Name: 오가노이드 유래 상피 단층: 장 장벽 기능을 위한 임상적으로 관련된 시험관내 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 40 s
Description: 배우세요 장 오가노이드 유래 상피 단층을 이용한 장 장벽 기능 연구 방법을. TEER 측정 및 투과성 분석으로 환자 특이적 약물 반응을 평가할 수 있는 생리학적 모델을 구축합니다.

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이 작업은 Topsector Life Sciences & Health - Topconsortium voor Kennis en Innovatie Health~Holland (LSH-TKI) 공공 - 민간 파트너십 (PPP) 프로젝트 번호 LSHM16021 Organoids와 함께 네덜란드 LSH 부문의 수당을 Hubrecht Organoid Technology (HUB) 및 HUB 내부 자금 조달 질병 모델링 및 독성학 부서에 대한 독성학 모델링을위한 새로운 도구로 지원합니다. 우리는 Sabine Middendorp (소아 위장병학, Wilhelmina Children 's Hospital, UMC, Utrecht)와 Hugo R. de Jonge와 Marcel J.C. Bijvelds (위장병 및 간학과, Erasmus MC, Rotterdam)의 실험실에 멤브레인 삽입물에 단층을 설정하는 초기 기술 지원을 제공 한 것에 감사드립니다.

