Name: 환자 유래 종양은 환자의 약물 내성을 예측하기위한 라이브전임상 플랫폼으로 이월합니다. (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: 학습하세요 환자 유래 종양(PDE)을 이용한 3D 배양 및 다중 면역형광 분석 기법으로 약물 반응성과 바이오마커를 예측하는 방법을. 이 기술은 종양 미세환경을 보존하여 맞춤형 암 치료 개발에 필수적인 전임상 플랫폼을 제공합니다.

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우리는 외과 절제 된 종양 조직을 제공 에 대한 레스터 NHS 트러스트의 대학 병원에서 외과 의사와 병리학자 감사합니다. 우리는 또한 VEctra 폴라리스의 사용과 지원을 위해 FFPE 조직 블록과 키스 스트라트만의 조직 처리 및 단면에 도움을 핵심 생명 공학 서비스 내의 조직학 시설에 감사드립니다. 이 연구는 레스터 대학, MRC 독성학 단위, 암 연구 영국 치료 발견 실험실 및 LifeArc: 4개의 파트너로 구성된 Explant 컨소시엄에 의해 지원되고 투자되었습니다. 추가 지원은 CRUK-NIHR 레스터 실험암 의학 센터에 의해 제공되었습니다 (C10604/A25151). GM에 대 한 자금, CD, 그리고 NA 유방암 지금의 촉매 프로그램에 의해 제공 되었다 (2017NOVPCC1066), 화이자에서 자금에 의해 지원 됩니다.

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이 논문은 PdEs의 생성, 약물 치료 및 분석을 위한 방법을 설명하고 전임상 모델 시스템으로 플랫폼의 장점을 강조합니다. 그 분해를 포함하지 않는 갓 절제된 종양의 전 생체 배양은 종양아키텍처(13,24)의 보존을 허용하므로 TME의 세포 성분의 공간 상호 작용뿐만 아니라 종양 내 이질성. 이 방법은 종양 특이적 마커를 사용하여, 스트로마 영역대 종양 조직의 영역을 식별하고 따라서 이들 구획 내의 약물 반응을 분리하는 방법을 보여준다(도 3). 또한, 다중 바이오마커는 동시에 프로파일을 프로파일화하여 TME 내의 면역 세포의 표적이동(도 4)을평가할 수 있다.
이전 간행물은 화학 요법, cisplatin의 표준에 대한 NSCLC PDEs의 계층화에 이 PDE 플랫폼의 ...

