Name: 마 취 쥐에서 중앙 신경 조작에 대 한 응답에서 신장 교감 신경 활동에 심각한 변화를 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 배우세요 마취 쥐에서 신장 교감 신경 활동(RSNA)과 평균 동맥압을 측정하는 방법을 중추신경계 조작을 통해 자율신경 조절 메커니즘을 연구하는 데 활용할 수 있습니다.

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이 연구는 간호 연구 (K99/R00NR014369)를 위한 국립 연구소에 의해 지원 되었다.

설명 하는 모든 메서드는 시카고에 일리노이의 대학에서 기관 동물 관리 위원회에 의해 승인 되었다.
1. 바이 폴라 방사선학 전극 만들기
<ol><li>전극을 만들려면 컷 스테인레스 스틸 와이어의 두 가지 길이가 약 18 mm. 약 15 m m 긴 튜브 폴 리 에틸렌 (PE-50)의 한 조각 잘라. 두 조각의 양쪽에서 튀어나와 와이어를 떠나 튜브에 와이어 피드.</li>
	<li>전선의 끝에서 절연체를 제거 떠나는 노출된 와이어의 2-3 m m 철사를 잘라 주세요. 한쪽 끝에 통해 노출 남성 핀 주름. 솔더 와이어를 안전 하 게 핀, 핀 커넥터 스트립 내부 보안 및 에폭시와 연결을 커버. 참고: 빠른 연결/해제 악어 클립을 사용 하 여 납땜을 방지 하는 대체 방식이입니다.</li>
	<li>전극의 반대 끝에 노출 된 와이어의 2-3 mm를 떠나 전선의 끝에서 단 열을 제거 합니다. 작은 "브가" 모양의 uninsulated 철사에서 후크를 만들 철사의이 부분을 구 부. 참고: 이것은 신장 교감 신경에 접촉 될 전극의 부분입니다. 그것은 튜브를 입력에서 액체를 방지 하기 위해이 끝을 밀봉 하는 것이 중요입니다. 실리콘 이나 에폭시 효과적으로 사용할 수 있습니다.</li>
</ol>2. 마 취 관리 및 외과 사이트 준비
<ol><li>남성 Sprague Dawley 쥐 (나이 9-11 주, 150-400 g 무게)에 마 취를 관리 합니다. 관리 pentobarbital 나트륨 50 mg/kg 복 (IP) 주사를 통해. 수술 중 마 취의 안정적인 비행기를 평가, 매 15 분 및 필요에 따라 다시 복용량 마 취 발가락-핀치 반사를 확인 합니다. 참고: Pentobarbital 나트륨 (Nembutal) 방사선학4,,56의 변조 방해 하지 않고 마 취의 지속적인된 비행기를 달성 하기 위해 이전 연구에서 사용 되었다. 이 프로토콜은 비 생존 수술 이므로 아무 복구/후-operative 모니터링 기간입니다.</li>
	<li>제도 동물 보호 지침에 따라 수술 사이트 준비 (즉., 쥐의 복 부, 뒤, 및 머리를 면도; 10 %povidone-요오드 솔루션 클렌징; 눈 윤활제; 적용 및 생리대에 쥐를 놓고). 실험 기간 동안 37 ° C에서 체온을 유지 한다.</li>
</ol>3. cannulate 대 퇴 정 맥 (정 맥 액세스)에 대 한
<ol><li>헤 파 린 (달성 20 단위/mL)을 0.9% 멸 균 식 염 수를 추가 합니다. 22 G 바늘을 통해 heparinized 염 분으로 1 mL 주사기를 채우십시오. 바늘을 솔루션 채우기 튜브 PE-50 튜브의 15 cm를 연결 합니다.</li>
	<li>부정사 거짓말 쥐와 사 타 구니 지역을 통해 2 cm 가로 절 개를 만듭니다. 면 끝 도포를 사용 하 여, 대 퇴 정 맥과 동맥을 노출 하는 결합 조직 해 부. 절 개를 오픈, 중 단일-후크 탄성 외과 투숙 실크로 수술 필드 확보 테이프 또는 작은 hemostats를 사용 하 여 적용 됩니다.</li>
	<li>Hemostats를 사용 하 여 카 테 터 중개자10으로 90 ° 각도로 22 G 바늘의 끝을 구 부.</li>
	<li>현미경 아래 혈관을 시각화. 부드럽게 정 맥 및 동맥 곡선된 겸 자 사용 하 여 구분 합니다. 장소 두 12 cm 긴 정 맥 아래 5-0 비단 봉합 (한 원심 인접 한); 동맥 아래 같은 방식으로 봉합을 놓습니다.<ol>
<li>정 맥; 가리고 하 원심 (아래) 봉합 넥타이 실크 테이프 또는 작은 hemostats 사용 하 여 수술 필드에이 봉합의 가장자리를 보호 합니다. 부드럽게 혈관 긴장 된 있지만 하지 너무 많은 힘 선박을 찢 어. 정 맥 외과 의사의 지배적인 손을에 수직 위치.</li>
	</ol>
</li>
	<li>근 위 봉합에 느슨한 overhand 절반 매듭을 사용 하 여 간단히 정 맥을 막다. 섬세 한 hemostatic 집게와 함께 부드럽게 혈액 흐름을 막다 하이 봉합 클램프. 비 지배적인 손에; 구부러진 팁 22 G 바늘을 잡으십시오 지배적인 손을 사용 하 여 집게와 튜브를 버클.</li>
	<li>카 테 터 중개자 (단계 3.3)와 정 맥에 작은 구멍을 찌를 하 고 그릇;에 (미리 heparinized 염 분 가득) PE-50 튜브를 삽입 구부러진된 바늘을 사용 하 여 용기 오픈에서 열기를 계속 배10에 카 테 터의 끝 위치에.<ol>
<li>근 위 봉합을 놓고 부드럽게 정 맥;으로 heparinized 염 분의 0.2 mL를 플러시 카 테 터를 사전. 적절 한 배치를 위해 정 맥에서 혈액 반환을 확인 하십시오. 인접 매듭을 완료 하 고, 원심 봉합 넥타이, 튜브 안전 정 맥 내.</li>
	</ol>
</li>
	<li>실험 기간 동안 정 맥 액세스를 사용 하 여 추가 마 취 또는 약물 투여 및 혈액 컬렉션에 대 한. 경우 일반 정 맥 혼합 및 혈액 샘플링을 해야 합니다 3-방법은 커넥터를 통합 합니다. 마 취를 적정 유해 발가락 핀치 반사 15 분 마다 확인 합니다.</li>
</ol>4. cannulate 평균 동맥 압력 모니터링에 대 한 대 퇴 동맥
<ol><li>현미경 동맥을 시각화. 방법에 유사한 정 맥 cannulation 사용, 원심 봉합 (단계 3.4) 막다; 동맥을 묶어 실크 테이프로 수술 필드에이 봉합의 가장자리를 보호 하 고 동맥 외과 의사의 지배적인 손을에 수직 위치.</li>
	<li>동맥 액세스 압력 변환기/주입 시스템을 사용 하는 경우<ol>
<li>500 mL 0.9% 식 염 수 백을 압력 변환기/튜브를 연결 합니다. 염 분, 모든 거품을 제거와 함께 튜브를 플러시 및 시스템 압력을 압력 유도 가방 안에 가방 장소.</li>