<ol><li>Haegebarth, A., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signaling%2C+lgr5%2C+and+stem+cells+in+the+intestine+and+skin%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Wnt signaling, lgr5, and stem cells in the intestine and skin.</a> The American Journal of Pathology. 174 (3), 715-721 (2009).</li>
<li>Schoultz, I., Keita, ÅV. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intestinal+barrier+and+current+techniques+for+the+assessment+of+gut+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">The intestinal barrier and current techniques for the assessment of gut permeability.</a> Cells. 9 (8), 1909(2020).</li>
<li>Martínez-Maqueda, D., Miralles, B., Recio, I., et al. HT29 Cell Line. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMart%C3%ADnez-Maqueda%2C+D+%22The+Impact+of+Food+Bio-Actives+on+Gut+Health%3A+In+Vitro+and+Ex+Vivo+Models%22">The Impact of Food Bio-Actives on Gut Health: In Vitro and Ex Vivo Models</a>. Verhoeckx, K., et al. , Springer. Cham (CH). 113-124 (2015).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon%2C+adenoma%2C+adenocarcinoma%2C+and+Barrett%27s+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li>
<li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+of+single+Lgr5%28%2B%29+liver+stem+cells+induced+by+Wnt-driven+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion of single Lgr5(+) liver stem cells induced by Wnt-driven regeneration.</a> Nature. 11 (2), 179-194 (2013).</li>
<li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+expanding+human+airway+organoids+for+disease+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22The+EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Long-term expanding human airway organoids for disease modeling.</a> The EMBO Journal. 38 (4), 1-20 (2019).</li>
<li>Karthaus, W. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+multipotent+luminal+progenitor+cells+in+human+prostate+organoid+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of multipotent luminal progenitor cells in human prostate organoid cultures.</a> Cell. 159 (1), 163-175 (2014).</li>
<li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li>
<li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+living+biobank+of+breast+cancer+organoids+captures+disease+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A living biobank of breast cancer organoids captures disease heterogeneity.</a> Cell. 172 (1-2), 373-386 (2018).</li>
<li>Vlachogiannis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+model+treatment+response+of+metastatic+gastrointestinal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers.</a> Science. 359 (6378), 920-926 (2018).</li>
<li>Van De Wetering, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+derivation+of+a+living+organoid+biobank+of+colorectal+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients.</a> Cell. 161 (4), 933-945 (2015).</li>
<li>Driehuis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+organoids+recapitulate+disease+and+allow+personalized+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer organoids recapitulate disease and allow personalized drug screening.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (52), 26580-26590 (2019).</li>
<li>Tiriac, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+profiling+identifies+common+responders+to+chemotherapy+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Organoid profiling identifies common responders to chemotherapy in pancreatic cancer.</a> Cancer Discovery. 8 (9), 1112-1129 (2018).</li>
<li>d'Aldebert, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+colon+organoids+from+inflammatory+bowel+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Characterization of human colon organoids from inflammatory bowel disease patients.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 363(2020).</li>
<li>Dotti, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+epithelial+stem+cell+compartment+could+contribute+to+permanent+changes+in+the+mucosa+of+patients+with+ulcerative+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Alterations in the epithelial stem cell compartment could contribute to permanent changes in the mucosa of patients with ulcerative colitis.</a> Gut. 66 (12), 2069-2079 (2017).</li>
<li>VanDussen, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+enhanced+human+gastrointestinal+epithelial+culture+system+to+facilitate+patient-based+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Development of an enhanced human gastrointestinal epithelial culture system to facilitate patient-based assays.</a> Gut. 64 (6), 911-920 (2015).</li>
<li>Noel, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primary+human+macrophage-enteroid+co-culture+model+to+investigate+mucosal+gut+physiology+and+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A primary human macrophage-enteroid co-culture model to investigate mucosal gut physiology and host-pathogen interactions.</a> Scientific Reports. 7, 45270(2017).</li>
<li>Bartfeld, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+of+human+gastric+epithelial+stem+cells+and+their+responses+to+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion of human gastric epithelial stem cells and their responses to bacterial infection.</a> Gastroenterology. 148 (1), 126-136 (2015).</li>
<li>van Es, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signalling+induces+maturation+of+Paneth+cells+in+intestinal+crypts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Wnt signalling induces maturation of Paneth cells in intestinal crypts.</a> Nature Cell Biology. 7 (4), 381-386 (2005).</li>
<li>van Es, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dll1+marks+early+secretory+progenitors+in+gut+crypts+that+can+revert+to+stem+cells+upon+tissue+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Dll1 marks early secretory progenitors in gut crypts that can revert to stem cells upon tissue damage.</a> Nature Cell Biology. 14 (10), 1099-1104 (2012).</li>
<li>de Lau, W. B. M., Snel, B., Clevers, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+R-spondin+protein+family%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">The R-spondin protein family.</a> Genome Biology. 13 (3), 1-10 (2012).</li>
<li>Basak, O., Beumer, J., Wiebrands, K., Seno, H., van Oudenaarden, A., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+quiescence+of+Lgr5%2B+stem+cells+in+intestinal+organoids+enables+differentiation+of+hormone-producing+enteroendocrine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Induced quiescence of Lgr5+ stem cells in intestinal organoids enables differentiation of hormone-producing enteroendocrine cells.</a> Cell Stem Cell. 20 (2), 177-190 (2017).</li>
<li>Beumer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteroendocrine+cells+switch+hormone+expression+along+the+crypt-to-villus+BMP+signalling+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Enteroendocrine cells switch hormone expression along the crypt-to-villus BMP signalling gradient.</a> Nature Cell Biology. 20 (8), 909-916 (2018).</li>
<li>Yin, X., Farin, H. F., van Es, J. H., Clevers, H., Langer, R., Karp, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Niche-independent+high-purity+cultures+of+Lgr5%2B+intestinal+stem+cells+and+their+progeny%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Niche-independent high-purity cultures of Lgr5+ intestinal stem cells and their progeny.</a> Nature Methods. 11 (1), 106-112 (2014).</li>
<li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forskolin-induced+swelling+in+intestinal+organoids%3A+An+in+vitro+assay+for+assessing+drug+response+in+cystic+fibrosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Forskolin-induced swelling in intestinal organoids: An in vitro assay for assessing drug response in cystic fibrosis patients.</a> Journal of Visualized Experiments. (120), (2017).</li>
<li>Miao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+surrogate+Wnts+support+organoid+growth+and+deconvolute+Frizzled+pleiotropy+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Next-generation surrogate Wnts support organoid growth and deconvolute Frizzled pleiotropy in vivo.</a> Cell Stem Cell. 27 (5), 840-851 (2020).</li>
<li>Srinivasan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TEER+measurement+techniques+for+in+vitro+barrier+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory+Automation%22%5BJournal%5D)">TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems.</a> Journal of Laboratory Automation. 20 (2), 107-126 (2015).</li>
<li>Blume, L. -F., Denker, M., Gieseler, F., Kunze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+corrected+transepithelial+electrical+resistance+%28TEER%29+measurement+to+quantify+rapid+changes+in+paracellular+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Die+Pharmazie%22%5BJournal%5D)">Temperature corrected transepithelial electrical resistance (TEER) measurement to quantify rapid changes in paracellular permeability.</a> Die Pharmazie. 65 (1), 19-24 (2010).</li>
<li>Lea, T. Caco-2 cell line. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLea%2C+T+%22The+Impact+of+Food+Bio-Actives+on+Gut+Health%3A+In+Vitro+and+Ex+Vivo+Models%22">The Impact of Food Bio-Actives on Gut Health: In Vitro and Ex Vivo Models</a>. Verhoeckx, K., et al. , Springer. Cham (CH). 103-111 (2015).</li>
<li>Heo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+Cryptosporidium+infection+in+human+small+intestinal+and+lung+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Modelling Cryptosporidium infection in human small intestinal and lung organoids.</a> Nature Microbiology. 3 (7), 814-823 (2018).</li>
<li>Watanabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 25 (6), 681-686 (2007).</li>
</ol>

저자는 이해 상충이 없다고 선언합니다.

이 프로토콜은 장 오가노이드의 일반적인 조작 및 유지뿐만 아니라 이러한 오가노이드로부터 유래된 상피 단일층의 준비 및 가능한 응용을 기술한다. 현재까지, 단층은 십이지장, 장폐색 및 정상 뿐만 아니라 이전에 그리고 활발하게 염증을 일으킨 장 조직으로부터 유래된 결장 오가노이드의 상이한 영역으로부터 성공적으로 제조되었다(공개되지 않은 데이터). 환자 유래 오가노이드 단일층의 적용은 다양한 약물 치료에 대한 환자 특이적 반응의 연구뿐만 아니라 질병 및 환자 특이적 방식으로 장벽 기능의 연구를 용이하게 한다. 세포주는 장내 장세포 및 잔 유사 세포를 포함하는 분화되고 편광된 단층을 형성할 수 있지만, 이들 세포주에서 많은 상이한 효소 및 운반체가 비정상적으로 발현되어 복잡성 및 생리학적 관련성이 감소된다3,30. 오가노이드 배양은 세포 배양보다 기술적으로 더 까다롭고 힘들다. 그러나, 오가노이드는 생체내 상황을 더 대표하지만, 세...