효과적이고 안전한 항암제의 개발은 예측 및 약동적 바이오마커의 식별을 용이하게 할 수 있는 작용 메커니즘에 대한 통찰력을 제공할 수 있는 적절한 전임상 모델이 필요합니다. 종양 간 이질성1,2,3,4,5 및 TME6,7,8,9,10,11,12는 항암제 반응에 영향을 미치는 것으로 알려져 있으며, 세포주, 오르가노이드 및 마우스 모델과 같은 많은 기존 전임상 암 모델은 이러한 결정적인 것을 완전히 수용할 수 없다. 기능. "이상적인" 모델은 종양 내의 비악성 세포와 악성종양의 복잡한 공간 상호 작용을 재구성할 수 있을 뿐만 아니라 종양 내의 지역적 차이를 반영할 수 있는 모델입니다. 이 문서에서는 이러한 요구 사항 중 많은 것을 충족할 수 있는 신흥 플랫폼인 PDEs에 중점을둡니다(13)
또한 조직문화로 알려진 인간 PdEs의 사용의 첫 번째 예는 호프만 등 새로 절제된 인간 종양의 조각을 생성하고 콜라겐 매트릭스14,15에서배양 할 때 1980 년대 후반으로 거슬러 올라간다. 이것은 조직 건축을 보존하는 3D 배양 시스템을 설치하여 TME 내의 기질 성분 및 세포 상호 작용의 유지를 보장하는 것을 포함했습니다. 원래 종양을 해체하지 않고, 호프만 외16 번역 연구의 새로운 접근을 예고하고, 이 시간 이후, 많은 그룹은 조직 무결성을 보존하고 정확한 약물 반응 데이터를 생성하는 것을 목표로 다른 각질 방법을 최적화했다17,18,19,21,21,22,23,24 프로토콜 간의 몇 가지 차이점이 분명하지만. 버틀러 외. 젤라틴 스폰지에서 배양된 박기는표본(20,21,25)을통해 영양분과 약물의 확산을 돕는 반면, Majumder 등은 동일한환자로부터유래된 자가혈류의 존재에서 종양과 기질 단백질로 구성된 매트릭스 위에 박리하여 종양 생태계를조성하였다. 23.
최근에는배양시스템(24)의공기-액체 인터페이스에서 투과성 멤브레인에 추가 성분없이 배치되는2-3mm 크기의크기의 조각으로 종양의 단편화에 의해 각질이 발생하는 프로토콜을 설정하였다. 종합하면, 이러한 수많은 연구는 PDEs가 원래 종양의 공간 건축 과 지역 이질성을 유지하는 인간의 종양의 손상되지 않은 살아있는 단편의 문화를 허용한다는 것을 입증했습니다. 본래 실험에서, 박종 또는 히스토컬은 일반적으로 약물 치료에 따라 균질화를 실시하였다. 그 후 히스토처형 약물 반응분석20,21,MTT(3-(6)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드) 분석, 락테이트 탈수소효소 분석, 또는 레자쥐린 계 의 분석26,27,288, 288 . 최근 엔드포인트 분석 기술, 특히 디지털 병리학의 진행은 이제29,30에서수행 할 수있는 엔드포인트 테스트 및 분석의 레퍼토리를 확장했습니다. 이러한 새로운 기술을 적용하려면 균질화 대신 파라핀(FFPE)에 내장된 후 면역염색 기술을 사용하여 분석하여 공간 프로파일링을 허용합니다. 이러한 접근법의 예는 비소세포폐암(NSCLC), 유방암, 대장암 및 중피종 에 대해 문서화되어 증식 마커, Ki67, 및 세포식 마커, 갈라진 다중 ADP 리보스 폴리모제 폴리머라제(cPARP) 및 세포증식의변화를 모니터링하는 데 사용되었다,34, 34,세포 증식 및세포증식 및 세포 증식및 세포 증식, 34.
멀티플렉스 면역 형광은 종점35에서이분야에서 약물 반응의 공간 프로파일링을 위해 특히 순종한다. 예를 들어, 대식세포 나 T 세포와 같은 면역 세포의 특정 클래스의 재현지화 및 공간 분포를 측정할 수 있으며, 약물 치료 시 TME 내에서13,36,37,38,치료제가 "감기종양"에서 "뜨거운 종양"으로의 전환을 선호할 수 있는지 여부를 조사할 수있다. . 최근 몇 년 동안, 이 그룹은 다른 종양 유형(NSCLC, 신장암, 유방암, 대장암, 흑색종)과 화학요법, 소분자 억제제 및 면역 체크포인트 억제제(ICI)를 포함한 다양한 항암제의 시험에서 PDE의 파생에 초점을 맞추고 있다. 엔드포인트 분석 방법은 TME의 다른 성분을 위한 바이오마커뿐만 아니라 생존을 위한 바이오마커의 공간 프로파일링을 허용하기 위해 멀티플렉스 면역 형광을 포함하도록 최적화되었습니다.