		<li>3.1 단계에에서 설명 된 대로 1 mL 주사기 heparinized 염 분와 22 G 바늘을 통해를 PE-50의 15 cm (heparinized 염 분으로 튜브 플러시) 바늘에 연결.</li>
		<li>근 위 봉합에 느슨한 절반 매듭을 사용 하 여 간단히 동맥을 막다. 카 테 터 중개자 (단계 3.3); 비 지배적인 손에 잡으십시오 지배적인 손에 선박 cannulation 집게와 PE-50의 원심 끝을 잡으십시오. 구부러진 22 G 바늘 동맥에 구멍을 찌를 하 고 선박에는 캐 뉼 러를 삽입.</li>
		<li>동맥과 사전 가능한 카 테 테 르에 인접 봉합을, 부드럽게 플러시 heparinized 염 분의 0.2 mL를 놓습니다. 동맥 혈액 반환 되도록 적절 한 배치를 확인 합니다. 인접 매듭을 완료 하 고, 원심 봉합 넥타이, 안전 튜브는 동맥 내부. 압력 변환기/튜브를 동맥 라인을 연결 합니다. 참고: 튜브의 원심 부분 동맥 라인을 확보 하 여 쥐의 hindlimb에 녹화 될 수 있습니다. 선박 cannulation 대체 접근 Jespersen 외설명.; 11 그들의 프로토콜 봉합 하는 관과 접근 확보 보다는 절 개를 접착제 오히려 확산을 견인 기를 사용 하 여 다른 팬 들은 구부러진된 바늘 중개자의 정보를 포함 하지 않습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>동맥 액세스 원격을 사용 하는 경우<ol>
<li>동맥 cannulation 전에 고배율에서 압력 감지 카 테 터를 검사 합니다. 테 거품/파편의 무료 하 고는 그대로 초승달 액체가 채워진 사이 (근 위)는 확인 및 젤 가득 (원심) 구성 요소. 각 이식 전에 카 테 터의 원심 끝에 젤 리필. 자석;를 사용 하 여 송신기 설정 완벽 한 배치를 견 뎌 야 하는 수술 중 혈압을 모니터링 합니다.</li>
		<li>근 위 봉합에 느슨한 overhand 절반 매듭을 사용 하 여 간단히 대 퇴 동맥을 막다. 비 지배적인 손에 잡고 테 중개자 (단계 3.3). 팁에서 젤 displacing 피하기 위해 선박 cannulation 집게와 원격 측정법 단위의 정 맥의 끝을 잡으십시오.</li>
		<li>구부러진 22 G 바늘 동맥에 구멍을 찌를 하 고 팁에서 젤 displacing 피하기 위해 선박 cannulation 집게를 사용 하 여 동맥에는 정을 삽입. 정까지 가능한 사전. 인접 하 고 원심 봉합 관계를 사용 하 여 보안 압력 테.</li>
		<li>절 개에 인접 한 측면 내부 원격 임 플 란 트의 시체를 턱 하 고 절단 바늘에 4-0 나일론 봉합 사를 사용 하 여이 절 개를 닫습니다. 배터리 수명을 보존 하는 기록의 결론에 자석에 의해 원격 장치를 해제 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 위치는 쥐 두뇌에 액세스할 Stereotaxic 수술 프레임에
<ol><li>부드럽게 stereotaxic 수술 프레임에서 발생 하기 쉬운 위치에 쥐를 이동합니다.</li>
	<li>귀 바 사이 쥐 놓고 람다와 bregma의 높이 맞춰야 하 니 막대를 조정 합니다. 포지셔닝 쥐 긴장, 무게, 및 CNS 대상의 위치에 달려 있습니다.</li>
	<li>2 cm rostrocaudal 메스 절 개를 중간 선 통해 두 피를 확인 합니다. 결합 조직 두개골 표면에서 제거 단단히 면 밀고 도포를 사용 하 여. Bregma, 람다, 중간 봉합 시각화에 도움을 두개골에 과산화 수소를 적용 합니다.</li>
	<li>쥐 뇌의 아틀라스를 사용 하 여 대상12가이드, 드릴 버 구멍 뼈, 두개골을 통해 전극 액세스에 대 한 크기.</li>
</ol>6. 신장 교감 신경 차단
<ol><li>10 X 프리 앰프와 microelectrode 앰프 와이어 방사선학 전극 (1.1-1.3 단계)를 연결 합니다.</li>
	<li>이전에 후 절 개를 통해 또는 쥐 stereotaxic 프레임에 고정 한 후 신장 신경 분리. 일단 쥐 stereotaxic 프레임에 방사선학 전극 위치. 4-5 cm 꼬리 방향으로, 약간 척추 옆 갈비뼈 아래에서 확장 메스 절 개를 확인 합니다. 무뚝뚝한 시각화 paraspinal 근육을 절 개 해 부.</li>
	<li>지방 근육 만나는 매우 피상적 1-2 cm rostrocaudal 절 개를가 위를 사용 합니다. 도포 면 스쳐를 사용 하 여 시각화 신장에 근육에서 지방 확산. 그것은 복 막 공간을 입력 하지 해야 합니다.</li>
	<li>견인 기를 사용 하 여 부드럽게 신장 신장 동맥 및 복 부 대동맥을 시각화 paraspinal 근육에서 분리. 신장 신경의 손상을 방지 하려면 지나치게 배 스트레칭 하지 않습니다. 2 "x 2" 코 튼 거 즈 패드를 식 염 수에 담가 사용 하 여 신장 상해에서 보호 하기.</li>
	<li>높은 확대, 아래 절 개 포켓에 신장 신경 식별 합니다. 신경 다발 대동맥 및 신장 동맥에 의해 형성 된 오른쪽 각도에서 가장 쉽게 볼 수 있습니다. 신장 신경 밀접 하 게 따라 신장 동맥은 대동맥에서 신장.</li>
	<li>기록 전극에 배치 될 것입니다 신경 다발의 세그먼트를 선택 합니다. 마이크로 해 부 핀셋을 사용 하 여 주변 조직/선박에서 신경 섬유를 부드럽게 해 부.</li>
	<li>보안에 홀더 와이어 방사선학 전극 (예., 악어 클립 지원 서에 부착). 전극 신경 세그먼트의 수준 낮은. 신경 후크를 사용 하 여 부드럽게 신경 스트레칭 없이 전극에 신장 신경의 세그먼트를 들어올립니다. 참고: 신경 uninsulated 철사, 신경에 병렬에 갈고리 모양의 두 "V" 안으로 휴식 해야 한다. 전극 와이어는 다른 조직, 혈액, 또는 림프 액을 만지지 해야 합니다.</li>
	<li>미네랄 오일 노출된 신장 교감 신경 건조 되기에서 방지 하기 위해 절 개를 입력 합니다. 절 개 되 고 패러데이 케이지에 연결 된 다른 피부에 한쪽 끝을 접지 클립을 사용 합니다.</li>
