기간 후에 다시 매개 변수를 측정 한다. 예를 들어 특성 불안 관련 행동을 증가 하는 경우이 동작이 테스트 해야 다시 1 주일 후, 전체 복구까지 기간을 결정할 수 있도록. 시간 포인트 및이 프로토콜에 정의 된 다른 프로시저와 함께 사용 하기 위해 적용할 수 있습니다. 시간 포인트를 변경할 때 프로토콜에 설명 된 대로 habituation 기간 유지 되어야 한다. 마우스의 동작에 영향을 줄 수 있는 요소를 줄이기 위해 마우스의 정상적인 동작을 방해 하지 않는 테스트 후 더 조작 해야 하는 테스트를 실시 한다. 그림 2 에 요약 점수 시트를 사용 하 여 프로토콜의 모든 테스트 요약 되어 있습니다. 그림 3 테스트 결과 해석 하는 방법에 대 한 개요를 주는 웰빙, 등급의 단순화 된 스케일을 제공 합니다.
1. 실험에 의해 처리를 마우스 habituating
<ol><li>그들은 다른 시설 또는 공급 업체에서 받은 후 적어도 2 주 동안 동물 시설에 길 들을 마우스를 허용 합니다.</li>
	<li>그룹에는 마우스를 집 고 12:12 h의 빛: 다크 사이클에 표준 조건 (실내 온도 22 ± 2 ° C, 상대습도 55 ± 10%)에서 그들을 유지 합니다.</li>
	<li>표준 농축으로 터널 및 면 nestlets와 모든 그룹을 제공 하 고 음식을 제공 광고 libitum물.</li>
	<li>터널 / 컵12테스트 전에 일주일 이상 처리 모든 쥐를 길 들. 참고: 스트레스 또는 불안, 차례로 웰빙에 영향을 미치는 또한이 프로토콜12의 결과에 영향을가지고 유도 수 쥐 꼬리 따기.</li>
</ol>2. 행동 시험장 및 기구 준비
참고: 테스트를 위해, 이상적으로 동물 지켜진다 룸 근처 별도 룸을 제공 합니다. 절차를 수행 하기 전에 테스트 룸 적어도 60 분에 자신의 홈 새에 쥐를 전송 합니다. 만약에 가능 하다 면, 절차를 실시 하는 동일한 테스트 룸에서이 프로토콜의 모든 테스트를 수행 합니다.
<ol><li>내 행동8 을 테스트 하 고 MGS13 (그림 4)에 사용 하기 위해 사진을 찍고 관찰 케이지를 준비 합니다.<ol>
<li>유리 상자를 사용 하 여 약 220 m m × 290 m m의 390 m m의 높이.</li>
		<li>침구 물자의 대략 0.5 cm이 상자의 바닥을 커버.</li>
		<li>새로운 환경으로 인 한 고통을 줄이기 위해 새로운 침구 소재 위에 홈 장에서 사용된 침구 물자의 피해 라.</li>
		<li>음식, 다이어트, 그리고 물으로 일반적으로 제공 되는 동일한 종류를 제공 합니다. 참고: 경우, 사용 물 병, 쥐 소재 침구와 물 그릇을 채울 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>감 금 소 준비 (III 입력: 420 mm × 260 × 150 m m)는 마우스는 개별적으로 보관 24 시간 관찰 기간에 대 한 (그림 5). 참고: 개별 주택 기간을 최소화 하기 위해이 기간 동안 동작, 홈 케이지 활동, 음식 섭취 및 배설물 corticosterone 대사 산물 (FCM)를 구축 하는 둥지에 대 한 데이터를 수집 합니다.<ol>
<li>장소는 고통을 줄이기 위해 케이지 (약 0.5 c m 깊이) 및 분산형 새로운 소재, 위에 홈 장에서 대변 없이 사용된 침구 물자의 자료를 새로운 침구.</li>
		<li>환경 농축 유일한 (참조 자료의 테이블)14으로 정의 된 무게의 표준화 된 평방 면 nestlet을 제공 합니다. 참고: 상업 nestlets 무게가 달라질 수 있습니다. 따라서, 우리는 집사에 의해 설명 하는 nestlet의 무게를 수정 하 고 2.7 g14대신 2.0 g를 사용.</li>
		<li>홈 케이지 활동을 측정 하는 적외선 센서를 사용 하는 경우는 케이지 상단 적외선 센서를 탑재 ( 재료의 표참조).</li>
		<li>음식, 다이어트로 일반적으로 제공 되는 동일한 종류를 제공 하 고 광고 libitum물.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모
참고:는 MGS 3 시간 지점에서 관측 장에 촬영에 대 한 사진: (i) 2 일전 기록 기준선 MGS 수준, 후 절차, (ii) 30 분 및 (iii) 150 분 후에 절차에 절차. 웰빙은 장애인, 점수는 MGS에 증가 합니다. 증가 MGS 점수는 아직도 150 분 후, 관찰 하는 경우 나중 단계에서 추가 사진 걸릴.
<ol><li>높은-정의 카메라를 사용 하 여 사진에 대 한.</li>
