Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Het benutten van de Bioorthogonal Inverse Electron Demand Diels-Alder Cycloadditiereacties voor Pretargeted PET Imaging

8.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/52335

⸱

3 februari 2015

 ,  , 
1Department of Radiology, Memorial Sloan Kettering Cancer Center

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

De bioorthogonale inverse elektrone-vraag Diels-Alder cycloadditie is gebruikt om een effectieve en modulaire pretargeted PET-beeldvormingsstrategie voor kanker te creëren. In dit protocol worden de stappen van deze methodologie beschreven in de context van een modelsysteem dat gebruikmaakt van het op colorectale kanker gerichte antilichaam huA33 en een 64Cu-gelabelde radioligand.

Samenvatting

Vanwege hun exquise affiniteit en specificiteit zijn antilichamen uiterst veelbelovende vectoren geworden voor de toediening van radio-isotopen aan kankercellen voor PET-beeldvorming. De noodzaak om antilichamen te labelen met radionucliden met lange fysische halfwaardetijden leidt echter vaak tot hoge achtergrondstralingdosissen voor niet-doelweefsels. Om dit probleem te omzeilen, hebben we een pretargeted PET-beeldvormingsstrategie gebruikt die is gebaseerd op de inverse elektronenvraag Diels-Alder cycloadditiereactie. De methodologie koppelt het antilichaam los van de radioactiviteit en benut zo de positieve kenmerken van antilichamen, terwijl het de farmacokinetische nadelen vermijdt. Het systeem bestaat uit vier stappen: (1) de injectie van een mAb-trans-cycloocteenkoppelstof (TCO); (2) een lokalisatieperiode waarin het antilichaam zich accumuleert in de tumor en uit het bloed verdwijnt; (3) de injectie van het radioactief gelabelde tetrazine; en (4) de in vivo klikligatie van de componenten, gevolgd door de klaring van overtollig radioligand. In het voorbeeld dat in het werk wordt gepresenteerd, werd met succes een 64Cu-NOTA-gelabelde tetrazine radioligand en een trans-cycloocteengeconjugeerd gehumaniseerd antilichaam (huA33) gebruikt om SW1222 colorectale kankertumoren af te bakenen met een hoge tumor-tot-achtergrond contrast. Verder produceert de pretargeting-methodologie hoge kwaliteit beelden met slechts een fractie van de stralingsdosis voor niet-doelweefsel die wordt gecreëerd door radio-immunoconjugaten die direct zijn gelabeld met 64Cu of 89Zr. Uiteindelijk is de modulariteit van dit protocol een van zijn grootste troeven, aangezien de trans-cycloocteengroepering kan worden toegevoegd aan elk niet-internaliserend antilichaam, en het tetrazine kan worden gekoppeld aan een breed scala van radio-isotopen.

Inleiding

In de afgelopen dertig jaar heeft positron emissie tomografie (PET) uitgegroeid tot een onmisbaar instrument in de klinische diagnostiek en behandeling van kanker. Antilichamen zijn lang beschouwd als veelbelovend vectoren voor het afgeven van positron emitterende radio-isotopen tumoren vanwege hun uitstekende affiniteit en specificiteit voor kanker biomarkers. 1,2 De relatief langzame in vivo farmacokinetiek van antilichamen draagt ​​het gebruik van radio-isotopen met meerdaagse de fysische halfwaardetijd. Deze combinatie kan een hoge stralingsdoses geven de niet-doelorganen patiënten, een belangrijke complicatie die van bijzonder klinisch belang omdat radioimmunoconjugaten intraveneus en daarom geïnjecteerd - in tegenstelling gedeeltelijke body CT scans - leiden tot geabsorbeerde doses in elk deel van het lichaam, ongeacht de ondervraagde weefsels.