<table><tbody><tr><td>Acetic acid</td><td>Sigma</td><td>320099</td><td>염색 시약</td></tr><tr><td>항체 희석제/블록, 1x</td><td>Perkin Elmer</td><td>ARD1001EA</td><td>항체 희석제/차단 버퍼</td></tr><tr><td>Barnstead NANOpure Diamond</td><td>Barnstead</td><td></td><td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td></tr><tr><td> 시트르산 일수화물</강력한></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7129</td><td>시트르산염 완충액<</td></tr><tr><td>강력한>Costar 다중 웰 세포 배양 플레이트용 시약</td><td>Corning Incorporated</td><td>3516</td><td>6 멀티웰 플레이트</td></tr><tr><td><>강력한DAPI 딜락테이트</td><td>Life Technologies</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>100 x 17 mm 접시, Nunclon Delta</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>150350</td><td>조직 배양용 100 mm 직경 접시</td></tr><tr><td>DMEM (1x) Dubelcco's Modified Eagle Medium + 4.5 g/L D-Glucose + 110 mg/mL Sodium Pyruvate</td><td>Gibco (Life Technologies)</td><td>10569-010</td><td>조직 배양 배지 (500 mL)</td></tr><tr><td>DPX mountant</td><td>VWR</td><td>360294H</td><td>Mounting medium</td></tr><tr><td>DPX mountant</td><td>Merck</td><td>6522</td><td>마운팅 배지</td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3609</td><td>TE buffer용 시약</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>CellPath</td><td>RBC-0100-00A</td><td>염색 시약</td></tr><tr><td>Foetal Bovine Serum</td><td>Gibco</td><td>10500-064</td><td>조직 배양에 사용 매체</td></tr><tr><td><강>37% 포름알데히드</강></td><td>피셔(아크로스)</td><td>119690010</td><td>10% 포르말</td></tr><tr><td>린<강>iGenix, 전자레인지 IG2095</강력></td><td>iGenix</td><td>IG2095</td><td>항원 회수</td></tr><tr><td><강한>산업용 메틸화 증류주(IMS)</강></td><td>Genta Medical</td><td>199050</td><td>99% 산업용 변성 알코올(IDA)</td></tr><tr><td>에 사용InForm 고급 이미지 분석 소프트웨어</td><td>Akoya Biosciences</td><td>InForm</td><td></td></tr><tr><td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Automated Vacuum Tissue Processor</td></tr><tr><td>Leica Arcadia H and C</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Embedding wax bath</td></tr><tr><td>Leica RM2125RT</td><td>라이카 바이오시스템</td><td></td><td>즈 로터리 마이크로톰</td></tr><tr><td><스트롱>라이카 ST4040 선형 염색기</스트롱></td><td>라이카 바이오시스템즈</td><td></td><td>H& E 염색제</td></tr><tr><td>Mayer의 Haematoxylin</td><td>Sigma</td><td>GHS132-1L</td><td>염색 시약</td></tr><tr><td>Millicell Cell Cell Culture Inserts, 30 mm, 친수성 PTFE, 0.4 &micro; m</td><td>Merck Milipore</td><td>PICMORG50</td><td>유기형 배양 인서트 디스크</td></tr><tr><td>Novolink 폴리머 검출 시스템</td><td>Leica Biosystems</td><td>RE7150-K</td><td>DAB 염색 키트</td></tr><tr><td>OPAL 480</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1500001KT</td><td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) 희석</td></tr><tr><td>제OPAL 520</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1487001KT</td><td>디메틸설폭사이드(DMSO) 희석제</td></tr><tr><td><강력한>OPAL 570</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1488001KT</td><td>디메틸설폭사이드(DMSO) 희석제</td></tr><tr><td><강력한>OPAL 620</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1495001KT</td><td>디메틸설폭사이드(DMSO) 희석제</td></tr><tr><td>OPAL 650 </td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1496001KT</td><td>디메틸 설폭사이드(DMSO) 희석</td></tr><tr><td>제<강력한>OPAL 690</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1497001KT</td><td>디메틸 설폭사이드(DMSO) 희석제</td></tr><tr><td>OPAL 780 / OPAL TSA-DIG 시약</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1501001KT</td><td>디메틸 설폭사이드(DMSO) 희석제 및 TSA-DIG 시약이 포함된 형광단</td></tr><tr><td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td><td>Perkin Elmer</td><td>ARH1001EA</td><td>HRP polymer</td></tr><tr><td>Penicillin/streptomycin solution</td><td>Fisher Scientific</td><td>11548876</td><td>조직 배양 매체</td></tr><tr><td>PhenoChart 전체 슬라이드 Contextual Viewer</td><td>Akoya Biosciences</td><td>PhenoChart</td><td>Viewer 소프트웨어 스캔 이미지</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td><td>Thermo Scientific Oxoid</td><td>BR0014G</td><td>PBS</td></tr><tr><td>1x Plus Amplification Diluent</td><td>Perkin Elmer</td><td>FP1498</td><td>Fluorophore Diluent</td></tr><tr><td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td><td>Invitrogen</td><td>P36961</td><td>Mounting medium</td></tr><tr><td>Slide Carrier</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>Vectra Polaris</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>S/3160/63</td><td>10% 포르말</td></tr><tr><td>린Sodium Hydroxide 펠릿</td><td>Fisher Scientific</td><td>S/4920/53</td><td>시트레이트 버퍼용 시약</td></tr><tr><td>Tenatex 강화 왁스 - 핑크 (500 g)</td><td>KEMDENT</td><td>1-601</td><td>치과 왁스 표면</td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp; 면역염색 센터용 Shandon Sequenza 슬라이드 랙</td><td>Fisher Scientific</td><td>슬라이드 및 슬라이드 클립용</td> <td>10098889</td> 홀더</tr><tr><td>Thermo Scientific Shandon 플라스틱 커버 플레이트</td><td>Fisher Scientific</td><td>11927774</td><td>슬라이드 클립</td></tr><tr><td>Tris(하이드록시메틸)aminomethane(Tris)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>252859</td><td>TE 완충액용 시약</td></tr><tr><td>VectaShield</td><td>Vecta Laboratories</td><td>H-1000-10</td><td>마운팅 매체</td></tr><tr><td>Vectra Polaris Slide Scanner</td><td>Perkin Elmer</td><td>Vectra Polaris</td><td>Slide scanner</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Genta Medical</td><td>XYL050</td><td>디왁싱제</td></tr></tbody></table>