	<li>부드럽게 관측으로 마우스를 이동 하 고 마우스를 적어도 30 분 동안 새로운 환경에 길 들을 허용 합니다.</li>
	<li>지속적으로 대 한 걸릴 각 시간에 대 한 30-40 사진 포인트 1-2 분 이내.</li>
	<li>날카로운 정면 또는 측면 사진 선택 하 고 흐릿한 사진이 나 정면 또는 측면 보기 보다 다른 관점에서 마우스 얼굴을 보여 주는 사진 삭제 모든 사진을 정렬 합니다.</li>
	<li>임의로 각 시간 지점에서 (즉, 프로시저, 프로시저, 후 30 분 및 절차 후 150 분 2 일전) 각 마우스에 대 한 하나의 사진을 선택 합니다.</li>
	<li>시체 위치 표시13이 아닌 마우스의 머리만 표시 하 사진 자르기.</li>
	<li>각 사진에 대 한 하나의 시트 스프레드시트 파일을 만들고 각 시트를 MGS의 5 명의 얼굴 작업 단위를 포함 하는 테이블을 추가 합니다. 참고: 기준선 사진 뿐만 아니라 사진 post 프로시저 파일 포함 되어 있습니다.</li>
	<li>시트의 순서를 무작위.</li>
	<li>3 명의 독립적인 사람, 이전 MGS 랭 포드 외 에 의해 개발 된를 사용 하 고 그들이 점수 3 점 척도 사용 하 여 얼굴 작업 단위를 훈련 했다 컴퓨터 화면에 파일을 제시 (0 = 미제공, 1 = 알맞게 제시, 2 = 분명히 현재). 참고: 다음 매개 변수13기반 점수: 궤도 강화 ("축소의 궤도, 단단히 닫힌된 눈 꺼 풀 또는 눈 짜기"); 코 돌출 ("둥근 코의 다리에서 보이는 피부의 확장"); 뺨 볼록한 ("볼록 모양 뺨 근육의"); 귀 위치 ("귀 떨어져 뽑아 다시 그들의 초기 위치에서 또는 수직 능선 귀 다시 그려지기의 팁 때문에 그 형태를 갖춘"); 수염 변경 ("그들의 기준선에서 수염의 움직임 중 하나 위치 뒤로, 얼굴 또는 앞으로, 마치 끝;에 서 서 수염 수 있습니다 또한 덩어리 같이 ").</li>
	<li>(랭 포드 외. 에서 적응 하는 다음과 같이 점수를 분석 13)입니다.<ol>
<li>MGS 점수를 생성 하기 위해 각 사진에 대 한 모든 얼굴 작업 단위 평균. 참고: 경우 얼굴 행동 단위 중 하나 득점 하지 수, 나머지 얼굴 작업 단위 평균.</li>
		<li>초기 사진 MGS 차이 점수 각 마우스에 대 한 사진 게시 절차에 대 한 평균에서 평균을 뺍니다.</li>
		<li>명 (비패라메트릭 테스트 관련된 샘플에 대 한) MGS 차이 점수 차이 대 한 테스트. 참고: 경우에 중요 한 차이 (p < 0.05), 모든 사진의 점수 또는 점수 몇 사진 사람 사이 다른 지 여부를 결정 합니다. 후 자가 사실이 라면,이 사진의 점수를 반복 합니다. 그렇지 않으면, 사람 MGS 훈련을 반복 하 고 다시 사진 점수 한다.</li>
		<li>평균 MGS 차이 점수에서에서 얻은 각 마우스에 대 한 다른 득점 경우 모든 사람의 결과 크게 차이가 없습니다.</li>
		<li>MGS 차이 점수 연구 그룹 간의 평균을 비교 하는 비패라메트릭 통계 테스트를 사용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 내 행동8,,1516
<ol><li>일반적으로 표준 불투명 플라스틱 물 병 (250 mL, 150 m m 길이, 55mm 직경, 병 목의 45 m m 직경)8에서 다이어트로 제공 140 ± 2g 음식 펠 릿을 배치 하 여 버 로우를 준비 합니다. 참고: 마우스 선호 넓은 튜브, 버 로우 68 m m의 직경을 가진 사용할 수 있습니다 디 콘16에 의해 설명 된 대로.</li>
	<li>장소 뚫으 집 안의 음식 펠 릿 순응에 대 한 일 절차 전에 가득합니다. 참고: 장에 일반 음식 분배 단위 비운 하지 해야 하지만 또한 있어야 음식 펠 릿으로 채워진 마우스 사용이.</li>
	<li>두 번, 프로시저 (기준선); 2 일전 테스트 수행 또한 마지막 30 분 게시물 절차를 실시 합니다.<ol>
<li>30 분 이상 관찰 케이지는 MGS에 대 한 사진을 찍은 길 들 마우스를 하자.</li>
		<li>장소는 플라스틱 물 병 음식 펠 릿 관찰 감 금 소의 뒤 벽에 평행으로 가득합니다.</li>
		<li>음식 펠 릿 (g)가 2 시간 후는 굴에 남아 있는 무게.</li>
	</ol>
</li>
	<li>초기 중량 (%)를 기준으로 마우스에 의해 뚫 으에서 제거 하는 음식 펠 릿의 무게를 계산 합니다.</li>
</ol>5. 24 시간 관찰 기간