	<li>높은 및 저역 통과 필터 (10 Hz 및 3 kHz)를 사용 하 여 앰프에 신호를 직접. 10 공화국 포함은 방사선학의 붕괴 패턴을 평가 하기 위해 오디오 모니터 최대 이득을 조정 합니다. 2000-10000 Hz4,5,6,,78사이 배열 하는 샘플링 속도 사용 합니다. CNS 조작 급속/간단한 동정 응답을 가설 하는 경우는 증가 샘플링 속도 사용 합니다.</li>
</ol>7. 레코드 데이터
<ol><li>정 맥 염의 1 mL 또는 (에서 0.1 mL) 10 µ g/mL phenylephrine의 bolus 주사로 baroreflex을 evoking 하 여 방사선학 녹음의 품질을 평가 합니다. 그림 1에서 볼 수 있듯이 주입 혈압을 증가 하 고 방사선학을 억제 한다. 60-80 mmHg의 평균 동맥 압력 증가 신장 sympathoinhibition4,,1314에 대 한 충분 하다.</li>
	<li>필요한 경우 신호를 개선 하기 위해 전극의 위치를 조정 합니다. 신경 두 후크 전극에 접촉 하지 않습니다 또는 어떤 조직, 혈액, 또는 림프 액체 전선을 접촉 하는 경우 위치를 변경 하는 것이 필요 합니다. 참고: 위치에 대 한 필요는 신경 방전의 청각 특성에 근거한 다.<ol>
<li>방사선학의 버스트 심장 주기, 주기적 발생 하지 경우 기록에서 어떤 방해는 전극 위치 신중 하 게.</li>
		<li>호흡 운동 또한 방사선학 녹음의 품질에 영향을 미칠 수, 부드럽게 위치 어디 근육의 움직임을 중단 하지 않습니다 전극 호흡 동안에 전극으로 이동 하 여 신호를 향상.</li>
	</ol>
</li>
	<li>명확한 신호를 얻을 일단 철수 미네랄 오일 절 개 포켓에 신경/전극 연결을 커버 하는 실리 카 젤을 적용 하 여 장소에 방사선학 전극 보안. 젤은 완전 하 게 설정 하기 전에 쥐를 이동 하지 마십시오.</li>
	<li>지속적으로 방사선학을 기록 하는 동안 CNS 조작 프로토콜을 수행 하 고 동맥 압력을 의미. Brainstem 조작에 대 한 microinjector/펄스 발생기를 사용 하는 경우이 장치에서 로직 신호 CNS 조작의 타이밍을 문서화 하는 방사선학/혈압 녹음에 도입 수 있습니다.</li>
	<li>실험 완료 되 면 실리 카 젤 및 척추 근육 사이 기록 전극에 인접 신경 분쇄 하 여 잡음 레벨을 결정 합니다. 방사선학4,,56에 대 한 값이 "0"의 기록 이상 30 s. 로 측정 잡음에 대 한 다른 접근 방법, 아트로핀, 늄, chlorisondamine, 또는 pentolinium 주석산8,,1516, 같은 짧은 연기 절 차단 관리 17.</li>
	<li>조심 스럽게 방사선학 전극 제거 하 고 와이어 전극에서 실리 카 젤의 모든 흔적을 제거. 재사용에 대 한 전극을 저장 합니다. 원격 트랜스미터를 끄고, 카 테 터의 끝을 손상 하지 않도록 주의 복용 제거.</li>
</ol>8입니다. 안락사 (Transcardiac 관류)
<ol><li>염료 나 형광, 전해질 장애, 만드는 주입 또는 c-fos 식의 감지 하 여 CNS 조작의 위치를 식별 합니다.</li>
	<li>뇌 분석 고정 필요 합니다, 쥐 transcardiac 관류에 대 한 준비. 쥐 마 취 깊이 남아 있도록 발가락 핀치 반사를 평가 합니다. 필요한 경우 추가 마 취를 제공 합니다. 증기 두건에서 transcardiac paraformaldehyde 정착 액의 관류를 수행 합니다. 주의: 열렬 한 피부/눈 자극입니다.</li>
	<li>관류 펌프 및 0.9% 정상적인 염 분으로 총리에 튜브를 삽입 합니다.</li>
	<li>피부와 흉 곽 아래 즉시 복 벽을 통해 5-6 cm 옆 절 개 하 고 흉을 엽니다. 횡 경 막에서 간을 조심 스럽게 분리 합니다. 곡선된 무딘가 위를 사용 하 여 횡 경 막에 작은 절 개를 확인 합니다. 좌 심 실에 직접 헤 파 린 0.1 mL를 주사.</li>
	<li>그것은 마음에 puncturing 어느 여 좌 심 실 (스테인리스 gavage 바늘이이 단계에 대 한 잘 작동)로 관류 바늘을 전달 하거나 작은 절 개를 절단 하 여 날카로운가 위를 사용 하 여 고 통과 gavage 바늘을 통해 팁은 통해 볼 수 있는 대동맥의 벽 (하지만 대동맥 아치에 도달 하지 한다). 수술 또는 전기 클립을 사용 하 여 장소에 바늘을 확보.</li>
	<li>주입 펌프를 사용 하 여 0.9% 정상적인 염 분 (실내 온도) 관리. 바로 염 분 린스에 대 한 콘센트를 만들려고 오른쪽 아 트리 움 2-3 m m 절 개를 만듭니다. 하강 대동맥을 잘라 하지 않습니다. 염 분 린스까지 간 변경 색상 레드/브라운에서 옅은 노란색, 약 400 mL의 주입을 계속 2-3 분 이상.</li>
	<li>펌프를 중지 합니다. 정착 액에는 perfusate를 전환 (예., 10% 포 르 말린 또는 4 %paraformaldehyde); 400 mL 주입 2-3 분 이상 두뇌를 제거 하 고 적어도 3 일 동안 또는 두뇌 싱크 될 때까지 조직 30% 자당 (30 mL의 0.1 M 인산 염 버퍼 식 염 수 100 mL에 용 해 하는 자당의)를 전송 하기 전에 4 ° C에서 하룻밤 통 솔루션에는 견본 저장 단면18cryogenetic 전에 cryoprotection에 대 한.</li>
</ol>9. 데이터 분석
<ol><li>전체 웨이브는 절대 값을 가져올 원시 방사선학 해결할. 전체 웨이브 원시 잡음 신호의 10 s 세그먼트를 해결할. 그것은 낮은 신호 대 잡음 비율에 의해 영향을 받는 모든 연구를 제외 해야 합니다. 연구에서 방사선학을 측정, 조사 요구 신호 잡음 비율을 2:1 6:1 ~17,,1920초과 같은 선험적 기준 적용.</li>
	<li>평균 겹치지 않는 세그먼트 (µ V)에 대 한 방사선학 정류 및 잡음 견적 (µ V) 빼기 계산 합니다. 실험의 목적에 따라 수 사관 10 등 간격을 선택할 수 있습니다 (그림 1) 또는 1 s. 계산에 대 한 평균을 계산 하 생리 소프트웨어에서 파형 분석 옵션을 사용 하 여 스프레드시트에 데이터를 내보낸 의미 선택한 시간 간격입니다.</li>
	<li>다른 동물에서 정상화 하는 비율 기준에서 변화 추가 분석에 대 한 값 표현 한다. 파라메트릭 통계를 사용 하 여 그룹 비교를 실시.</li>
</ol>

