Name: Fabricage van een microfluïdische apparaat voor de compartimentering van Neuron Soma en axonen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 58 s
Description: Leer de fabricage van een microfluïdische neuronencultuur met PDMS-softlithografie. Dit apparaat compartimenteert cellichamen en axonen voor geavanceerd neurobiologisch onderzoek naar regeneratie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deel 1: Het voorbereiden van de microfluïdische neuron apparaat <ol><li> Een 3 &quot;silicium wafer met een patroon gemaakt van SU-8 door fotolithografie wordt gebruikt om de Polydimethylsiloxaan (PDMS) microfluïdische mal gegoten. We verwijzen naar de SU-8 patronen silicium wafer als meester mallen, of&quot; meesters &quot;. </li><li> PDMS wordt gemengd met verharder in de aw / w-verhouding van 10:1, dat wil zeggen, voor 10 gram PDMS, is 1 gram verharder toegevoegd. </li><li> Het PDMS is vervolgens goed gemengd en uitgegoten op het silicium wafer. De silicium wafer is vervat in een 10 cm polystyreen petrischaal. Het duurt ongeveer 12 g tot 15 g van PDMS aan de master te bedekken met een dikte van ongeveer 4 mm. </li><li> De meester met het PDMS wordt dan geplaatst in een vacuüm exsiccator met het deksel van de petrischaal, en vacuüm wordt toegepast. Dit wordt gedaan om te helpen luchtbellen te verwijderen uit de PDMS die werden geïntroduceerd tijdens het roeren in de verharder. Het duurt ongeveer 15 minuten voor de luchtbellen worden verwijderd. </li><li> De master met PDMS wordt verwijderd uit de exsiccator. Een lucht pistool met een 0,45 um filter wordt gebruikt om de resterende luchtbellen te verwijderen. </li><li> De master wordt dan geplaatst op een 80 ° C hete plaat gedurende 1 uur om uit te harden. </li></ol> Opmerking: Als een vacuüm exsiccator niet beschikbaar is, de meester kan worden achtergelaten bij kamertemperatuur gedurende enkele uren. De luchtbellen zullen uiteindelijk verdwijnen op hun eigen. Als een hete plaat is niet beschikbaar is, zal het PDMS uitharden bij kamertemperatuur na 24 uur. Opmerking: Het is ook belangrijk om ervoor te zorgen dat de master-niveau is tijdens het uithardingsproces. Deel 2: Knip uit het neuron microfluïdische apparaat <ol><li> Zodra de PDMS is uitgehard op de master, is het naar een schoon kap. </li><li> Met behulp van een chirurgisch mes, is een cirkel gesneden rond de omtrek van de apparaten. Wanneer men voegt het blad in het PDMS, is het belangrijk om contact te maken met de silicium wafer, maar om niet te veel druk op de wafer, anders wordt de meester zal barsten. </li><li> Met een cirkel knippen helemaal rond de apparaten (er zijn 4 apparaten per elke 3 &quot;Silicon Master), is het PDMS voorzichtig getild de meester. Dit kan worden gestart door voorzichtig te draaien de chirurgische mes zoals het is ingevoegd in de voorafgaande cut . </li><li> Vervolgens worden reservoirs gestanst in het apparaat met behulp van een 8 mm weefsel biopsie punch. </li><li> De apparaten worden dan in vieren en het teveel PDMS getrimd weg, zodat het toestel netjes past op Corning Glass Cover (nr. 1) 24 mm x 40 mm. Stikstof lucht wordt gebruikt om de klap weg overtollige vuil. Hardnekkige vuil kan ook worden verwijderd met 3M Scotch Brand 471 vinyl