Name: 면역 능력이 있는 마우스를 기관내로 접종하기 위한 한천 비드 내장 마이코박테리움 농양의 제조 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: 학습하세요 면역 능력이 있는 마우스에서 한천 비드 내장 Mycobacterium abscessus를 기관내로 접종하여 만성 폐 감염 모델을 만드는 방법을. 이 프로토콜은 항생제 효능 평가를 위한 강력한 전임상 도구를 제공합니다.

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<ol><li>Dartois, V., Dick, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+development+challenges+in+nontuberculous+mycobacterial+lung+disease%3A+Tb+to+the+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Drug development challenges in nontuberculous mycobacterial lung disease: Tb to the rescue.</a> J Exp Med. 219 (6), e20220445(2022).</li>
<li>Martiniano, S. L., Nick, J. A., Daley, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nontuberculous+mycobacterial+infections+in+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Nontuberculous mycobacterial infections in cystic fibrosis.</a> Clin Chest Med. 43 (4), 697-716 (2022).</li>
<li>Maurer, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+antimicrobial+bactericidal+activity+in+mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Lack of antimicrobial bactericidal activity in mycobacterium abscessus.</a> Antimicrob Agents Chemother. 58 (7), 3828-3836 (2014).</li>
<li>Wu, M. L., Aziz, D. B., Dartois, V., Dick, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ntm+drug+discovery%3A+Status%2C+gaps+and+the+way+forward%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discov+Today%22%5BJournal%5D)">Ntm drug discovery: Status, gaps and the way forward.</a> Drug Discov Today. 23 (8), 1502-1519 (2018).</li>
<li>Egorova, A., Jackson, M., Gavrilyuk, V., Makarov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pipeline+of+anti-mycobacterium+abscessus+small+molecules%3A+Repurposable+drugs+and+promising+novel+chemical+entities%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Pipeline of anti-mycobacterium abscessus small molecules: Repurposable drugs and promising novel chemical entities.</a> Med Res Rev. 41 (4), 2350-2387 (2021).</li>
<li>Nuermberger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+animal+models+to+develop+new+treatments+for+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Using animal models to develop new treatments for tuberculosis.</a> Semin Respir Crit Care Med. 29 (5), 542-551 (2008).</li>
<li>Nuermberger, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+efficacy+testing+of+new+drug+candidates%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Preclinical efficacy testing of new drug candidates.</a> Microbiol Spectr. 5 (3), (2017).</li>
<li>Nicola, F., Cirillo, D. M., Lore, N. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+murine+models+to+study+lung+infection+with+mycobacterium+abscessus+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Preclinical murine models to study lung infection with mycobacterium abscessus complex.</a> Tuberculosis (Edinb). 138, 102301(2023).</li>
<li>Dartois, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+murine+models+for+the+testing+of+antimicrobials+against+mycobacterium+abscessus+pulmonary+infections%3A+Current+practices+and+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Preclinical murine models for the testing of antimicrobials against mycobacterium abscessus pulmonary infections: Current practices and recommendations.</a> Tuberculosis (Edinb). 147, 102503(2024).</li>
<li>Obregon-Henao, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+mycobacterium+abscessus+to+antimycobacterial+drugs+in+preclinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of mycobacterium abscessus to antimycobacterial drugs in preclinical models.</a> Antimicrob Agents Chemother. 59 (11), 6904-6912 (2015).</li>
<li>Lerat, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+antibiotic+activity+against+mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of antibiotic activity against mycobacterium abscessus.</a> J Infect Dis. 209 (6), 905-912 (2014).</li>
<li>Saliu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+infection+by+nontypeable+haemophilus+influenzae+fuels+airway+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22ERJ+Open+Res%22%5BJournal%5D)">Chronic infection by nontypeable haemophilus influenzae fuels airway inflammation.</a> ERJ Open Res. 7 (1), (2021).</li>
<li>Rodgers, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologically+relevant+murine+models+of+chronic+pseudomonas+aeruginosa+respiratory+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Biologically relevant murine models of chronic pseudomonas aeruginosa respiratory infection.</a> Pathogens. 12 (8), 1053(2023).</li>
