Ontcijfering Axonale Pathways van genetisch bepaalde groepen van neuronen in de Chick Neural Tube Door gebruik te maken In ovo Elektroporatie

Summary

Deze video laat zien hoe axonale paden van genetisch bepaalde groepen neuronen te visualiseren in de embryonale kuiken ruggenmerg gebruik te maken van In ovo Elektroporatie van de reportergenen onder de controle van specifieke enhancer elementen.

Abstract

Tewerkstelling van enhancer elementen om de expressie van reportergenen rijden in neuronen is een veel gebruikt model voor het bijhouden van axonale projectie. Voor het volgen van axonale projectie van spinale interneuronen in gewervelde dieren, kiemlijn gerichte reportergenen opbrengst bilateraal symmetrisch etikettering. Daarom is het moeilijk om onderscheid te maken tussen de ipsi-en contra-lateraal uitstekende axonen. Eenzijdige elektroporatie in het kuiken neurale buis is een nuttig middel om de expressie van een reportergen te beperken tot een kant van het centrale zenuwstelsel, en om axonale projectie te volgen aan beide zijden

Protocol

I. Elektroporatie

Eierbehandeling

1. Leg de eieren in een vochtige incubator ingesteld op 37-38 ° C, bij voorkeur een incubator met een rockende laden.
2. Embryo worden geëlektroporeerd na ongeveer 66 uur van de incubatietijd, wanneer zij hebben bereikt Hamburger & Hamilton (HH) fase 18-20. In dit stadium het hoofd ligt in een rechte hoek ten opzichte van de romp (aandoening, de zogenaamde cervicale buiging) en een uitgebreide set van extra-embryonale bloedvaten, zoals de voorste, achterste, rechts en links vitelline aderen moet worden gezien. Dit is een optimale podium voor enhancer-afhankelijke specifieke expressie ^1,3,....

Discussion

Elektroporatie van plasmide DNA in het kippenembryo ontwikkelt zich als een krachtige techniek voor in vivo ectopische expressie. De combinatie van specifieke enhancers, en chick elektroporatie biedt een snelle en efficiënte tool voor het ontcijferen van axonale paden van een genetisch bepaalde groep neuronen ^1,3,5. Gebruik makend van de Cre / loxP en de Gal4/UAS versterking systemen kunnen vergroten het niveau en de duur van meningsuiting. De opkomende beeld is van een complex divergentie van axonale signale.......