tape. </li></ol> Deel 3: Plasma hechting de apparaten om glas dekglaasjes. <ol><li> Plasma Cleaner wordt gebruikt om de band A Harrick het neuron apparaten aan op de dekglaasjes. Kortom, zijn de apparaten geplaatst in het plasma schoner en een vacuümpomp wordt gebruikt om de lucht te evacueren uit de kamer. </li><li> Nadat de vacuümdruk heeft bereikt 300 millitorr, is macht ingeschakeld om de elektrische spoel en ingesteld op hoog. </li><li> De elektrische spoel creëert plasma, &quot;een gedeeltelijk geïoniseerd gas dat bestaat uit elektronen, ionen en neutrale atomen of moleculen&quot; - <a href="http://www.harrickplasma.com/plasma_physics.php">http://www.harrickplasma.com/plasma_physics.php</a> , uit de resterende luchtmoleculen links in de kamer. De plasma creëert reactieve stoffen op het oppervlak van het glas en het apparaat, dat wanneer ze samen geplaatst zal een blijvende band te vormen. De plasma wordt ook het oppervlak hydrofiel, die helpt vergemakkelijken de toevoeging van vloeistoffen. Daarnaast is de plasma reiniger steriliseert de apparaten. Het oppervlak van de PDMS apparaat dat de microfluïdische apparaat bevat is geplaatst zijde naar boven in het plasma reiniger, samen met het glas dia&#39;s. De plasma behandelde oppervlakken van het glas en microfluïdische apparaat worden gemonteerd in contact met elkaar op een schone bench, dan geplaatst in steriele 60 mm gerechten. De behandelde oppervlakken vormen een hechte band onomkeerbaar. </li><li> Binnen 10 minuten van plasma hechten van de apparaten op glas, is Poly-L-lysine (PLL) toegevoegd aan het apparaat. Na 10 minuten zal de hydrofiliciteit van het toestel afnemen waardoor het moeilijk is voor de PLL om het apparaat in te voeren. Opmerking: Het is belangrijk om voor de luchtbellen in het apparaat te controleren na de toevoeging van de PLL. Luchtbellen in het hoofdkanaal zijn ongewenst, omdat ze zouden oxideren cellen. Een eenvoudige methode om bestaande luchtbellen te verwijderen is het gebruik van een P200 pipet gevuld met 150 ul van de vloeistof (in dit geval PLL), direct plaats de tip bij de opening van de belangrijkste kanaal, en krachtig druk de P200. Dit moet mogelijk worden meerdere malen herhaald, maar uiteindelijk de kracht van de pipet rijdt de luchtbellen uit. </li><li> De apparaten met PLL mogen &#39;s nachts in een standaard weefselkweek incubator geïncubeerd bij 37 ° C met 5% CO 2. </li><li> De volgende dag, de deondeugden zijn tweemaal snel gespoeld met geautoclaveerd dH2O. Tijdens dit proces wordt vloeibare nooit helemaal verwijderd van de belangrijkste kanalen, alleen van de reservoirs. Het verwijderen van vloeistof uit de belangrijkste kanalen zal introduceren bubbels. Na twee snelle spoelingen, zijn de apparaten gevuld met geautoclaveerd dH2O en terug geplaatst in de incubator voor een minimum van 3 uur, of &#39;s nachts. </li><li> De volgende dag, zijn de apparaten opnieuw twee keer snel gespoeld met geautoclaveerd dH2O. Vervolgens wordt neurale basale media, met de nodige aanvullingen B27 en Glutamax voor het kweken van primaire rat neuronen, toegevoegd aan de apparaten. De apparaten zijn terug geplaatst in de incubator voor toekomstig gebruik. De apparaten zijn nu klaar voor het zaaien van neuronen. </li></ol>