장 상피는 장의 발광 함량과 기저 조직 사이의 물리적 장벽 역할을합니다. 이 장벽은 인접한 세포 사이에 강한 세포 간 연결을 확립하는 단단한 접합에 의해 연결되는 주로 흡수성 장세포의 단일 상피층을 포함한다. 이 세포들은 장의 정점 (루멘)과 기저변을 분리하는 편광 상피 내막을 형성하면서 동시에 소화 된 영양소와 대사 산물의 부세포 수송을 조절합니다. 장세포 이외에, 잔, 파네스 및 장내분비 세포와 같은 다른 중요한 상피 세포도 점액, 항균 펩티드 및 호르몬을 각각 생산함으로써 장 항상성에 기여한다. 장 상피는 류신이 풍부한 반복 함유 G-단백질 결합 수용체 5 양성 (LGR5+) 줄기 세포를 장내 크립트의 바닥에 나누어 지속적으로 보충하여 위쪽으로 이동하여 다른 세포 유형으로 분화되는 트랜스 증폭 (TA) 세포를 생산합니다1. 식품 알레르겐, 의약 화합물 및 미생물 병원균에 대한 노출과 같은 유전 적 및 환경 적 요인에 의한 장 상피 항상성의 붕괴는 장 장벽 기능의 중단으로 이어집니다. 이러한 상태는 염증성 장 질환 (IBD), 체강 질환 및 약물 유발 GI 독성2를 포함한 여러 장 질환을 유발합니다.
장 상피에 대한 연구는 막 삽입물, 장기 온 칩 시스템, Ussing 챔버 및 장 링과 같은 여러 시험관 내 플랫폼 시스템을 사용하여 수행됩니다. 이들 플랫폼은 형질전환된 세포주 또는 일차 조직을 모델로서 사용하여 막의 정점 및 기저측 양쪽 모두에 접근할 수 있는 편광된 상피 단층을 확립하는데 적합하다. 대장(adeno)암종 세포주인 Caco-2, T84 및 HT-29와 같은 형질전환 세포주는 어느 정도 편광된 장내세포 또는 점액 생성 세포로 분화할 수 있지만, 이들은 여러 세포 유형이 누락되고 다양한 수용체 및 운반체가 비정상적으로 발현됨에 따라 생체내 상피를 대표하지 않는다3 . 또한, 세포주는 단일 공여체로부터 유래되기 때문에, 이들은 환자간 이질성을 나타내지 않으며 감소된 복잡성 및 생리학적 관련성을 겪는다. Ussing 챔버 및 장 고리로 사용되는 일차 조직은 생체 내 상황을 더 대표하지만, 제한된 가용성, 단기 생존력 및 확장성 부족으로 인해 고처리량 (HT) 연구를위한 매개체로 부적합합니다.
오가노이드는 장, 신장, 간, 췌장 및 폐와 같은 다른 기관으로부터 확립된 시험관내 상피 배양물이다. 그들은 장기적이고 안정적인 확장성뿐만 아니라 유전 적 및 표현형 안정성을 갖는 것으로 입증되었으므로 외부 자극에 충실한 반응을 보이는 원래 기관의 상피의 대표적인 생물학적 미니어처입니다 4,5,6,7,8,9. 오가노이드는 절제되거나 생검된 정상, 병, 염증 또는 암성 조직으로부터 효율적으로 확립되며, 이질적인 환자 특이적 반응10,11,12,13,14,15,16을 나타낸다. 이 논문은 오가노이드 문화에서 유래 된 장 상피 단층을 확립하는 방법을 보여줍니다. 단층은 소장뿐만 아니라 결장 및 직장 오가노이드 문화에서 성공적으로 확립되었습니다. 이 모델은 상피 세포가 약물에 대한 수송 및 투과성뿐만 아니라 상피에 대한 독성 학적 영향을 연구 할 수있는 기회를 창출합니다. 또한이 모델은 면역 세포 및 박테리아와의 공동 배양을 통해 장 상피와의 상호 작용을 연구 할 수 있습니다17,18,19. 또한,이 모델은 환자 특정 방식으로 치료법에 대한 반응을 연구하고 상피 장벽 중심의 치료제의 다음 물결을 찾기 위해 스크리닝 노력을 시작하는 데 사용될 수 있습니다. 이러한 접근법은 클리닉으로 확장 될 수 있으며 개인화 된 치료를위한 길을 닦을 수 있습니다.
이 프로토콜의 상피 단층은 인간 정상 장 오가노이드로부터 제조되지만, 프로토콜은 다른 오가노이드 모델에 적용되고 최적화될 수 있다. 상피 오가노이드 단층은 줄기 세포 증식을 지원하고 장내 크립트 세포 조성물을 나타내기 위해 Wnt를 함유하는 장내 오가노이드 확장 배지에서 배양된다. 장내 오가노이드는 Wnt, Notch 및 표피 성장 인자 (EGF) 경로를 조절함으로써 장내분비 세포, 파네스, 잔 및 장내분비 세포와 같은 상이한 장 상피 운명을 갖도록 농축될 수 있다. 여기서, 확장 배지에서 단층의 확립 후에, 이들은 이전에 기술된 바와 같이 더 분화된 장 상피 세포,20,21,22,23,24,25로 구동된다. 스크리닝 목적을 위해, 관심있는 화합물의 작용 모드, 그의 표적 세포, 및 실험 조건에 따라, 단층은 관련 기능적 판독을 갖는 화합물의 효과를 측정하기 위해 선택된 세포 조성을 향해 구동될 수 있다.

