Name: 좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: 학습하세요 쥐의 좌골 신경 만성 수축 수술을 통해 신경병증성 통증을 유도하고 기계적·열 자극에 대한 통각 과민 반응을 정량적으로 측정하는 방법입니다. 이 기법은 만성 통증의 주변 및 중추 기전을 연구하는 데 활용됩니다.

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저자는 베넷과 샤오 (1988)에 의해 CCI 모델의 원래 설명을 인정하고 싶습니다. 이 작품은 과학 그리니치 표준시에 의학 연구를위한 국민 건강과 호주의 의료 연구 협의회 (ID # 568637)과 뉴사우스 웨일즈 사무소에서 교부금에 의해 부분적으로 지원되었다.

1. 좌골 신경 만성 수축 무균 기술은 수술을 위해 사용해야합니다. 70 % 에탄올로 수술 작업 표면을 소독하고 autoclaving에 의해 사전에 멸균 악기 (예 : 미세 가위, 포셉, 그리고 견인기), gauzes, 스테이플과 면봉으로 준비합니다. 여러 수술의 경우 청소 및 70 % 에탄올이나 쥐 사이에 마른 비드 steriliser와 resterilise 악기. 외과 마스크, 헤어 모자와 멸균 장갑을 착용한다. 신경의 수축 들어, 건조 방지를 위해, 멸균 식염수에 포장되어 약 3 cm 길이의 작은 조각으로 절단하여 삼가의 크롬을 함유하는 장치 내장 봉합사를 준비합니다. 상처를 닫을 경우, 상용 멸균 실크 봉합을 사용합니다. <ol><li> O 2의 isoflurane 5 %를 사용하는 유도 챔버에 쥐를 Anaesthetise 다음, 안면 만든 사용자 정의를 통해 O 2에서 isoflurane 2 % 제공하고, 절차를 수행하는 동안 anesthetised 동물을 모니터링. 일반적인 대안 anesthetics는 할로탄 또는 intraperitoneal 나트륨은 pentobarbital 흡입됩니다. 이들 수용체는 neuropathic 고통의 개발에 중요한 이후 케타민을은 N-메틸-D-aspartate (NMDA) 수용체 길항제로 피해야한다. </li><li> 쥐의 왼쪽 뒷다리 다리를 면도. 그런 다음, 37에서 열 조절 난방 매트에 동물을 배치 ° C와 눈에 윤활 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 70% 이소 프로필 알코올과 요오드 용액 세 가지 다른 응용 프로그램과 함께 면도 영역을 소독. </li><li> 쥐가 가슴 / 흉부에 누워으로 왼쪽 뒷다리 다리를 위로 향하게하고 발을 마스킹 테이프를 사용하여 척추 90 °에서 femor과 위치에 누르고 있습니다. </li><li> 피부 병렬 절개하지만 femor 아래 3~4mm, 그리고 결합 조직을 절단하여 절개를 둘러싼 근육에서 무료로 피부를 확인합니다. </li><li> gluteus superficialis와 팔뚝 사이의 결합 조직을 잘라 무딘 가위를 이용하여femoris 근육. </li><li> 좌골 신경의 명확한 시각화 수 있도록,이 두 근육 사이의 간격을 넓혀 리트 렉터를 사용합니다. </li><li> 곡선 야기한 스쳐 포셉 및 마이크로 가위, 주변의 결합 조직에서 좌골 신경의 부드럽게 무료로 약 10 밀리 (좌골 trifurcation에 근위)를 사용. </li><li> 현미경과 좋은 광원에서, 이중 매듭으로 좌골 신경의 trifurcation에 근위 간격 1mm를, 넷 ligatures을 (삼가의 크롬을 함유하는 직감 4.0, Ethicon, 미국) 매다. 각각의 끈 들어, 하나의 느슨한 루프로 시작, 다음 루프 가까운 두 끝을 파악하고 루프 살짝만 아늑한되고 봉합사는 신경을 따라 미끄러지게하지 않는까지 조입니다. 의 적절한 위치에 루프를 개최하려면, 매듭을 완성을 가장 먼저 위에 두 번째 루프를 놓으십시오. 