Method Article

Het isoleren van stamcellen uit Soft musculoskeletale weefsels

DOI:

10.3791/2011

⸱

July 5th, 2010

 ,  , 
1Stem Cell Research Center, Childrens Hospital of Pittsburgh of UPMC, 2Department of Bioengineering, University of Pittsburgh, 3Department of Orthopedic Surgery, University of Pittsburgh, 4Department of Pathology, University of Pittsburgh, 5Department of Molecular Genetics & Biochemistry, University of Pittsburgh

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het isoleren van volwassen stamcellen uit spier-en zachte weefsels op basis van de cel naleving snelheid kolf.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Volwassen stamcellen zijn al lang besproken met betrekking tot de toepassing ervan in regeneratieve geneeskunde. Volwassen stamcellen hebben geleid tot een veel opwinding voor de behandeling van gewonde en zieke weefsels als gevolg van hun indrukwekkende mogelijkheden om multi-lijn celdifferentiatie en hun zelf-vernieuwing kunnen ondergaan. Het belangrijkste is, hebben deze eigenschappen hen voordelig voor gebruik in de autologe stamceltransplantatie therapieën. Het huidige protocol zal introduceren de lezers op de gewijzigde preplate techniek waarbij zachte weefsels van het bewegingsapparaat, zoals pees-en spier, zijn een

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In het algemeen, de complete gewijzigde preplate procedure vereist 1-2 dagen van voorbereiding, 1 week van het uitvoeren van de technische procedure, 2-3 dagen van cel identificatie met immunocytochemie, en een extra 2-3 weken van stamcel populatie expansie. De apparatuur die nodig is voor stamcellen cultuur zijn vergelijkbaar met die van andere celkweek systemen die een bench-top centrifuge, CO 2 incubator, Laminaire stroming weefselkweek kap en een omgekeerde microscoop uitgerust met fluorescentie en een digitale camera bevat. De geïsoleerde stamcellen ook gekloond kunnen worden en kunnen opgeslagen worden op lange termijn in vloeibare stikstof voor de h....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het is bekend dat sommige volwassen weefsels meerdere stamcellen bevatten. In de afgelopen jaren van studie, zijn stamcellen aangetroffen in de zachte musculoskeletale weefsels, waaronder skeletspier en pezen. Deze huidige protocol details een procedure, die bekend staat als de gewijzigde preplate techniek, die met succes is gebruikt in ons laboratorium om volwassen stamcellen uit pezen en skeletspieren te isoleren. Met behulp van de gewijzigde preplate beschreven techniek boven de cellen kunnen worden onderverdeeld in .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Geen belangenconflicten verklaard.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs zijn zeer erkentelijk voor mevrouw Haiying Pan en de heer Ian Bellayr voor hun technische hulp op celisolatie voor de huidige films en de heer Kyle Holden en de heer Jonathan Lucas voor hun hulp op dia bewerken. Veel dank aan de volgende lijst van personen die betrokken zijn geweest bij de ontwikkeling van de gewijzigde preplate technieken die de afgelopen jaren: Drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, Kimimasa Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. We zijn dankbaar voor de technische bijstand van James H. Cummins, Ryan Pruchnic, Joseph Feduska, Rebecca C. Schugar, Ha....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMInvitrogen#11995-073
FBSInvitrogen#10437-028
Heat-inactivated horse serumInvitrogen#26050-088
Chick embryo extractAccurate Chemical#CE650T-10
100U ml penicillin/streptomycinInvitrogen#15140-122
Dulbecco's PBSInvitrogen#14190-250
Hank's Buffered Salt SolutionInvitrogen#24020-117
Collagenase type XI 0.2%(wt/vol)Sigma-Aldrich#C7657
Dispase2.4U mlInvitrogen#17105-041
Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250)Invitrogen#15400-054
Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g literSigma-Aldrich#C-9791
DMSOSigma#D-2650

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
  2. Qu-Petersen, Z. Identificatio....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Stem Cell IsolationMusculoskeletal TissueEnzymatic DigestionPreplate TechniqueCollagen Coated FlaskCell DissociationFlow CytometryImmunofluorescenceMicroscopyProliferation Medium

Related Articles