<table><tbody><tr><td>100% 에탄올</td><td>Fisher Emergo</td><td>10644795</td><td></td></tr><tr><td>1250, 300 및 20 &micro; L 저잔류 필터 팁</td><td>Greiner bio-one</td><td>732-1432 / 732-1434 / 732-2383</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 원뿔형 튜브</td><td>Greiner bio-one</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>24웰 세포 배양 플레이트</td><td>Greiner bio-one</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>24웰 HTS Fluoroblok 트랜스웰 플레이트(광밀)</td><td>Corning</td><td>351156</td><td></td></tr><tr><td>24웰 HTS 트랜스웰 플레이트(표 1)</td><td>Corning</td><td>3378</td><td></td></tr><tr><td>Transwell 인서트가 있는 24웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>3470</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; m cell strainer</td><td>PluriSelect</td><td>43-50040-01</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 코니컬 튜브</td><td>Greiner bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>6-well 세포 배양 플레이트</td><td>Greiner bio-one</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>96-well black plate transparent bottom</td><td>Greiner bio-one</td><td>655090</td><td></td></tr><tr><td>96-well fast thermal cycling plates</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>96웰 HTS 플루오로블록 트랜스웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>351162</td><td></td></tr><tr><td>96웰 HTS 트랜스웰 플레이트(표 1)</td><td>Corning</td><td>7369</td><td></td></tr><tr><td>96웰 투명 배양 플레이트</td><td>Greiner bio-one</td><td>655180</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Bio-Techne Ltd</td><td>2939</td><td></td></tr><tr><td>Accutase 세포 해리 시약</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>A11105-01</td><td>Cell 해리 시약 2</td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F-12</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>17504001</td><td></td></tr>세포 <tr><td>배양 현미경 (광/광학 현미경)</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CellTiter-Glo</td><td>Promega</td><td>G9683</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터</td><td>PHCBI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAPT</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5942</td><td></td></tr><tr><td>DEPC는 H2O</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>750024를</td> Ca2+ <td></td></tr><tr><td>및 Mg2+</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>14040091</td><td></td></tr><tr><td>로 처리했습니다.DPBS, 분말, 칼슘 없음, 마그네슘 없음</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>21600069</td><td></td></tr><tr><td>EnzChek Lysozyme Assay Kit</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>E22013</td><td></td></tr><tr><td>EVOM2 meter with STX electrode</td><td>WTI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gastrin</td><td>Bio-Techne Ltd</td><td>3006</td><td></td></tr><tr><td>유리 피펫</td><td>Volac</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Life Technologies 유럽 BV</td><td>35050038</td><td></td></tr><tr><td>hEGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Life Technologies 유럽 BV</td><td>15630056</td><td></td></tr><tr><td>Human Noggin</td><td>Peprotech</td><td>120-10C</td><td></td></tr><tr><td>Human Rspo3</td><td>Bio-Techne Ltd</td><td>3500-RS/CF</td><td></td></tr><tr><td>IWP-2</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-105-335</td><td></td></tr><tr><td>Ki67 1차 항체</td><td>Sanbio</td><td>BSH-7302-100</td><td></td></tr><tr><td>Ki67 2차 항체</td><td>Agilent</td><td>K400111-2</td><td></td></tr><tr><td>Kova International Glasstic Slide with</td><td>Counting grids Fisher Emergo</td><td>10298483</td><td></td></tr><tr><td>Laminar flow hood</td><td>Thermo scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lucifer Yellow CH dilithium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L0259</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel, Growth Factor Reduced ( GFR)</td><td>Corning</td><td>356231</td>세포<td>외 기질(ECM)</td></tr><tr><td>MicroAmp Fast 8-Tube Strip, 0.1 mL</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>4358293</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optical 8-Cap Strips</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>4323032</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes</td><td>Eppendorf</td><td>0030 120 086</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes (1000, 200, and 20 &micro; L)</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MUC2 1차 항체</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-15334</td><td></td></tr><tr><td>MUC2 2차 항체</td><td>VWR</td><td>VWRKS/DPVR-HRP</td><td></td></tr><tr><td>다채널 피펫 (200 &micro; L)</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>N-아세틸시스테인</td><td>시그마-알드리치</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>NGS Wnt</td><td>U-단백질 익스프레스</td><td>N001-0.5mg</td><td></td></tr><tr><td>니코틴아미드</td><td>시그마-알드리치</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>올리고뉴클레오티드 ALPI1/포워드</td><td>맞춤형</td><td>GGAGTTATCCTGCTCCCCAC</td><td></td></tr><tr><td>올리고뉴클레오티드 ALPI1/리버스</td><td>맞춤형</td><td>CTAGGAGGTGAAGGTCCAACG</td><td></td></tr><tr><td>올리고뉴클레오티드 LGR5/포워드</td><td></td><td>맞춤형 ACACGTACCCACAGAAGCTC</td><td></td></tr><tr><td>올리고뉴클레오티드 LGR5/리버스</td><td>맞춤형</td><td>GGAATGCAGGCCACTGAAAC</td><td></td></tr><tr><td>올리고뉴클레오티드 MUC2/포워드</td><td>맞춤형</td><td>AGGATCTGAAGAAGTGTCACTG</td><td></td></tr><tr><td>올리고뉴클레오티드 MUC2/리버스</td><td>맞춤형</td><td>TAATGGAACAGATGTTGAAGTGCT</td><td></td></tr><tr><td>올리고뉴클레오티드 TBP/포워드</td><td>맞춤형</td><td>ACGCCGAATATAATCCCAAGCG</td><td></td></tr><tr><td>올리고뉴클레오티드 TBP/리버스</td><td>맞춤형</td><td>AAATCAGTGCCGTGGTTCGTG</td><td></td></tr><tr><td>광학 접착제 커버</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>4311971</td><td></td></tr><tr><td>PD0325901</td><td>Stemcell Technologies</td><td>72184</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>Life Technologies 유럽 BV</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 쉐이커</td>, <td>Panasonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PowerUp, SYBR, 그린 마스터 믹스</td>, <td>Fisher Emergo</td><td>A25776</td><td></td></tr>, <tr><td>Primocin</td><td>InvivoGen</td><td>ANT-PM-2</td><td>일차 세포용 항균 제형</td></tr>, <tr><td>Qubit RNA HS Assay Kit</td><td>, Life Technologies Europe, BV</td><td>Q32852</td><td></td></tr><tr><td>멀티채널 피펫용 시약 저장소</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS4870</td><td></td></tr><tr><td>REMS AutoSampler(24-프로브 또는 96C-프로브</td><td>포함) WTI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Richard-Allan Scientific Alcian Blue/PAS 특수 염색 키트</td><td>, Thermo scientific</td><td>87023</td><td></td></tr><tr><td>RNase-Free DNase 세트</td>, <td>Qiagen</td><td>79254</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy 미니 키트</td>, <td>Qiagen</td><td>74106</td><td></td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7076</td><td></td></tr><tr><td>혈청학 피펫</td><td>Greiner bio-one</td><td>606180 / 607180 / 760180</td><td></td></tr><tr><td>혈청학 피펫 (Pipet-Aid)</td> <td>Drummond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>단일 가장자리 면도날</td><td>GEM Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Superscript RT-PCR</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>11904018</td><td></td></tr><tr><td>Tecan Spark 10M 플레이트 리더</td><td>Tecan</td><td>용 1st strand system</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme (1x)</td><td>Life Technologies Europe BV</td><td>12605-010</td><td>세포 해리 시약 1</td></tr><tr><td>수조</td><td>Grant</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Y27632 (ROCK 억제제)</td><td>AbMole</td><td>M1817</td><td></td></tr></tbody></table>