마지막으로, 1mm 주위에 묶인의 미심쩍은 부분을 절단. 신경의 수축이 최소화되고, 간단한 떨리는이 관찰되면 즉시 중지, 일 때문에 체포되지 않도록해야전자 epineural 혈액의 흐름. ligatures 단단히 걸쳐 axotomy로 연결하고, autotomy (자동 절단), 성공적인 통증 과민성 테스트를 배제 모두 원치 않는 부작용. </li><li> 피부를 고정하는 근육 레이어와 스테이플 (Autoclip, 9 밀리) 닫습 봉합 (Mersilk 5.0, Ethicon)를 사용합니다. 다음, 상처를 소독하기 (Riodine) 요오드 용액을 사용하십시오. </li><li> 질식 의식 동물을 방지하기 위해, 마취 회복 기간 동안 긴밀하게 쥐를 관찰하고, 그것이 평평한 종이 침구 (아니라 표준 동물 축산의 침구)와 별도의 새장에 복구할 수 있습니다. 어떤 수술 진통제의 수사를 제공하기 전에 이것이 통증 과민성 시험을 방해할 수있는 사실을 고려해야합니다. 사실, 부상 당시 마취제, lidocaine의 로컬 응용 프로그램이 neuropathic 고통의 발전을 변경하고, 이전 주 7 hyperalgesia의 정도를 감소 수있다는 증거가있다. 이 m에 대한 논의는베넷 외 8 시까지 리뷰를보고 atter. </li></ol> 2. 통증 Behaviours의 측정 <ol><li> 실험을 시작하기 전에 며칠 동안 쥐의 일일 처리는 해당 처리기에 쥐가 의히다 스트레스와 물고의 위험을 줄이기 위해 권장합니다. </li><li> 행동적 테스트에 앞서, 쥐가 테스트 절차 및 동물 인클로저에게 길들여해야합니다. 테스트 환경은 조용하고 보관하고 잘 일정한 온도 및 습도 수준으로 조절하고, 하루 중 비슷한 시간을 각 테스트 세션에서 수행되어야합니다. </li><li> 통증 과민성 테스트는 원하는대로, CCI (기준) 이전과 CCI 후 다른 시간 지점에서 여러 번 수행해야합니다. </li></ol> 3. 기계 탈퇴 임계값 <ol><li> 시험 당일, 장소의 쥐 고가 메쉬 낭패 테스트 케이지로 탈퇴 임계값을 측정하기 전에 15-30분, 새장 탐사 및 groo있게명나라 활동을 중단하고 쥐가 편안하고 고정이 될 수 있습니다. </li><li> 직접 hindpaw의 중반 발바닥 표면 바로 아래에 동적 발바닥 폰 프라이 aesthesiometer (우고 Basile, 이탈리아), 위치 필라멘트와 터치 자극기 장치를 사용하여 금속 메쉬 피하 시작 키를 누르십시오. 이것은 기계적으로 증가 힘으로 hindpaw의 발바닥 표면을 자극하기 위해 필라멘트를 올렸으니까요. </li></ol> 수동 폰 프라이의 머리카락은 피부에 적용할 때 특정 무력을 유도하도록 조정되는 직경 필라멘트 증가의 연속입니다. 그들의 발자국이 인출 한도 등 이전 4 설명된 측정을위한 전자 동적 발바닥 폰 프라이의 aesthesiometer의 대안으로 사용될 수 있습니다. 전자 폰 프라이 aesthesiometers (예 IITC, 미국 및 Somedic, 스웨덴)의 여러 다른 제조 업체도 있습니다. <ol start="3"><li> 부상 및 손상되지 않은 두 hindpa에서 기계 탈퇴 임계값을 기록WS, counterbalanced 순서를 유지해야합니다. 이 장치는 웃기고 압력을 적용하고 금단 반응에 따라 시스템이 자동으로 기록하고 (g)을 적용 최강 군사력을 표시합니다. 모호한 응답 (ambulation이나 정리의 경우 IE)가 발생하면, 자극을 반복하고 다시 임계값을 기록합니다. 빠는데 또는 hindpaw의 다음의 자극을 떨고있는 것은 고통과 관련된 행동의 징후입니다. </li><li> 기계적 자극에게 자극 사이에 약 5 분 간격으로 3 회 반복 임계값을 기록하고 발자국 탈퇴 임계값의 평균을 계산합니다. </li></ol> 4. 열 탈퇴 대기 시간 발바닥 테스트 악기의 적외선 (IR​​) 가열 강도는 실험을 시작하기 전에 조정해야합니다. 