환자 유래 종양은 환자의 약물 내성을 예측하기위한 "라이브"전임상 플랫폼으로 이월합니다.

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

약물 내성의 이해와 고저항성 암을 민감하게 하기 위한 새로운 전략의 개발은 환자 반응을 정확하게 예측할 수 있는 적합한 전임상 모델의 가용성에 의존합니다. 기존 전임상 모델의 단점 중 하나는 인간 종양 미세환경(TME)을 문맥적으로 보존하고 종양 내 이질성을 정확하게 나타내지 못해 데이터의 임상번역을 제한하는 것이다. 대조적으로, 인간 종양의 살아있는 단편의 문화를 대표함으로써, 환자 유래 한 절제 (PDE) 플랫폼은 원래 종양의 병리학 적 및 건축 적 특징을 가능한 한 가깝게 반영하는 3차원 (3D) 맥락에서 약물 반응을 검사 할 수 있게합니다. PDEs를 가진 이전 보고는 화학 저항하는 종양에서 화학반응을 구별하는 플랫폼의 기능을 문서화하고, 이 분리는 동일 화학요법에 참을성 있는 반응의 예측이다는 것을 보여주었습니다. 동시에, PDEs는 약물 반응을 예측하는 종양의 분자, 유전 적 및 조직학적 특징을 심문할 수 있게 하여 환자 계층화에 대한 바이오마커와 내성 종양에 민감하게 반응하는 새로운 중재 적 접근법을 식별할 수 있습니다. 이 논문은 환자 샘플 수집부터 끝점 분석에 이르기까지 PDE 방법론을 자세히 보고합니다. 그것은 특정 종양에 대한 맞춤형 조건을 강조, 절제 파생 및 배양 방법에 대한 자세한 설명을 제공합니다, 적절한 경우. 엔드포인트 분석을 위해, 종양 및 기질 영역 내의 주요 바이오마커의 공간 프로파일링을 위한 멀티플렉스 면역 형광 및 다중 스펙트럼 이미징에 초점이 있다. 이러한 방법을 결합함으로써, 다양한 임상 병리학 파라미터와 관련될 수 있는 정량적 및 질적 약물 반응 데이터를 생성하여 잠재적으로 바이오마커 식별에 사용될 수 있다.

