Name: Het isoleren van stamcellen uit Soft musculoskeletale weefsels (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-05T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Leer het isoleren van adulte stamcellen uit skeletspierweefsel via enzymatische digestie en herhaalde pre-plating. Deze methode ondersteunt regeneratieve geneeskunde en stamcelbiologie onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs zijn zeer erkentelijk voor mevrouw Haiying Pan en de heer Ian Bellayr voor hun technische hulp op celisolatie voor de huidige films en de heer Kyle Holden en de heer Jonathan Lucas voor hun hulp op dia bewerken. Veel dank aan de volgende lijst van personen die betrokken zijn geweest bij de ontwikkeling van de gewijzigde preplate technieken die de afgelopen jaren: Drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, Kimimasa Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. We zijn dankbaar voor de technische bijstand van James H. Cummins, Ryan Pruchnic, Joseph Feduska, Rebecca C. Schugar, Haiying Pan en Jessica Tebbets. De auteur zou ook graag de financiële steun voor dit werk erkennen van de spierdystrofie Association (MDA), de National Institutes of Health (NIH), het Department of Defense (DOD), van de Children&#39;s Hospital van Pittsburgh van UPMC, het Ministerie van orthopedische chirurgie, en de Universiteit van Pittsburgh.

In het algemeen, de complete gewijzigde preplate procedure vereist 1-2 dagen van voorbereiding, 1 week van het uitvoeren van de technische procedure, 2-3 dagen van cel identificatie met immunocytochemie, en een extra 2-3 weken van stamcel populatie expansie. De apparatuur die nodig is voor stamcellen cultuur zijn vergelijkbaar met die van andere celkweek systemen die een bench-top centrifuge, CO 2 incubator, Laminaire stroming weefselkweek kap en een omgekeerde microscoop uitgerust met fluorescentie en een digitale camera bevat. De geïsoleerde stamcellen ook gekloond kunnen worden en kunnen opgeslagen worden op lange termijn in vloeibare stikstof voor de huidige of toekomstige studies 1,2. Alle reagentia en materialen die worden gebruikt voor deze procedure moet steriel en aseptisch behandeld. Stap 1: Voorbereiding <ol><li> Collageen vacht weefselkweek gerechten en flacons: Type I collageen afgeleid van kalf huid (0,1 g in 1 liter, Sigma-Aldrich). De plasticware de vacht bestaat uit: T-25 flessen, 6 of 12 goed borden, schalen (60 en 100 mm, BD Falcon) zoals eerder beschreven 1,2. Schud de plasticware elk half uur, gedurende 4 uur om zelfs coating van het collageen te verzekeren. Het collageen oplossing wordt dan verwijderd. En de gecoate plasticware wordt vervolgens drogen in de weefselkweek kap met het UV-licht en de kap zowel op, om de steriliteit te waarborgen, en tot slot vatte of bedekt voor later gebruik. </li><li> Bereid celkweekmedium: 400ml DMEM (DMEM, hoge glucose, Invitrogen), 50ml warmte geïnactiveerd foetaal Bovine Serum (FBS, Invitrogen), 50ml Horse Serum (HS, Invitrogen), en 5 ml Chick Embryo Extract (CEE; Accurate Chemical Co ) zal vacuüm gefilterd met behulp van een disposable 0.22-um van 500 ml steriele filter-systeem (Corning) zijn. Steriele penicilline / streptomycine-oplossing (Invitrogen) zullen worden toegevoegd uiteindelijk 100 Eenheden / ml. De bereide oplossingen kan worden opgeslagen bij 4 ° C gedurende ten minste een maand. Deze oplossing wordt gebruikt om de cellen van de fles los te maken bij het splitsen van culturen, of de voorbereiding van de cellen voor transplantatie. </li><li> Warm-up oplossingen voor celisolatie: De volgende reagentia dienen te worden opgewarmd tot 37 ° C voorafgaand aan het gebruik ervan voor celisolatie: Buffered Salt Hank&#39;s Solution (HBSS, Invitrogen), 0,2% (wt / vol) collagenase-type XI (Sigma -Aldrich), met een gemiddelde van 3.200 collageen vertering eenheden per ml HBSS; Dispase 2,4 units/1mL (Invitrogen), 0,5% (wt / vol) trypsine (Invitrogen). </li><li> Steriliseer chirurgische apparatuur in voorbereiding: Chirurgische procedure vereisen steriele chirurgische instrumenten, waaronder: verschillende groottes tang, micro-schaar, iris schaar en / of scalpel mesjes. Bovendien, 15 en 50 ml polypropyleen centrifugebuis (BD Falcon), Cell zeef (poriegrootte 70 m) (BD Falcon), 18 -, 23 - en 27-gauge naalden (BD PrecisionGlide), en 10 - of 20-ml steriele spuiten (BD). </li></ol> Stap 2: weefselbiopten, isolatie en mechanische dissociatie 1-4 Het weefsel biopsies worden uitgevoerd onder een steriele cultuur motorkap en onder andere vers geoogst pezen en skeletspieren worden verkregen uit de tibia of soleus spieren van de achterbeen van de wild-type muizen (Vrouw C57BL/6J, 4-5 weken of jonger, Jackson laboratorium). Enige zichtbare bindweefsel, bloedvaten en vetweefsel worden vervolgens verwijderd uit de biopsie monsters. De weefsels van de pees en spieren zijn dan voorzichtig die in het kader van een chirurgische dissectie microscoop om de overblijfselen van de huid en de botten te verwijderen