Om dit probleem te omzeilen, heeft aanzienlijke inspanningen werden gewijd aan de ontwikpment van PET-imaging strategieën die de radio-isotoop en het richtende deel los te koppelen, waardoor gebruik te maken van de gunstige eigenschappen van antilichamen en tegelijkertijd plinten hun intrinsieke farmacokinetische beperkingen. Deze strategieën - het vaakst genoemd pretargeting of multistep targeting - typisch dienst vier stappen: (1) de toediening van een antilichaam kan binden zowel een antigeen en een radioligand; (2) de accumulatie van het antilichaam in het doelweefsel en de klaring uit het bloed; (3) de administratie van een klein molecuul radioligand; en (4) het in vivo ligatie van de radioligand aan het antilichaam, gevolgd door de snelle klaring van overmaat radioligand. 3-8 In sommige gevallen een extra klaringsmiddel wordt geïnjecteerd tussen stap 2 en 3 om de uitscheiding van antilichaam versnellen die straks de tumor binden en blijft in het bloed. 5

In grote lijnen, two soorten pretargeting strategieën meest voor in de literatuur. Hoewel beide succesvol zijn gebleken in preklinische modellen, ze bezitten ook belangrijke beperkingen die hun klinische toepasbaarheid hebben belemmerd. De eerste strategie is gebaseerd op de hoge affiniteit tussen streptavidine-geconjugeerde antilichamen en biotine gemodificeerde radiolabels; De immunogeniciteit van de met streptavidine gemodificeerde antilichamen heeft bewezen een zorgwekkende problemen betreffende de vertaling,. 5,6,9,10 De tweede strategie daarentegen stelt bispecifieke antilichamen die zijn genetisch gemanipuleerde zowel kanker binden biomarker antigeen en een klein molecuul radioactief hapteen. 3,11-14 Hoewel dit laatste route zeker creatief is de brede toepasbaarheid beperkt door de complexiteit, kosten en gebrek aan modulariteit van het systeem.

Onlangs hebben we ontwikkeld en publiceerde een pretargeted PET imaging methode op basis van de inverse elektron vraag Diels-Alder (IEDDA) cycloadditiereactie tussen trans -cyclooctene (TCO) en tetrazine (Tz;. Figuur 1) 11 Terwijl de reactie zelf is al decennia bekend, heeft IEDDA chemie een renaissance van de afgelopen jaren als een klik chemie bioconjugatie techniek, zoals geïllustreerd door het fascinerende werk van de groepen van Ralph Weissleder, Joseph Vos en Peter Conti onder anderen. 12-15 De IEDDA cycloadditiereactie heeft in een breed scala van instellingen werden toegepast, met inbegrip van fluorescentie beeldvorming met peptiden, antilichamen, en nanodeeltjes evenals nucleaire beeldvorming . met zowel radiohalogens en radiometals 16-26 De ligatie is een hoge opbrengst, schoon, snel (k 1> 30.000 M -1 sec -1), selectief, en - kritisch -. bioorthogonal 27 En terwijl een aantal soorten van click chemie - waaronder Cu gekatalyseerde azide-alkyn cycloaddities, stam bevorderde azide-alkyn cycloaddities en Staudinger ligaties -. zijn bioorthogonal als goed, het is de unieke combinatie van snelle reactie kinetiek en bioorthogonality dat maakt IEDDA chemie zo goed geschikt voor pretargeting toepassingen in hele organismen 28,29 Langs deze lijnen, is het belangrijk op te merken dat het recente rapport van onze laboratoria was niet de eerste die IEDDA chemie toepassing op pretargeting: het eerste verslag van pretargeted beeldvorming met IEDDA is ontstaan ​​uit het werk van Rossin, et al en werd gekenmerkt door een SPECT methode gebruik van een 111-gelabeld tetrazine 30..

Zoals hierboven besproken, de pretargeting methode vier relatief eenvoudige stappen (figuur 2). In het protocol bij de hand, een pretargeted strategie voor PET beeldvorming van colorectale kanker die een 64 Cu-NOTA gelabelde tetrazine radioligand en een TCO-gemodificeerde conjugaat van antilichaam huA33 werken worden beschreven. Echter, uiteindelijk de modulariteit van deze methode is een van de grdaarvan eet activa, trans -cyclooctene groep kan worden toegevoegd aan een niet-internaliserende antilichamen en de tetrazine kan worden aan diverse radioactieve reporters.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

ETHIEK STATEMENT: Alle van de in vivo dierproeven beschreven werden uitgevoerd volgens een goedgekeurd protocol en onder de ethische richtlijnen van het Memorial Sloan Kettering Cancer Center Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC).

