Name: 고염 식단 조건에서 소금에 민감한 쥐의 장내 미생물 세포 외 소포의 분리 및 차등 특성화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T15:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: 배우세요 고염 식단 조건에서 소금에 민감한 쥐의 장내 미생물 세포 외 소포를 밀도 구배 원심분리법으로 분리하고 특성화하는 방법입니다. 이 기술은 고혈압 연구에서 장내 미생물 상호작용을 이해하는 데 기여합니다.

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<ol><li>Thursby, E., Juge, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+to+the+human+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Introduction to the human gut microbiota.</a> Biochem J. 474 (11), 1823-1836 (2017).</li>
<li>Aschtgen, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotation+of+Vibrio+fischeri+Flagella+Produces+Outer+Membrane+Vesicles+That+Induce+Host+Development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Rotation of Vibrio fischeri Flagella Produces Outer Membrane Vesicles That Induce Host Development.</a> J Bacteriol. 198 (16), 2156-2165 (2016).</li>
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<li>Wilck, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salt-responsive+gut+commensal+modulates+T%28H%2917+axis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Salt-responsive gut commensal modulates T(H)17 axis and disease.</a> Nature. 551 (7682), 585-589 (2017).</li>
<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+Gastrin%2FCCKBR+%28Cholecystokinin+B+Receptor%29+Ameliorates+Salt-Sensitive+Hypertension+by+Inhibiting+Intestinal+Na%28%2B%29%2FH%28%2B%29+Exchanger+3+Activity+Through+a+PKC+%28Protein+Kinase+C%29-Mediated+NHERF1+and+NHERF2+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Intestinal Gastrin/CCKBR (Cholecystokinin B Receptor) Ameliorates Salt-Sensitive Hypertension by Inhibiting Intestinal Na(+)/H(+) Exchanger 3 Activity Through a PKC (Protein Kinase C)-Mediated NHERF1 and NHERF2 Pathway.</a> Hypertension. 79 (8), 1668-1679 (2022).</li>
<li>Zheng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+of+liver-yang+hyperactivity+syndrome+induced+by+a+high+salt+diet+by+altering+components+of+the+gut+microbiota+associated+with+the+glutamate%2FGABA-glutamine+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">Hypertension of liver-yang hyperactivity syndrome induced by a high salt diet by altering components of the gut microbiota associated with the glutamate/GABA-glutamine cycle.</a> Front Nutr. 9, 964273(2022).</li>
<li>Mulligan, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+TEM+Specimen+Preparation+and+Analysis+of+Plasmonic+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">Multiplexed TEM Specimen Preparation and Analysis of Plasmonic Nanoparticles.</a> Microsc Microanal. 21 (4), 1017-1025 (2015).</li>
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<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alleviation+of+colitis+by+honeysuckle+MIR2911+via+direct+regulation+of+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Alleviation of colitis by honeysuckle MIR2911 via direct regulation of gut microbiota.</a> J Control Release. 376, 123-137 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>필수 용품</td><td></td><td></td><td></td></tr>원<tr><td>심 필터(10nkDa 2 mL)</td><td>Millipore</td><td>UFC903096</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜드(50 mL)</td><td>BKMAN</td><td>20220404</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜드</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>Z30815SCA</td><td></td></tr><tr><td>진공 여과 시스템</td><td>Biosharp</td><td>24902581</td><td></td></tr><tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chromogenic LAL Endotoxin Assay Kit</td><td>Beyotime</td><td>022124240705</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie Blue Fast Staining Solution</td><td>Beyotime</td><td>Z972241010</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Damas-beta</td><td>P3117308</td><td></td></tr><tr><td>Enhanced BCA Protein Assay Kit</td><td>Beyotime</td><td>A006241112</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>KESH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>OptiPrep (60% wt/vol, iodixanol)</td> <td>Serumwerk</td><td>00124</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Labshark</td><td>130114005</td><td></td></tr><tr><td>포스포텅스텐산</td><td>RUIXIN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>자당</td><td>Damas-베타</td><td>P1917057</td><td></td></tr><tr><td>Tris(VWR)</td><td>Damas-베타</td><td>P3061764</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루 염색 용액(0.4%)</td>, <td>Beyotime</td><td>BD07242904</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Absorbance Microplate Reader</td><td>SpectraMax</td><td>ABP01690</td><td></td></tr><tr><td>Biomicroscope</td>, <td>Motic</td><td>BA210Digital</td><td></td></tr><tr><td>Desk 원심분리기</td><td>Cence</td><td>CHT210R</td><td></td></tr><tr><td>데스크탑 고속 마이크로 원심분리기</td><td>DLAB</td><td>D3024</td><td></td></tr><tr><td>고정 각도 알루미늄 로터 + 500 mL 원심 컵</td><td>Cence</td><td></td><td></td></tr><tr><td>고정밀 전자 저울</td><td>SKR</td><td>BN-200</td><td></td></tr><tr><td>층류 캐비닛</td><td>Nantong Hunan Scientific Instrument Co., Ltd.</td><td>SW-CJ-2FDS</td><td></td></tr><tr><td>SW 32.1 Ti 스윙 버킷 턴+ SW 32.1 Ti 로터 버킷</td><td>BECKMAN COULTER</td><td></td><td></td></tr><tr><td>투과 전자 현미경</td><td>JEOL</td><td>JEOL-1400FLASH</td><td></td></tr><tr><td>튜브 로테이터</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>초원심분리기</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>Optima XE-100</td><td></td></tr><tr><td>초순수 시스템</td><td>ULPHW</td><td>UPR-II-15TNZ</td><td></td></tr><tr><td>Water-Cieculation 다기능 진공 펌프</td><td>Qiang Qiang</td><td>SHZ-D(III)</td><td></td></tr></tbody></table>