참고: 마우스 2.2에 설명 된 대로 개별적으로 보관 됩니다. (그림 5), 24 h 동안 식품을 측정 하기 위해 섭취, 홈 케이지 활동, 둥지 건물 행동과 FCM 수준. 24 시간 관찰 두번 일어난다: (i) 2 일전 절차 초기 레벨, (ii) 절차의 날에.
<ol><li>
음식 섭취 량
	<ol>
<li>몸 무게 (점수 시트의 일부)에 어떤 변화를 평가 하기 위해 정기적으로 (예: 마 취, 마 취, 마 취 후에 2 일 및 마 취 후 주간 직전 2 일), 쥐를 무게. 참고: 체중 체중의 그램 당 음식 섭취 량을 계산 해야 합니다. 물 섭취 량 또한 24 h 관찰 기간 동안 측정할 수 있습니다. 음식 섭취 량이 감소 하는 경우 복지 장애가 있을 수 있습니다.</li>
		<li>케이지 (약 100 g)의 음식 단위에 제공 된 표준 음식 다이어트 (그램)의 초기 무게를 결정 합니다.</li>
		<li>24 시간 관찰 기간의 끝에 표준 음식 다이어트의 무게를 결정 합니다.</li>
		<li>신중 하 게 음식 흘림에 대 한 식품 단위 아래 케이지 측면을 검사 하 고 식품 단위에 남아 있는 음식 펠 릿의 무게에 발견 어떤 여분의 음식 펠 릿을 추가.</li>
		<li>단위 체중 당 음식 섭취 량을 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
홈 케이지 활동 참고: 적외선 센서를 사용 하 여 다음 지침 참조 ( 재료의 표참조), 하지만 홈 케이지 활동 또한 대체 프로그램으로 평가 될 수 있다. 제어 수준 (예: hypoactivity, 과다)에서 홈 케이지 활동의 편차 장애인된 복지의 징조 수 있습니다.<ol>
<li>프로그램을 시작 합니다.</li>
		<li>1 분의 샘플 간격 및 충 동 24 h에 대 한 매 순간 기록 됩니다 의미 24 h의 수집 시간을 선택 합니다. 참고: 경우는 실험 후 녹화 시작 여러 번 방을 입력만에서 데이터를 사용할 때 마우스 방해 되지 않은 기간 (즉, 어두운 기간 동안).</li>
		<li>자극의 10 분 간격으로 정리해.</li>
		<li>시간 곡선 (전류 × 분) 아래 영역을 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
둥지 빌딩 동작 참고: 복잡 하 고 높은 둥지 복지의 지표로 사용할 수 있습니다.<ol>
<li>배치 평방 면 nestlet ( 재료의 표참조) 무게로 정의 (예: 2.0 g) 감 금 소의 한가운데에.</li>
		<li>다음 아침, 약 2 시간 후에 표시등이 켜 디 콘14 에 따라 5-포인트 규모 (아래 참조)에 둥지를 점수. Nestlet 초기 체중의 5% 이상 하는 untorn nestlet 조각 무게. 둥지14 다음과 같이 점수<ol>
<li>그대로 nestlet의 90% 경우에 "1"의 점수를 할당 합니다.</li>
			<li>그것은 50-90% 그대로 하는 경우 "2"의 점수를 할당 합니다.</li>
			<li>할당 점수 "3"는 nestlet의 50-90% 났습니다.</li>
			<li>할당 "4" 90% 이상이 났습니다, 둥지는 평평 하 고, 그리고 그것의 둘레의 50% 미만 웅크리고 마우스 몸 높이 보다 더 높은 점수.</li>
			<li>할당 "5" 이상 90 %nestlet 났습니다 둥지 높은, 그리고 그것의 둘레의 50% 이상은 위로 컬된 마우스의 몸 높이 보다 더 높은 점수.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
지저분한 Corticosterone 대사 산물 참고: 컨트롤 수준 이상의 FCM의 증가 24 h postanesthetic 기간 동안 급성 스트레스 수준을 반영합니다.<ol>
<li>24 시간 관찰 기간의 끝에 집게를 사용 하 여 케이지에서 모든 건조 분 변 알갱이 수집 하 고 젖은 펠 릿 소변으로 오염 제거.</li>
		<li>황금 외 에 FCM를 추출 17, 다음과 같이입니다.<ol>
<li>60-70 ° C의 온도에서 건조 분 변 샘플</li>
			<li>박격포를 사용 하 여 배설물 샘플 균질</li>
			<li>멀티 소용돌이에 30 분 동안 원심 분리기 튜브에서 80% 메탄올의 1 mL와 0.05 g의 약 수를 흔들어.</li>
			<li>샘플 15 분 동안 2500 x g에서 원심</li>
			<li>다른 분리기 관으로 상쾌한의 0.5 mL를 플라스틱.</li>
			<li>-18 ° C의 최소한 배설물 샘플 (및 추출 물)을 저장</li>