mIF 염색 조직학적 섹션의 다중 스펙트럼 이미징은 개별 세포 집단의 식별 및 phenotyping을 허용하고 각성 TME에서 종양 및 기질 성분의식별(도 2). 다중 스펙트럼 이미징은 높은 내재성 자동 불발력을 가진 조직의 분석에 특히 유용하며, 이는 자동 불피 신호가 다른 신호로부터 감속되고 후속 분석에서 제외될 수 있기 때문에 높은 콜라겐 함량을 가진 조직과 같은 조직분석에 특히 유용합니다. 실리코 조직 및 세포 세분화에 따라 원시 세포 수(예를 들어, 백분율 양성), 신호 강도, 세포 크기, 조직 영역 및 개별 세포의 공간 위치를 포함하되 이에 국한되지 않는 다수의 출력을 가진 약물 반응의 정량화를 허용한다.
조직 및 세포 세분화는 따라서 약물 치료 결과의 정량적 분석 및 종양 및 기질 별 반응의 식별에 매우 유용합니다. 예를 들어, 종양 마커와 함께 Ki67 및 cPARP에 대한 염색은 각각, 절제(그림<strong ...

이 논문은 살아있는 환자 관련 전임상 모델 시스템에서 종양 약물 반응을 평가하기 위한 환자 유래 각종의 생성, 약물 치료 및 분석을 위한 방법을 설명합니다.