<li>Hoover, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+pneumonia+model+in+immunocompetent+rodents+to+evaluate+antibacterial+efficacy+against+s.+Pneumoniae%2C+h.+Influenzae%2C+k.+Pneumoniae%2C+p.+Aeruginosa+or+a.+Baumannii%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A robust pneumonia model in immunocompetent rodents to evaluate antibacterial efficacy against s. Pneumoniae, h. Influenzae, k. Pneumoniae, p. Aeruginosa or a. Baumannii.</a> J Vis Exp. (119), e55068(2017).</li>
<li>Lore, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aminoglycoside-modifying+enzyme+eis2+represents+a+new+potential+in+vivo+target+for+reducing+antimicrobial+drug+resistance+in+mycobacterium+abscessus+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">The aminoglycoside-modifying enzyme eis2 represents a new potential in vivo target for reducing antimicrobial drug resistance in mycobacterium abscessus complex.</a> Eur Respir J. 60 (6), 2201541(2022).</li>
<li>Riva, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+chronic+mycobacterium+abscessus+lung+infection+in+immunocompetent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">A new model of chronic mycobacterium abscessus lung infection in immunocompetent mice.</a> Int J Mol Sci. 21 (18), 6590(2020).</li>
<li>Chang, V., Phillips, P. P. J., Imperial, M. Z., Nahid, P., Savic, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+clinical+development+pathways+to+advance+tuberculosis+regimen+development%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">A comparison of clinical development pathways to advance tuberculosis regimen development.</a> BMC Infect Dis. 22 (1), 920(2022).</li>
<li>Yang, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+granuloma+fibrosis+induced+by+agar-embedded+mycobacterium+abscessus+in+c57bl%2F6jnarl+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Pathological granuloma fibrosis induced by agar-embedded mycobacterium abscessus in c57bl/6jnarl mice.</a> Front Immunol. 14, 1277745(2023).</li>
<li>Poerio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+host-+and+pathogen-directed+therapy+for+the+control+of+mycobacterium+abscessus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Combined host- and pathogen-directed therapy for the control of mycobacterium abscessus infection.</a> Microbiol Spectr. 10 (1), e0254621(2022).</li>
<li>Pearce, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhaled+tigecycline+is+effective+against+mycobacterium+abscessus+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Inhaled tigecycline is effective against mycobacterium abscessus in vitro and in vivo.</a> J Antimicrob Chemother. 75 (7), 1889-1894 (2020).</li>
<li>De Groote, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gm-csf+knockout+mice+for+preclinical+testing+of+agents+with+antimicrobial+activity+against+mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Gm-csf knockout mice for preclinical testing of agents with antimicrobial activity against mycobacterium abscessus.</a> J Antimicrob Chemother. 69 (4), 1057-1064 (2014).</li>
<li>Facchini, M., De Fino, I., Riva, C., Bragonzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+chronic+pseudomonas+aeruginosa+airway+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long term chronic pseudomonas aeruginosa airway infection in mice.</a> J Vis Exp. (85), e51019(2014).</li>
<li>Degiacomi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+novel+drug+candidate+vomg+kills+mycobacterium+abscessus+and+other+pathogens+by+inhibiting+cell+division%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Antimicrob+Agents%22%5BJournal%5D)">The novel drug candidate vomg kills mycobacterium abscessus and other pathogens by inhibiting cell division.</a> Int J Antimicrob Agents. 64 (4), 107278(2024).</li>
<li>Rimal, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T405%2C+a+new+penem%2C+exhibits+in+vivo+efficacy+against+m.+Abscessus+and+synergy+with+beta-lactams+imipenem+and+cefditoren%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">T405, a new penem, exhibits in vivo efficacy against m. Abscessus and synergy with beta-lactams imipenem and cefditoren.</a> Antimicrob Agents Chemother. 66 (6), e0053622(2022).</li>