			<li>FCM19 5α-pregnane-3b,11b,21-triol-20-one 효소 immunoassay (EIA)18,또는 다른 완전히 유효한 EIA를 사용 하 여 분석 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>기준선 FCM 농도 기준으로 FCM 농도의 백분율 변화를 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. 무료 탐구 패러다임
<ol><li>랙에서 홈 케이지 하 고 24 시간 관찰 기간의 끝에 테이블 표면에 놓습니다.</li>
	<li>감 금 소의 더 긴 쪽으로 45 °의 각도에서 장에 gridded 케이지 상단 (없이 음식 또는 물 병)를 배치 합니다. 참고: 마우스에 대 한 은신처 역할 둥지를 파괴 하지 않습니다 하지만 둥지 위에 케이지 상단 대각선 배치.</li>
	<li>모니터 또는 비디오 기록 약 1.5 m의 거리에서 10 분 동안 쥐.<ol>
<li>타이머를 시작 합니다.</li>
		<li>항상 때 마우스 (케이지 상단에 모든 4 개의 발)와 케이지 위에 올라 또는 케이지 상단 (케이지 바닥에 하나 이상의 발)와 note 참고: 일부 마우스 케이지 상단을 등반 하 고 떠나 감 금 소의 가장자리를 따라 주문 수 있습니다. 일부 마우스는 또한 케이지 상단에 후면. 쥐 감 금 소 위에 아직도 마치 이러한 경우를 처리 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>버트 외. 다음 매개 변수를 평가 20.<ol>
<li>대기 시간 (초)에 첫번째 탐험을 분석 합니다.</li>
		<li>탐험의 수를 분석 합니다.</li>
		<li>탐험의 총 기간 (초)을 분석 합니다. 참고: 첫 번째 탐험, 탐험, 낮은 수 및 탐사의 낮은 총 기간에 높은 대기 시간이 높은 특성 불안 수준을 나타낼 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>Miyashita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+stress+increases+biopyrrins%2C+oxidative+metabolites+of+bilirubin%2C+in+mouse+urine%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Social stress increases biopyrrins, oxidative metabolites of bilirubin, in mouse urine.</a> Biochem Biophys Res Commun. 349 (2), 775-780 (2006).</li>
<li>Bains, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+individual+mouse+activity+in+group+housed+animals+of+different+inbred+strains+using+a+novel+automated+home+cage+analysis+system%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Analysis of individual mouse activity in group housed animals of different inbred strains using a novel automated home cage analysis system.</a> Front Behav Neurosci. 10 (106), (2016).</li>
<li>Saibaba, P., Sales, G. D., Stodulski, G., Hau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behaviour+of+rats+in+their+home+cages%3A+daytime+variations+and+effects+of+routine+husbandry+procedures+analysed+by+time+sampling+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Behaviour of rats in their home cages: daytime variations and effects of routine husbandry procedures analysed by time sampling techniques.</a> Lab Anim. 30 (1), 13-21 (1996).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