저희 연구실에서는, 우리는 순진 쥐 10 초 정도의 평균 발자국 탈퇴 대기 시간을 제공하기 위해 적외선 강도를 조절, 우리는 조직 댐을 피하기 데는 20 초 컷 - 오프 지연 시간을 설정앞발을 제거하는 실패의 경우 연령. <ol><li> 시험 당일, 장소 15-30분 지연을 측정하기 전에 유리 낭패 테스트 케이지에 쥐, 케이지 탐사를 허용하고 중단을위한 활동을 정리하고 쥐가 편안하고 고정이되었습니다. </li><li> 직접 hindpaw의 중반 발바닥 표면 바로 아래에 열 발바닥 진통제 악기 (우고 Basile, 이탈리아), 위치 적외선 소스를 사용하여 시작 키를 누르십시오. 이것은 투명한 유리 표면을 통해 복사열의 광선에 hindpaw의 발바닥 표면을 제공합니다. 열 발바닥 진통제 악기 (예 : IITC, 미국 및 Stoelting, 미국)의 다른 제조 업체도 있습니다. </li><li> counterbalanced 위해 부상과 손상되지 않은 두 hindpaws에서 탈퇴 대기 시간을 기록합니다. 이 장치는 자동으로 열원에서 손 철회에 대한 열 자극의 발병에서 (초) 촬영 시간을 기록합니다. 모호한 반응이 발생하는 경우 (ambula의 경우 즉,기 또는 정리), 자극을 반복하고 다시 대기 시간을 기록합니다. 빠는데 또는 hindpaw의 다음의 자극을 떨고있는 것은 고통과 관련된 행동의 징후입니다. </li><li> 열 자극에게 자극 사이에 약 5 분 간격으로 적어도 3 번 반복, 대기 시간을 기록하고 발자국 탈퇴 대기 시간의 평균을 계산합니다. </li></ol> 4. 대표 결과 Wistar 쥐의 (손상되지 않은) ipsilateral (부상)과 contralateral 발냄새의 기계적 인출 한도 및 열 회수 지연의 예제는 앞에 표시 (베이스 라인) 및 2~12일 그림 3A의 CCI, 그리고 그림 3B 이후. 있습니다 이러한 수치에서 그것은 CCI는, 기계적 및 열적 통증 과민성의 존재를 나타내는, 기계 금단 임계값과 ipsilateral hindpaw의 열 인출 대기 모두에서 상당한 감소를 일으키는 것을 볼 수있는 만성 neuropathic 고통의 두 기능 . <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3393/3393fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 1"> 그림 1. CCI 모델 ligatures의 위치를 보여주는 개략도. neuropathic 고통의이 동물 모델은 중간 허벅지 수준에서 좌골 신경 네개의 느슨한 삼가의 크롬을 함유하는 - 내장 ligatures의 배치를 포함한다. 그것은 hindpaw 기슭와 후속 통증 과민성에가는 afferents의 일부만 손상에 대한 결과입니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3393/3393fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 통증이 테스트에 사용 hindpaw 영역의 다이어그램. 같은 빨간색 점선 동그라미로 표시 footpads에서 불과 후부 중반 발바닥 표면은, 고통 테스트에 사용됩니다. 이 지역은 좌골 신경의 말단 지점에서 주로 innervated 있습니다. 뒤꿈치와 footpads는 차동 피부 민감도에 따라 피해야한다. "3.jpg /&gt; 쥐의 좌골 신경의 만성적인 수축에 따라 그림 3. 통증 과민성. CCI 후, 기계적 자극 (A)와 (B) 부상에서 열 자극에 발자국 탈퇴 대기 시간 (ipsilateral)에 발자국 탈퇴 임계값에 상당한 감소는 손상되지 않은 (contralateral) hindpaw (P는 &lt;0.01 반복 측정 2로 비교할 hindpaw입니다 방향 ANOVA). 데이터는 뜻 보여주 ± SEM, n은 = 7 Wistar의 쥐.