<li>Maggioncalda, E. C., Story-Roller, E., Ammerman, N. C., Nuermberger, E. L., Lamichhane, G. Progressive mycobacterium abscessus lung infection in c3heb/fej mice associated with corticosteroid administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaggioncalda%2C+EC+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>125mL 병</td><td>Corning</td><td>8388</td><td>멸균</td></tr><tr><td>3 x 3 튜브 홀딩 랙</td><td>Fisher</td><td>5972-0030PK</td><td>사용 전 소독</td></tr><tr><td>3D 프린팅 마우스 스탠드</td><td>Transworld Marketing&nbsp;</td><td>맞춤형 설계 및 생산</td> 사용 <td>전 소독</td></tr><tr><td>48웰 희석 플레이트</td><td>Celltreat&nbsp;</td><td>229192</td><td>멸균</td></tr><tr><td>50mL 원심분리기 튜브</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td>멸균</td></tr><tr><td>마취 기계</td><td>EZ 시스템</td><td>EZ-AF9000 SYSTEM</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Avanti J-15R&nbsp;</td><td>베크만 쿨터</td><td>&nbsp; B99517</td><td></td></tr><tr><td>리프트오프 뚜껑 랙의 원심분리기 배리어 피펫 팁 1000G</td><td>Thermo Scientific ART&nbsp;</td><td>21-236-2A</td><td>멸균</td></tr><tr><td>생물학적 위험 가방</td><td>Fisherbrand</td><td>22-044561</td><td></td></tr><tr><td>커넥터 링&nbsp;</td><td>pluriSelect</td><td>41-50000-03</td><td></td></tr><tr><td>코튼 팁 어플리케이터</td><td>Puritan&nbsp;</td><td>22-029-571</td><td>멸균</td></tr><tr><td>일회용 접종 루프 노란색 멸균 100 지퍼백</td><td>Cole-Parmer Essentials&nbsp;</td><td>03-391-562</td><td>멸균</td></tr><tr><td>일회용 폴리 라이닝 타월 드레이프</td><td>Dynarex</td><td>19-310-671</td><td>멸균</td></tr><tr><td>Dulbecco의 인산염 완충 식염수</td><td>Thomas Scientific</td><td>21-031-CM</td><td>멸균</td></tr><tr><td>깔때기</td><td>pluriSelect</td><td>42-50000</td><td>멸균</td></tr><tr><td>GE Ultrospec 10</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GE80211630</td><td>분광 광도계</td></tr><tr><td>Gentlemacs 조직 해리제</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-427</td><td>열 활성화되지 않음</td></tr><tr><td>해밀턴 주사기&nbsp;</td><td>해밀턴&nbsp;</td><td>80801</td><td>사용 전 소독</td></tr> 중<tr><td>광</td>유 <td>Sigma-Aldrich</td><td>330760-1L</td><td>멸균</td></tr><tr><td>이소플루란 용액 250ml 병 Covetrus</td><td></td><td>29405</td><td>피부 부식/자극: 구분 2, 심각한 눈 손상/눈 자극: 구분 2A, 특정 표적 장기 전신 독성(단일 노출): 구분 3 졸음 및 현기증을 유발할 수 있으며, 심각한 눈 자극을 유발하며, 피부 자극을 유발합니다. 흡입하지 말고 통풍이 잘 되는 곳에서 사용하십시오.</td></tr><tr><td>M 튜브 (gentleMACS)</td> <td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-335</td><td>멸균</td></tr><tr><td>마그네틱 교반기 MR Hei-Connect&nbsp;</td><td>Heidolph</td><td>505-40000-13-1</td><td></td></tr><tr><td>자기 교반 바</td><td>Thomas Scientific</td><td>&nbsp; 1181L08</td><td>멸균</td></tr><tr><td>기계식 피펫 100&ndash; 1000 & 마이크로; L&nbsp;</td><td>길슨 피펫맨 L&nbsp;</td><td>FA10006M</td> 기계식 피펫 20&ndash를 <td>사용하기 전에 소독했습니다</td></tr><tr><td>. 200 & 마이크로; L&nbsp;</td><td>길슨 피펫맨 L&nbsp;</td><td>FA10003MG</td><td>사용 전 소독</td></tr><tr><td>금속 동물 사료 바늘 24G</td><td>Braintree Scientific</td><td>N-VP 24G-1S</td> 멸<td>균(고압멸균)해야 함</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H10 Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0303-500G</td><td>멸균(고압멸균)</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H11 Agar</td><td>Thermo Fisher</td><td>R4554002</td><td>멸균(고압멸균)</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H9 미디엄</td><td>Beckton Dickinson</td><td>271310</td><td>멸균(고압멸균)</td></tr> <tr><td>마우스 스탠드 부품</td><td>TriMech 솔루션&nbsp;</td><td>SRV-AMS-FDM</td><td>사용 전 소독 비</td></tr><tr><td>흡수성 실크 봉합사</td><td>Fisher Scientific</td><td>18020-50</td><td>n/a</td></tr><tr>Middlebrook Media 500 ml <td>Thermo Scientific Remel&nbsp</td><td>와 함께 사용하기 위한 OADC 액체 농축;</td><td>R450605</td><td>멸균</td></tr><tr><td>PBS(10x), pH 7.4 멸균 여과 500mL</td><td>Gibco</td><td>70-011-044</td><td>멸균</td></tr><tr><td>Peroxiguard 물티슈</td><td>Peroxigard</td><td>29221</td><td>n/a</td></tr><tr><td>페트리 접시(투명 뚜껑 원형 100mmx 15mm</td><td>Fisherbrand&nbsp);</td><td>FB0875712</td><td>멸균</td></tr><tr><td>PluriStrainer 200 mm</td><td>pluriSelect</td><td>43-50200-03</td><td>멸균; 세포 여과기</td></tr><tr><td>롤러 병</td><td>Corning</td><td>430165</td><td>멸균</td></tr><tr><td>혈청학적 피펫</td><td>Corning</td><td>4489</td><td>멸균</td></tr> 분<tr><td>광 광도계 큐벳 1.5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14955127</td><td>멸균(고압멸균)</td></tr><tr><td>주사기 마개 또는 클립(나일론)</td> <td>Trimech&nbsp;</td><td>SRV-AMS-MJF</td><td>사용 전 소독</td></tr> 트<tr><td>립틱 콩 국물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8907-500G</td><td>멸균</td></tr><tr><td>트윈 80&nbsp;</td><td>피셔</td><td>170793</td><td>필터 멸균&nbsp;</td></tr><tr><td>와이드 보어 필터링 피펫 팁 리프트 오프 뚜껑 랙 200G&nbsp;</td><td>Thermo Scientific ART</td><td>21-236-1A</td><td>멸균</td></tr></tbody></table>