오가노이드 유래 상피 단층: 장 장벽 기능을 위한 임상적으로 관련된 시험관내 모델

Organoid-Derived Epithelial Monolayer: A Clinically Relevant In Vitro Model for Intestinal Barrier Function

과거에는 장 상피 모델 시스템이 형질전환 세포주 및 일차 조직으로 제한되었습니다. 이들 모델 시스템은 전자가 원래의 조직 생리학을 충실하게 나타내지 않기 때문에 내재적인 한계를 가지며, 후자의 이용가능성은 제한된다. 따라서 그들의 응용 프로그램은 기초 및 약물 개발 연구를 방해합니다. 성인 줄기 세포 기반 오가노이드 (이하 오가노이드라고 함)는 그들이 파생 된 정상 또는 병든 상피 조직의 미니어처입니다. 이들은 상이한 위장관 (GI) 관 영역에서 매우 효율적으로 확립될 수 있고, 장기간의 확장성을 가지며, 시험관내 치료에 대한 조직 및 환자 특이적 반응을 시뮬레이션할 수 있다. 여기서, 장 유래 오가노이드 유래 상피 단층의 확립은 상피 장벽 완전성, 투과성 및 수송성, 항균 단백질 분비 및 조직학을 측정하는 방법과 함께 입증되었다. 또한, 장 유래 오가노이드 단층은 증식하는 줄기 및 경이 증폭 세포뿐만 아니라 주요 분화 된 상피 세포로 농축 될 수 있습니다. 따라서, 이들은 표적 세포에 대한 화합물의 효과 및 그들의 작용 방식을 연구하도록 맞춤화될 수 있는 모델 시스템을 나타낸다. 오가노이드 배양은 세포주보다 기술적으로 더 까다 롭지 만, 일단 확립되면 생체 내 상피 복잡성과 환자 간 이질성을 진정으로 나타내기 때문에 약물 개발의 후기 단계에서 실패를 줄일 수 있습니다.