<ol><li>Park, J. W., Vahidi, B., , A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research.%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nat Protoc. 1, 2128-2136 (2006).</li>
<li>Taylor, A. M., Blurton-Jones, M., Rhee, S. W., Cribbs, D. H., Cotman, C. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury%2C+regeneration+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nat Methods. 2, 599-605 (2005).</li>
</ol>

In deze video hebben we laten zien hoe te maken en voor te bereiden een PDMS microfluïdische apparaat dat we gebruiken om de cultuur neuronen inch Het apparaat stelt ons in staat om het verkrijgen van een zuivere axonale fractie van elkaar gescheiden door microgroeven van het compartiment met daarin een mix van cellichamen, dendrieten en axonen . Deze toestellen kan de onderzoeker om de effecten van verschillende behandelingen studie en als een platform voor het uitvoeren van lichamelijk letsel op de axonen en kijk welke effecten deze behandelingen hebben op de neuronen te bieden. Het toestel biedt ook een niveau van om het kweken van neuronen die helpt te vergemakkelijken transport studies. Daarnaast heeft de microgroeven, die de celkweek compartiment gescheiden van de axon compartiment, zorgt voor vloeibare isolatie tussen de twee compartimenten waardoor het mogelijk is aan een kant van het toestel te behandelen zonder het uitvoeren van de andere kant van het apparaat direct met de behandeling. Deze eigenschap maakt het mogelijk de onderzoeker te bestuderen effecten zoals signaaltransductie en het vervoer als gevolg van de behandeling.