고염 식단 조건에서 소금에 민감한 쥐의 장내 미생물 세포 외 소포의 분리 및 차등 특성화

Separation and Differential Characterization of Gut Microbial Extracellular Vesicles in Salt-Sensitive Rats under High-Salt Diet Conditions

EV의 농도는 서로 다른 분획으로 측정되었습니다(그림 2A). 실험 결과는 EV의 농도가 일련의 밀도 구배 솔루션에서 일반적인 정규 분포 패턴을 나타내는 것으로 나타났습니다(그림 2B). 구체적으로, 분수 9에서 EV의 농도가 최고점(3.85 x 109)에 도달했으며, 이는 EV의 주분포 분율이 936일 수 있음을 시사합니다.
단백질 함량을 측정하기 위해 BCA 키트를 사용하여 다양한 분획의 단백질 함량을 평가했습니다(그림 2C). 이 방법에서 분획 9의 단백질 함량은 0.417μg/μL였으며, 이는 EV의 분포를 더욱 입증합니다. LPS는 그람 음성 박테리아 37,38의 고유한<sup class=...

High salt intake is a major risk factor for hypertension, and its underlying mechanism may be closely linked to extracellular vesicles (EVs) secreted by ...

separation-differential-characterization-gut-microbial-extracellular

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

출처: Cian, M. B. et. al., Acinetobacter baumannii에 대한 기술적 조정을 통해 그람 음성 박테리아에 대한 세포 외피를 내막 및 외막 분획으로 분리. J. Vis. 경험. (2020년)이 비디오는 자당 구배 초원심분리를 사용하여 그람 음성 박테리아의 내막 및 외막 분획을 분리하는 방법을 보여줍니다. 멤브레인 분획은 멤브레인 특정 성분의 표적 분석을 위해 정제 및 저온에서 저장됩니다.

그람 음성 박테리아의 내막 및 외막 분획의 분리

출처: 왓슨, DC, et.al. 대장균 및 기타 박테리아로부터 세포외 소포의 확장 가능한 분리 및 정제. J. Vis. 경험. (2021년)이 비디오는 유전자 조작 박테리아의 외막에서 파생된 세포외 소포(EV)의 분리 및 농축을 보여줍니다. 이 과정에는 박테리아를 배양하여 EV를 방출한 다음 세포와 잔해물을 제거하기 위한 순차적 원심분리 및 여과 단계가 포함됩니다. 마지막으로, 한외여과는 다운스트림 분석을 위해 EV를 농축하는 데 사용됩니다.

박테리아로부터 외막 유래 세포외 소포의 분리 및 농축

결핵 균은 낮은 철 조건에 응하여 세포외 소포의 증가된 생산 그리고 방출을 보여줍니다. 이 작품은 철 결핍에 응하여 풀어 놓인 진균 세포외 소포의 정제 그리고 특성화를 위한 낮은 철 조건 및 방법을 생성하기 위한 프로토콜을 상세히 기술합니다.