도 1A는 이를 동결 상태로부터 해동시킨 후의 장내 오가노이드의 대표적인 밝은 필드 이미지를 도시한다. 최적의 회복을 보장하기 위해 오가노이드를 고밀도로 해동하는 것이 중요합니다. 오가노이드는 약 10μL의 ECM 돔에 있는 24웰 또는 6웰 플레이트에 도금됩니다(그림 1B). 대부분의 정상적인 장 오가노이드는 낭성 형태를 가지고 있습니다. 해동 과정에서 회복 된 후, 오가노이드는 더 큰 크기로 자라며 오가노이드 배양에 따라 3-7 일 후에 계대 될 준비가됩니다 (그림 1C). 오가노이드를 수확하고 ECM을 세척한 후(도 1D), 오가노이드는 기계적 전단에 의해 작은 크기로 파쇄될 수 있다. 오가노이드의 형태학(낭성 그림 1C, 신진 그림 1E)에 따라 오가노이드는...

여기에서, 우리는 장 장벽 기능, 투과성 및 수송을 연구하기 위한 인간 오가노이드 유래 장 상피 단층의 제조를 기술한다. 오가노이드가 외부 자극에 대한 원래의 상피 조직 반응을 나타내기 때문에, 이들 모델은 세포주의 확장성과 일차 조직의 관련성 및 복잡성의 이점을 결합한다.

In the past, intestinal epithelial model systems were limited to transformed cell lines and primary tissue. These model systems have inherent limitations ...