<table><tbody><tr><td>PDMS</td><td>Reagens</td><td>Dow Corning</td><td></td><td>Sylgard 184 met uithardingsmiddel. Raadpleeg Dow Corning om een leverancier bij u in de buurt te vinden</td></tr><tr><td>Plasmareiniger</td><td>Instrument</td><td>Harrick Scientific Products, Inc.</td><td></td><td>http://www.harrickplasma.com/</td></tr><tr><td>Neural Basal Media</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>21103-049</td><td>Neural Basal Media wordt verkregen via Invitrogen onder hun Gibco-lijn van celkweekreagentia.</td></tr><tr><td>B27</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>17504-044</td><td>B27 is een gepatenteerd supplement verkrijgbaar via Invitrogen onder hun Gibco-lijn van celkweekreagentia.</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>35050-061</td><td>Glutamax is verkrijgbaar via Invitrogen onder hun Gibco-lijn van celkweekreagentia.</td></tr><tr><td>Corning No. 1 dekglas</td><td>dekglas</td><td>Corning</td><td>Corning No. X2935 244</td><td>Verkrijgbaar via Fisher Scientific, Fisher catalogusnummer 12-531D</td></tr><tr><td>60 mm Petrischaal</td><td>Instrument</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-13A</td><td>Steriele polystyreen petrischalen van 60 mm worden gebruikt om het aan glas gebonden apparaat te huisvesten.</td></tr><tr><td>BD Falcon 50 ml buis</td><td>Instrument</td><td>BD Biosciences</td><td>Falcon No. 352098</td><td>Verkrijgbaar via Fisher Scientific catalogusnummer 14-959-49A</td></tr><tr><td>BD Falcon 15 ml buis</td><td>Instrument</td><td>BD Biosciences</td><td>Falcon No. 352097</td><td>Verkrijgbaar via Fisher Scientific catalogusnummer 14-959-70C</td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-1274</td><td></td></tr><tr><td>Nieuw item</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fabricage van een microfluïdische apparaat voor de compartimentering van neuron soma en axonen

Fabrication of a Microfluidic Device for the Compartmentalization of Neuron Soma and Axons

In deze video, tonen we de techniek van zachte lithografie met polydimethylsiloxaan (PDMS), dat we gebruiken om een ​​microfluïdische apparaat voor het kweken van neuronen fabriceren. Voorheen werd een silicium wafer patroon met het ontwerp voor het neuron microfluïdische apparaat met behulp van SU-8 en fotolithografie aan een meester mal te maken, of wat we gewoon naar verwijzen als een &quot;master&quot;. Vervolgens gaan we gieten het silicium polymeer PDMS op de top van de meester, die vervolgens wordt genezen door het verwarmen van de PDMS tot 80 ° C gedurende 1 uur. De PDMS vormt een negatieve mal van het apparaat. De PDMS wordt vervolgens zorgvuldig knippen en tilde uit de buurt van de meester. Gaten worden geponst waar de reservoirs zal zijn en de overtollige PDMS geknipt uit de buurt van het apparaat. Stikstof wordt gebruikt om de klap weg overtollige vuil uit het apparaat. Op dit punt de apparaten zijn nu klaar voor gebruik en kan zowel gebonden aan Corning nummer 1 te dekken glas met een plasma sterilisator / reiniger of kan reversibel worden gebonden aan de dekking van glas door simpelweg plaatsen van het apparaat op de top van het deksel glas. De omkeerbare binding van het apparaat om glas is bedekt met een aparte video-en vereist in de eerste dat het apparaat of worden gesteriliseerd met 70% ethanol of door autoclaveren. Plasma behandelen steriliseert de apparaten zodat er geen verdere behandeling nodig is. Het is echter belangrijk, wanneer de apparaten toe te voegen vloeistof aan op de apparaten binnen 10 minuten van de plasma-behandeling, terwijl het oppervlak nog hydrofiel plasma-behandeling. Wacht langer dan 10 minuten om vloeistof toe te voegen aan het toestel maakt het moeilijk voor de vloeistof om het apparaat in te voeren. Het neuron apparaten zijn meestal plasma gebonden aan glas en 0,5 mg / ml poly-L-lysine (PLL) in pH 8,5 boraatbuffer cover is meteen toegevoegd aan het apparaat. Na een minimum van 3 uur incubatie met PLL, zijn de apparaten gewassen met water dH2O een minimum van drie keer met ten minste 15 minuten tussen elke wasbeurt. Vervolgens wordt het water verwijderd en vers medium wordt toegevoegd aan het apparaat. Op dit punt van het apparaat is klaar voor gebruik. Het is belangrijk om te onthouden op dit punt om nooit alle media te verwijderen uit het apparaat. Laat altijd media in het hoofdkanaal.