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

환자 유래 이질은 환자 결과를 정확하게 예측할 수 있는 즉각적인 약물 반응 데이터를 제공하는 단기 적인 방법입니다. PD 플랫폼은 지역 종양의 병리학 적 및 건축 적 특징을 가능한 한 가깝게 반영하는 3D 컨텍스트에서 약물 반응을 검사 할 수 있습니다. Explant는 약물의 물질 대사와 작용 메커니즘에 대한 새로운 통찰력을 제공하고 새로운 약동적 바이오 마커의 식별을 용이하게 할 수있는 잠재력을 가지고 있습니다.실험을 시작하기 전에 모든 수술 장비를 70 % 산업용 메틸화 된 증류주 솔루션으로 청소하십시오. 10센티미터 의 문화 요리를 얼음 위에 25 밀리리터의 신선한 매체로 채웁니다. 핀셋을 사용하여 시편을 치과 왁스 표면에 옮기고 두 개의 피부 이식 블레이드를 사용하여 조직을 약 2 ~3 입방 밀리미터의 조각으로 자랍시다.10센티미터 접시에 담근을 옮기고 실온에서 24시간 배양하기 위해 10% 비완충된 포르말린 용액을 함유한 1밀리리터 튜브에 6~9개의 티슈를 배치합니다. 6개의 웰 플레이트의 원하는 수의 우물을 우물당 1.5 밀리리터의 신선한 배지로 채웁니다. 그리고 조개 식배 삽입 접시를 각 우물에 배치하여 매체 위에 떠 있습니다.각 삽입 디스크에 6~9개의 허실을 배치하고 복구를 허용하기 위해 5%의 이산화탄소 인큐베이터에 16시간 인큐베이션을 보관합니다. 다음 날, 새로운 접시의 각 우물에 신선한 매체와 약물을 추가합니다. 차량 제어에 대한 우물을 포함합니다.모든 약물 치료가 준비되면 핀셋을 사용하여 새로운 6 개의 웰 플레이트의 각 우물에 1 개의 인서트를 전달하여 이산화탄소 인큐베이터에서 24 ~ 48 시간 배양하십시오. 약물 치료 후, 10 %의 포르말린을 포함하는 새로운 여섯 개의 우물 판으로 디스크를 전송합니다. 그리고 각 각 각 절기의 상단에 10 % 포르말린의 몇 방울을 추가하여 실온에서 24 시간 동안 잠복하는 고정으로 완벽한 커버리지를 보장하십시오.다음 날, 70 % 산업 메틸화 용액에 작은 작기 스폰지의 적절한 수를 담급니다. 그리고 기스펀을 장술 카세트 안에 놓습니다. 모든 스폰지가 배치되었을 때, 삽입 된 디스크에 접촉 각 explant의 약물 치료 측과 함께 하나의 스폰지에 동일한 약물 치료 조건에서 모든 각기를 전송합니다.각 각 절제의 상단에 또 다른 미리 담근 스폰지를 놓고 카세트에 이출을 확보하기 위해 카세트를 닫습니다. 그런 다음 조직학적 처리를 진행하기 전에 70 % 산업용 메틸화 솔루션에 카세트를 침수합니다. 스캔 후 교육 분석을 수행하고 스탬프가 포함된 스캔을 적절한 분석 소프트웨어에 로드합니다.단일 모드 보기에서 이미지를 탐색하고 스캔을 선택하여 본질적인 형광으로 분석하고 스캔합니다. 단일 뷰에서 본질적인 형광 스캔을 통해 자동 불발 피커를 클릭하여 스테인드 조직 영역에 세그먼트를 그립니다. 마커와 색상을 편집한 후 각 불소와 연결된 상자에 마커 이름을 입력합니다.소프트웨어가 업로드된 모든 이미지에서 본질적인 형광의 강도를 빼도록 이미지를 준비하십시오. 세그먼트 조직 단계를 화면 상단의 클릭하여 조직 세분화 훈련 창을 엽니다. 조직 범주 패널에서 분할할 각 조직 범주의 이름을 입력합니다.관심있는 조직 범주에서 세포의 그룹 주위에 영역을 그리려면 그리기를 클릭합니다. 그런 다음 다음 조직 범주로 전환하고 새로운 영역을 그립니다. 모든 훈련 영역이 정의되면, 기차 조직 세그먼트를 사용하고, 훈련 정확도가 정착 할 때까지 기다립니다.100%에 가까운 값으로 세그먼트를 클릭하여 조직을 분류할 수 있습니다. 조직 세분화의 품질을 확인한 후 세포 세분화를 클릭하고 셀룰러 구획을 선택하여 세그먼트로 선택합니다. 핵 구성 요소를 구성하려면 일반적인 강도 슬라이더를 사용하여 핵 픽셀을 감지하는 데 사용되는 임계값을 조정합니다.라이브 피드백은 미리 보기 창에서 제공됩니다. 핵 픽셀의 클러스터를 분할하려면 핵 부품 분할 패널에서 핵의 염색 품질을 가장 잘 설명하는 버튼을 선택하고 슬라이더 막대를 사용하여 분할 감도를 조정합니다. 그런 다음 모든 이미지를 분할하려면 모든 세그먼트를 클릭합니다.모든 이미지가 분할된 경우 표현형 패널에서 감지할 표현형 목록을 추가하고 표현형의 이름을 해당 텍스트 상자에 입력합니다. 표현형을 편집하여 특정 셀을 선택하고 드롭다운 메뉴에서 해당 표현형을 선택합니다. 교육 선택을 완료한 후 열차 분류기를 클릭하여 각 표현형의 결과를 평가합니다.표현형을 모두 진행하고 프로젝트를 저장하고 내보내기를 클릭합니다. 일괄 처리 분석 탭을 선택하고 배치 알고리즘 또는 프로젝트 상자에 프로젝트를 로드합니다. 이미지와 테이블을 내보내려면 내보내기 옵션의 모든 상자를 선택하고 슬라이드 를 클릭하고 이전에 준비된 배치에 대한 스탬프가 포함된 모든 이미지를 로드합니다.그런 다음 한 스탬프의 시작 배치 분석으로 실행을 클릭하고 획득한 경우 해당 데이터를 내보냅니다. 세포 생존가능성의 마커를 위해 염색된 NSCLC 의 다중 스펙트럼 화상 진찰은, 개별 세포 집단의 식별 및 phenotyping을 허용하고, 암소 종양 마이크로 환경 내의 종양 및 기질 성분의 식별을 허용합니다. 세포 생존성 마커의 조직 및 세포 세분화는 입증된 바와 같이 다중 스펙트럼 이미지 얼룩, 관심있는 약물로 치료된 환자 유래 된 자궁에서 세포 사멸 및 증식을 정량화하는 데 사용될 수 있다.예를 들어, 이러한 분석에서, Nivolumab으로 치료된 종양으로부터의 조직 샘플에서, 처리된 종양 샘플에 비해 더 많은 수의 죽어가는 세포가 확인되었다. 또한, 도시된 바와 같이, 얼룩진 해부로부터 공간 정보를 추출하는 능력은 세포 간 거리의 계산을 허용한다. 또한, 이 종은 광범위한 공간 프로파일링 또는 질량 세포측정에 사용될 수 있으며, 이는 샘플의 3D 구조를 유지하면서 자회사 해상도에서 수백 개의 바이오마커를 동시에 프로파일링할 수 있습니다.PD는 면역 요법의 효능을 예측할 수 있었습니다. 예를 들면, 면역 체크포인트 억제제에 민감하거나 저항하는 케이스를 구별하고 이 구별을 뒷받침하는 기계장치를 조사하는 것이 가능할 수 있었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