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앤 M. 핑크는 데이터 과학 국제 고객 자문 위원회의 일원 이다.

방사선학을 측정 하기 위한 중요 한 단계를 포함: (1) 피하 신장 paraspinal 근육에서 분리 될 때 신장 동맥 및 신경의 스트레칭과 기록 전극에 신경 세그먼트 때, (2) 신중 하 게 해 부 신장 신경 섬유 주변 조직/선박에서 전극 전선 (3) 보장 조직, 혈액, 또는 림프의 액체, 그리고 (4) 방지 신경 신장 신경 및 신경 전극 단위에 실리 카 젤에 광 유를 적용 하 여 밖으로 건조에서 무료입니다. 문제 해결에 대 한 기록 시스템 적절 하 게 접지 되도록 중요 하다. 명확한 방사선학 신호를 얻으려면, 전극의 위치는 시각화 및 실리 카 젤을 포함 이전 원시 방사선학 신호를 듣고 있는 동안 신중 하 게 조정할 수 있습니다. 몇 시간을 지속 하는 실험에 대 한 CNS 조작에 의해 변조 수 있는 방사선학 신호에 수술 결과의 성공적인 완료.
결과 해석 하는 경우 조사 평균 동맥 압력 및 방사선학에 마 취의 영향을 고려해 야 합니다. 이 프로토콜에는 바르 마 취 (pentoba...