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<li>Austin, P. J., Moalem-Taylor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuro-immune+balance+in+neuropathic+pain%3A+involvement+of+inflammatory+immune+cells%2C+immune-like+glial+cells+and+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">The neuro-immune balance in neuropathic pain: involvement of inflammatory immune cells, immune-like glial cells and cytokines.</a> J. Neuroimmunol. 229, 26-50 (2010).</li>
</ol>

동물 실험은 뉴 사우스 웨일즈, 오스트 레일 리아 대학의 동물 관리 및 윤리위원회의 승인을, 그리고 비탄의 연구를위한 국제 교류 협회에서 발행한 지침을 따라했다.

CCI는 만성 neuropathic 고통의 널리 사용되는 말초 신경 손상 모델입니다. 그것은 수행 비교적 간단하고, 부상 후 최소 한 달 동안 강력하고 안정적​​인 통증 과민성을 생산하고 있습니다. CCI 따라 쥐가 부상 hindpaw (발가락이 함께 개최되어 발바닥 - 근육이 수축과 앞발로 땅을 차다는 everted)뿐만 아니라, 흔들림 지키고 자발적인 고통 9 존재를 암시 부상 hindpaw으로 핥아 반복 비정상적인 자세를 나타냅니다. 감각 장애 외에도 여러 조사관은 CCI와 같은 교란 사회적 상호 작용, 수면 방해, 우울증 같은과 행동 10-13 불안과 같은과 같은 행동 장애를, 끝,을 보였습니다하지만이 같은 행동 장애를 찾기 위해 실패에 대한 대비입니다 다른 14,15 의해. CCI 따라서 일반적으로 pathophysiology 및 neuropathic 고통의 치료를위한 잠재적인 치료 대리인을 모두 조사하는 데 사용됩니다. <p class="jove_co...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 장비의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 삼가의 크롬을 함유하는 배 </td><td> Ethicon </td><td> G-211 </td><td> 4-0 두께 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> Delvet Pty. (주), 세븐 힐즈, 뉴사우스 웨일즈 (NSW) </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Mersilk </td><td> Ethicon </td><td> W-580 </td><td> 5-0 두께 </td></tr><tr><td> Autoclip </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 427,631 </td><td> 9mm 스테인리스 </td></tr><tr><td> Riodine </td><td> 오리온 </td><td> R1000802F </td><td> 1퍼센트 W / V 요오드 </td></tr><tr><td> 열 발바닥 진통제 악기 </td><td> 우고 Basile </td><td> 37,370 </td><td></td></tr><tr><td> 동적 발바닥 aesthesiometer </td><td> 우고 바질전자 </td><td> 37,400 </td><td></td></tr></tbody></table>

좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축

Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats

만성 neuropathic 고통은 중앙 또는 주변 신경계 손상으로 인한, 인구 1,2의 7~18% 영향을 만연하고 쇠약 조건이다. 증상은 자연 (같은 간지, 굽기, 전기 충격) 고통, dysaesthesia, paraesthesia, allodynia (통증이 보통이 아닌 고통스러운 자극으로 인한) 및 hyperalgesia합니다 (통증 자극에 대한 향상된 응답)가 있습니다. 감각 증상은 불면증과 우울증과 같은 행동 장애와 공동 병적입니다. 만성 neuropathic 고통을 공부하고 말초 신경 손상을 흉내낸 여러 동물 모델이 개발되었고, 가장 널리 사용되는 중 하나는 베넷과 샤오의 (1988) 일방적 좌골 신경 만성 수축 상해 (CCI) 3 (그림 1)입니다. 여기 CCI 및 테스트 고통 과민성을 수행하기위한 방법을 제시한다. CCI는 다음과 같이함으로써 노출된 한쪽에서 좌골 신경으로 마취하에 수행됩니다친척 절개하고 gluteus superficialis와 팔뚝 femoris 근육 사이의 결합 조직을 통해 절단. 네 삼가의 크롬을 함유하는 제품 내장 ligatures 그냥 윗니와 아랫니가 맞물리다 위해, 1 밀리미터 간격으로 좌골 신경 주위에 느슨하게 연결되어 있지만 epineural 혈류를 체포되지 않습니다. 상처가 피부의 근육 및 스테이플의 봉합으로 닫힙니다. 동물 그때 통증 과민성 시험이 시작되기 전에 24 시간 동안 수술에서 회복하기 위해 허용됩니다. 행동 테스트를 위해 쥐나는 테스트 장치에 배치하고 테스트 절차에 길들 수있게됩니다. 테스트 영역은 좌골 신경 분포에 속하는 hindpaw의 중반 발바닥 표면 (그림 2)이다. 기계 인출 한도는 기계 전자 동적 발바닥 폰 프라이 aesthesiometer 또는 수동 폰 프라이 머리카락 4를 사용하여 부상 및 손상되지 않은 hindpaws을 모두 자극에 의해 평가된다. 기계 인출 한도는 진력 최대 압력(g)를 그것의 발자국이 탈퇴를 실행시킵니다. 첫째 학스다 외 (1988)에 기술된 열 인출 지연의 측정은 hindpaw는 발바닥 진통제 측정기 5,6를 사용하여 투명한 유리 표면을 통해 복사열의 광선에 노출됩니다. 열 자극에 대한 탈퇴 대기 시간은 부상과 손상되지 않은 hindpaws 모두에서 발자국 철회를위한 시간으로 기록됩니다. 이어 CCI, 부상 한것 땜에 기계적 인출 한도뿐만 아니라 열 인출 지연 시간 기준 측정과 손상되지 않은 앞발로 땅을 차다 (그림 3)에 비해 모두 크게 줄일 수 있습니다. 통증 과민성 테스트와 함께 말초 신경 손상의 CCI 모델은 만성 neuropathic 고통을 수정하는 잠재적인 치료 대리인의 효과를 조사하기위한 모델 시스템을 제공합니다. 저희 연구실에서는 pathogenesis에 신경 면역 상호 작용의 역할을 조사하기 위해 hindpaws의 열 및 기계적 감도와 함께 CCI를 활용neuropathic 고통과 치료.

수술의 단순하고 강력한 행동 결과로 인해 좌골 신경의 만성적인 수축이 neuropathic 고통의 사전 저명한 동물 모델 중 하나입니다. 수술에 따라 24 시간 내에 통증 과민성 설립되고 양적 폰 프라이 aesthesiometer (기계적 시험)과 발바닥 진통제 측정기 (온도 시험)를 사용하여 측정할 수있다.

중추 또는 말초 신경계의 손상으로 발생하는 만성 신경병성 통증은 ...의 7-18%에 영향을 미치는 흔하고 쇠약하게 만드는 질환입니다.