면역 능력이 있는 마우스를 기관내로 접종하기 위한 한천 비드 내장 마이코박테리움 농양의 제조

Preparation of Agar Bead Embedded Mycobacterium abscessus to Inoculate Immunocompetent Mice Intratracheally

비드 크기 및 부담 한천 비드 및 이의 박테리아 부담을 시각화하기 위해, mCherry 적색 형광 단백질을 Mab 유형 균주 ATCC 19977에서 구성적 Hsp60 프로모터 하에서 발현하고 상기한 바와 같이 이 균주를 한천 비드에 내장했습니다. 그림 1A 는 비드 크기의 범위를 보여줍니다(스케일 바 = 200μm). 그림 1B 는 6개의 독립적인 비드 제제의 부담을 보여주며, 설명된 절차의 재현성을 보여줍니다.
주사기 푸시스루(push-through) 및 기관내 접종 후 박테리아 주입(bacterial inplantion)의 도금 기관내 접종은 두 단계로 최적화되었습니다. CFU/mL는 비드가 주사기를 통과하고 연결된 튜브를 통과할 때 비드 또는 박테리아 손실이 발생하지 않도록 하기 위해 유리 주사기를 통과하기 전과 후에 접종물에 열거되었습니다. 표 1 은 두 개의 독립적인 비드 제제(시험 1 및 2)의 초기 박테리아 역가와 단일 주사기 로드에서 '푸시드스루' 샘플 100mL당 회수된 CFU 수를 보여줍니다. 비드 및 박테리아 손실을 방지하려면 금속 튜브에 연결된 유리 주사기가 필요합니다. 한천 구슬은 플라스틱 표면에 달라붙는 경향이 있습니다.
비드 준비에서 시간 경과에 따른 CFU 계수는 비드의 박테리아 부담이 1주 동안 4°C에서 안정적으로 유지되었으며 2주당 박테리아 부담이 ~2배 감소하고 폐 침착이 손상되지 않은 것으로 나타났습니다. 다음으로, 5 내지 8 마리의 마우스 그룹을 3 개의 독립적 인 비드 제제로 감염시켜 기관 내 접종 절차의 재현성을 테스트했습니다. 표 2 는 마우스당 폐 CFU의 수를 보여주며, 설명된 대로 감염 후 24시간 동안 열거되어 있습니다.
마지막으로, 감염의 운영자 간 재현성은 각각 다른 운영자가 수행한 10개의 CD-1 마우스로 구성된 3개 그룹을 감염시켜 평가했습니다. 감염 후 24시간 이내에 열거된 폐 CFU가 그림 2에 나와 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67602/67602fig01.jpg"> 
그림 1: 비드 크기를 평가하고 M. abscessus 박테리아 부하를 시각화 및 정량화하기 위한 파일럿 실험. (A) M. abscessus ATCC 19977 균주를 함유하는 한천 비드로, 구성적 hsp60 프로모터 하에서 mCherry 적색 형광 단백질을 발현하도록 조작되었습니다. 5μl의 비드 현탁액을 유리 슬라이드에 펴고 카메라(10x 대물렌즈)가 장착된 형광 현미경으로 이미지화했습니다. 각 빨간 점은 ~70-250 μm 범위의 직경의 한천 구슬 내에 둘러싸인 형광 박테리아 세포입니다. (B) 방법의 재현성을 보여주는 6개의 개별 비드 제제의 박테리아 부담(CFU/mL). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67602/67602fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67602/67602fig02.jpg"> 
그림 2: 감염의 작업자간 재현성. 10 CD-1 암컷 마우스 그룹은 동일한 비드 제제를 사용하여 설명된 대로 3명의 독립적인 작업자에 의해 기관내 감염되었습니다. 감염 후 24시간 동안 열거된 폐 CFU가 표시됩니다. O1, O2, O3: 연산자 1, 2, 3. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67602/67602fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td colspan="2">CFU/100 μL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">비드 준비</td>
			<td>트라이얼 1</td>
			<td>트라이얼 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.13E+05</td>
			<td>2.40E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>주사기 푸시스루 시료</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>1.14E+05</td>
			<td>5.10E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>1.36E+05</td>
			<td>4.10E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>9.30E+04</td>
			<td>3.90E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>9.80E+04</td>