심장 혈관 시스템의 자율 제어에 대 한 전 임상 발견 알려 고혈압, 심장 마비, 만성 신장 질환 등 질환을 관리 하기 위한 전략. 교감 신 경계와 감소 vagal 심장 톤의 과잉 활동 혈압 (BP)1에 기여 한다. 만 성으로 높은 신장 동 정적인 유출 카 테 콜 아민 분 비를 강화 하 고 신장 혈, 심혈 관계/신장 시스템2,3에 해로운 결과 감소. 자율 신경 부전으로 이어지는 neurobiological 경로 정의 하려면 설치류에 학문은 중앙 신경 시스템 (CNS)의 신경 공감 매개 변수를 조절 하는 방법을 결정 하기 위한 중요 한. 이 프로토콜의 목적은 신장 교감 신경 활동 (방사선학)을 측정 하는 것에 대 한 기술 정보를 제공 하 고 혈압과 마 취 쥐에서 CNS 조작에 대 한 응답에서 급성 교감 변화 측정에 대 한 기술 개요.
급성 (비-생존) 방사선학 측정 (지속적인 분 h)는 약리학, 전기로, 과학자는 CNS 프로브 것입니다 또는 optogenetically에 특정 핵의 기능을 결정 하는 쥐를 마 취 때 유용 합니다. 이러한 메서드, 독방 핵, periaqueductal 회색, 같은 구조를 사용 하 여 pedunculopontine tegmentum 고 rostral ventrolateral 정도 되어 조사 공감 매개 변수4, 규제 neurobiological 경로 정의 하 5,,67. 이 방식은 조사를 CNS 목표를 식별 하는 데 중요 한의 자율 부전8,9만성 모델에 추가. 이러한 실험을 완료 하려면 실험실 납땜, 외과 현미경, stereotaxic 프레임, microelectrode 증폭기 및 오디오 모니터 필요 합니다. 실험실에 존재 하는 요인 전기 소음을에 따라 수술/기록 영역 패러데이 케이지/접지 스트랩 방사선학 녹음에 전기 소음을 줄이기 위해 필요할 수 있습니다. 뇌 분석 조직 고정 필요 합니다, 관류 펌프 및 연기 후드가 필요 합니다. 데이터 디지털화 될 수 및 다양 한 분석 옵션 및 telemetric 신호를 통합에 대 한 호환성 여러 생리 소프트웨어/데이터 수집 (아날로그-디지털 컨버터) 단위4,5를 사용 하 여 기록 .