en geplaatst in een schotel met koud (4 ° C) HBSS (aangevuld met add 5% van FBS). De geïsoleerde weefsels worden dan afzonderlijk geplaatst op collageen gecoate platen met koud HBSS en zal worden gehakt (&lt;1x1 mm 3) in een grove brij met behulp van micro-schaar en / of scalpel mesjes. Stap 3: Enzymatische vertering van het weefsel: Het gehakt weefsel wordt vervolgens enzymatisch gedissocieerd door een reeks van stappen 2,4,5 <ol><li> Breng het gehakt weefsel slurries in afzonderlijke 15-ml buizen en centrifugeer bij ~ 3500 rpm bij 4 ° C gedurende 5 minuten. </li><li> Verwijder de bovenstaande vloeistof, wassen met HBSS en herhaal het centrifugeren. </li><li> Verwijder het supernatant en verteren deze slurries door het toevoegen van 10 ml voorverwarmd 0,2% collagenase-type XI (Sigma). Incubeer 60 minuten bij 37 ° C, terwijl continu zachtjes de buizen schommelen. Als alternatief, schud met de hand om de 10 minuten. </li><li> Centrifuge en resuspendeer deze slurries in 10 ml dispase (2,4 eenheden / ml, Gibco) oplossing. Incubeer 45 minuten bij 37 ° C, schudden met handen of het zachtjes schommelen elke 10 minuten. </li><li> Centrifuge en resuspendeer deze slurry in 10 ml van 0,2% trypsine HBSS oplossing. Incubatie is afhankelijk van de mate waarin de afzonderlijke cellen vrijkomen uit de weefsels die kan worden uitgevoerd door het observeren van de opschorting onder de microscoop. Het is niet aan te bevelen 30 minuten dan bij 37 ° C met het omkeren van de buizen of zachtjes wiegen elke 10 minuten. </li><li> Centrifugeer de resulterende cels en resuspendeer de cel pellet in 10 ml van de Proliferatie Medium (PM). </li><li> Distantiëren van de celsuspensie door het passeren van het extract door een reeks naalden. De cellen worden vervolgens twee keer door een 18G, dan een 23G, en tenslotte een 27G naald. </li><li> Passeren de cel extract door een 70-um cel zeef. </li></ol> Stap 4: Preplating naar verschillende celpopulaties op basis van celadhesie rate 1-3 te isoleren <ol><li> Centrifugeer en resuspendeer de cel pellets in proliferatie Medium. </li><li> Het bord van de cel mengsels op een collageen gecoate T-25 vat (of 60 mm schaal) en markeer deze als PP1. De cel suspensie moet in acht worden genomen als het bezit van een groot aantal van refractieve kernen en ander vuil onder de microscoop. </li><li> Incubeer bij 37 ° C in een bevochtigde, 5% CO 2 incubator gedurende 2 uur. </li><li> Overdracht klevend cellen om een ​​nieuw collageen gecoate T-25 vat (of 60 mm gerecht) en merk is als PP2. Voeg 5 ml van PM in de plaat label PP1. De vroege hechtende cellen die hechten aan de kolf zijn meestal myofibroblasten 3. </li><li> Zet de kolven om de incubator voor nog eens 24 uur, transfer klevend cellen om een ​​nieuw collageen gecoate T-25 kolf (of gerecht) en het als PP3 markeren. Voeg 5 ml van de proliferatie Medium op de plaat label PP2. Deze hechtende cellen die hechten aan deze kolf zijn meestal fibroblasten 2,3. </li><li> Keer terug naar de incubator kolven en herhaal de procedure in een ander 24 uur tot de bevolking PP6 wordt gemaakt. Handhaaf elke groep van zwevende cellen en hen in staat stellen zich te verspreiden en het onderzoek regelmatig met een omgekeerde microscoop. PP3-PP4 zijn meestal myoblasten terwijl de spier een satelliet-cellen worden vaak vooral gezien in PP5 2. </li><li> Het grootste deel van de langzaam hechtende cellen meestal hechten door PP6. In dit stadium, de cellen lijken kleine, ronde, licht refractieve en zijn zeer schaars in aantal en worden beschouwd als een stamcel populatie 1,2 is. </li></ol> Stap 5: Identificatie en uitbreiding van geïsoleerde stamcellen <ol><li> De geïsoleerde PP6 cellen zijn zeer gering in aantal en moeten worden gehandhaafd in FBS rijke Proliferatie Medium (20% FBS in DMEM) die dagelijks wordt veranderd. Het grootste deel van de cellen aanwezig zijn in het PP6 cultuur sterven tijdens de volgende 1-2 weken van het kweken, maar een grote, gezonde PP6 bevolking is meestal gemaakt na een extra 1-2 weken van de expansie. De stamcellen geïsoleerd uit muizen zeer uitdrukkelijke stamcel antigeen 1 (Sca1), CD34, foetale lever kinase 1 (Flk1), en andere stam markers 1,2,6,7 die kunnen worden gevisualiseerd via immunocytochemische vlekken. Deze stamcellen vertonen ook meerdere differentiatie capaciteiten 3,6,8. </li><li> De geïsoleerde cellen worden onderhouden en uitgebreid op een laag celdichtheid in cultuur (12-gerechten goed bij 50-100 cellen / putje of &lt;20-30% confluentie in de kolf of schotel) tot differentiatie 1,2 voorkomen. Zeer weinig cellen vormen klonen tijdens de expansie, en deze gekloonde stamcellen kunnen lange tijd proliferatie (LTP) ondergaan voor een andere competentie studies. De gekloonde stamcellen ook kan opslaan in vloeibare stikstof met behulp van algemene cel opslag procedures worden bijvoorbeeld PM medium met 10% DMSO. Maak een aantal lage passage voorraden van de stamcellen voor enig ander back-up studies. </li></ol>