오가노이드 유래 단층은 환자의 장 상피 장벽 기능을 재검토하고 각 환자의 기능 장애를 개선하기위한 치료법의 효과를 테스트하여 개인화 된 치료 전략을 식별 할 수있게합니다. 오가노이드 단층은 손상이 발생하는 측면 인 상피의 정점 측면에 대한 액세스를 제공하며 3D 구조로 성장하는 오가노이드에서 정상적이고 접근 할 수 있습니다. 모든 오가노이드는 다르므로 투쟁이 다릅니다.단단한 단층을 형성하려면 증식 단계에서 오가노이드를 사용하고 빠르게 소화하여 두 개에서 네 개의 세포로 구성된 클러스터를 형성하십시오. 모든 모델에 대해 세포 시딩을 적정하십시오. 이 절차를 시연하는 것은 HUB의 선임 연구원 인 Wies Van Dooremalen이 수행 할 것입니다.멤브레인 삽입물을 세포외 매트릭스 또는 ECM으로 코팅하여 시작합니다. 생물 안전 캐비닛에서 작업하면서 멤브레인 인서트를 지지판에 놓습니다. ECM 40X를 얼음처럼 차가운 DPBS에 칼슘과 마그네슘으로 희석한 다음, 희석된 ECM 150 마이크로리터를 각 삽입물의 정점 구획에 피펫한다.플레이트를 섭씨 37도에서 적어도 한 시간 동안 인큐베이션한다. 시딩을 위해 세포를 준비하려면 섭씨 37도 수조에서 세포 해리 시약의 분취량을 미리 준비하십시오. 여섯 웰 플레이트의 각 웰에 대해 두 밀리리터의 시약을 사용하십시오.오가노이드를 함유하는 배양 플레이트를 인큐베이터로부터 생물안전 캐비닛으로 옮긴다. 텍스트 원고에 설명 된대로 오가노이드를 처리하지만 여러 튜브를 하나의 튜브로 풀링하지 마십시오. 오가노이드를 수확 한 후, 기본 배지 또는 BM을 12 밀리리터에 첨가하고 85 배 G에서 원심 분리한 다음 상청액을 흡인하십시오.오가노이드가 들어있는 튜브를 최대 12 밀리리터의 DPBS로 채운 다음 10 밀리리터 피펫을 사용하여 10 번 위아래로 피펫하십시오. 섭씨 8도에서 5분 동안 85배 G에서 원심분리하고, 오가노이드 펠릿을 방해하지 않고 상층액을 흡인한다. 미리 가온된 세포 해리 시약을 오가노이드에 첨가하고 재현탁시킨 다음, 튜브를 섭씨 37도의 수조에서 5분 동안 대각선 또는 수평으로 인큐베이션한다.인큐베이션 후, 다섯 밀리리터 멸균 플라스틱 피펫 또는 P1000 피펫을 사용하여 10회 상하로 피펫을 상하로 피펫한다. 현미경으로 오가노이드 현탁액을 확인하여 단일 세포와 두 개 내지 네 개의 세포로 구성된 일부 세포 덩어리의 혼합물이 형성되었는지 확인하십시오. 세포 현탁액에 ROCK 억제제와 함께 최대 12 밀리리터의 BM을 첨가하여 세포 해리를 중지하십시오.세포를 원심분리한 다음, 세포 펠릿을 방해하지 않고 상청액을 흡인한다. 여러 튜브에서 동일한 오가노이드 배양물을 처리할 때, 세포 펠릿을 풀링한 후 12밀리리터의 BM에 재현탁시킨다. BM으로 미리 습윤된 40마이크로미터 스트레이너를 통해 세포 현탁액을 여과하고 50밀리리터 원뿔형 튜브로 유동 스루를 수확한 다음, 10밀리리터의 BM으로 스트레이너를 세척하고 동일한 튜브로 유동 스루를 수확합니다. 긴장된 세포 현탁액을 두 개의 새로운 15밀리리터 원뿔형 튜브로 옮기고 원심분리를 반복한다.세포 펠릿을 교란시키지 않고 상청액을 흡인하고, 출발 물질로 사용된 전체 배양 플레이트 당 10 마이크로몰 ROCK 억제제로 보충된 IEM의 네 밀리리터에 세포를 재현탁시킨다. 소량의 세포 현탁액을 일대일 비율로 Trypan Blue와 혼합하여 계산 한 다음 세포를 계수하고 살아있는 세포의 총 수를 계산하여 각 개별 세포를 작은 덩어리로 계산합니다. 10 마이크로몰 ROCK 억제제로 보충된 IEM의 밀리리터 당 여섯 번째 살아있는 세포에 3X 10을 함유하는 세포 현탁액을 제조하였다.세포를 시드하려면 ECM 코팅 인서트에서 DPBS를 조심스럽게 흡인하여 플레이트를 수평으로 유지하십시오. ROCK 억제제로 보충된 IEM 800 마이크로리터를 각각의 기저측성 구획에 피펫하고, ECM 코팅된 막 상에 제조된 150 마이크로리터의 세포 현탁액을 정점 구획에 적가한다. 플레이트를 인큐베이터에 섭씨 37도 및 5 % 이산화탄소에 놓습니다.일단 세포가 막 상에 침전되면, 매일 경상피 전기 저항 또는 TEER를 측정하고 현미경을 사용하여 막 삽입물을 이미지화하십시오. 단층을 새로 고치려면, 막 삽입물을 함유하는 플레이트의 기저측성 구획으로부터 배지를 제거한 다음, 정점 구획으로부터 배지를 조심스럽게 흡인한다. 150 마이크로 리터의 신선한 IEM을 각 정점 구획에 떨어 뜨리고 800 마이크로 리터의 신선한 IEM을 각 기저 측부 구획에 첨가하십시오.수동 TEER 미터를 사용하는 경우 70 % 에탄올로 전극을 청소하고 생물 안전 캐비닛 내부에서 공기 건조시킨 다음 BM이 들어있는 튜브에 전극을 넣으십시오. 전극을 수동 TEER 미터에 연결하고 기능 스위치를 돌려 옴 단위로 측정하고 전원 스위치를 켭니다. 짧은 전극을 인서트의 정점 구획에 놓고 단층을 만지지 않고 기저측 구획에 긴 전극을 놓습니다. 빈 웰에서 저항을 측정 한 다음 나머지 샘플에서 저항을 측정하십시오.다른 조건을 가진 샘플 사이에서 BM으로 전극을 세척하십시오. 끝나면 데미 물과 70 % 에탄올로 전극을 닦은 다음 공기 건조하십시오. 이 프로토콜은 장내 오가노이드를 수확하고 상피 세포의 단층을 준비하는 데 사용되었습니다.IEM에서 여덟 일 동안 배양된 단층이 여기에 표시되어 있다. 단층을 장세포 분화 배지 또는 EDM에 노출시킬 때 구조가 관찰되는 반면, 조합 배지 또는 CDM에 노출된 단층은 더 매끄러운 구조를 나타낸다. 단층 형성은 정량적으로 TEER 측정에 뒤따랐다.완전히 합류한 단일층은 약 100 옴 센티미터 제곱의 TEER 값을 가졌고, 이는 어느 분화 배지에 노출될 때 증가하였다. 모든 중간 조건에서 단층은 루시퍼 황색에 대해 더 낮은 겉보기 투과성을 나타냈다. IEM에서 배양된 장폐색 단층에 의한 리소자임 분비는 EDM 또는 CDM에서 또 다른 나흘 동안 그리고 합류할 때까지 IEM에서 배양된 단층의 분비량보다 높았다.IEM, IEM 및 후속 EDM, 또는 IEM 및 후속 CDM에서 배양된 단층은 H&E, Ki67, MUC2 및 Alcian Blue 염색으로 관찰된 형태학의 차이를 보여준다. 분화 시, 증식성 세포는 감소한 반면, 잔 세포 및 장세포 마커 유전자 발현은 LGR5, MUC2 및 알칼리성 포스파타제 유전자 발현으로 나타낸 바와 같이 IEM 조건 하에서 관찰된 것에 비해 증가하였다. 단층을 준비 할 때, 소화 후 오가노이드의 anoikis를 예방하는 것이 중요합니다.추가적으로, 세포의 ECM은 트랜스웰 막에 고르게 분포되어야 한다. 오가노이드-유래 단일층은 환자 특이적 방식으로 상이한 형광 기질을 사용하는 분자 수송의 평가를 허용한다.

organoid-derived-epithelial-monolayer-clinically-relevant-vitro-model

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

출처: 인, J. G. 외. 병원체, 공존체, 숙주 장 상피 간 상호작용을 연구하기 위한 인간 대장장 단층. J. Vis. 경험 (2019).이 영상은 콜라겐 코팅된 Transwell 시스템에서 대장유래 상피세포를 배양하여 장벽을 모델링하고 숙주-병원체 상호작용 연구를 가능하게 하는 점액 생성 단일층을 생성하는 절차를 시연합니다.