여기, 우리는 뇌 종양의 수술 표본, 칭했다 "종양 explant 방법"으로 약물 효능 검사를위한 방법을 만들었습니다. 이 방법을 통해, 우리는 고체 종양의 microenvironment을 위반하지 않고 약물 효능을 평가할 수 있습니다. 이 방법의 신뢰성을 검증하기 위해, 우리는 현재 첫 라인 chemotherapeutic 에이전트 temozolomide과 치료의 glioma의 표본과 함께 대표 데이터를 설명합니다.

외과 종양 표본의 Explants를 사용하여 소설 안티 - 암 의약품 개발을위한 방법

설립 암 세포주 및 이종 이식편은 지난 수십 년간 암 연구의 주류이었다. 그러나, 최근의 증거는 치료 반응이 크게 종양 세포 미세 환경에 의해 영향을 받는다는 의미한다. 따라서, 우리는 약물 개발을 목적으로 일차 종양 시료의 생체 외 분석을 개발 하였다.

기본 종양 및 / 또는 전임상에 대한 관련 전이 및 치료제의 임상 개발의 전 생체 치료 응답

피하 전임상 모델에서 환자 유래 종양을 활용하여 새로운 치료법, 예측 바이오 마커의 발견 및 약제 내성 경로의 효능을 연구 할 수있는 좋은 방법입니다. 이 모델은 신약 개발 과정에서 임상 시험에 앞서 많은 신규 항암 요법의 운명을 결정하는데 중요하다.

전임상 환자 유래 종양 소설 안티 - 암 치료의 조사를위한 이종 이식 모델의 개발 및 유지 보수

있도록 매우 민감한 탐지 목표 인간의 대 장 암 (CRC) 세포 조직 정착, 우리 여기 PDX 파생 CRC organoid 셀에 녹색 형광 단백질 (GFP) lentiviral 입자의 효율적인 변환에 대 한 프로토콜을 표시 스테레오-형광 현미경 관찰 받는 쥐로 그들의 주입에의...