1. Synthese van Tz-Bn-NOTA

  1. In een klein reactievat, ontbinden 7 mg NH 2 -BN-NOTA (1,25 x 10 -2 mmol) in 600 ul NaHCO3 buffer (0,1 M, pH 8,1). Controleer de pH van de oplossing. Indien nodig, de pH van de oplossing tot 8,1 met kleine hoeveelheden van 0,1 M Na 2 CO 3.
  2. Voeg de NH2 -BN-NOTA oplossing 0,5 mg Tz-NHS (1,25 x 10 -3 mmol) in een 1,7 ml microcentrifugebuis.
    OPMERKING: De Tz-NHS kan ofwel worden afgewogen droog of toegevoegd vanuit een stockoplossing van droge DMF of DMSO (<50 pi).
  3. Laat de verkregen reactieoplossing reageren gedurende 30 min bij KTonder zacht roeren.
  4. Na 30 min, zuivert het product met omgekeerde fase C18 HPLC chromatografie gereageerde NH2 -BN-NOTA verwijderen. De NH2 -BN-NOTA kunnen worden gevolgd bij een golflengte van 254 nm, terwijl de Tz-NHS en Tz-Bn-NOTA best gevolgd bij een golflengte van 525 nm.
    OPMERKING: De retentietijden zijn uiteraard sterk afhankelijk van de HPLC-uitrusting opstart van elk laboratorium (pompen, kolommen, buizen, enz.). Echter, om een voorbeeld te presenteren, als een gradiënt van 0: 100 MeCN / H2O (beide met 0,1% TFA) tot 100: 0 MeCN / H2O gedurende 25 min en een analytisch 4,6 x 250 mm C 18 kolom gebruikt , de retentietijden van Tz-Bn-NOTA, Tz-NHS, en NH 2 -BN-NOTA zal ongeveer 15 min, 16,5 min en 10 min, respectievelijk. Het product kan worden gezuiverd van de andere reactiecomponenten in een enkele run of meerdere runs met een semi-preparatieve of preparatieve C 18 HPLC-kolom. 1H-NMR, analeytical HPLC, en ESI-MS zijn alle methoden die kunnen worden gebruikt om de zuiverheid van de voltooide Tz-Bn-NOTA precursor controleren. 11
  5. Bevries de verzamelde HPLC eluens met behulp van vloeibare stikstof.
  6. Wikkel de collectie buis in ondoorzichtige aluminiumfolie.
  7. Leg de bevroren collectie buis in een vriesdrogen vat O / N om het HPLC mobiele fase te verwijderen.
  8. Bewaar het gezuiverde product (heldere roze vaste stof) in het donker bij -80 ° C.
    Opmerking: Dit is een aanvaardbare stopplaats in de procedure. De voltooide Tz-Bn-NOTA precursor is stabiel gedurende tenminste 1 jaar onder deze omstandigheden.