In deze video laten we zien de techniek van zachte lithografie met polydimethylsiloxaan (PDMS), dat we gebruiken om een ​​microfluïdische apparaat voor het kweken van neuronen farbricate.

Fabricage van een microfluïdische apparaat voor de compartimentering van Neuron Soma en axonen

In deze video demonstreren we de techniek van soft lithografie met polydimethylsiloxaan (PDMS), die we gebruiken om een microfluïdisch apparaat te vervaardigen voor ...

Welkom in het laboratorium van Dr. Newly John. Het John Lab is gespecialiseerd in het ontwikkelen van microfluïdische platforms voor biologische toepassingen. In deze video demonstreren we de productie en het gebruik van een microfluïdisch apparaat dat is ontworpen voor het compartimenteren en kweken van primaire neuronen.Het neuron-apparaat werd voor het eerst gepubliceerd in Nature Methods in augustus 2005. Sinds de introductie is het neuron-apparaat wereldwijd op grote schaal door samenwerkingspartners gebruikt. Het neuron-apparaat bestaat uit een stuk PDMS dat is gegoten op een siliciumwafer met een SUA-patroon van het apparaat, dat vooraf via fotolithografie is gecreëerd.Het apparaat heeft drie hoofdkenmerken: vier reservoirs met een diameter van 8 mm, twee hoofdkanalen van elk 1,5 mm breed, 7 mm lang en 100 µm hoog, en microgroeven van 10 µm breed en 3 µm hoog die de twee hoofdkanalen met elkaar verbinden. De microgroeven kunnen variëren in lengte van 150 µm tot 900 µm, hoewel de standaardlengte 450 µm is. Wanneer het apparaat zo wordt bekeken dat de hoofdkanalen en de microgroeven verticaal staan, is te zien dat de reservoirs links van de groeven via de hoofdkanalen met elkaar verbonden zijn, evenzo als de reservoirs aan de rechterzijde.Deze functie maakt het mogelijk dat vloeistof door het hoofdkanaal stroomt, wat een belangrijk kenmerk is dat het mogelijk maakt om cellen te laden en media te vervangen. Het neuron-apparaat biedt drie grote voordelen ten opzichte van traditionele weefselkweekplatformen. Ten eerste maakt het de compartimentering van cellichamen of soma en de axonen mogelijk. Met het neuron-apparaat is het mogelijk om zuivere axonale fracties te verkrijgen.De grootte en lengte van de microgroeven maken het mogelijk dat axonen door het andere hoofdkanaal passeren, terwijl wordt voorkomen dat de cellichamen oversteken. Ten tweede is het, dankzij het ontwerp van het apparaat en door gebruik te maken van hydrostatische druk, mogelijk om zowel de celzijde als de axonzijde van het apparaat aan afzonderlijke behandelingen te onderwerpen, simpelweg door het volume in de reservoirs aan de ene zijde van het apparaat hoger te houden dan aan de andere zijde. En ten derde kan de zuivere axonale fractie van het apparaat door vacuümsuiging worden afgesneden, waardoor de onderzoeker axonale regeneratie kan bestuderen en observeren.Onderzoeker Hina Lee zal nu het voorbereiden van het microfluïdische neuron-apparaat demonstreren. Een siliciumwafer van 3 Å met een patroon van SU-8, vervaardigd via fotolithografie, wordt gebruikt om de poly-dimethylsiloxaan (PDMS) microfluïdische mal te gieten. We noemen de siliciumwafer met het SU-8-patroon de mastermallen of kortweg de masters.PDMS wordt gemengd met een uithardingsmiddel in een gewichtsverhouding van 10 op 1. Dat is bijvoorbeeld 15 gram PDMS per 1,5 gram uithardingsmiddel. De PDMS wordt vervolgens goed gemengd en op de silicon wafer gegoten.De siliciumwafer bevindt zich in een polystyreen petrischaal van 10 centimeter. Er is ongeveer 12 gram tot 15 gram PDMS nodig om de MA's te bedekken met een dikte van ongeveer vier millimeter. De master met de PDMS wordt vervolgens in een vacuümdesiccator geplaatst met het deksel van de petrischaal verwijderd, waarna er vacuüm wordt aangelegd.Dit wordt gedaan om luchtbellen te verwijderen uit de PDMS die zijn ontstaan tijdens het roeren van het uithardingsmiddel. Het duurt ongeveer 15 minuten voordat de luchtbellen zijn verwijderd. De master met PDMS wordt na 15 minuten in de vacuümdesiccator uit de desiccator gehaald.Er zijn nog enkele luchtbellen aanwezig op de PDMS-master. Een persluchtpistool met een filter van 0,45 micron wordt gebruikt om de resterende bellen te verwijderen. De master wordt vervolgens gedurende één uur op een warmteplaat van 80 °C geplaatst om te uitharden.Als er geen vacuümdesiccator beschikbaar is, kan het mengsel enkele uren op kamertemperatuur blijven staan. De luchtbellen zullen uiteindelijk vanzelf verdwijnen. Indien er geen warmteplaat beschikbaar is, zal de PDMS na 24 uur uitharden bij kamertemperatuur.Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de master waterpas staat tijdens het uithardingsproces. Zodra de PDMS op de master is uitgehard, wordt deze met een chirurgisch scalpeltje naar een cleanbench gebracht. Er wordt een cirkelvormige snede rondom de rand van de devices gemaakt.Het is belangrijk dat men het mes in de PDMS steekt om contact te maken met de siliciumwafer, maar er mag niet te veel druk op de wafer worden uitgeoefend, anders zal de master barsten met een cirkelvormige snede rondom de apparaten. Er bevinden zich vier apparaten op elke siliciummaster van drie inch. De PDMS wordt voorzichtig van de master getild.Dit kan worden gestart door het chirurgische mesje voorzichtig te draaien terwijl het in de eerdere snede wordt ingebracht. Het is erg dun met de PDMS-apparaten op de mal. Reservoirs aan de bovenzijde worden in het apparaat geponst met een weefselbiopsieponser van acht millimeter.Het residu dat in de pons achterblijft, wordt met een staafje naar buiten geduwd. De apparaten worden vervolgens in vieren gedeeld en overtollig PDMS wordt weggesneden, zodat het apparaat precies op een Corning-dekglaasje past. Glas nummer één van 24 millimeter bij 40 millimeter stikstoflucht wordt gebruikt om eventueel resterend vuil weg te blazen.Hardnekkig vuil kan ook worden verwijderd met behulp van 3M Scotch Brand 4 7 1 vinyltape. De schone apparaten zijn nu klaar voor plasmabinding. Een Herrick plasma cleaner wordt kortstondig gebruikt om de neuron-apparaten aan de dekglasplaatjes te binden.De apparaten en de dekglasjes worden op een plateau geplaatst, waarna het plateau in de plasmareiniger wordt geplaatst en een vacuümpomp wordt gebruikt om de lucht uit de kamer te onttrekken. Het is belangrijk op te merken dat de PDMS-apparaten met de voorkant naar boven worden geplaatst. Dit betekent dat de zijde met het ontwerp naar boven is gericht, zodat deze wordt blootgesteld aan het plasmagas.Nadat de vacuümdruk 300 millitorr heeft bereikt, wordt de stroom naar de elektrische spoel ingeschakeld en op hoog ingesteld. De deur wordt op een kier gezet om een kleine hoeveelheid lucht in de kamer toe te laten, wat helpt bij het genereren van het plasma. De apparaten en het dekglas worden gedurende twee minuten met plasma behandeld.Let op de paarse kleur in de kamer. Dat is het eigenlijke plasma. De elektrische spoel creëert plasma, wat een gedeeltelijk geïoniseerd gas is dat bestaat uit elektronen, ionen en neutrale atomen of moleculen.Het plasma creëert reactieve species op het oppervlak van het glas en het apparaat, die een permanente verbinding vormen wanneer ze samen worden geplaatst. Het plasma maakt het oppervlak daarnaast hydrofiel, wat de toevoeging van vloeistoffen vergemakkelijkt. De plasmareiniger steriliseert tevens de apparaten.Na een plasmabehandeling van twee minuten wordt de stroom van het vacuüm uitgeschakeld en wordt er lucht in de kamer geleid. De plasmabehandelde oppervlakken van het glas en het microfluïdische apparaat worden in een cleanbench met elkaar in contact gebracht en gemonteerd. De apparaten worden vervolgens in steriele schalen van 60 millimeter geplaatst.De plasmabehandelde oppervlakken van het glas en het apparaat vormen een sterke, onomkeerbare verbinding. Binnen 10 minuten na de plasmabinding wordt polyollysine aan het apparaat toegevoegd dat aan het glas is bevestigd. Na 10 minuten zal de hydrofiliteit van het apparaat afnemen.Hierdoor wordt het voor de PLL moeilijk om het apparaat binnen te dringen. Het is belangrijk om na de toevoeging van PLL te controleren op luchtbellen in het apparaat. Een eenvoudige methode om aanwezige luchtbellen te verwijderen is het gebruik van een P 200 pipet gevuld met 100 µL vloeistof.In dit geval plaatst u de tip van de PLL direct bij de opening van het hoofdkanaal en drukt u vervolgens krachtig op de P 200. Dit moet mogelijk enkele keren worden herhaald, maar uiteindelijk zal de kracht van de pipet de luchtbellen naar buiten drijven. De apparaten die PLL bevatten, mogen een nacht incuberen in een standaard weefselkweekincubator bij 37 °C met 5% CO2.Na 24 uur incubatie met PLL worden de apparaten twee keer snel gespoeld met gedeïoniseerd autoclaafwater. Tijdens dit proces wordt vloeistof nooit volledig uit de hoofdkanalen verwijderd, enkel uit de reservoirs. Het verwijderen van vloeistof uit de hoofdkanalen zal leiden tot de vorming van luchtbellen.Na twee korte spoelingen worden de apparaten opnieuw gevuld met gedeïoniseerd autoclaafwater en minimaal drie uur of een nacht teruggeplaatst in de incubator. De volgende dag, nadat de apparaten een nacht of minimaal drie uur met water zijn geïncubeerd, worden ze opnieuw in de veiligheidskast geplaatst en twee keer gespoeld met gedeïoniseerd water. Vervolgens wordt neuraal basaal medium, mengandung de benodigde supplementen B 27 en glutamaat voor het kweken van primaire ratneuronen, aan de apparaten toegevoegd.De apparaten worden vervolgens teruggeplaatst in de incubator voor toekomstig gebruik. De apparaten zijn nu klaar voor het uitplaten van neuronen. In deze video hebben we de techniek van soft-lithografie gedemonstreerd, die we gebruiken voor de productie van onze neuron-apparaten.Deze apparaten kunnen worden gebruikt voor het kweken van neuronen en andere cellen van belang. Het primaire voordeel van deze apparaten is de mogelijkheid om de kweek van de neuronale cellichamen aan de ene zijde van het apparaat te scheiden en te compartimenteren van een zuivere axonale fractie aan de andere zijde van het apparaat. In de volgende video laten we zien hoe we corticale neuronen van foetale ratten (E 18) prepareren en hoe we de cellen in het apparaat laden.Dat is alles vanuit het John Lab. Bedankt voor het kijken.