			<td>3.60E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>1.14E+05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>평균의</td>
			<td>1.11E+05</td>
			<td>4.18E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>증권 시세 표시기</td>
			<td>1.69E+04 (15%)</td>
			<td>6.50E+04 (16%)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: 유리 주사기와 금속 공급 바늘을 통과한 후 100μL 샘플당 집락 형성 단위(CFU).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2">트라이얼 1</td>
			<td colspan="2">트라이얼 2</td>
			<td colspan="2">트라이얼 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>마우스 ID</td>
			<td>폐 CFU/마우스</td>
			<td>마우스 ID</td>
			<td>폐 CFU/마우스</td>
			<td>마우스 ID</td>
			<td>폐 CFU/마우스</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>남-1</td>
			<td>6.50E+03</td>
			<td>남-6</td>
			<td>2.20E+05</td>
			<td>남-11</td>
			<td>6.80E+04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>남-2</td>
			<td>1.10E+04</td>
			<td>남-7</td>
			<td>2.70E+05</td>
			<td>남-12</td>
			<td>1.70E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>남-3</td>
			<td>1.40E+04</td>
			<td>남-8</td>
			<td>8.10E+04</td>
			<td>남-13</td>
			<td>2.10E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>남-4</td>
			<td>3.20E+03</td>
			<td>엠-9</td>
			<td>1.40E+05</td>
			<td>남-14</td>
			<td>4.40E+04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>남-5</td>
			<td>4.50E+03</td>
			<td>남-10</td>
			<td>1.30E+05</td>
			<td>남-15</td>
			<td>7.50E+04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>남-16</td>
			<td>1.01E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>남-17</td>
			<td>7.00E+04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>남-18</td>
			<td>5.80E+03</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>평균의</td>
			<td>7.84E+03</td>
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표 2: 접종 24시간 후 마우스 폐에 한천 비드 내장 M. 농 양 이식

Robust mouse models of chronic infection with Mycobacterium abscessus, an environmental pathogen that preferably infects the lungs, are badly needed. ...

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

출처: Bernut, A. 외, 얼룩말피시 배아에서 Mycobacterium absrumus 의 발병기전 해독 및 영상 분석. J . Vis. Exp. (2015).이 영상은 감염된 제브라피시 배아에서 Mycobacterium abscessus 를 분리하고 정량화하는 프로토콜을 시연합니다. 이 절차는 배아 안락사, 조직 용해, 균질화를 통해 박테리아를 방출한 후, 원심분리 및 계면활성제 완충제 내 재현탁을 포함합니다. 마지막으로, 박테리아 현탁액을 연속적으로 희석하여 항생제 보조 한천에 도판한 후 배양하여 집락 형성과 정량화를 가능하게 합니다.

제브라피시 배아에서 박테리아 분리 및 배양하여 감염 용량 평가

이 비디오는 마취된 마우스의 전신 염증 유발을 보여줍니다. 마이코박테리아 항원 보조제 디포의 주입은 사이토카인 방출 및 국소 염증을 유발합니다. 림프관이 열려 면역 세포가 림프절로 들어갈 수 있게 되고 T세포가 활성화되어 전염증성 사이토카인을 방출하여 광범위한 염증을 유발합니다.