2. Voorbereiding van huA33-TCO immuunconjugaat

  1. In een 1,7 ml microcentrifugebuis, stelt een 1 mg / ml (2,7 mM) oplossing van TCO-NHS in droge DMF.
  2. In een 1,7 ml microcentrifugebuis, stelt een 2 mg / ml (13,3 uM) oplossing van huA33 in 1 ml fosfaat gebufferde zoutoplossing, pH 7,4 (0,01 M PO 4 3- 0.154 M NaCl).
  3. Gebruik van kleine hoeveelheden (<5 ui) 0,1 M Na 2 CO 3, de pH van het antilichaam oplossing 8,8-9,0. Gebruik ofwel pH-papier of een pH-meter met een micro-elektrode om de pH te controleren, en wees voorzichtig niet om de pH boven pH 9,0 te stijgen.
  4. Zodra het antilichaam oplossing de juiste pH, voeg een volume van de TCO-NHS die overeenkomt met 8 molaire equivalenten van de geactiveerde ester. Voeg bijvoorbeeld 7.9 ul van de 1 mg / ml TCO-NHS oplossing (1,07 x 10 -7 mol TCO-NHS) tot 1 ml 2 mg / ml huA33 antilichaam oplossing (1,33 x 10 -8 mol huA33). Niet meer dan 5% DMF per volume in de oplossing.
  5. Meng de oplossing door het omkeren van de microcentrifugebuisje meerdere malen.
  6. Wikkel de microcentrifugebuisje in ondoorzichtige aluminiumfolie.
  7. Laat de oplossing geïncubeerd gedurende 1 uur bij kamertemperatuur onder zacht roeren.
  8. Na 1 uur bij KT, zuiveren de resulterende immunoconjugaat met een voorverpakte wegwerp SIZe uitsluiting ontzoutingskolom. Ten eerste spoel de grootte-uitsluiting beschreven door de leverancier conserveringsmiddelen aanwezig op de kolom tijdens opslag te verwijderen. Voeg vervolgens het reactiemengsel om de grootte-uitsluiting, spoel de kolom met 1,5 ml 0,9% steriele zoutoplossing, en vervolgens het product met 2 ml 0,9% steriele zoutoplossing als elutiemiddel verzamelen.
    OPMERKING: Deze stap zal het ingevulde huA33-TCO opleveren als een 2 ml oplossing.
  9. Meet de concentratie van de verkregen huA33-TCO op een UV-Vis spectrofotometer.
  10. Als een hogere concentratie gewenst, concentreren de huA33 TCO-oplossing met behulp van een centrifugale filtereenheid met een 50.000 molecuulgewicht cut-off.
    Opmerking: Het is belangrijk op te merken dat terwijl huA33 en diverse andere bekende antilichamen (bijvoorbeeld bevacizumab, trastuzumab, cetuximab en J591) zijn zeer tolerant geconcentreerd, aggregatie en precipitatie kan optreden bij concentraties in andere gevallen. Onderzoekers wordt geprobeerd dit procedure een nieuw antilichaam moet vertrouwen op de literatuur en hun eigen kennis van het antilichaam in kwestie met betrekking tot of het antilichaam concentreren.
  11. Bewaar de ingevulde huA33-TCO immuunconjugaat bij 4 ° C in het donker.
    Opmerking: Dit is een aanvaardbare stopplaats in de procedure. De voltooide mAb-TCO conjugaat moet stabiel zijn gedurende ten minste 3 maanden onder deze opslagomstandigheden.

3. 64 Cu Radioactief merken van Tz-Bn-NOTA

Opmerking: deze stap van het protocol omvat de behandeling en manipulatie van radioactiviteit. Voordat u deze stappen - of het uitvoeren van enig ander werk met radioactiviteit - onderzoekers moeten overleggen met Radiation Safety Department hun eigen instelling. Neem alle mogelijke stappen om de blootstelling aan ioniserende straling te minimaliseren.

  1. In een 1,7 ml microcentrifugebuis Bereid een 0,5 mg / ml (723 pM) oplossing van Tz-Bn-NOTA.
  2. In een 1,7 ml MicroCentrifuge buis, voeg 10 ul van de Tz-Bn-NOTA oplossing (5 ug) 400 gl 0,2 M NH4 OAc pH 5,5 buffer.
  3. In het belang van een goede radiochemische nota boekhouding, meten en registreren van de hoeveelheid radioactiviteit in het monster met een dosiskalibrator vóór en na de daaropvolgende stappen in de onderstaande protocol (3,4-3,8). Dit zal helpen bij de nauwkeurige bepaling van radiochemische opbrengsten.
  4. Voeg 2,000 uCi (74 MBq) van 64 Cu de Tz-Bn-NOTA oplossing.
    OPMERKING: Typisch [64 Cu] CuCl2 wordt in een klein volume (<30 pi) 0,1 N HCl, en aldus slechts kleine hoeveelheden (<10 pi) van deze voorraadoplossing nodig voor radiolabeling reactie. Als grotere volumes van de [64 Cu] CuCl2 voorraad nodig zijn, de radiomerking reactie is tolerant ten opzichte van het totale volume reactie verhogen. Toch moet de pH van de radioactief reactieoplossing zorgvuldig worden gecontroleerd om te waarborgendat niet onder pH 4,0 valt.
  5. Laat de oplossing geïncubeerd gedurende 10 min bij kamertemperatuur onder zacht roeren.
  6. Na 10 min incubatie, zuivert het product middels tegenfase-C18-HPLC chromatografie. De retentietijden zijn uiteraard sterk afhankelijk van de HPLC-uitrusting opstart van elk laboratorium (pompen, kolommen, buizen, enz.). Echter, om een voorbeeld te presenteren, als een gradiënt van 5:95 MeCN / H2O (beide met 0,1% TFA) tot 95: 5 MeCN / H2O gedurende 15 min wordt gebruikt, de retentietijd van 64 Cu-Tz- Bn-NOTA moet ongeveer 9,8 min, terwijl vrij, ongecomplexeerde 64 Cu elueren met het oplosmiddel voorzijde rond 2-4 min.
  7. Met een roterende verdamper, verwijder de HPLC eluent.
  8. Los het 64 Cu-Tz-Bn-NOTA product in 0,9% steriele zoutoplossing.
    OPMERKING: Aangezien 12.7 hr fysische halveringstijd van 64 Cu, is dit niet aanvaardbaar stopplaats in de procedure. Voer de synthese van 64 Cu-Tz-Bn-NOTEen onmiddellijk voorafgaand aan de injectie van de radioactieve, en volg stap 3.7 onmiddellijk voor stap 4.5.