이 절차의 전반적인 목표는 신경병증성 통증의 일반적인 설치류 모델인 좌골 신경의 만성 수축 손상을 유발하고, 그 결과로 나타나는 통증 행동을 정량적으로 측정하는 것입니다. 이를 위해 먼저 허벅지 중간 높이에서 노출된 좌골 신경 주위에 4개의 크롬 거트 결찰사를 배치하여 좌골 신경에 수축 손상을 유발합니다. 다음으로, von Frey 분석기를 사용하여 기계적 자극에 대한 발Withdrawal 역치를 정량적으로 측정하고, plantar analgesia meter를 사용하여 열 자극에 대한 발Withdrawal 잠복기를 측정함으로써 원하는 시점에서 뒷발의 통증 행동을 모니터링합니다.최종적으로 기계적 및 열적 자극에 대한 유발 회피 반응의 측정을 통해 기계적 및 열적 통증의 존재와 손상된 뒷발의 과민반응을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다. bene와 Z에 의해 처음 개발된 이 말초신경 손상 방법은 신경병성 통증이 생성되는 말초 및 중추 기전은 무엇인가와 같은 만성 통증 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 모델은 통증 과민반응을 감소시키기 위한 새로운 전략을 조사하는 기초를 제공하므로, 이 기술의 영향은 신경병성 통증의 치료로 확장됩니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 연구자는 cmic 장gut 봉합사를 정지 신경 주위에 배치하고, 과도하지 않으면서도 충분한 신경 손상을 유발할 수 있는 적절한 조임 강도를 조절하는 데 어려움을 겪을 수 있습니다. 이 절차를 시작하려면, 수술 작업 표면을 70% ethanol로 소독하고 이전에 고압 멸균 처리한 멸균 기구, 거즈, 스테이플러 및 면봉을 준비하십시오. 다음으로, 5% ISO fluorine을 사용하여 유도 챔버에서 쥐를 마취합니다.수술 중에 맞춤 제작된 페이스 마스크를 통해 2% ISO 플루오린을 투여합니다. 그 후, 쥐의 왼쪽 뒷다리를 제모하고, 37 °C로 설정된 온도 조절 가열 패드 위에 동물을 놓습니다. 눈에는 윤활성 안연고를 도포합니다.그 다음, 크롬 처리된 캣gut 봉합사를 약 3cm 길이의 작은 조각들로 잘라 멸균 식염수에 담가 준비합니다. 이어서, 면도한 부위를 알코올과 요오드 용액으로 번갈아 세 번 도포하여 소독합니다. 동물을 흉부가 바닥에 닿게 눕힌 상태에서 왼쪽 뒷다리를 들어 올리고, 발에 마스킹 테이프를 사용하여 대퇴골이 척추와 90도 각도가 되도록 고정합니다.그 다음 대퇴골에서 약 3~4mm 아래쪽 피부를 절개합니다. 결합 조직을 절단하여 절개 부위 주변의 피부와 근육을 분리합니다. 뭉툭한 가위를 사용하여 gluteus superficialis와 biceps fems 근육 사이의 결합 조직을 절단합니다.다음으로, 리트랙터를 사용하여 두 근육 사이의 간격을 넓혀 좌골신경이 명확하게 보이도록 한 뒤, 포셉과 미세 가위를 사용하여 주변 결합 조직으로부터 좌골신경의 약 10 millimeters를 조심스럽게 분리합니다. 각 결찰 시, 좌골신경의 삼분지점 근위부에 첫 번째 결찰사를 묶습니다. 우선 느슨하게 한 바퀴 루프를 만듭니다.그런 다음 루프에 가까운 양 끝단을 잡고, 루프가 신경을 겨우 조이며 결찰사가 신경을 따라 미끄러지지 않을 때까지 당깁니다. 루프를 적절한 위치에 유지한 상태에서 첫 번째 루프 위에 두 번째 루프를 얹어 매듭을 완성합니다. 다음으로 결찰사의 여분 끝단을 자르되, 신경의 수축 범위는 약 1mm 정도로 최소화해야 합니다.