<ol><li>Gharaibeh, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+slowly+adhering+cell+fraction+containing+stem+cells+from+murine+skeletal+muscle+by+the+preplate+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique.</a> Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).</li>
<li>Qu-Petersen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+population+of+muscle+stem+cells+in+mice%3A+potential+for+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration.</a> J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).</li>
<li>Li, Y. &amp, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+muscle-derived+cells+into+myofibroblasts+in+injured+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Differentiation of muscle-derived cells into myofibroblasts in injured skeletal muscle.</a> Am J Pathol. 161, 895-907 (2002).</li>
<li>Watt, D. J., Lambert, K., Morgan, J. E., Partridge, T. A. &amp, Sloper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+donor+muscle+precursor+cells+into+an+area+of+muscle+regeneration+in+the+host+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Incorporation of donor muscle precursor cells into an area of muscle regeneration in the host mouse.</a> J Neurol Sci. 57, 319-331 (1982).</li>
<li>Lu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+myogenic+progenitor+populations+from+Pax7-deficient+skeletal+muscle+based+on+adhesion+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Isolation of myogenic progenitor populations from Pax7-deficient skeletal muscle based on adhesion characteristics.</a> Gene Ther. 15, 1116-1125 (2008).</li>
<li>Lee, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+isolation+of+muscle-derived+cells+capable+of+enhancing+muscle+regeneration+and+bone+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Clonal isolation of muscle-derived cells capable of enhancing muscle regeneration and bone healing.</a> J Cell Biol. 150, 1085-1100 (2000).</li>
<li>Cao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+receptors+in+the+maturation-dependent+adenoviral+transduction+of+myofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">The role of receptors in the maturation-dependent adenoviral transduction of myofibers.</a> Gene Ther. 8, 627-637 (2001).</li>
<li>Cao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+stem+cells+differentiate+into+haematopoietic+lineages+but+retain+myogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle stem cells differentiate into haematopoietic lineages but retain myogenic potential.</a> Nat Cell Biol. 5, 640-646 (2003).</li>
<li>Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+medicine+based+on+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Musculoskelet+Neuronal+Interact%22%5BJournal%5D)">Regenerative medicine based on muscle stem cells.</a> J Musculoskelet Neuronal Interact. 8, (2008).</li>
<li>Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &amp, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+medicine+for+the+musculoskeletal+system+based+on+muscle-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Orthop+Surg%22%5BJournal%5D)">Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells.</a> J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).</li>
</ol>