<table><tbody><tr><td>스테인레스 스틸 와이어</td><td>AM 시스템; Sequim, WA</td><td>791000</td><td>RSNA 전극</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 (PE-50) 튜브 VWR</td><td>; Radnor, PA</td><td>63019-048</td><td>RSNA 전극;용기 캐뉼레이션</td></tr><tr><td>미니어처 핀 커넥터</td><td>AM 시스템; Sequim, WA</td><td>520200</td><td>RSNA 전극</td></tr><tr><td>압착 도구</td><td>Daniels Manufacturing Corp.; 올랜도, FL</td><td>M22520</td><td>RSNA 전극</td></tr><tr><td>커넥터 스트립</td><td>Amphenol; Clinton Township, MI</td><td>221-2653</td><td>RSNA 전극</td></tr><tr><td>JB Kwik 에폭시</td><td>JB 용접, 유황 스프링스, TX</td><td>8270</td><td>RSNA 전극</td></tr><tr><td>실리콘</td><td>Permatex; Hartford, CT</td><td>2222</td><td>RSNA 전극</td></tr><tr><td>헤파린 나트륨; 주사 가능(10mL 바이알, 1000U/mL)</td><td>KV 수의학 공급; David City, NE</td><td>P03466</td><td>정맥 라인 개통</td></tr><tr><td>페닐에프린 HCl; 주사용 (1 mL 바이알, 10 mg / mL)</td> <td>ACE 외과 용품; Brockton, MA</td><td>950-6312</td><td>신장 교감신경 억제 테스트</td></tr><tr><td>단일 후크 탄성 외과 체류</td><td>하버드 장치; Holliston, MA</td><td>72-2595</td><td>절개</td></tr><tr><td>실크 수술 테이프</td><td>3M, Minneapolis, MN</td><td>1538-0</td><td>안전한 수술 스테이</td></tr><tr><td>바늘, 20G</td><td>Sigma-Aldrich;St. Louis, MO</td><td>Z192554-100EA</td><td>혈관 캐뉼레이션</td></tr><tr><td>Dumont #7 곡선 겸자</td><td>Fine Science Tools; 포스터 시티, CA</td><td>11274-20</td><td>선박 캐뉼레이션</td></tr><tr><td>5-0 실크 봉합사 넥타이</td><td>Braintree Scientific; Braintree, MA</td><td>SUT-S 106</td><td>혈관 캐뉼레이션</td></tr><tr><td>섬세한 지혈 겸자</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.; Gaithersburg, MD</td><td>RS-7117</td><td>혈관 캐뉼레이션 및 RSNA 수술</td></tr><tr><td>Crile 지혈 겸자</td><td>Fine Science Tools; Foster City, CA</td><td>13004-14</td><td>바늘 굽힘</td></tr><tr><td>원격 측정 송신기</td><td>Data Sciences International; 미네소타주 미니애폴리스</td><td>PA-10</td><td>평균 동맥압 모니터링(원격 측정)</td></tr><tr><td>리겔 주사기</td><td>Data Sciences International; Minneapolis, MN</td><td>276-0038-001</td><td>송신기 재사용 (원격 측정)</td></tr> <tr><td>일회용 압력 변환기</td><td>Transpac; San Clemente, CA</td><td>MI-1224</td><td>평균 동맥압 모니터링</td></tr><tr><td>Clear-Cuff 압력 주입기</td><td>MILA International Inc.; 피렌체, 켄터키</td><td>2281339</td><td>평균 동맥압 모니터링</td></tr><tr><td>용기 캐뉼레이션 겸자</td><td>Fine Science Tools; Foster City, CA</td><td>00574-11</td><td>카테터 삽입</td></tr><tr><td>검은색 모노필라멘트 나일론 4-0 봉합사 역 절단 바늘</td><td>McKesson Medical-Surgical; San Francisco, CA</td><td>S661GX</td><td>보안 원격 측정</td></tr><tr><td>송신기 원격 측정 수신기</td><td>Data Sciences International; 미네소타주 미니애폴리스</td><td>RPC-1</td><td>평균 동맥압 모니터링(원격 측정)</td></tr><tr><td>LabChart Pro(소프트웨어), PowerLab(수집 하드웨어)</td><td>AD 기기; Colorado Springs, CO</td><td>ML846, MX2 matrix 2.0 (Data Science International 원격 측정과 호환)</td><td>소프트웨어/수집 하드웨어용 3가지 옵션</td></tr><tr><td>SciWorks(소프트웨어), DataWave(수집 하드웨어)</td><td>DataWave Technologies, Loveland, CO</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Spike 2(소프트웨어), Micro1401-3</td><td>Cambridge Electronic Design Ltd., London UK</td><td>1401-3</td><td></td></tr><tr><td>Micro-drill</td><td>Roboz 수술 기구 Co.; Gaithersburg, MD</td><td>RS-6300</td><td>CNS 수술</td></tr><tr><td>입체 유위 수술 프레임</td><td>스톨팅; Wood Dale, IL</td><td>51600</td><td>CNS 수술</td></tr><tr><td>10X 프리 앰프 AM 시스템이 있는 미세 전극 증폭기</td><td>; Sequim, WA</td><td>1800-2</td><td>RSNA 기록</td></tr><tr><td>견인기</td><td>미세 과학 도구; Foster City, CA</td><td>17009-07</td><td>RSNA 수술</td></tr><tr><td>미세 해부 핀셋</td><td>정밀 과학 도구; Foster City, CA</td><td>11251-10</td><td>RSNA 수술</td></tr><tr><td>마이크로 훅</td><td>미세 과학 도구; 포스터 시티, CA</td><td>10064-14</td><td>RSNA 수술</td></tr><tr><td>미네랄 오일</td><td>Fisher Scientific; Waltham, MA</td><td>8042-47-5</td><td>RSNA 수술</td></tr><tr><td>오디오 모니터</td><td>AM 시스템; Sequim, WA</td><td>3300</td><td>RSNA 수술</td></tr><tr><td>실리카겔</td><td>Wacker, 뮌헨; 독일</td><td>RT601A-B</td><td>RSNA 수술</td></tr><tr><td>전기 클립</td><td>Tyco Electronics; 샤프하우젠, 스위스</td><td>EB0283-000</td><td>관류 바늘</td></tr><tr><td>Bonn 가위, 직선/날카로운 점</td> 접지 또는 고정 <td>Roboz Surgical Instrument Co; Gaithersburg, MD</td><td>RS-5840</td><td>관류</td></tr><tr><td>Gavage 바늘</td><td>하버드 장치; Holliston, MA</td><td>75-0286</td><td>관류</td></tr><tr><td>Masterflex 관류 펌프</td><td>Cole-Parmer; Vernon Hills, IL</td><td>7524-10</td><td>관류</td></tr><tr><td>Masterflex 백금 경화 실리콘 튜빙</td><td>Cole-Parmer; Vernon Hills, IL</td><td>96410-15</td><td>관류</td></tr><tr><td>포르말린(10% 완충 용액, 4 L)</td><td>Sigma-Aldrich; St. Louis, MO</td><td>HT501128</td><td>관류</td></tr><tr><td>자당</td><td>시그마-알드리치; St. Louis, MO</td><td>S0389</td><td>극저온 보호</td></tr></tbody></table>

마 취 쥐에서 중앙 신경 조작에 대 한 응답에서 신장 교감 신경 활동에 심각한 변화를 측정

Quantifying Acute Changes in Renal Sympathetic Nerve Activity in Response to Central Nervous System Manipulations in Anesthetized Rats

신장 동 정적인 신경 활동 (방사선학) 및 평균 동맥 압력에 있는 중요 한 매개 변수 심장 혈관과 자율 연구; 그러나, 측정 하 고 이러한 변수를 분석 하기 위한 기술에 있는 과학자를 감독 하는 한정 된 자원 있다. 이 프로토콜에는 방사선학 및 마 취 쥐에 있는 평균 동맥 압력 측정을 위한 방법을 설명 합니다. 프로토콜은 또한 중앙 신경 조직 (CNS) 조작에 대 한 방사선학 녹음 하는 동안 두뇌에 액세스 하는 방법을 포함 한다. 방사선학 녹음 기술 호환 됩니다 pharmacologic, optogenetic, 또는 CNS의 전기 자극. 접근은 조사와 상관 관계를 해부학 CNS 핵 비 생존 실험 단기 (h 분) 자율 반응을 측정할 때 유용 합니다. 접근 쥐에서 방사선학의 만성 (생존) 녹음을 얻기 위해 사용 되는 것이 아닙니다. 방사선학, 평균 방전 방사선학, 정류 및 평균 동맥 압력 수 계량 및 패라메트릭 통계적 테스트를 사용 하 여 추가 분석. 정 맥 접근, telemetrically, 평균 동맥 압력을 기록 하 고 미래 조직학 분석을 위한 뇌 고정을 얻기위한 방법 또한 문서에 설명 되어 있습니다.