나머지 3개의 결찰에 대해서도 동일한 단계를 반복하되, 각각의 추가 결찰을 이전 결찰보다 1mm 더 근위측에 묶습니다. 수술 종료 시점에 최소한의 압박 상태를 유지하며, 봉합사로 근육층을 폐쇄하고 스테이플러로 피부를 고정합니다. 그다음, 요오드 용액을 사용하여 상처 부위를 소독합니다.마취 회복 기간 동안 동물을 면밀히 관찰하고, 평평한 종이 깔개가 깔린 별도의 케이지에서 회복하도록 합니다. 실험을 시작하기 전, 며칠 동안 매일 동물을 핸들링합니다.그런 다음 행동 테스트 전에 쥐를 우리에 적응시킵니다. 테스트 환경은 정온과 정습 상태로 조용하게 잘 제어되어야 하며, 각 테스트 세션은 하루 중 비슷한 시간에 수행해야 합니다. 테스트 당일 기계적 회피 역치를 연구하려면, 실험 시작 15~30분 전에 쥐를 격자형 바닥의 고정 케이지에 넣습니다. dynamic plantar von fray 장치를 사용하여 필라멘트가 달린 터치 자극기 유닛을 뒷발의 중앙 발바닥 표면 바로 아래에 배치하고 시작 키를 누릅니다.필라멘트를 들어 올려 뒷발의 발바닥 표면에 점진적으로 증가하는 힘으로 기계적 자극을 줍니다. 다음으로, 손상된 뒷발과 손상되지 않은 뒷발 모두에서 기계적 회피 역치를 기록합니다. 이 장치는 회피 반응 시 가해진 최대 힘을 자동으로 기록하고 표시합니다.기계적 자극을 약 5분 간격으로 3회 반복하고, 대조군인 손상되지 않은 뒷발을 균형 잡힌 순서(counterbalanced order)로 테스트한 다음, 발 withdrawal 임계값의 평균을 계산합니다. 테스트 당일 열 withdrawal 잠복기를 연구하려면, 실험 15~30분 전에 쥐를 유리 바닥 테스트 케이지에 넣습니다. thermal planter analgesia 장비를 사용하여 적외선 광원을 뒷발 발바닥 중앙 표면 바로 아래에 배치하고 시작 키를 누릅니다.이를 통해 투명한 유리 표면을 통해 뒷발의 발바닥 표면을 복사열 빔에 노출시킵니다. 그런 다음 손상된 뒷발과 손상되지 않은 뒷발 모두에서 회피 잠복기를 기록합니다. 이 장치는 열 자극 시작부터 열원으로부터 발을 떼는 때까지 걸린 시간을 자동으로 기록합니다.손상된 뒷발과 손상되지 않은 뒷발을 균형 잡힌 순서로 테스트하며, 자극 사이에 약 5분의 간격을 두고 열 자극을 최소 3회 반복한 후 발 withdrawal 잠복기의 평균값을 계산합니다. 여기서는 좌골 신경의 만성 압박 전부터 압박 후 12일까지 Wistar 랫드의 손상된 발과 손상되지 않은 발 모두에서 기계적 withdrawal 임계값을 보여줍니다. 손상되지 않은 반대측 뒷발과 비교했을 때, 손상된 동측 뒷발에서 기계적 자극에 대한 발 withdrawal 임계값이 유의미하게 감소합니다. 여기서는 좌골 신경의 만성 압박 전부터 압박 후 12일까지 손상된 발과 손상되지 않은 발 모두에서의 열 withdrawal 잠복기를 보여줍니다.마찬가지로, 손상된 동측 뒷발의 열적 회피 잠복기는 손상되지 않은 대측 뒷발과 비교하여 유의하게 감소합니다. CCI 수술에 숙달되면 동물당 최소 20분 이내에 적절히 수행할 수 있으며, 이는 뒷발의 장기적인 통증 과민반응을 유발합니다. 이 절차를 시도할 때, 결찰사를 느슨하게 묶는 것이 중요하다는 점을 기억해야 합니다. 부종 발생 후 결찰사 하단에서 자가 압박이 일어나면서 수축이 발생하기 때문입니다.이 말초 신경 손상 기법과 통증 과민성 P파 측정법은 신경성 통증 분야의 연구자들이 신경 손상으로 인한 만성 통증의 기저 기전을 탐구할 수 있도록 제공됩니다.