프로토콜은 단일 마 취 또는 반복된 isoflurane 마 취를 받은 C57BL/6JRj 쥐의 평가에 원래 개발 되었다. 결과 확인 고급 동작을 테스트 뿐만 아니라 다른 조치 (예: 자유 탐구 패러다임, MGS, 내 음식 섭취 량) 복지를 평가 하기 위한 중요 한 방법 이었다. 반복된 isoflurane 마 취 특성 불안 관련 행동, MGS, 내 행동에 단기 효과 발생합니다. 또한, 반복된 isoflurane 마 취 영향 음식 섭취10등장.
무료 답사 패러다임 표시 된 감소 된 예비 동작 하 고, 결과적으로, 특성 불안 상부 취 반복 했다 쥐에서와 비교 된 마우스 한 번만 취 컨트롤. 그러나, 모든 그룹의 쥐 gridded 케이지 톱10,20탐험. 불안 관련 문제를 조사할 때 그것은 특성 및 상태 불안<sup clas...

EU 지침 2010/631 규정 Russel과 Burch2 를 개발한 3R 원칙 (대체, 감소, 구체화) 동물 실험은 필요 때마다 적용 하는 것입니다. EU 지침의 궁극적인 목표는 모든 동물 실험, 밖으로 위상 하지만 지시문 인정, 시간이 되 고, 일부 동물 실험은 여전히 필요 인간과 동물 건강을 보호 하는 연구를 수행. 따라서, 동물 실험은 어떤 다른 방법으로 바꿀 수 없습니다, 경우는 최소한 실험실 동물의 신뢰할 수 있는 결과 얻을 하는 데 사용 될 것 이다. 또한, 고통, 고통, 및 실험 절차를 동반 하는 조 난의 양은 적절 한 수정 조치를 사용 하 여 최소화 합니다. EU 지침 2010/63 규정 한 절차의 심각도 prospectively 비 복구, 가벼운, 중간, 또는 심한1으로 분류 되어야 합니다. 심각도 분류에 사건-의해-사건을 기준으로 결정이 주어진된 절차의 심각도 평가를 과학적으로 소리 도구를가지고 중요 합니다.
모 튼과 그리피스3 에 의해 제안 된로 점수 시트 웰빙4에 부정적인 영향을 포함 하 여 정상 상태에서 어떤 편차를 감지에 필수적인 도구입니다. 점수 시트를 사용 하 회 결정 고통, 고통, 그리고 실험으로 인 한 조 난 및 개별 동물 (예를 들어, 몸 무게, 모피, 걸음 걸이)의 물리적 상태에 보이는 변화에 초점. 별관 8 세의 EU 지침 2010/63 각 심각도 카테고리의 예를 제공 합니다, 하지만 과학적으로 사용 하 여 주어진된 프로시저의 심각의 정도 추정 하 연구원은 아직도 부족 도구 데이터를 기반으로 합니다.
부정적인 복지를 보여주는 지표의 부재; 동물의 상태를 확인 하는 유일한 방법은 아니다. 긍정적인 복지를 가리키는 지표의 존재 또한 중요 한5,6,,78이다. 예를 들어 동물 내 같은 고급 동작을 표시 하 고 그들의 모든 필수 요구 충족 하는 경우에 건물 동작을 중첩. 고급 동작을 복지 감소 있다면5,7감소 처음. 복지를 평가에 사용 되는 프로토콜 상세 하 고 포괄적인 방식으로9에 웰빙을 평가 하기 위해 물리, 생리/생화학, 및 동물의 심리 상태를 가리키는 지표를 포함 해야 합니다.
세련미의 컨텍스트 내에서 프로토콜은 이러한 요구 사항을 충족 하 고 쥐10의에 전신 마 취와 관련 된 절차의 효과 평가 하기 위해 개발 되었다. 동시에 목표에 주어진된 실험 프로토콜의 쉽게 통합할 수 있도록 추가적인 스트레스를 최소화 했다. 프로토콜 내 행동, 활동, 음식 섭취, 중첩 등 홈 케이지 동작 및 특성 불안 관련 행동을 고려 합니다. 또한, 그것은 포함 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모 (MGS), 및 비-침략 적 분석 corticosterone 대사 산물의 배설물. 과학 고 동물을 중심으로 복지의 평가 촉진 하 고 심각성의 정도의 분류를 지 원하는 복지에 정보를 제공 하는 프로토콜은 설계 되었습니다. 점수 시트, 뿐만 아니라 그것은 절차의 심각도 분류에 대 한 유용한 정보를 제공할 수 있습니다. 프로토콜 수행 하기 쉬운 하 고 광범위 한 장비를 필요로 하지 않습니다, 연구의 결과 영향을 주지 않고 지속적인 실험으로 통합 될 수 있습니다. 주목 해야 한다 그 동물 연구: 보고의 Vivo 실험 (도착) 지침11 동물 실험, 설계, 분석, 개선 및 보고의 목표와 관련 된 모든 연구에서 관찰 될 것 이다.