그림 1 샘플 방사선학과 혈압 기록을 Nembutal 취 쥐에서 보여 줍니다. 평균 동맥 압력의 증가 유도 하 고 baroreflex 및 과도 sympathoinhibition4,6연상 phenylephrine의 정 맥 주사 사용 되었다. 척도 방사선학, 원시 방사선학 정류 되었고 겹치지 않는 10 s 세그먼트;에 대 한 평균 소음 예측은 각 세그먼트에서 뺍니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58205/58205fig1.jpg"> 그림 1: 방사선학과 phenylephrine 주입 IV에 대 한 응답에서 혈압.<...

중앙 신경 시스템 (CNS) 조작에 대 한 공감과 심장 혈관 응답을 측정 하기 위한 방법 신경 과학 발전을 위해 중요 하다. 이 프로토콜은 측정 및 마 취 쥐 (비-생존)에서 신장 교감 신경 활동 (방사선학)에 심각한 변화를 측정 과학자를 지원 하기 위해 개발 되었다.

Renal sympathetic nerve activity (RSNA) and mean arterial pressure are important parameters in cardiovascular and autonomic research; however, there are ...

이 방법은 자율신경계, 특히 신장으로의 교감신경 유출을 조절하는 중추신경계 메커니즘에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 중추 신경계 조작이 신장으로의 교감신경 유출에 미치는 영향을 측정할 수 있다는 것입니다. 동맥 삽관을 삽입하기 전에 고배율에서 압력 감지 카테터를 검사하여 카테터에 기포와 파편이 없고 유체와 젤로 채워진 구성 요소 사이에 손상되지 않은 반월판이 있는지 확인합니다.각 이식 전에 카테터의 말단 끝에 젤을 다시 채우고 자석을 사용하여 송신기를 켭니다. 근위 봉합사에 느슨한 오버핸드 반 매듭을 넣어 대퇴 동맥을 잠시 폐색합니다. 그리고 카테터 도입기를 비지배적인 손에 들고 혈관 캐뉼레이션 겸자를 사용하여 팁에서 젤이 변위되지 않도록 원격 측정 장치의 캐뉼라 끝을 잡습니다.구부러진 22게이지 바늘 끝을 사용하여 동맥에 구멍을 뚫고 캐뉼라를 동맥에 최대한 삽입합니다. 그런 다음 근위 및 원위 봉합사 타이로 압력 카테터를 고정합니다. 그리고 원격 측정 임플란트의 몸체를 절개 부위에 인접한 옆구리 안쪽에 밀어 넣습니다.뇌 접근을 위해 머리를 이어바 사이에 두고 정위 수술 프레임에서 쥐를 엎드린 자세로 부드럽게 이동하고 앞니 막대를 조정하여 람다와 브레그마의 높이를 균등화합니다. 그런 다음 두피의 정중선을 통해 2cm 길이의 꼬리 부분을 절개하고 면봉 어플리케이터를 사용하여 두개골 표면의 결합 조직을 단단히 제거합니다. 노출된 두개골에 과산화수소를 바르면 브레그마, 람다 및 정중선 봉합사를 시각화하는 데 도움이 됩니다.표적 지정을 안내하기 위해 쥐 뇌의 지도를 사용하여 두개골을 통해 전극이 접근할 수 있는 크기의 버 구멍 절골술을 뚫습니다. 신장 교감신경을 분리하기 위해 와이어 신장 교감신경 활동 또는 RSNA 전극을 10X 프리 증폭기 및 미세 전극 증폭기에 연결하고 갈비뼈 아래 4-5cm에서 꼬리 방향으로 척추 약간 옆으로 메스를 절개합니다. 둔기로 절개하여 척추 주위 근육을 시각화하고 지방이 근육과 만나는 곳에 매우 피상적인 1-2cm 꼬리 절개를 만듭니다.면봉 어플리케이터를 사용하여 근육에서 지방을 멀리 분산시켜 복막 공간으로 들어가지 않고 신장을 시각화합니다. 그리고 견인기를 사용하여 신장과 척추 주위 근육을 부드럽게 분리하여 신장 동맥과 복부 대동맥을 시각화합니다. 그리고 절개 주머니의 신장 신경을 확인하기 위해 고배율을 사용합니다.신경 다발은 대동맥과 신장 동맥이 대동맥에서 신장까지 신장 동맥을 밀접하게 따라가는 직각에서 가장 쉽게 볼 수 있습니다. 그런 다음 미세 해부 핀셋을 사용하여 주변 조직에서 기록 전극에 놓을 신경 다발의 일부를 부드럽게 절개합니다. 와이어 RSNA 전극을 홀더에 고정하고 전극을 신경 분절 수준까지 내립니다.신경 후크를 사용하여 신경을 늘리지 않고 신장 신경의 일부를 전극 위로 부드럽게 들어 올립니다. 그리고 절개 부위에 미네랄 오일을 채워 노출된 신장 교감 신경을 촉촉하게 유지합니다. 접지 클립을 동물에 부착하고 다른 쪽 끝을 패러데이 케이지에 부착하고 고역 및 저역 통과 필터링을 사용하여 신호를 증폭기로 보냅니다.그런 다음 RSNA의 버스트 패턴을 평가하기 위해 오디오 모니터를 포함하여 최대 10kHz까지 게인을 조정합니다. RSNA 기록의 품질을 평가하기 위해 100마이크로리터 볼루스 페닐에프린을 100마이크로리터 볼루스 정맥 주사하여 혈압을 높이고 신장 교감신경 활동을 억제하여 전극의 위치를 조정하여 필요에 따라 신호를 개선합니다. 명확한 신호가 확인되면 미네랄 오일을 흡인하고 전극을 실리카겔로 제자리에 고정합니다.이 대표적인 실험에서는 평균 동맥압의 증가를 유도하고 압력반사 및 일시적인 교감신경 억제를 유발하기 위해 페닐에프린의 정맥 주사를 사용했습니다. RSNA를 정량화하기 위해 원시 RSNA를 수정하고 겹치지 않는 10초 세그먼트에 대해 평균을 구하고 각 세그먼트에서 노이즈 추정치를 뺐습니다. 이 절차를 수행할 때 쥐가 적절하게 마취되었는지, 입위 프레임에 적절하게 배치되었는지, 시스템이 전기 소음을 줄이기 위해 적절하게 접지되었는지 확인하는 것이 중요합니다.이 절차와 뇌 조직 채취에 따라 조직학 방법을 적용하여 교감신경 흥분 반응을 제어하는 중심계 핵의 유형을 특성화할 수 있습니다. 이 기술을 통해 신경과학자들은 마취된 쥐의 자율신경 조절 메커니즘을 탐구할 수 있으며, 이는 혈압과 신장 기능의 조절을 이해하기 위한 동물의 향후 연구에 정보를 제공합니다. 적어도 15분마다 마취 평면을 평가하는 것이 중요하다는 것을 잊지 마십시오.그리고 필요에 따라 추가 마취를 제공합니다.