chronic-constriction-sciatic-nerve-pain-hypersensitivity-testing

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

용서해주 신경 부상 동물 모델은 나머지 sural 신경은 그대로두고, tibial 및 일반 peroneal 신경 가지를 lesioning하여 좌골 신경의 부분 denervation 다음과 주변 neuropathic 고통의 마우스 모델로 여기에 설명되어 있습니다. 기계 allodynia 인한 행동 수정은 폰 프라이 필라멘트에 의해 계량입니다.

마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

우리는 쥐의 척수 손상의 급성 또는 만성 기간을위한 두 촉각 감각 테스트 방법을 설명합니다. 이러한 확인 절차는 allodynia 같은 감각의 개발과 유지 보수를 검색할 수 있습니다.

쥐의 척수를 다친 후에 급성 및 만성 촉각 감각 테스트

신경 병증 성 통증은 체성 시스템에 영향을 미치는 장애 또는 질병의 결과이다. 생쥐의 신경 병증 성 통증의 "팔목 모델은"좌골 신경의 주요 지점 주위에 폴리에틸렌 커프스의 주입으로 구성되어 있습니다. 기계적 이질통은 본 프레이 필라멘트를 사용하여 테스트된다.

마우스의 신경 병증 성 통증의 좌골 신경의 바지를 접 모델

여기에 제공된 프로토콜은 만성 허혈 후 통증(CPIP)의 동물 모델을 확립하는 단계를 상세히 설명합니다. 이것은 인간 복잡한 지역 고통 증후군 유형-I를 모방하는 잘 인식된 모형입니다. 기계적 및 열적 과민성은 CPIP 래트 모델에서 관찰된 캡사이신 유도 노시펜스 거동뿐만 아니라 추가로 평가된다.

쥐에 있는 복잡한 지역 고통 증후군 타입-I를 위한 만성 포스트 허혈 고통 모형

요통의 예방 및 관리를 위한 새로운 치료적 개입을 개발하기 위해 동물 모델은 번역 관점에서 이러한 치료법의 메커니즘과 효과를 조사해야 합니다. 현재 프로토콜은 쥐의 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 방법인 BMS 테스트를 설명합니다.

만성 요통의 기계론적 조사를 위한 쥐의 등 기계적 민감도 평가

부분 좌골 신경 결찰술은 열 및 기계적 자극에 대한 과장된 반응을 특징으로 하는 오래 지속되는 만성 신경병성 통증을 유발합니다. 이 신경병성 통증 마우스 모델은 일반적으로 통증 관리를 위한 혁신적인 치료법을 연구하는 데 사용됩니다. 이 기사에서는 표준화 및 재현성을 개선하기 위한 수술 절차에 대해 자세히 설명합니다.

부분 좌골 신경 결찰: 새로운 치료법의 항통각수용 효과를 연구하기 위한 만성 신경병성 통증의 마우스 모델

쥐의 좌골 신경통을 유도하기 위해 만성 수축 손상 모델에서 Fu의 피하 침을 사용하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

좌골 신경통에 대한 Fu의 피하 침의 효능: 만성 수축 손상 쥐 모델의 행동 및 전기 생리학적 변화

생쥐에서 원위 안와하부 신경의 만성 수축 손상은 촉각 자극에 대한 반응으로 자발적 행동(얼굴 손질 활동 증가)과 통각 행동(von Frey 모발 자극에 대한 과민성)의 변화를 유발하며, 이는 지속적인 통증 및 이질증의 징후이며 삼차신경병증성 통증의 모델 역할을 합니다.

삼차신경병증성 통증을 연구하기 위한 마우스의 원위 안와하부 신경(DIoN-CCI)의 만성 수축 손상

여기서는 급성, 마취, 생체 내 쥐 실험에서 두 가지 유형의 척수 전기생리학적 측정을 사용하여 신경섬유 아형의 활동을 구별할 수 있는 두 가지 유형의 측정법인 국소장 전위 및 광역 동적 범위 단일 뉴런 기록을 평가하는 방법을 제시합니다.

마취된 쥐에서 말초 통증 차단을 평가하는 전기생리학적 방법

미국에서 약 3~8,000,000명은 간질 성 방광염 / 방광 통증 증후군 (IC / BPS), 골반 통증에 의해 부분적으로 특징 쇠약 상태에서 고통. 조건 신경계 기여를 연구하기 위해, 방광 통증의 생리 학적 모델은 생쥐와 쥐에 사용됩니다.

쥐의 방광 통증 모델로 방광 팽창 유발 내장 운동 응답

학습하세요 쥐의 좌골 신경 만성 수축 수술을 통해 신경병증성 통증을 유도하고 기계적·열 자극에 대한 통각 과민 반응을 정량적으로 측정하는 방법입니다. 이 기법은 만성 통증의 주변 및 중추 기전을 연구하는 데 활용됩니다.

좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축

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