<table><tbody><tr><td>Isofluran</td><td>CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH</td><td>1214</td><td></td></tr><tr><td>InfraMot - 센서 장치</td><td>TSE 시스템</td><td>302015-SENS</td><td></td></tr><tr><td>InfraMot - 제어 장치</td><td>TSE 시스템</td><td>302015-C/16</td><td></td></tr><tr><td>InfraMot - 소프트웨어</td><td>TSE 시스템</td><td>302015-S</td><td></td></tr><tr><td>Nestlet N</td><td>Ancare - Plexx</td><td>NES3600</td><td></td></tr><tr><td>카메라 EOS 350D</td><td>카논</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

일반 마 취 기계를 사용 하 여 프로시저에 대 한 마우스에 웰빙의 체계적인 평가

Systematic Assessment of Well-Being in Mice for Procedures Using General Anesthesia

3R 원칙 (대체, 감소, 구체화) 개발 Russel과 뉴욕 생명에 의해, 따라 과학 연구 가능한 동물 실험에 대 한 대안을 사용 해야 합니다. 동물 실험에 대안이 있을 때, 사용 하는 실험실 동물의 총 수는 귀중 한 데이터를 얻는 데 필요한 최소 이어야 한다. 또한, 고통, 고통, 및 실험 절차를 동반 하는 고통을 최소화 하기 위해 적절 한 수정 조치를 적용 합니다. 고통, 고통, 및 조 난의 정도 분류 하는 데 사용 하는 카테고리는 비-복구, 가벼운, 중간, 또는 심한 (EU 지침 2010/63). 확인 하려면 개별 경우에는 카테고리 적용, 과학적으로 소리 도구를 사용 하 여 결정적 이다.
여기 잘이 평가 프로토콜 절차는 전신 마 취는 설계 되었습니다. 프로토콜 내과 복지의 지표로 동작을 구축 하는 둥지 같은 집 케이지 활동, 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모와 럭셔리 동작에 초점을 맞추고. 그것은 또한 불안 관련 행동 특성에 대 한 무료 탐구 패러다임을 사용합니다. 급성 스트레스의 지표로 지저분한 corticosterone metabolites 24 h 후 마 취 기간 동안 측정 된다.
프로토콜은 마우스 따라 전신 마 취의 과학적으로 단단한 정보를 제공 합니다. 그것의 단순 프로토콜 수 있습니다 쉽게 적응 되며 계획 된 연구에서 통합. EU 지침 2010/63에 따라 카테고리에서 조 난을 분류 하는 규모를 제공 하지는 않습니다, 그것은 과학적으로 사운드 데이터를 사용 하 여 프로시저의 심각의 정도 추정 하는 연구를 도울 수 있다. 과학, 동물을 중심으로 복지의 평가 개선할 수 있는 방법을 제공 합니다.

이 프로토콜은 원래 C57BL/6JRj 마우스 isoflurane 마 취에의 한 경험을 다음의 평가를 개발 (일 분 마 취 세션, n = 13 여성) 또는 반복된 isoflurane 마 취 (6 45 분 마 취 세션 3-4 일 마 취 세션, n = 13 여성) 컨트롤 마우스의 비교 (n = 6 여성)10, 아니 마 취를 받은 하지만 같은 조치에 따라 시험. 우리는 isoflurane 마 취와 반복된 isoflurane 마 취의 치료 되지 않는 통제 쥐에 비해 C57BL/6JRj 마우스에의 한 경험의 영향을 평가. 여기, 여성 C57BL/6JRj 마우스의 대표적인 결과, 일부 데이터를 포함 하 여 이전 출판 Hohlbaum 외. 10, 뿐만 아니라 이전 되지 않은 결과 표시 됩니다.
<p class="jove_content" fo:keep-together.withi...