fabrication-microfluidic-device-for-compartmentalization-neuron-soma

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In deze video laten we zien de voorbereiding van de E18 Corticale Rat neuronen.

Voorbereiden E18 Corticale Rat Neuronen voor Compartimentering in een microfluïdische apparaat

BioMEMS: het aangaan van nieuwe samenwerkingen tussen biologen en ingenieurs

We ontwikkelden een nieuw meerdere compartimenten neuron co-cultuur microsysteem platform voor in-vitro CNS axon-glia interactie onderzoek. Het platform is in staat het uitvoeren van maximaal zes onafhankelijke experimenten in parallel en werd vervaardigd met behulp van een nieuw ontwikkelde macro / micro hybrid fabricage methode.

Een Multi-compartimenten CNS Neuron-glia Co-cultuur Microfluïdische Platform

This video demonstrates the utilization of a pre-assembled plastic microfluidic chip for the compartmentalized culture of primary rat hippocampal neurons. The neurons are plated into one of the microfluidic compartments, where they attach and grow, extending their axons through the chip's microgrooves into the adjacent compartment. The narrow microgrooves prevent neuronal cell bodies from entering, thereby enabling physical separation between the somatic and axonal compartments.

Compartmentalized Primary Murine Neuron Culture Using Plastic Microfluidic Chips

The video demonstrates the differentiation of neural stem cells (NSCs) using a microfluidic device comprising a somatic and an axonal compartment separated by a microgroove barrier. NSCs are introduced into the somatic compartment and are allowed to adhere. The NSCs differentiate into neurons inside the somatic compartment and extend axons through the microgroove barrier to the axonal compartment.

Differentiation of Neural Stem Cells to Neurons Using a Compartmentalized Microfluidic Device

Protocollen voor enkel neuron microfluïdische arraying en water maskeren voor de in-chip plasma patroonvorming van biomateriaal coatings worden beschreven. Sterk verbonden co-culturen kan worden bereid met minimale cel ingangen.

Voorbereiding van Neuronale Co-culturen met Single Cell Precision

Dit manuscript bevat informatie over de fabricage van micro-tissue-gemanipuleerde neurale netwerken: driedimensionale micron-grootte constructies die bestaan ​​uit lange uitgelijnd axonale tracten die de geaggregeerde neuronale populatie (n) in een buisvormige hydrogel bekleden. Deze levende steigers kunnen dienen als functionele relais om neurale circuits te reconstrueren of te moduleren of als biofidelische testbedden die grijze-witte materie-neuroanatomie nabootsen.

Anatomisch Geïnspireerde Driedimensionale Microweefsel Geanimeerde Neurale Netwerken voor Nervous System Reconstructie, Modulatie en Modellering

Dit protocol beschrijft het gebruik van plastic fiches om cultuur en grendelen primaire lymfkliertest neuronen. Deze chips zijn voorgemonteerd, gebruiksvriendelijke en compatibel met hoge resolutie, levend, en fluorescentie beeldvorming. Dit protocol wordt beschreven hoe plaat rat hippocampal neuronen binnen deze chips en uitvoeren van fluidic isolatie, axotomy en immunokleuring.

Gebruik van vooraf geassembleerde kunststof Microfluidic Chips voor primaire lymfkliertest neuronen compartimentering

Dit protocol demonstreert het gebruik van gecompartimenteerde microfluïdische chips, injectie gegoten in een cyclisch olefine copolymeer aan gekweekte neuronen die worden onderscheiden van menselijke stamcellen. Deze chips zijn voorgeassembleerd en gemakkelijker te gebruiken dan traditionele gecompartimentaliseerde poly (dimethylsiloxaan) apparaten. Meerdere gemeenschappelijke experimentele paradigma's worden hier beschreven, met inbegrip van virale labeling, fluidic isolatie, axotomie, en...

Compartimenlise ring van menselijke stamcel-afgeleide neuronen in voorgemonteerde kunststof Microfluïdische chips

Het huidige protocol beschrijft het zaaien en kleuren van neuronale mitochondriën in microfluïdische kamers. De vloeiende drukgradiënt in deze kamers maakt de selectieve behandeling van mitochondriën in axonen mogelijk om hun eigenschappen te analyseren als reactie op farmacologische uitdagingen zonder het cellichaamcompartiment te beïnvloeden.

Microfluïdica-geassisteerde selectieve depolarisatie van axonale mitochondriën

Dit protocol beschrijft een microfluïdisch systeem dat neuronale metabole dynamiek modelleert na axonale verwonding, waardoor beeldvorming, multi-omics-analyse en mechanistische studies van intrinsieke metabole remodellering mogelijk zijn.

Microfluïdische chip voor axonale letselmodellen, constructie en het mogelijk maken van multi-omics-analyse

Leer de fabricage van een microfluïdische neuronencultuur met PDMS-softlithografie. Dit apparaat compartimenteert cellichamen en axonen voor geavanceerd neurobiologisch onderzoek naar regeneratie.

Fabricage van een microfluïdische apparaat voor de compartimentering van Neuron Soma en axonen

Meer video's verkennen