마 취 쥐에서 중앙 신경 조작에 대 한 응답에서 신장 교감 신경 활동에 심각한 변화를 측정

이 방법은 자율신경계, 특히 신장으로의 교감신경 유출을 조절하는 중추신경계 메커니즘에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 중추 신경계 조작이 신장으로의 교감신경 유출에 미치는 영향을 측정할 수 있다는 것입니다. 동맥 삽관을 삽입하기 전에 고배율에서 압력 감지 카테터를 검사하여 카테터에 기포와 파편이 없고 유체와 젤로 채워진 구성 요소 사이에 손상되지 않은 반월판이 있는지 확인합니다.

각 이식 전에 카테터의 말단 끝에 젤을 다시 채우고 자석을 사용하여 송신기를 켭니다. 근위 봉합사에 느슨한 오버핸드 반 매듭을 넣어 대퇴 동맥을 잠시 폐색합니다. 그리고 카테터 도입기를 비지배적인 손에 들고 혈관 캐뉼레이션 겸자를 사용하여 팁에서 젤이 변위되지 않도록 원격 측정 장치의 캐뉼라 끝을 잡습니다.

구부러진 22게이지 바늘 끝을 사용하여 동맥에 구멍을 뚫고 캐뉼라를 동맥에 최대한 삽입합니다. 그런 다음 근위 및 원위 봉합사 타이로 압력 카테터를 고정합니다. 그리고 원격 측정 임플란트의 몸체를 절개 부위에 인접한 옆구리 안쪽에 밀어 넣습니다.

뇌 접근을 위해 머리를 이어바 사이에 두고 정위 수술 프레임에서 쥐를 엎드린 자세로 부드럽게 이동하고 앞니 막대를 조정하여 람다와 브레그마의 높이를 균등화합니다. 그런 다음 두피의 정중선을 통해 2cm 길이의 꼬리 부분을 절개하고 면봉 어플리케이터를 사용하여 두개골 표면의 결합 조직을 단단히 제거합니다. 노출된 두개골에 과산화수소를 바르면 브레그마, 람다 및 정중선 봉합사를 시각화하는 데 도움이 됩니다.

표적 지정을 안내하기 위해 쥐 뇌의 지도를 사용하여 두개골을 통해 전극이 접근할 수 있는 크기의 버 구멍 절골술을 뚫습니다. 신장 교감신경을 분리하기 위해 와이어 신장 교감신경 활동 또는 RSNA 전극을 10X 프리 증폭기 및 미세 전극 증폭기에 연결하고 갈비뼈 아래 4-5cm에서 꼬리 방향으로 척추 약간 옆으로 메스를 절개합니다. 둔기로 절개하여 척추 주위 근육을 시각화하고 지방이 근육과 만나는 곳에 매우 피상적인 1-2cm 꼬리 절개를 만듭니다.

면봉 어플리케이터를 사용하여 근육에서 지방을 멀리 분산시켜 복막 공간으로 들어가지 않고 신장을 시각화합니다. 그리고 견인기를 사용하여 신장과 척추 주위 근육을 부드럽게 분리하여 신장 동맥과 복부 대동맥을 시각화합니다. 그리고 절개 주머니의 신장 신경을 확인하기 위해 고배율을 사용합니다.

신경 다발은 대동맥과 신장 동맥이 대동맥에서 신장까지 신장 동맥을 밀접하게 따라가는 직각에서 가장 쉽게 볼 수 있습니다. 그런 다음 미세 해부 핀셋을 사용하여 주변 조직에서 기록 전극에 놓을 신경 다발의 일부를 부드럽게 절개합니다. 와이어 RSNA 전극을 홀더에 고정하고 전극을 신경 분절 수준까지 내립니다.

신경 후크를 사용하여 신경을 늘리지 않고 신장 신경의 일부를 전극 위로 부드럽게 들어 올립니다. 그리고 절개 부위에 미네랄 오일을 채워 노출된 신장 교감 신경을 촉촉하게 유지합니다. 접지 클립을 동물에 부착하고 다른 쪽 끝을 패러데이 케이지에 부착하고 고역 및 저역 통과 필터링을 사용하여 신호를 증폭기로 보냅니다.

그런 다음 RSNA의 버스트 패턴을 평가하기 위해 오디오 모니터를 포함하여 최대 10kHz까지 게인을 조정합니다. RSNA 기록의 품질을 평가하기 위해 100마이크로리터 볼루스 페닐에프린을 100마이크로리터 볼루스 정맥 주사하여 혈압을 높이고 신장 교감신경 활동을 억제하여 전극의 위치를 조정하여 필요에 따라 신호를 개선합니다. 명확한 신호가 확인되면 미네랄 오일을 흡인하고 전극을 실리카겔로 제자리에 고정합니다.

이 대표적인 실험에서는 평균 동맥압의 증가를 유도하고 압력반사 및 일시적인 교감신경 억제를 유발하기 위해 페닐에프린의 정맥 주사를 사용했습니다. RSNA를 정량화하기 위해 원시 RSNA를 수정하고 겹치지 않는 10초 세그먼트에 대해 평균을 구하고 각 세그먼트에서 노이즈 추정치를 뺐습니다. 이 절차를 수행할 때 쥐가 적절하게 마취되었는지, 입위 프레임에 적절하게 배치되었는지, 시스템이 전기 소음을 줄이기 위해 적절하게 접지되었는지 확인하는 것이 중요합니다.

이 절차와 뇌 조직 채취에 따라 조직학 방법을 적용하여 교감신경 흥분 반응을 제어하는 중심계 핵의 유형을 특성화할 수 있습니다. 이 기술을 통해 신경과학자들은 마취된 쥐의 자율신경 조절 메커니즘을 탐구할 수 있으며, 이는 혈압과 신장 기능의 조절을 이해하기 위한 동물의 향후 연구에 정보를 제공합니다. 적어도 15분마다 마취 평면을 평가하는 것이 중요하다는 것을 잊지 마십시오.

그리고 필요에 따라 추가 마취를 제공합니다.