Het is bekend dat sommige volwassen weefsels meerdere stamcellen bevatten. In de afgelopen jaren van studie, zijn stamcellen aangetroffen in de zachte musculoskeletale weefsels, waaronder skeletspier en pezen. Deze huidige protocol details een procedure, die bekend staat als de gewijzigde preplate techniek, die met succes is gebruikt in ons laboratorium om volwassen stamcellen uit pezen en skeletspieren te isoleren. Met behulp van de gewijzigde preplate beschreven techniek boven de cellen kunnen worden onderverdeeld in ...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>#11995-073</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>#10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Hitte-geïnactiveerd paardenserum</td><td>Invitrogen</td><td>#26050-088</td><td></td></tr><tr><td>Kippembryo-extract</td><td>Accurate Chemical</td><td>#CE650T-10</td><td></td></tr><tr><td>100U ml penicilline/streptomycine</td><td>Invitrogen</td><td>#15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's PBS</td><td>Invitrogen</td><td>#14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Hank's Buffered Salt Solution</td><td>Invitrogen</td><td>#24020-117</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase type XI 0.2%(wt/vol)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#C7657</td><td></td></tr><tr><td>Dispase 2.4U ml</td><td>Invitrogen</td><td>#17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA 0.5%(wt/vol) (10x; 5g liter trypsine (1:250)</td><td>Invitrogen</td><td>#15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Collageen voor het coaten van de kolf: Type I collageen afgeleid van kalfshuid 0.1 g liter</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#C-9791</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>#D-2650</td><td></td></tr></tbody></table>

het isoleren van stamcellen uit soft musculoskeletale weefsels

Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues

Volwassen stamcellen zijn al lang besproken met betrekking tot de toepassing ervan in regeneratieve geneeskunde. Volwassen stamcellen hebben geleid tot een veel opwinding voor de behandeling van gewonde en zieke weefsels als gevolg van hun indrukwekkende mogelijkheden om multi-lijn celdifferentiatie en hun zelf-vernieuwing kunnen ondergaan. Het belangrijkste is, hebben deze eigenschappen hen voordelig voor gebruik in de autologe stamceltransplantatie therapieën. Het huidige protocol zal introduceren de lezers op de gewijzigde preplate techniek waarbij zachte weefsels van het bewegingsapparaat, zoals pees-en spier, zijn een<sup&gt; St</sup&gt; Enzymatisch los en vervolgens geplaatst in collageen gecoat kolven met medium. De bovenstaande vloeistof, die is samengesteld uit medium en de resterende drijvende cellen, is serieel overgedragen dagelijks naar nieuwe flessen. De stamcellen zijn de langzaamste zich te houden aan de kolven die meestal duurt 5-7 dagen (serieel transfers of preplates). Door gebruik te maken van deze techniek, volwassen stamcellen aanwezig in deze weefsels kunnen gemakkelijk worden geoogst door middel van vrij niet-invasieve procedures.

Het isoleren van volwassen stamcellen uit spier-en zachte weefsels op basis van de cel naleving snelheid kolf.

Het isoleren van stamcellen uit Soft musculoskeletale weefsels

Volwassen stamcellen worden al lange tijd besproken in relatie tot hun toepassing in de regeneratieve geneeskunde. Volwassen stamcellen hebben geleid tot een grote hoeveelheid ...

Het algemene doel van deze procedure is het isoleren van volwassen stamcellen uit musculoskeletaal zacht weefsel, zoals skeletspierweefsel. Dit wordt bereikt door eerst een biopsie van het zachte weefsel te nemen, dit te debrideren en fijn te hakken. De tweede stap van de procedure is het enzymatisch verteren van het weefsel.De derde stap van de procedure is het isoleren van de stamcellen via herhaalde pre-platingstappen. De laatste stap van de procedure is de identificatie van de geïsoleerde stamcellen. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die het morfologische en cellulaire gedrag van de cellen aantonen met behulp van immunofluorescentie, microscopie en/of flowcytometrie.Hoi, ik ben y Lee van het Lab for Molecular Pathology van de afdeling Orthopedic Surgery aan de University of Pittsburgh. Vandaag laat ik u zien hoe u een volwassen stamcel isoleert uit de weke delen van het Mus skeletale systeem, zoals skeletspierweefsel. Hallo, ik ben Dr. Johnny Ward.Ik ben professor aan de University of Pittsburgh School of Medicine binnen de afdeling Orthopedic Surgery. Ik heb nauw samengewerkt met Dr. Young Lee aan deze procedures om verschillende typen stamcellen te isoleren uit

isolating-stem-cells-from-soft-musculoskeletal-tissues

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video laat zien hoe de dooierzak en de aorta-gonaden-mesonephros regio micro-ontleden van embryo's en het gebruik flowcytometrie om hematopoietische stamcellen te sorteren.