철분 제한 마이코박테리아에 의해 생성된 세포외 소포의 격리 및 특성화

세균성 소포는 병인에 중요한 역할을 하고 유망한 생명 공학 응용 프로그램이 있습니다. 소포의 이질성은 분석과 사용을 복잡하게 합니다. 따라서 다양한 크기의 소포를 분리하는 간단하고 재현 가능한 방법이 필요합니다. 여기에서, 우리는 Aggregatibacter actinomycetemcomitans에의해 생성된 이기종 소포를 분리하기 위하여 크기 배제 크로마토그래피의 사용을 보여줍니다.

크기 배제 크로마토그래피는 세균 외부 막 소포 이질성을 분석

박테리아는 생리 활성 생물학적 분자를 운반하는 나노 미터 크기의 세포 외 소포 (EV)를 분비합니다. EV 연구는 생물 발생, 미생물-미생물 및 숙주-미생물 상호 작용 및 질병에서의 역할, 잠재적 인 치료 응용 프로그램을 이해하는 데 중점을 둡니다. EV 연구의 표준화를 촉진하기 위해 다양한 박테리아로부터 EV를 확장 가능한 분리를 위한 워크플로우가 제시됩니다.

대장균 및 다른 박테리아로부터의 세포외 소포의 확장 가능한 분리 및 정제

본 프로토콜은 시아노박테리아 배양물로부터의 세포밖 소포의 분리, 농도 및 특성화에 대한 상세한 설명을 제공한다. 서로 다른 규모의 문화에서 소포를 정화하기위한 접근법, 방법론 간의 절충점 및 현장 샘플 작업을위한 고려 사항도 논의됩니다.

시아 노 박테리아 세포 밖 소포의 분리 및 특성 분석

여기서 목표는 심혈관 질환에서 dysbiosis의 메커니즘을 조사하기 위한 프로토콜을 설명하는 것입니다. 이 논문은 쥐 분변 샘플을 무균적으로 수집 및 이식하고, 장을 분리하고, "Swiss-roll" 방법을 사용한 다음 면역염색 기술을 사용하여 위장관의 변화를 조사하는 방법에 대해 설명합니다.

쥐 분변 분리 및 미생물군 이식

이 연구는 밀도 구배 원심분리(DGC)를 통해 인간의 대변에서 농축된 박테리아 세포외 소포체(BEV)를 분리 및 정제하는 방법을 설명하고, 형태, 입자 크기 및 농도에서 BEV의 물리적 특성을 식별하고, 임상 및 과학 연구에서 DGC 접근 방식의 잠재적 응용 분야에 대해 논의합니다.

Density Gradient Centrifugation을 사용한 인간 대변에서 박테리아 세포외 소포의 분리 및 정제

이 논문은 다음을 설명합니다: (1) 신생아 마우스에게 DOL 6 초기부터 경구 개베지 분자를 전달하는 것; 그리고 (2) DOL 10부터 이유기(DOL 20) 새끼 생검에서 Ussing 챔버를 이용한 세포 간 및 세포 간 투과성을 평가하여 대장실 상피 장벽 기능을 체 외 평가.

신생아 마우스 새끼의 구강 개비지와 사용 챔버를 이용한 장 장벽 무결성 기능 평가

창 자 미생물 호스트 상호 작용은 합성 구두 커뮤니티, 생체 외에서 위장 소화, 그리고 소장 상피의 모델을 결합 하 여 새로운 접근 방식을 사용 하 여 평가 됐다. 우리 세포 침입 병원 체와 다중 종 biofilms의 평가 또는 테스트 probiotic 정립 생존 적응 될 수 있는 방법 제시.

생체 외에서 직감 호스트 미생물 인터페이스에 합성 세균 컨소시엄의 생존 능력을 평가

배우세요 고염 식단 조건에서 소금에 민감한 쥐의 장내 미생물 세포 외 소포를 밀도 구배 원심분리법으로 분리하고 특성화하는 방법입니다. 이 기술은 고혈압 연구에서 장내 미생물 상호작용을 이해하는 데 기여합니다.

고염 식단 조건에서 소금에 민감한 쥐의 장내 미생물 세포 외 소포의 분리 및 차등 특성화

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