4. In Vivo Pretargeted PET Imaging

OPMERKING: Net als in Protocol afdeling 3, deze stap van het protocol heeft betrekking op de behandeling en manipulatie van radioactiviteit. Voordat u deze stappen onderzoekers moeten overleggen met Radiation Safety Department hun eigen instelling. Neem alle mogelijke stappen om de blootstelling aan ioniserende straling te minimaliseren.

  1. In een vrouwelijke athymische naakt muis, subcutaan implantaat 1 x 10 6 SW1222 colorectale kanker cellen en laat deze uit te groeien tot een 100-150 mm 3 xenogreffe (9-12 dagen na inenting). 11
  2. Verdun een aliquot van de huA33 TCO-oplossing van protocol van 2 tot een concentratie van 0,5 mg / ml in 0,9% steriele zoutoplossing.
  3. Injecteer 200 ui van het huA33-TCO (100 ug) in de staartader van de xenograft-dragende muis.
  4. Wacht 24 uur voor de accumulatie van de huA33-TCO in de tumor van de muis.
  5. Verdun de 64 Cu-Tz-Bn-NOTA radioligand tot een concentratie van 1,5 mCi / ml in 0,9% steriele zoutoplossing.
  6. Injecteer 200 ui van de 64 Cu-Tz-Bn-NOTA radioligand oplossing (300 uCi, 11,1 MBq 1,6 nmol 64 Cu-Tz-Bn-NOTA, uitgaande van een specifieke activiteit van 6,7 MBq / nmol) in de staartader van de xenograft-dragende muizen.
  7. Op het gewenste beeldvormende tijdstip (bijvoorbeeld 2, 6, 12 of 24 uur na injectie), verdoven de muis met een 2% isofluraan: zuurstof gasmengsel.
  8. Plaats de muis op het bed van de kleine dieren PET-scanner. Handhaaf anesthesie tijdens de scan met behulp van een 1% isofluraan: zuurstof gasmengsel. Voorafgaand aan het plaatsen van het dier op de scanner bed, controleren verdoving met behulp van de teen-snuifje methode en veterinaire zalf voor de ogen van de muis om te drogen tijdens anesthesie te voorkomen.
  9. Verwerven van de PET-gegevens voor de muis via een statischescannen met een minimum van 20 miljoen samenvallende gebeurtenissen met behulp van een energie raam van 350-700 keV en een toeval timing raam van 6 nanoseconden. Na het voltooien van de overname van het beeld, hoeft de muis niet onbeheerd achter en plaats het niet in een kooi met andere muizen tot hij weer bij bewustzijn is.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De eerste drie stappen van het experiment - de synthese van Tz-Bn-NOTA, de conjugatie van TCO huA33 en de radiolabeling van het Tz-Bn-NOTA construct (figuren 3 en 4) - zeer betrouwbaar. Bij de bovenstaande procedure werd Tz-Bn-NOTA construct gesynthetiseerd in hoge opbrengst en zuiverheid. De huA33 antilichaam werd gemodificeerd met 4,2 ± 0,6 TCO / mAb en Tz-Bn-NOTA werd radioactief gemerkt met 64 Cu tot het gezuiverde radioligand op in> 99% radiochemische zuiverheid> 8...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Het belangrijkste voordeel van deze pretargeted PET strategie is dat het in staat is afbakenen tumoren met target-to-background beeldcontrast slechts een fractie van de achtergrondstraling dosis geproduceerd door direct gemerkte antilichamen. Bijvoorbeeld, in de colorectale kanker beeldvormingssysteem beschreven, gegevens van acute experimenten van biologische verdeling werden toegepast voor dosimetrische berekeningen voor de 64 Cu gebaseerde pretargeting strategie voeren met direct gelabelde 64 Cu...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