우리는 전신 마 취를 사용 하 여 프로시저 동안 쥐에 복지를 평가 하기 위해 프로토콜을 개발. 복지의 수준 뿐만 아니라 glucocorticoid 대사 산물 분석 했다 나타내는 행동 매개 변수의 시리즈. 프로토콜은 과학, 동물 중심 방식에서 심각도의 정도 추정 하는 일반적인 보조로 사용할 수 있습니다.

In keeping with the 3R Principle (Replacement, Reduction, Refinement) developed by Russel and Burch, scientific research should use alternatives to animal ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 전신 마취를 포함한 절차를 거친 마우스의 웰빙을 평가하고 EU 지침 2010/63에 따라 심각도 분류를 뒷받침하는 과학적으로 건전한 데이터를 제공하는 것입니다. 이 프로토콜은 전신 마취와 관련된 절차로 인한 고통의 정도와 같은 실험실 동물 과학 분야의 동물 복지에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 동물 기반의 과학적 방식으로 각 개별 마우스의 웰빙을 평가하고 이 프로토콜을 계획된 다른 연구에 쉽게 적용하고 통합할 수 있다는 것입니다.우리는 반복적인 마취가 단일 노출보다 실험실 쥐에게 더 많은 스트레스를 유발한다면 과학적으로 근거한 데이터가 누락될 것이라고 추측했을 때 이 프로토콜에 대한 아이디어를 처음 떠올렸습니다. 이 단계에서는 바닥 면적이 약 220mm x 290mm이고 높이가 390mm인 유리 상자를 준비합니다. 약 0.5cm의 침구 재료로 바닥을 덮으십시오.그런 다음 새로운 환경으로 인한 고통을 줄이기 위해 가정용 케이지에서 사용한 침구 재료를 새 침구 재료 위에 한 줌 뿌립니다. 음식과 물을 제공하십시오. 쥐를 관찰 케이지로 부드럽게 옮기고 최소 30분 동안 새로운 환경에 적응할 수 있도록 합니다.마우스 찡그린 얼굴 눈금의 경우 사진 촬영을 위해 고화질 카메라를 사용하십시오. 1-2분 이내에 각 시점에 대해 약 30-40장의 사진을 연속으로 촬영합니다. Deacon과 Jirkof에 따르면 굴을 파는 행동을 테스트하기 위해 표준 불투명 플라스틱 물병에 140g의 음식 알갱이를 넣어 굴을 준비합니다.다음으로, 음식 알갱이로 채워진 플라스틱 물병을 관찰 케이지의 뒤쪽 벽과 평행하게 놓습니다. 2시간 후, 굴에 남아 있는 음식 알갱이의 무게를 잰다. 기준선으로 절차 2일 전에 두 번 테스트를 수행합니다.이 단계에서는 쥐를 개별적으로 수용하는 24시간 관찰 기간 동안 새 침구 재료로 케이지를 준비합니다. 24시간 관찰 기간은 쥐의 찡그린 비늘과 굴을 파는 행동 후에 시작됩니다. 단일 주택의 기간은 최소한으로 유지됩니다.그 동안 가정 케이지 활동, 음식 섭취, 둥지 짓기 행동 및 분변 코르티코스테론 대사 산물의 수치가 측정됩니다. 다음으로, 고통을 줄이기 위해 가정 케이지에서 대변이 없는 사용한 침구 재료를 한 줌 뿌립니다. 환경 풍부화로만 정의된 무게의 표준화된 정사각형 면 둥지를 제공하십시오.그런 다음 케이지 상단에 적외선 센서를 장

systematic-assessment-well-being-mice-for-procedures-using-general

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

출처: Yan, Z., et al. 만성 스트레스를 받은 마우스에 대한 Xiaoyaosan의 항우울증 효과 평가. J. Vis. 특급 (2019). 이 비디오는 만성 스트레스로 인한 우울증에 대한 마우스 모델을 구축하고 우울 행동을 평가하는 과정을 보여줍니다. 다양한 스트레스 요인의 만성적인 적용은 코르티코스테론의 방출을 유발하여 뉴런의 과잉 흥분과 궁극적인 뉴런 사멸로 이어지며, 이는 생쥐에서 우울증과 유사한 증상을 초래합니다.