Isolatie van Vroege hematopoietische stamcellen van muizen dooierzak en AGM

De micro-ontleed explantaten techniek is een robuuste en betrouwbare methode voor het isoleren van proliferatieve skeletspieren cellen van jonge, volwassen of embryonale spieren als bron van skeletspieren stamcellen. Uniek, zijn deze cellen zijn klonaal ontleend aan de skeletspieren stamcellijnen gebruikt voor in vivo transplantatie te produceren.

Volwassen en embryonale skeletspier Microexplant Cultuur en isolatie van de skeletspieren Stem Cells

De isolatie en cultuur van een zuivere populatie van rustende cellen satelliet, een spier stamcelpopulatie, is essentieel voor het begrip van spier stamcel biologie en regeneratie, en stamceltransplantatie voor therapieën spierdystrofie en andere degeneratieve ziekten.

Isolatie, Cultuur en Transplantatie van Muscle satelliet-cellen

Bloedvaten in de menselijke skeletspier haven diverse multi-lineage voorloper populaties die ideaal is voor regeneratieve toepassingen zijn. Deze isolatie methode maakt gelijktijdige zuivering van drie multipotente precursor celpopulaties respectievelijk uit drie structurele lagen van de bloedvaten: myogene endotheelcellen van de intima, pericytes van media en adventitia cellen van adventitia.

Isolatie van bloedvatgeassocieerde afgeleid Multipotente Voorlopers van Human Skeletal Muscle

Dit protocol beschrijft technieken voor het isoleren van levende cellen en de primaire kweek van myogene en fibroblastcellijnen uit spier- of huidweefsel. Er wordt ook een techniek beschreven voor het onvergankelijk maken van deze cellijnen. Samenvattend bieden deze protocollen een betrouwbare tool om afgeleide cellen van patiënten te genereren en te bewaren voor downstream-toepassingen.

Isolatie en immortaliseren van Patient afgeleide cellijnen van spierbiopsie for Disease Modeling

In dit artikel presenteren we methoden om te isoleren en te onderscheiden van het beenmerg stromale cellen en hematopoietische stamcellen van lange beenderen van de muis. Twee verschillende protocollen worden gepresenteerd opbrengst andere cel populaties geschikt voor uitbreiding en differentiatie in botcellen, adipocytes en osteoclasten.

Isolatie, cultuur en differentiatie van beenmerg stromale cellen en Osteoclast voorlopercellen van muizen

De precieze identificatie van fibro-adipogene voorlopercellen (FAPs) en spierstamcellen (MuSC's) is van cruciaal belang voor het bestuderen van hun biologische functie in fysiologische en pathologische omstandigheden. Dit protocol biedt richtlijnen voor de isolatie, zuivering en cultuur van FAPs en MuSC's van volwassen muisspieren.

FACS-isolatie en kweek van fibro-adipogene voorlopers en spierstamcellen van onverstoorbare en gewonde muizenskeletspieren

Dit protocol beschrijft de isolatie van spierstamcellen en fibro-adipogene voorlopers uit individuele skeletspieren bij muizen. Het protocol omvat enkelvoudige spierdissectie, stamcelisolatie door fluorescentie-geactiveerde celsortering, zuiverheidsbeoordeling door immunofluorescentiekleuring en kwantitatieve meting van S-fase-invoer door 5-ethynyl-2'-deoxyuridine-incorporatietest.

Isolatie van rustige stamcelpopulaties van individuele skeletspieren

Hier presenteren we protocollen die isolatie van stromale cellen uit muizenbot, beenmerg, thymus en menselijk thymusweefsel mogelijk maken die compatibel zijn met single-cell multiomics.

Stromale celisolatie van hematopoëtische organen

Dit protocol biedt een gestandaardiseerde methode voor het isoleren en verrijken van primaire myoblasten uit volwassen en neonatale muisskeletspieren via weefseldissociatie, sequentiële filtratie, preplating en gedefinieerde kweekcondities, waardoor de opbouw en het onderhoud van satellietcel-afgeleide myoblastkweken mogelijk is voor latere experimentele toepassingen.

Isolatie van skeletspiersatellietcellen voor in vitro myogenesestudies

Leer het isoleren van adulte stamcellen uit skeletspierweefsel via enzymatische digestie en herhaalde pre-plating. Deze methode ondersteunt regeneratieve geneeskunde en stamcelbiologie onderzoek.

Het isoleren van stamcellen uit Soft musculoskeletale weefsels

Meer video's verkennen