De auteurs danken Prof. Ralph Weissleder, Dr. Pat Zanzonico en Dr. NagaVaraKishore Pillarsetty voor nuttige gesprekken en de NIH voor financiering (BMZ: 1K99CA178205-01A1)

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Tetrazine NHS EsterSigma-Aldrich764701Bewaar bij -80 °C
Trans-cyclooctene NHS EsterSigma-Aldrich764523Bewaar bij -80 °C
p-NH2-Bn-NOTAMacrocyclicsB-601Bewaar bij -80 °C

Referenties

  1. Wu, A. M. Antibodies and antimatter: The resurgence of immuno-PET. Journal of Nuclear Medicine. 50, 2-5 (2009).
  2. Zeglis, B. M., Lewis, J. S. A practical guide to the construction of radiometallated bioconjugates for positron emission tomography. Dalton Transactions. 40, 6168-6195 (2011).
  3. Hollander, N. Bispecific antibodies for cancer therapy. Immunotherapy. 1, 211-222 (2009).
  4. Liu, G., et al. Tumor pretargeting in mice using 99mTc-labeled morpholino, a DNA analog. Journal of Nuclear Medicine. 43, 384-391 (2002).
  5. Boerman, O. C., van Schaijk, F. G., Oyen, W. J. G., Corstens, F. H. M. Pretargeted radioimmunotherapy of cancer: Progress step by step. Journal of Nuclear Medicine. 44, 400-411 (2003).
  6. Goldenberg, D. M., Sharkey, R. M., Paganelli, G., Barbet, J., Chatal, J. F. Antibody pretargeting advances cancer radioimmunodetection and radioimmunotherapy. Journal of Clinical Oncology. 24, 823-834 (2006).
  7. Sharkey, R. M., Chang, C. H., Rossi, E. A., McBride, W. J., Goldenberg, D. M. Pretargeting: taking an alternate route for localizing radionuclides. Tumor Biology. 33, 591-600 (2012).
  8. Sharkey, R. M., et al. Improving the delivery of radionuclides for imaging and therapy of cancer using pretargeting methods. Clinical Cancer Research. 11, 7109-7121 (2005).
  9. Schultz, J., et al. A tetravalent single-chain antibody-streptavidin fusion protein for pretargeted lymphoma therapy. Cancer Research. 60, 6663-6669 (2000).
  10. Lewis, M. R., et al. In vivo evaluation of pretargeted 64Cu for tumor imaging and therapy. Journal of Nuclear Medicine. 44, 1284-1292 (2003).
  11. Zeglis, B. M., et al. A pretargeted PET imaging strategy based on bioorthgonal Diels-Alder click chemistry. Journal of Nuclear Medicine. 54, 1389-1396 (2013).
  12. Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. Tetrazine ligation: fast bioconjugation based on inverse electron demand Diels-Alder reactivity. Journal of the American Chemical Society. 130, 13518-13519 (2008).
  13. Devaraj, N. K., Upadhyay, R., Hatin, J. B., Hilderbrand, S. A., Weissleder, R. Fast and sensitive pretargeted labeling of cancer cells through a tetrazine/trans-cyclooctene cycloaddition. Angewandte Chemie-International Edition. 48, 7013-7016 (2009).
  14. Devaraj, N. K., Weissleder, R. Biomedical applications of tetrazine cycloadditions. Accounts of Chemical Research. 44, 816-827 (2011).
  15. Devaraj, N. K., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. Tetrazine-based cycloadditions: application to pretargeted live cell imaging. Bioconjugate Chemistry. 19, 2297-2299 (2008).
  16. Keliher, E. J., Reiner, T., Turetsky, A., Hilderbrand, S., Weinberg, R. A. High-yielding, two-step 18F labeling strategy for 18F-PARP1 inhibitors. ChemMedChem. 6, 424-427 (2011).
  17. Reiner, T., Earley, S., Turetsky, A., Weissleder, R. Bioorthogonal small-molecule ligands for PARP1 imaging in living cells. ChemBioChem. 11, 2375-2377 (2010).
  18. Reiner, T., Keliher, E. J., Earley, S., Marinelli, B., Weissleder, R. Synthesis and in vivo imaging of a 18F-labeled PARP1 inhibitor using a chemically orthogonal scavenger-assisted high-performance method. Angewandte Chemie International Edition. 50, 1922-1925 (2011).