만성 스트레스 노출을 통한 마우스의 우울증 유도 및 평가

복원력 반사 손실이 긴 동물 실험에서, 또한 최면이라는 의식을위한 표준 행동 대리 역임했다. 약리학 적 개입으로 인한 휘발성 마취제 감도의 변화는 흡입 치료제의 전달을 위해 적응 될 수있다 신중하게 제어 높은 처리량 평가 시스템으로 검출 될 수있다.

로컬 또는 전신 약물 개입 후 마우스의 휘발성 전신 마취 감도의 변화를 평가

이 영화는 생쥐의 조직 및 간 혈류 역학을 취득하는 방법을 보여줍니다. 전체의 모니터링은 중요한 파라미터, 전신 혈압, 중심 정맥압, 간동맥 유량 및 포털 정맥 압력뿐만 아니라 마우스에서 포털 유량의 획득을 포함한다.

마우스의 전신과 간장 혈 역동 학적 파라미터의 모니터링

모터 기술의 포괄적인 행동 테스트 배터리 분위기-사회적 상호 작용, 우울증, 불안 등-인식 neurodegeneration 관련 행동 변화 생쥐에서의 반복 된 평가 위해 설계 되었습니다.

모터 기술, 분위기, 그리고 쥐에 있는 인식의 반복 된 평가 행동 테스트 배터리

이 문서에서는 새로운 마우스 판단 편향 프로토콜에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 정서적 상태에 대한이 후각 파기 작업의 민감성에 대한 증거도 입증되고 다양한 연구 분야에서 그 유용성이 논의됩니다.

후각 파기 작업을 통한 마우스 판단 편향 평가

기계적 충돌-회피 분석은 다양한 마우스 통증 모델에서 정서적-동기 부여 반응을 더 잘 이해하기 위해 사용될 수 있는 마우스에서 통증 감수성의 비반사적 판독으로서 사용된다.

마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

우리는 인식에 나이의 영향을 조사하고있는 태블릿 컴퓨터 기반 응용 프로그램 (EmoCogMeter)의 유용성을 테스트했습니다. 결과는 따라서 우리의 응용 프로그램의 유용성을 증명, 연령과 관련된인지 적 몰락을 보여줍니다. 연구 결과는 탐지 및인지 기능 장애의 모니터링을위한 태블릿 기​​반 응용 프로그램의 큰 임상 및 실용 가능성을 강조.

EmoCogMeter, 소설 태블릿 컴퓨터 기반 접근 방식을 사용하여인지 기능의 연령과 관련된 변화의 평가

쥐의 행동 유연성과 같은 실행 기능을 평가하는 능력은 온전한 동물과 질병 모델 모두에서 인지의 신경 생물학을 조사하는 데 유용합니다. 여기에서는 전전두엽 피질 네트워크의 중단에 특히 민감한 전략 전환 및 반전 학습을 평가하기 위한 자동화된 작업에 대해 설명합니다.

쥐의 행동 유연성을 평가하기위한 조작 적 절차

이 프로토콜은 연구자들이 조건화된 장소 선호 및 운동 행동 민감성 분석을 사용하여 중독의 이러한 측면을 테스트하기 위해 고안된 실험을 수행할 수 있도록 하기 위한 것입니다.

코카인 유발 행동 과민성 및 마우스의 조건 장소 선호도 평가

행동 테스트 질병 또는 동물의 웰빙에 대 한 치료의 phenotypic 효과 평가 하기 위해 전 임상 시험에 사용 됩니다. 세계적으로 모터 기능 평가, 우리는 일반적인 운동, 근 력, 및 조정에 대 한 테스트를 선택: 오픈 필드 테스트, 메쉬 테스트 및 rotarod 테스트, 각각.

행동의 배터리 테스트 사정 일반 운동, 근육 강도, 그리고 조정 마우스

배우세요 마우스의 웰빙을 체계적으로 평가하는 방법으로, 일반 마취 후 행동 지표와 글루코코르티코이드 대사물질을 분석합니다. 이 프로토콜은 EU 지침 2010/63에 따른 심각도 분류를 지원하며 동물 복지 연구의 윤리 기준을 향상시킵니다.

일반 마 취 기계를 사용 하 여 프로시저에 대 한 마우스에 웰빙의 체계적인 평가

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