GFP Lentivirus 불리고 Organoids 환자 파생 결 장 종양에서 경작에 의해 생성 된 Micrometastases의 고감도 검출

환자 유래 이종이식(PDX) 모델은 흑색종 분자 및 생물학적 특징을 보다 강력하게 회귀하고 기존의 플라스틱 조직 배양 계 세포 에 비해 치료 반응의 더 예측이다. 여기서는 새로운 PDX 모델 의 확립과 기존 PDX 모델의 특성화/실험에 대한 표준 운영 프로토콜에 대해 설명합니다.

흑색종 환자 유래 이종이식 모델

여기서 우리는 종양의 게놈 메이크업에 기초하여 선택된 표적 치료의 효능을 시험하기 위한 프로토콜을 제시한다. 프로토콜은 구조적인 DNA 재배열의 확인 그리고 검증, 마우스로 환자의 종양의 이식 및 해당 약에 대한 반응을 시험하는 것을 기술합니다.

구조적 DNA 변경 분석 및 환자 유래 제노이식을 사용하여 암에 있는 표적으로 한 치료 시험

우리는 organotypic 종양 조직 조각에 있는 실시간 약 반응을 측정하기 위한 프로토콜을 소개합니다. 여기에 설명된 실험 전략은 생체 내 조건에서 임상 또는 마우스 종양에서 유래한 조직 조각에 중고 처리량 약물 스크린을 수행하는 플랫폼을 제공한다.

오르가노티픽 종양 조직 슬라이스에서 실시간 약물 반응 측정

환자 유래 제노이식(PDX) 모델과 이식 가능한 유전자 조작 마우스 모델은 인체 질환을 충실히 재구성하고 기본 및 번역 형 유방암 연구를 위한 선호 모델입니다. 여기서, 종양 생물학을 연구하고 약물 반응을 평가하기 위해 유방 지방 패드로 유방 종양 단편을 정형전으로 이식하는 방법이 설명된다.

유방암을 위한 전임상 모형으로 유방 종양의 정형소 이식

시험관 내 스크리닝을 위해 환자 유래 제노이식(PDX)을 사용하여 오가노이드를 생성하여 생체내/생체 외 모델의 쌍을 매칭하는 방법을 설명합니다. PDX 종양은 기계적 또는 효소적으로 작은 조각으로 수확/처리되었으며, 원래 PDX에 대해 처리, 냉동 보존 및 특징인 종양 오르가노이드를 성장시키는 영리한 방법.

암 약리학 연구를 위한 PDX 및 PDX 유래 오르가노이드의 생체내/생체외 환자 유래 모델 쌍 생성

매우 정확한 체외 고처리량 분석 시스템은 암 조직과 유사하지만 96웰 및 384웰 플레이트를 가진 체외 고처리량 분석 시스템에 적합하지 않은 환자 유래 종양 오르가노이드(PdOs)를 사용하여 항암제를 평가하기 위해 개발되었다.

환자 유래 종양 오르가노이드를 사용하여 시험관 분석에서 높은 처리량

이 프로토콜은 NSCLC 환자 유래 오가노이드 모델에서 표적화된 신호전달 억제제에 대한 약물 민감성의 표준화된 평가를 기술한다.

EGFR 돌연변이 NSCLC 환자 유래 오가노이드에서 표적 치료법에 대한 민감도 프로파일링

학습하세요 환자 유래 종양(PDE)을 이용한 3D 배양 및 다중 면역형광 분석 기법으로 약물 반응성과 바이오마커를 예측하는 방법을. 이 기술은 종양 미세환경을 보존하여 맞춤형 암 치료 개발에 필수적인 전임상 플랫폼을 제공합니다.

환자 유래 종양은 환자의 약물 내성을 예측하기위한 "라이브"전임상 플랫폼으로 이월합니다.

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