  19. Taylor, M. T., Blackman, M., Dmitrenko, O., Fox, J. M. Design and synthesis of highly reactive dienophiles for the tetrazine-trans-cyclooctene ligation. Journal of the American Chemical Society. 133, 9646-9649 (2011).
  20. Selvaraj, R., et al. Tetrazine-trans-cyclooctene ligation for the rapid construction of integrin alpha(v)beta(3) targeted PET tracer based on a cyclic RGD peptide. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. 21 (3), 5011-5014 (2011).
  21. Liu, S., et al. Efficient 18F labeling of cysteine-containing peptides and proteins using tetrazine-trans-cyclooctene ligation. Molecular Imaging. 12, 121-128 (2013).
  22. Han, H. S., et al. Development of a bioorthogonal and highly efficient conjugation method for quantum dots using tetrazine-norbornene cycloaddition. Journal of the American Chemical Society. 132, 7838-7839 (2010).
  23. Zeglis, B. M., et al. Modular strategy for the construction of radiometalated antibodies for positron emission tomography based on inverse electron demand Diels-Alder click chemistry. Bioconjugate Chemistry. 22, 2048-2059 (2011).
  24. Zeng, D., Zeglis, B. M., Lewis, J. S., Anderson, C. J. The growing impact of bioorthogonal click chemistry on the development of radiopharmaceuticals. Journal of Nuclear Medicine. 54, 829-832 (2013).
  25. Reiner, T., Zeglis, B. M. The inverse electron demand Diels-Alder reaction in radiochemistry. Journal of Labeled Compounds and Radiopharmaceuticals. 57, 285-290 (2014).
  26. Li, Z., et al. Tetrazine-trans-cyclooctene ligation for the rapid construction of 18-F labeled probes. Chemical Communications. 46, 8043-8045 (2010).
  27. Karver, M. R., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. Synthesis and evaluation of a series of 1,2,4,5-tetrazines for bioorthogonal conjugation. Bioconjugate Chemistry. 22, 2263-2270 (2011).
  28. Sletten, E. M., Bertozzi, C. R. Bioorthogonal chemistry: fishing for selectivity in a sea of functionality. Angewandte Chemie International Edition. 48, 6973-6998 (2009).
  29. Bosch, S. M., et al. Evaluation of strained alkynes for Cu-free click reaction in live mice. Nuclear Medicine and Biology. 40, 415-423 (2013).
  30. Rossin, R., et al. In vivo chemisry for pretargeted tumor imaging in live mice. Angewandte Chemie International Edition. 49, 3375-3378 (2010).
  31. Ackerman, M. E., et al. A33 antigen displays persistent surface expression. Cancer Immunology and Immunotherapy. 57, 1017-1027 (2008).
  32. Carrasquillo, J. A., et al. 124I-huA33 antibody PET of colorectal cancer. Journal of Nuclear Medicine. 52, 1173-1180 (2011).
  33. Sakamoto, J., et al. A phase I radioimmunolocalization trial of humanized monoclonal antibody huA33 in patients with gastric carcinoma. Cancer Science. 97, 1248-1254 (2006).
  34. Rossin, R., Lappchen, R., vanden Bosch, S. M., LaForest, R., Robillard, M. S. Diels-Alder reaction for tumor pretargeting: In vivo chemistry can boost tumor radiation dose compared with directly labeled antibody. Journal of Nuclear Medicine. 54, 1989-1995 (2013).
  35. Rossin, R., et al. Highly reactive trans-cyclooctene tags with improved stability for Diels-Alder chemistry in living systems. Bioconjugate Chemistry. 34, 1210-1217 (2014).
  36. Emmetiere, F., et al. 18F-labeled-bioorthogonal liposomes for in vivo targeting. Bioconjugate Chemistry. 24, 1784-1789 (2013).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Bioorthogonale reactieTrans cycloocteen conjugaatTetrazine radioligandKoper 64 markeringGrootte uitsluitingschromatografieReverse phase HPLCPET scans voor kleine dierenTumor achtergrondverhouding
Het benutten van de Bioorthogonal Inverse Electron Demand Diels-Alder Cycloadditiereacties voor Pretargeted PET Imaging
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.