quantifying-acute-changes-renal-sympathetic-nerve-activity-response

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

수술의 단순하고 강력한 행동 결과로 인해 좌골 신경의 만성적인 수축이 neuropathic 고통의 사전 저명한 동물 모델 중 하나입니다. 수술에 따라 24 시간 내에 통증 과민성 설립되고 양적 폰 프라이 aesthesiometer (기계적 시험)과 발바닥 진통제 측정기 (온도 시험)를 사용하여 측정할 수있다.

좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축

이 비디오는 쥐의 동맥압 변화에 반응하는 신장 교감 신경(RSN)의 활동을 연구하는 기술을 보여줍니다. 대퇴 동맥에 압력 감지 카테터를 부착하면 신장 교감 신경이 노출됩니다. 그런 다음 신경을 기록 전극 위로 들어 올리고 전기 활동을 기록합니다. 다음으로, 혈압을 높이기 위해 혈관 수축 약물을 주입하고 RSN 활성의 해당 변화를 모니터링합니다.

쥐의 동맥 압력에 반응하여 신장 교감 신경 활동의 변화를 기록합니다.

이 비디오는 안지오텐신 II 유도 고혈압 마우스 모델에서 교감신경 기능을 방해하고 혈압을 낮추기 위해 페놀이 사용하는 신장 동맥 교감신경 탈신경 절차를 보여줍니다.

Angiotensin II-Induced Hypertension Mouse Model에서 신장 동맥의 교감신경 탈신경

마 취 쥐 비 생리 조직 혈압, 혈압과 자율 신 경계 사이의 친밀 한 관계를 주어진 자율의 의미 있는 평가 하는 걸로 전시. 따라서, 동시에 기록적인 신장 교감 신경 활동을 의식 쥐의 정 맥 주입 혈압 소설 방법 요약.

신장 동 정적인 신경 활동의 의식, 정 맥 주입 혈압 동시 녹음에 대 한 새로운 접근 방식을 억제 쥐.

이 연구에서는 동굴 같은 신경 자극 신경 전극의 절연을 수행 하기 위한 기술과 간단한 수술에 설명 합니다 intracavernous 압력 측정 및 실리콘 접착제를 사용 하 여 복잡 한.

동굴 같은 신경 자극 및 쥐에 Intracavernous 압력의 녹음

여기에서는 안지오텐신 II 주입으로 유도 된 고혈압이있는 마우스에서 신장 교감 신경 탈신경 (RDN)에 대한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차는 반복 가능하고 편리하며 고혈압 및 심장 비대에 대한 RDN의 조절 메커니즘을 연구 할 수 있습니다.

개선된 신장 탈신경은 안지오텐신 II 주입으로 유발된 고혈압을 완화했습니다.

쥐의 좌골 신경통을 유도하기 위해 만성 수축 손상 모델에서 Fu의 피하 침을 사용하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

좌골 신경통에 대한 Fu의 피하 침의 효능: 만성 수축 손상 쥐 모델의 행동 및 전기 생리학적 변화

우리는 심장 기능을 기록하고 심장 잠금 척추 등쪽 뿔 뉴런을 분석하는 것과 함께 척추 다채널 세포 외 기록을 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 이 방법은 침술에 의해 유발된 흉추의 내장 기능 변화의 기저에 있는 척추 메커니즘을 연구하기 위한 시간적으로 동기화된 틀을 제공합니다.

쥐 척추 등쪽 뿔(Rat Spinal Dorsal Horn)의 심장 잠금 뉴런 반응에 대한 체세포 자극의 코딩 프로파일 연구

여기서는 급성, 마취, 생체 내 쥐 실험에서 두 가지 유형의 척수 전기생리학적 측정을 사용하여 신경섬유 아형의 활동을 구별할 수 있는 두 가지 유형의 측정법인 국소장 전위 및 광역 동적 범위 단일 뉴런 기록을 평가하는 방법을 제시합니다.

마취된 쥐에서 말초 통증 차단을 평가하는 전기생리학적 방법

시신경의 절개면은 성인 CNS 손상의 널리 사용되는 모델입니다. 망막 신경절 세포의 90 퍼센트 (RGCs)은 누구의 axons 완전히 axotomy 후 14 일 이내에 죽는 (axotomy) 그었 있습니​​다. 이 모델은 실험 조작을 쉽게받을 수있는 고도 재현할 수 있습니다.

시신경의 절개 : 중추 신경계에서 신경 세포의 Apoptosis 성인의 모델

배우세요 마취 쥐에서 신장 교감 신경 활동(RSNA)과 평균 동맥압을 측정하는 방법을 중추신경계 조작을 통해 자율신경 조절 메커니즘을 연구하는 데 활용할 수 있습니다.

마 취 쥐에서 중앙 신경 조작에 대 한 응답에서 신장 교감 신경 활동에 심각한 변화를 측정

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