숙주-병원체 상호작용을 연구하기 위한 장벽 기능을 가진 인간 대장층 단층 생성

이 프로토콜 상피 장벽 침투성 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 인간의 창 자 organoids에서 실시간 다음 약리학 적인 치료에서의 측정을 설명 하 고 라이브 셀 현미경 검사 법.

인간의 장 Organoids에 상피 장벽 침투성의 실시간 측정

여기, 우리 문화 인간 enteroid 또는 셀룰러 및 생 화 확 적인 수준에서 호스트 상피 microbiota 상호 작용 연구를 그대로 배리어 기능이 있는 colonoid monolayers 프로토콜을 제시.

병원 균, 공생, 그리고 호스트 창 자 상피 사이 상호 작용을 공부 하는 인간 Colonoid Monolayers

여기에서 우리는 소장 오르가노이드의 장벽 무결성을 정량화하는 기술을 기술합니다. 이 방법이 살아있는 오르가노이드를 기반으로 한다는 사실은 시간 해결 방식으로 상이한 장벽 무결성 변조 물질 또는 이들의 조합에 대한 순차적 조사를 가능하게 한다.

살아있는 오르가노이드의 장 장벽 고장 조사

이 프로토콜에서, 우리는 장 지하실에서 직접 뮤린 기본 상피 결장 단층층을 생성하는 방법을 설명합니다. 우리는 투과성 필터에 컨천단층을 생성하기 위한 실험적 접근법, 스크래치 상처 치유 및 생화학 연구를 위한 컨큐리 단층, 면역 형광 분석을 위한 희소및 응수 단층층을 제공합니다.

장 내 토굴에서 뮤린 기본 결장 상피 단층의 세대

여기서는 장 적정별 상호 작용을 모델링할 수 있는 두 가지 프로토콜을 제시합니다. 오르가노이드 유래 장 단층층 및 공기-액체 인터페이스(ALI) 배양은 발광 및 바생측 모두에서 접근할 수 있는 잘 차별화된 상피생성을 용이하게 하는 반면, 극성 반전장 기관가의 측면은 그들의 정면을 노출시키고 높은 처리량 분석에 적합합니다.

장 관성 오르가노이드 모델을 사용하여 정법별 상호 작용을 연구하는 문화 방법

여기서는 기본 3차원(3D) 장 세포주 모델 시스템과 고정 장 등가물의 광학 현미경 평가를 위한 파라핀 임베딩 프로토콜을 구성하는 방법을 설명합니다. 선택한 단백질의 염색을 통해 단일 실험에서 여러 시각적 파라미터를 분석하여 전임상 약물 스크리닝 연구에 사용할 수 있습니다.

면역 성분이 있는 기본 3차원(3D) 장 모델 시스템

엔테로이드는 조직 생리학 및 병태생리학, 약물 개발 및 재생 의학을 연구하기 위한 새로운 모델로 부상하고 있습니다. 여기서는 관련 조직 세포 유형과의 공동 배양을 허용하는 소 일차 세포 2D 장내 유래 배양 시스템에 대해 설명합니다. 이 모델은 위장 연구 모델링을 위한 중개적 이점을 제공합니다.

중개 생물의학 연구에 응용하기 위한 소 1차 장내염 유래 2차원 단층 배양 시스템 생성

이 연구는 오가노이드에서 소 장 2D 단층을 생성하기 위한 프로토콜을 제시하여 숙주-병원체 상호 작용 연구를 위한 향상된 접근성을 제공합니다. 여기에는 멤브레인 무결성 및 기능을 평가하는 방법이 포함되며, 소의 위장 생리학을 모방하는 in vitro 모델을 발전시킵니다. 이 접근법은 향상된 치료 전략을 포함하여 상당한 생물 의학 및 농업 이점을 약속합니다.

Small and Large Intestinal Monolayer interface를 사용한 소 오가노이드 기술의 발전

이 연구는 조직 줄기세포에서 유래한 장 오가노이드를 이용한 세균 감염의 시험관 내 조사 방법을 제시합니다. 이 프로토콜은 2차원에서 오가노이드를 배양하고 구분하는 방법, 침착성 대장균으로 감염시키는 방법, 그리고 상피 장벽 돌파, 감염 영상, 상피 RNA 반응 등 주요 측정값을 평가하는 방법을 설명합니다.

숙주-박테리아 상호작용을 연구하기 위한 침입 또는 저저막 추출물에 적용한 2차원 오가노이드 배양

배우세요 장 오가노이드 유래 상피 단층을 이용한 장 장벽 기능 연구 방법을. TEER 측정 및 투과성 분석으로 환자 특이적 약물 반응을 평가할 수 있는 생리학적 모델을 구축합니다.

오가노이드 유래 상피 단층: 장 장벽 기능을 위한 임상적으로 관련된 시험관내 모델

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