쥐 모델에서 전신 염증을 유발하기 위한 박테리아 항원의 피하 주사

이 비디오는 감염 후 포도막염을 연구하기 위해 프라임된 마이코세균성 포도막염(PMU)의 마우스 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 이전에 동일한 면역원으로 면역된 마우스에서 열에 의해 사멸된 결핵균의 유리체강내 주사에 의한 PMU를 유도한 후, 이미징 및 조직병리학적 검사를 사용하여 눈의 만성 염증의 진행을...

감염 후 포도막염을 연구하기 위한 프라이밍 마이코박테리아 포도막염의 쥐 모델

우리는 마우스 모델에서 지속적인 장기 만성 녹농균기도 감염을 확립하는 한천 비즈 방법을 서술.

장기 만성<em&gt; 녹농균</em마우스의&gt;기도 감염

광학적으로 투명한 제브라피시 배아는 병원성 미생물과 선천성 면역 세포 간의 상호 작용을 실시간으로 연구하고 시각화하는 데 널리 사용됩니다. 형광 이미징과 결합된 Mycobacterium abscessus의 미세 주입은 제브라피시 배아의 탯줄 형성과 같은 필수 병원성 특징을 면밀히 조사하는 데 사용됩니다.

영상 병인과의 Cording를 해독하고<em&gt; 미코 농양</em&gt; Zebrafish의 배아에서

피부에서 배출 림프절로의 세포 이동을 추적하기 위한 마우스의 분석법이 설명되어 Bacille Calmette-Guérin에 발바닥 패드 감염 후 림프절로 동원된 피부 수지상 세포의 특성을 분석할 수 있습니다.

와 감염시 배수 림프절에 쥐 피부 수지상 세포의 마이그레이션을 연구하는 CFSE 기반 분석<em&gt; 소 결핵균</em&gt; Bacille 칼 메트 - GUERIN

결핵균 (M. 결핵) 기자 효소 형광 (REF)를 사용 하 여 감염 된 쥐의 광학 이미징을 설명 합니다. 이 프로토콜 pathogenesis, 치료 및 백신 연구에 대 한 전 임상 동물 모델에 M. 결핵 의 과민 하 고 특정 탐지를 촉진 한다.

기자 효소 형광와 쥐에서 이미징 결핵균

여기, 선물이 식-진 균 abscessus 상호 작용을 공부 하는 두 개의 프로토콜: 세균 세포내 결핍 및 RNA에서 세균 세포내 transcriptome 결정 transposon 돌연변이 라이브러리의 심사 시퀀싱. 두 방법 모두 게놈 장점과 transcriptomic 적응 세포내 박테리아 체력 향상에 대 한 통찰력을 제공 합니다.

식 세포에서 세포내 복제에 대 한의 진 균 abscessus 독성 마커의 식별

이 보고서에서 우리는 조사자가 안내 포도막염의 마우스 모델을 생성 할 수있는 프로토콜을 제시합니다. 더 일반적으로 실험적 자가면역 포도막염(EAU)이라고 하는 이 확립된 모델은 인간 질병의 여러 측면을 포착합니다. 여기에서는 여러 판독값을 사용하여 질병 진행을 유도하고 모니터링하는 방법을 설명합니다.

실험적 자가면역 포도막염: 안구내 염증성 마우스 모델

이 프로토콜은 마우스에서 프라이밍 된 마이코 박테리아 포도막염 (PMU)을 유도하는 단계를 설명합니다. 이 방법은 마우스 모델 시스템에서 신뢰할 수 있고 강력한 안구 염증을 생성하는 데 도움이 되는 단계를 간략하게 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하여 면역학, 전사 및 단백질체학 분석을 통한 추가 평가를 위해 단일 동물에서 포도막 눈과 염증이 없는 동료 눈을 생성했습니다.

감염 후 포도막염의 모델로서의 프라이밍 된 마이코 박테리아 포도막염 (PMU)

여기에서는 노출과 유사한 조건을 반영하기 위해 마우스 귀에 Mycobacterium avium 을 저선량 피내 접종하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

쥐 귀에 Mycobacterium avium 의 피내 접종

학습하세요 면역 능력이 있는 마우스에서 한천 비드 내장 Mycobacterium abscessus를 기관내로 접종하여 만성 폐 감염 모델을 만드는 방법을. 이 프로토콜은 항생제 효능 평가를 위한 강력한 전임상 도구를 제공합니다.

면역 능력이 있는 마우스를 기관내로 접종하기 위한 한천 비드 내장 마이코박테리움 농양의 제조

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